專利名稱：菝葜皂苷元在預(yù)防和治療抑郁癥藥物中的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，確切的說是菝葜皂苷元在預(yù)防和治療抑郁癥藥物中的新用途。
背景技術(shù)：
抑郁癥屬情感障礙性疾病，其發(fā)病率逐年上升，嚴重危害人類的身心健康。目前，抑郁癥的治療仍以藥物治療為主，但是目前的抗抑郁藥普遍存在有效率低，易復(fù)發(fā)的問題，且副作用多。因此，從天然植物中尋找、研制理想的抗抑郁藥物，愈來愈引起國際的關(guān)注。
菝葜皂苷元(Sarsasapogenin)，又稱知母皂苷元，為甾體皂苷類化合物，是中藥知母的主要活性成分，具有改善學(xué)習(xí)記憶、降低血糖、抑制血小板聚集、促進神經(jīng)前體細胞再生、抗氧化等多方面的藥理作用。目前主要用于阿爾茨海默病和阿爾茨海默性老年癡呆的治療。如中國專利號99806042.9公開的一種名稱為“用于治療阿爾茨海默病的異菝葜皂苷元和anzurogenin-D”的發(fā)明專利，申請人為英國植物藥物公共有限公司。中國專利號93112451.4公開了一種名稱為“對β腎上腺素受體和M膽堿受體有雙向調(diào)節(jié)作用的藥物及其制法”的發(fā)明專利，公開了菝葜皂苷元的制備方法及對受體的調(diào)節(jié)作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供菝葜皂苷元在預(yù)防和治療抑郁癥藥物中的新用途，它具有毒性小的特點，并且對抑郁癥繼發(fā)的學(xué)習(xí)記憶下降、免疫力降低等癥狀有明顯的緩解作用。菝葜皂苷元及其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或與糖所成的苷等，或以其作為活性成分組成的藥用組合物等用于制備預(yù)防或治療包括內(nèi)源性抑郁癥，反應(yīng)性抑郁癥，隱匿性抑郁癥，藥物引起的繼發(fā)性抑郁癥，更年期或產(chǎn)后抑郁癥，腦外傷或腦卒中誘發(fā)的抑郁癥以及抑郁性神經(jīng)癥等在內(nèi)的各種抑郁癥狀的藥物中的應(yīng)用，以及用于制備預(yù)防和治療抑郁癥引起的繼發(fā)性的學(xué)習(xí)記憶下降，快感缺乏，免疫功能低下以及性功能減退等癥狀的藥物中的應(yīng)用，其中所述病體為哺乳動物，菝葜皂苷元的有效劑量范圍為0.02-200mg/kg。
具體實施例方式
下面的動物實驗是對本發(fā)明的進一步詳細說明，但并不意味著對本發(fā)明的任何限制。
1.對行為絕望的影響實驗動物采用雄性昆明種小鼠，自由攝食飲水，體重20-24克。
菝葜皂苷元混懸于0.5％羧甲基纖維素鈉中，灌胃給藥14天，每天一次。
動物隨機分組，每組12只。末次給藥后1h將動物放入水深10cm的玻璃缸內(nèi)(25cm高，10cm直徑)，水溫24℃。觀察6min，記錄比較各組后4min內(nèi)的不動時間。
試驗結(jié)果用平均值±標準差表示，以t檢驗統(tǒng)計處理。小鼠強迫游泳實驗是經(jīng)典的行為絕望模型，可以模擬人類的抑郁狀態(tài)，廣泛應(yīng)用于抗抑郁藥的臨床前評價。結(jié)果如表1所示，與溶媒對照組相比，菝葜皂苷元(30、90mg/kg)可顯著縮短強迫游泳實驗中小鼠的不動時間，且呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。
表1菝葜皂苷元對小鼠強迫游泳不動時間的影響

