含麥芽糖苷結(jié)構(gòu)三氮唑類去甲斑蝥素衍生物及其制備方法與應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種含麥芽糖苷結(jié)構(gòu)三氮唑類去甲斑蝥素衍生物及其制備方法與應(yīng)用，該制備方法用1,3?偶極環(huán)加成方法在去甲斑蝥素結(jié)構(gòu)中C5和C6位引入1,2,3?三氮唑，與1?疊氮?全乙?；溠刻欠磻?yīng)導(dǎo)入麥芽糖苷結(jié)構(gòu)，從而合成出含麥芽糖苷結(jié)構(gòu)1,2,3?三氮唑類去甲斑蝥素衍生物，該化合物具有多種生物活性，可用于制備抗腫瘤藥物。
【專利說明】
含麥芽糖昔結(jié)構(gòu)H氮性類去甲斑藝素衍生物及其制備方法與 應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域：
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體是設(shè)及一種含麥芽糖巧結(jié)構(gòu)=氮挫類去甲斑莖素 衍生物及其制備方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】：
[0002] 去甲斑莖素，化學(xué)名：7-氧雜二環(huán)[2.2.1 ]庚燒-2，3-二簇酸酢，CAS: [5442-12-6; 29745-04-8]，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：
[0003]
[0004] 斑莖素是研究惡性腫瘤藥物的有效成份?，F(xiàn)代研究證明，其對原發(fā)性肝癌有一定 療效，而且有升高白細(xì)胞，不抑制免疫系統(tǒng)等優(yōu)點，因此，具有很高的藥用研究價值，引起人 們的廣泛關(guān)注。但斑莖素的毒性較大，合成很復(fù)雜，近來的研究表明，去甲斑莖素中少了2,3 位的兩個甲基，去甲斑莖素不僅保持了較強(qiáng)的抗腫瘤活性和獨特的升高白細(xì)胞作用，而且 毒性大大降低，基本上消除了斑莖素對泌尿系統(tǒng)毒刺激副作用。
[0005] 因此，與斑莖素骨架修飾有關(guān)的一項具有重大意義的合成工作是去掉2,3位甲基 取代。運一結(jié)構(gòu)改變不會影響斑莖素抗癌活性而毒性有所降低，并且合成步驟簡化。

【發(fā)明內(nèi)容】
：
[0006] 本發(fā)明的第一方面目的是提供一種含麥芽糖巧結(jié)構(gòu)=氮挫類去甲斑莖素衍生物。
[0007] 本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下：
[000引一種含麥芽糖巧結(jié)構(gòu)=氮挫類去甲斑莖素衍生物，其結(jié)構(gòu)式如下：
0.
[0009 G
[0010
[0011
[0012] 該化合物相關(guān)實驗數(shù)據(jù)如下：
[0013]
[0014]
【申請人】通過研究發(fā)現(xiàn)：去甲斑莖素五元環(huán)中的氧可W用氮或硫代替，一些取代基 可W取代在氮和硫上，同時在Cs和Cs上取代還可W改變藥理活性。通過進(jìn)一步實驗確定:使 用1-疊氮-全乙酷基麥芽糖對去甲斑莖素進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，巧妙應(yīng)用1,3-偶極環(huán)加成方法引 入1，2,3-=氮挫及麥芽糖巧結(jié)構(gòu)，從而可W有效提高去甲斑莖素的活性。
[0015] 本發(fā)明的第二方面目的是提供一種上述含麥芽糖巧結(jié)構(gòu)=氮挫類去甲斑莖素衍 生物的制備方法，其特征在于，包括W下步驟：
[0016] (1)、去甲去氨斑莖素的合成：
