專利名稱：一種氨基脲(sem)衍生化試劑及其使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于免疫化學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，涉及一種氨基脲衍生化試劑及其在氨基脲的衍生化的方法，以及其衍生物的夾心ELISA檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
呋喃西林(nitrofurazone)屬于硝基呋喃類藥物,是一種廣譜抗菌藥物,被廣泛作治療藥物和飼料添加劑用于禽、畜、水產(chǎn)養(yǎng)殖中控制疾病或疫情。呋喃西林在臨床上表現(xiàn)為明顯的三致作用(致癌、致畸、致突變)，因此引起各國(guó)的高度重視，歐盟早在1995年就禁止呋喃西林用作獸藥，澳大利亞、美國(guó)也相繼在2001年和2002年出臺(tái)了相關(guān)法律，將呋喃西林作為養(yǎng)殖禁用藥物。呋喃西林在動(dòng)物體內(nèi)極易降解，短短數(shù)小時(shí)內(nèi)即可代謝為呋喃西林代謝物氨基脲(式一)，氨基脲易與蛋白質(zhì)結(jié)合，該結(jié)合產(chǎn)物性質(zhì)較穩(wěn)定不易分解，可在動(dòng)物體內(nèi)存留數(shù)周。因此氨基脲常被用作檢測(cè)呋喃西林原藥的標(biāo)記物，世界上大多數(shù)國(guó)家都以監(jiān)測(cè)氨基脲
來達(dá)到對(duì)呋喃西林原藥監(jiān)控的目的。
權(quán)利要求
1.一種氨基脲衍生化試劑，其特征在于所述的氨基脲衍生化試劑為帶有特異性小分子標(biāo)記的醛基苯甲酸，所述醛基苯甲酸能通過醛基與氨基脲的氨基反應(yīng)，形成帶有特異性小分子標(biāo)記的氨基脲-醛基苯甲酸衍生物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的氨基脲衍生化試劑，其特征在于所述的特異性小分子標(biāo)記是能夠與特異性蛋白或抗體結(jié)合的小分子，包括生物素、地高辛、組氨酸、熒光分子，所述熒光分子包括 CY-5、CY-3、FITC、FAM。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的氨基脲衍生化試劑，其特征在于所述的特異性小分子標(biāo)記通過一段短臂連接在醛基苯甲酸的羧基上，短臂為任選地?fù)诫sN或O或S或P的2-30個(gè)C的直鏈分子。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的氨基脲衍生化試劑，其特征在于所述醛基苯甲酸為對(duì)醛基苯酸衍生物或鄰醛基苯甲酸。
5.一種檢測(cè)樣品中氨基脲方法，包括: (1)用抗氨基脲-醛基苯甲酸衍生物抗體包被酶標(biāo)板； (2)使樣品與帶有特異性小分子標(biāo)記的醛基苯甲酸接觸，形成帶有特異性小分子標(biāo)記的氨基脲-醛基苯甲酸衍生物； (3)將步驟(2)得到的混合物加入步驟(I)的酶標(biāo)板中，使所述帶有特異性小分子標(biāo)記的氨基脲-醛基苯甲酸衍生物固定在酶標(biāo)板上； (4)再向所述酶標(biāo)板中加入能與所述特異性小分子標(biāo)記結(jié)合的酶標(biāo)二抗，使其與所述特異性小分子標(biāo)記反應(yīng)； (5)對(duì)步驟(4)中發(fā)生的反應(yīng)進(jìn)行檢`測(cè)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算氨基脲的含量。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述的氨基脲衍生化試劑被溶解于極性溶劑中，所述極性溶劑選自甲醇、水、乙醇、DMSO、DMF及其混合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述的酶標(biāo)板采用96孔酶標(biāo)板，并封閉板上未包被抗體的空白孔。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述抗氨基脲-醛基苯甲酸衍生物抗體為鼠單抗、兔多抗及基因工程抗體中的任意一種。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述的酶標(biāo)二抗為辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的、能與所述特異性小分子標(biāo)記結(jié)合的蛋白或抗體及其偶聯(lián)物，所述蛋白或抗體及其偶聯(lián)物選自親和素/鏈霉親和素、地高辛抗體、組氨酸抗體/含Ni親和分子、熒光分子抗體。
10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述檢測(cè)是用酶標(biāo)儀測(cè)量吸光度。
11.一種檢測(cè)樣品中氨基脲的試劑盒，其特征在于包括: (1)帶有特異性小分子標(biāo)記的醛基苯甲酸； (2)包被有抗氨基脲-醛基苯甲酸衍生物抗體的酶標(biāo)板； (3)酶標(biāo)二抗。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的試劑盒，其特征在于所述的特異性小分子標(biāo)記是能夠與特異性蛋白或抗體結(jié)合的小分子，包括生物素、地高辛、組氨酸、熒光分子，所述熒光分子包括CY-5、CY-3、FITC、FAM。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的試劑盒，其特征在于所述的特異性小分子標(biāo)記通過一段短臂連接在醛基苯甲酸的羧基上，短臂為任選地?fù)诫sN或O或S或P的2-30個(gè)C的直鏈分子。
14.根據(jù)權(quán)利要求11所述的試劑盒，其特征在于所述抗氨基脲-醛基苯甲酸衍生物抗體為鼠單抗、兔多抗及基因工程抗體中的任意一種。
15.根據(jù)權(quán)利要求11所述的試劑盒，其特征在于所述的酶標(biāo)二抗為辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的、能與所述特異性小分子標(biāo)記結(jié)合的蛋白或抗體及其偶聯(lián)物，所述蛋白或抗體及其偶聯(lián)物選自 親和素/鏈霉親和素、地高辛抗體、組氨酸抗體/含Ni親和分子、熒光分子抗體。
全文摘要
本發(fā)明涉及了一種氨基脲衍生化試劑及試劑盒及其在氨基脲的夾心ELISA檢測(cè)中的應(yīng)用。所述試劑為帶有特異性小分子標(biāo)記的醛基苯甲酸，所述醛基苯甲酸能通過醛基與氨基脲的氨基反應(yīng)，形成帶有特異性小分子標(biāo)記的氨基脲-醛基苯甲酸衍生物。本發(fā)明的氨基脲衍生化試劑能簡(jiǎn)化氨基脲衍生物的分離和純化步驟，免去了氨基脲半抗原的制備和使用，并可實(shí)現(xiàn)其夾心ELISA法的檢測(cè)，從而極大地簡(jiǎn)化了檢測(cè)步驟、降低檢測(cè)時(shí)間和操作誤差，同時(shí)增強(qiáng)檢測(cè)的穩(wěn)定性、精密度和靈敏度。
文檔編號(hào)G01N33/543GK103105488SQ20121058646
公開日2013年5月15日 申請(qǐng)日期2012年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月31日
發(fā)明者戴信敏 申請(qǐng)人:戴信敏