與溶媒對照組比較**P＜0.01，*P＜0.052.對藥物誘導(dǎo)抑郁狀態(tài)的影響實驗動物采用雄性昆明種小鼠，自由攝食飲水，體重20-24克。
菝葜皂苷元混懸于0.5％羧甲基纖維素鈉中，灌胃給藥14天，每天一次。
動物隨機分組，每組12只。末次給藥后1h，測定小鼠直腸1.5～2cm處溫度，然后腹腔給予利血平(2.5mg/kg)，測定在給予利血平4h后的直腸溫度，計算兩次體溫的差值。實驗中保持室溫恒定在(22±1)℃。
試驗結(jié)果用平均值±標準差表示，以t檢驗統(tǒng)計處理。
利血平能使囊泡對單胺類遞質(zhì)的再攝取能力喪失進而被單胺氧化酶代謝，造成大腦和外周遞質(zhì)耗竭，進而引發(fā)很多異常的生理和行為反應(yīng)，例如體溫下降。結(jié)果如表2所示，與溶媒對照組相比，菝葜皂苷元(30、90mg/kg)可顯著縮短減少利血平誘導(dǎo)的體溫下降，且呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系，證明其可以對抗藥物誘導(dǎo)的抑郁狀態(tài)。
表2菝葜皂苷元對利血平誘導(dǎo)的小鼠體溫下降的影響

與溶媒對照組比較**P＜0.01，*P＜0.053.對雌激素撤除誘導(dǎo)抑郁狀態(tài)的影響實驗動物采用雌性昆明種小鼠，自由攝食飲水，體重20-24克。
菝葜皂苷元混懸于0.5％羧甲基纖維素鈉中，灌胃給藥14天，每天一次。
動物隨機分為空白對照組、卵巢摘除+溶媒對照組以及卵巢摘除+藥物治療組，每組12只。
動物行雙側(cè)卵巢摘除術(shù)后第二天開始給藥，末次給藥后1h將動物放入水深10cm的玻璃缸內(nèi)(25cm高，10cm直徑)，水溫24℃。觀察6min，記錄比較各組后4min內(nèi)的不動時間。
試驗結(jié)果用平均值±標準差表示，以t檢驗統(tǒng)計處理。
很多臨床證據(jù)表明產(chǎn)后以及更年期易產(chǎn)生抑郁狀態(tài)，這是由于產(chǎn)后以及更年期雌激素水平降低，因此我們利用雌性動物卵巢摘除與強迫游泳實驗相結(jié)合來建立產(chǎn)后抑郁癥及更年期抑郁癥的動物模型。結(jié)果如表3所示，與空白對照組相比，去卵巢動物的游泳不動時間明顯增加，提示抑郁模型建立成功。菝葜皂苷元(10、30、90mg/kg)可逆轉(zhuǎn)卵巢摘除誘導(dǎo)的不動時間增加，縮短不動時間，且呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。
表3 菝葜皂苷元雌激素撤除誘導(dǎo)抑郁狀態(tài)的影響

與空白對照組比較#P＜0.05；與卵巢摘除+溶媒對照組比較**P＜0.01，*P＜0.054.對腦缺血再灌注誘導(dǎo)抑郁狀態(tài)的影響實驗動物采用雄性昆明種小鼠，自由攝食飲水，體重20-24克。
菝葜皂苷元混懸于0.5％羧甲基纖維素鈉中，灌胃給藥14天，每天一次。
動物隨機分為空白對照組、缺血再灌+溶媒對照組以及缺血再灌+藥物治療組，每組12只。
將動物麻醉，經(jīng)頸正中切口，分離雙側(cè)頸動脈并套以“0”號絲線，將雙側(cè)頸動脈同時結(jié)扎阻斷并確定無血流通過后，30min后切斷絲線灌流10min，再次阻斷30min后，放開線，使血流再通。阻斷的同時，在距尾尖1.5cm處剪斷放血，放血量小于體重的6％，以造成全腦低灌流，放血后熱凝止血。
動物行缺血再灌術(shù)后第二天開始給藥，末次給藥后1h將動物放入水深10cm的玻璃缸內(nèi)(25cm高，10cm直徑)，水溫24℃。觀察6min，記錄比較各組后4min內(nèi)的不動時間。
試驗結(jié)果用平均值±標準差表示，以t檢驗統(tǒng)計處理。
經(jīng)大量的臨床觀察，已公認抑郁是腦中風(fēng)后最常見的并發(fā)癥之一，可極大阻礙肢體功能的康復(fù)，已成為近年來較為熱門的研究課題。本實驗利用腦缺血再灌注模擬卒中狀態(tài)，并結(jié)合強迫游泳實驗建立卒中后誘發(fā)的抑郁癥模型。結(jié)果如表4所示，與空白對照組相比，缺血再灌動物的游泳不動時間明顯增加，提示卒中誘導(dǎo)的抑郁模型建立成功。菝葜皂苷元(30、90mg/kg)可逆轉(zhuǎn)缺血再灌誘導(dǎo)的不動時間增加，縮短不動時間，且呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。
表4 菝葜皂苷元對腦缺血再灌注誘導(dǎo)抑郁狀態(tài)的影響