[0017] 將順下締二酸酢研細(xì)，加入乙酸，室溫條件下攬拌至溶解，滴入巧喃，室溫攬拌24 ~48小時，巧喃與順下締二酸酢發(fā)生Diels-Alder反應(yīng)，制得去甲去氨斑莖素(1);
[0018] (2)、N-苯基取代去甲去氨斑莖酷亞胺的合成：
[0019] 將去甲去氨斑莖素溶于丙酬溶劑中，在攬拌下滴加苯胺的丙酬溶液，反應(yīng)1小時后 加入醋酸儘、=乙胺和醋酢，在室溫下反應(yīng)8小時;將干燥后的沉淀溶于二甲基甲酯胺中，冰 水浴中與二環(huán)己基碳二亞胺攬拌反應(yīng)10小時，將濾液置于冰水中得到結(jié)晶，再重結(jié)晶得到 產(chǎn)物(3);
[0020] (3)、導(dǎo)入麥芽糖巧S氮挫結(jié)構(gòu)：
[0021] 室溫氮氣保護(hù)下將N-苯基取代去甲去氨斑莖酷亞胺（3)和1-疊氮-全乙酷基麥芽 糖(4)混合于甲醇中，進(jìn)行加成反應(yīng)，回流2小時后冰水浴冷卻至(TC,氮氣保護(hù)下緩慢滴加 甲醇鋼的甲醇溶液;滴加完畢后，升至室溫繼續(xù)反應(yīng)10~12小時，TLC監(jiān)測至原料點消失，用 732強(qiáng)酸苯乙締陽離子交換樹脂調(diào)節(jié)體系至中性，過濾，用甲醇洗涂離子交換樹脂數(shù)次，濾 液減壓除去甲醇后得黃色固體，柱層析后甲醇再結(jié)晶，真空干燥得到目標(biāo)化合物含麥芽糖 巧結(jié)構(gòu)=氮挫類去甲斑莖素衍生物(5)。
[0022] 進(jìn)一步的；
[0023] 步驟(1)中，反應(yīng)得到的沉淀需減壓過濾；
[0024] 步驟(2)中，反應(yīng)得到的沉淀需要真空干燥;冰水浴應(yīng)將溫度降至(TC;重結(jié)晶應(yīng)用 甲醇。
[0025] 步驟(2)中，1-疊氮-全乙酷基麥芽糖的合成方法如下：50毫升圓底燒瓶中加入漠 代乙酷麥芽糖，疊氮化鋼W及無水DMF，氮氣保護(hù)。室溫攬拌過夜，體系顏色由白變淺黃色。 劇烈攬拌下，將體系倒入200毫升水中，出現(xiàn)大量固體，抽濾，冷水洗涂出去鹽和DMF，干燥， 得到1-疊氮-全乙酷基麥芽糖(4)。
[00%] 本發(fā)明設(shè)及的反應(yīng)如下：
[0027]
[0028] 本發(fā)明的第=方面目的是提供一種前述含麥芽糖巧結(jié)構(gòu)=氮挫類去甲斑莖素衍 生物在制備抗腫瘤藥物方面的應(yīng)用。通過實驗驗證:上述化合物，對于不同瘤株如人肝癌細(xì) 胞、口腔癌細(xì)胞、胃癌細(xì)胞、卵巢癌細(xì)胞、白血病細(xì)胞、腸癌細(xì)胞等，均具有抑制作用，其中對 于化-60(白血病細(xì)胞)具有更佳的抑制率和選擇性，可單獨制備抗腫瘤藥物、也可W作為活 性成分與其他抗腫瘤藥物制備抗腫瘤組合物，具有非常好的工業(yè)應(yīng)用前景。
[0029] 本發(fā)明的原理及有益效果如下：
[0030]
【申請人】通過研究發(fā)現(xiàn)：1，2，3-S挫類化合物本身多具各種活性，將1，2，3-S挫基 引入某些活性分子可明顯增強(qiáng)其藥性;運次我們在C-5或C-6上引入S氮挫的基礎(chǔ)上還導(dǎo)入 了含麥芽糖巧結(jié)構(gòu)，得到含麥芽糖巧結(jié)構(gòu)=氮挫類去甲斑莖素衍生物;上述化合物針對人 肝癌細(xì)胞、口腔癌細(xì)胞、胃癌細(xì)胞、卵巢癌細(xì)胞、白血病細(xì)胞、腸癌細(xì)胞等瘤株，特別是針對 白血病細(xì)胞，具有顯著的抗增殖活性。
[0031] W下結(jié)合實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步描述，但實施例不應(yīng)解釋為限定本發(fā)明的范 圍。
【具體實施方式】：
[0032] 實施例1:
[0033] (1)、去甲去氨斑莖素的合成：