與空白對照組比較##P＜0.05；與缺血再灌+溶媒對照組比較**P＜0.01，*P＜0.055.對抑郁癥繼發(fā)的快感缺乏、學(xué)習(xí)記憶下降、免疫力低下的影響實驗動物采用雄性昆明種小鼠，自由攝食飲水，體重20-24克。
菝葜皂苷元混懸于0.5％羧甲基纖維素鈉中，自造模第15天起灌胃給藥14天，每天一次。
動物隨機分為空白對照組、慢性應(yīng)激+溶媒對照組以及慢性應(yīng)激+藥物治療組，每組12只。
小鼠(空白對照組除外)每天隨機給予不同的應(yīng)激刺激，包括高速水平震蕩1min、禁食12h、禁水12h、夾尾1min、45℃熱刺激5min、4℃冷刺激5min、懸吊5min、晝夜顛倒、45°傾斜飼養(yǎng)12h、潮濕飼養(yǎng)12h，平均每種刺激各3次。在末次給藥后測定動物自蔗糖水消耗量、學(xué)習(xí)記憶能力以及免疫功能。
學(xué)習(xí)記憶能力測定采用避暗法。本試驗在暗室內(nèi)進行，避暗箱的明室上方20cm處安置40W的燈泡，試驗時將燈打開，暗室底部的銅柵通以交流電。給藥第14天，將小鼠面部背向洞口放入明室，小鼠一進入暗室立即關(guān)上洞門，電擊1s(40V)后將動物取出，該實驗為訓(xùn)練過程。24h后重做此實驗，記錄各鼠自放入明室至進入暗室遇到電擊所需的時間(潛伏期)。
免疫功能測定采用小鼠單核巨噬細胞吞噬功能的測定。于末次給藥后尾靜脈注射印度墨汁，在注射后2分鐘和8分鐘分別用肝素處理過的毛細管刺入眼內(nèi)眥取血20μl，加至含0.1％Na2CO3液作為空白對照。末次取血后，處死小鼠，取肝臟和脾臟，分別稱重記錄。并以下列公式計算清除速度和吞噬指數(shù)。
清除速度＝(1gOD1-1gOD2)/(t2-t1)吞噬指數(shù)＝體重/(肝重+脾重)×3K1/2試驗結(jié)果用平均值±標準差表示，以t檢驗統(tǒng)計處理。
大量的臨床觀察顯示，長期應(yīng)激和抑郁癥都能導(dǎo)致快感缺乏、學(xué)習(xí)記憶能力下降以及免疫功能減退。慢性溫和應(yīng)激模型是公認的目前最接近臨床抑郁狀態(tài)的動物模型，本文建立慢性溫和應(yīng)激模型，考察菝葜皂苷元對模型動物上述指標的影響。結(jié)果如表5-7所示，慢性溫和應(yīng)激導(dǎo)致快感缺乏、學(xué)習(xí)記憶能力下降以及免疫功能減退，給予菝葜皂苷元治療后動物狀態(tài)顯著好轉(zhuǎn)，蔗糖水消耗量增加，學(xué)習(xí)記憶損傷有所改善，單核巨噬細胞吞噬功能有所增強。
以上實驗證明菝葜皂苷元具有明顯的對抗各種病因誘發(fā)的抑郁癥的作用，并且顯著改善了抑郁癥繼發(fā)的快感缺乏、記憶力下降以及免疫功能低下，因而，可用于制備預(yù)防和治療抗抑郁的藥物以及抗抑郁癥繼發(fā)疾病的藥物。
表4 菝葜皂苷元對腦缺血再灌注誘導(dǎo)抑郁狀態(tài)的影響


與空白對照組比較##P＜0.05；與缺血再灌+溶媒對照組比較**P＜0.01，*P＜0.05表5 菝葜皂苷元對抑郁癥繼發(fā)的快感缺乏的影響

與空白對照組比較##P＜0.05；與慢性應(yīng)激+溶媒對照組比較**P＜0.01表6 菝葜皂苷元對抑郁癥繼發(fā)的記憶力下降的影響

與空白對照組比較##P＜0.05；與慢性應(yīng)激+溶媒對照組比較**P＜0.01，*P＜0.05表7 菝葜皂苷元對抑郁癥繼發(fā)的免疫力低下的影響


與空白對照組比較##P＜0.05；與慢性應(yīng)激+溶媒對照組比較**P＜0.01，*P＜0.05。
權(quán)利要求
1.菝葜皂苷元在預(yù)防和治療抑郁癥藥物中的新用途，其特征在于菝葜皂苷元可在制備抗抑郁藥物中應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的菝葜皂苷元在預(yù)防和治療抑郁癥藥物中的新用途，其特征在于菝葜皂苷元及其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或與糖所成的苷等用于制備預(yù)防和治療抑郁狀態(tài)的藥物中應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的菝葜皂苷元在預(yù)防和治療抑郁癥藥物中的新用途，其特征在于含菝葜皂苷元及其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或與糖所成的苷等的藥物組合物，包括與藥用載體組合，用于制備預(yù)防和治療抑郁狀態(tài)的藥物中應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3所述的任一藥物或藥物組合物在預(yù)防和治療抑郁癥藥物中的新用途，其特征在于可以用于制備預(yù)防和治療包括內(nèi)源性抑郁癥，反應(yīng)性抑郁癥，隱匿性抑郁癥，藥物引起的繼發(fā)性抑郁癥，更年期或產(chǎn)后抑郁癥，腦外傷或腦卒中誘發(fā)的抑郁癥以及抑郁性神經(jīng)癥的各種抑郁癥狀的藥物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的各種應(yīng)用，其特征在于包括菝葜皂苷元及其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或與糖所成的苷等，或以其作為活性成分組成的藥用組合物在防止各類抑郁癥引起的繼發(fā)性的學(xué)習(xí)記憶下降，快感缺乏，免疫功能低下以及性功能減退等癥狀中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5所述的任一藥物或藥物組合物在預(yù)防和治療抑郁癥及其繼發(fā)病癥藥物中的新用途，其特征在于其中所述病體為哺乳動物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一所述的應(yīng)用，菝葜皂苷元的有效劑量范圍為0.02-200mg/kg。
全文摘要
本發(fā)明提供了菝葜皂苷元在預(yù)防和治療抑郁癥藥物中的新用途，它具有毒性小的特點，并且對抑郁癥繼發(fā)的學(xué)習(xí)記憶下降、免疫力降低等癥狀有明顯的緩解作用。菝葜皂苷元及其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或與糖所成的苷等，或以其作為活性成分組成的藥用組合物等用于制備預(yù)防或治療包括內(nèi)源性抑郁癥，反應(yīng)性抑郁癥，隱匿性抑郁癥，藥物引起的繼發(fā)性抑郁癥，更年期或產(chǎn)后抑郁癥，腦外傷或腦卒中誘發(fā)的抑郁癥以及抑郁性神經(jīng)癥等在內(nèi)的各種抑郁癥狀的藥物中的應(yīng)用，以及用于制備預(yù)防和治療抑郁癥引起的繼發(fā)性的學(xué)習(xí)記憶下降，快感缺乏，免疫功能低下以及性功能減退等癥狀的藥物，其中所述病體為哺乳動物，菝葜皂苷元的有效劑量范圍為0.02－200mg/kg。
文檔編號A61K36/8964GK101019870SQ20071001063
公開日2007年8月22日 申請日期2007年3月19日 優(yōu)先權(quán)日2007年3月19日
發(fā)明者吳英良, 任利翔 申請人:沈陽藥科大學(xué)