[0034] 在IOOmL錐形瓶中依次加入15mL乙酸，4.00g(40mmol)粉末狀順下締二酸酢。等順 下締二酸酢溶解后，攬拌下加入2.76g(40.5mmol)巧喃。然后再室溫下放置24-48小時，將反 應(yīng)完全后得到的產(chǎn)物進(jìn)行減壓過濾得到去甲斑莖素結(jié)晶。
[0035] (2)、N-苯基取代去甲去氨斑莖酷亞胺的合成：
[0036] 取3.32g(20mmol)去甲斑莖素溶解于30mL丙酬中，將丙酬溶液和苯胺加入到反應(yīng) 錐形瓶中，可見有大量的沉淀生成。在常溫下反應(yīng)8小時后，將沉淀過濾出來后真空干燥，溶 解于20mL二甲基甲酯胺中，冷卻至0°C。置于冰水浴中，加入3.09g(15mmol)二環(huán)己基碳二亞 胺，攬拌反應(yīng)10小時。然后冷卻，過濾，將濾液倒在50mL冰水中，析出固體。將其過濾，洗涂， 最后用甲醇重結(jié)晶得到產(chǎn)物(3)。
[0037] (3)、導(dǎo)入麥芽糖巧S氮挫結(jié)構(gòu)：
[0038] 室溫氮氣保護(hù)下將N-苯基取代去甲去氨斑莖酷亞胺（3)和1-疊氮-全乙酷基麥芽 糖(4)混合于甲醇中，進(jìn)行加成反應(yīng)，回流2小時后冰水浴冷卻至(TC,氮氣保護(hù)下緩慢滴加 甲醇鋼的甲醇溶液。滴加完畢后，升至室溫繼續(xù)反應(yīng)10~12小時，TLC監(jiān)測至原料點消失，用 732強(qiáng)酸苯乙締陽離子交換樹脂調(diào)節(jié)體系至中性，過濾，用甲醇洗涂離子交換樹脂數(shù)次，濾 液減壓除去甲醇后得黃色膠狀固體，柱層析后用甲醇再結(jié)晶，真空干燥得到目標(biāo)化合物 (5)。
[0039] 化合物(5)名稱:含麥芽糖巧結(jié)構(gòu)=氮挫類去甲斑莖素衍生物
[0040] 分子式：〔2 曲 2N4O13
[0041 ] 物化參數(shù):黃色固體，m.p.213-215°c [0042]結(jié)構(gòu)確認(rèn)：
[004；3] Ih 醒R(DMS0-d6):S = 7.51-7.19(m，5H，Ar-H)，5.15(d，J = 9.60Hz，lH，H5)，4.74 (d，J=17.60Hz，lH，H4)，4.56(d，J=17.60Hz，lH，Hl)，4.00(d，J = 9.60Hz，lHJ6)，3.43(d， J = 7.20Hz，lH，H3) ,3.29 (d, J = 7.20Hz，1H，H2) ,5.62-4.54,3.62-3.06 14 X Maltosyl-H,7X0H)；
[0044] IRWBr)v:：M78(N-C = 0)，2985 2942(ArH)，1782，1742，1715(C = 0)，1614(N=N)， 1229(C-0-C)a212(C-N)ai61(N-N)cm'S
[0045] Anal.calcd.for C26出2N4〇i3.C，51.32;H，5.30;N，9.24。
[0046] 應(yīng)用實施例：含麥芽糖巧結(jié)構(gòu)=氮挫類去甲斑莖素衍生物(化合物5)的抗腫瘤活 性測定。
[0047] 將上述實施例制備的化合物（5)，分別W不同瘤株（腫瘤細(xì)胞Bel-7402、KB、 SGC7901、H08901、Hk60、ECA109)為實驗對象，測試化合物（5)對于不同瘤株的體外抑制作 用:實驗采用四甲基偶氮挫鹽微量酶反應(yīng)比色法(M1T法），活性用半數(shù)抑制濃度表示（IC50)。 [004引具體實驗步驟如下：
[0049] 將化合物5用DMSO溶解，稀釋，腫瘤細(xì)胞Be^7402(人肝癌細(xì)胞）、?。谇话┘?xì)胞）、 SG口901 (胃癌細(xì)胞）、冊8901 (卵巢癌細(xì)胞）、化-60(白血病細(xì)胞）、ECA109(腸癌細(xì)胞)在96孔 板上種入4000個/200化/孔，每孔加入化合物化L，終濃度為12. OiiM，6. OiiM，3. OiiM，1.5測，共 同于37°C、5 %C〇2細(xì)胞培養(yǎng)箱中解育72小時，WDMS0( 1 % )為空白對照。72小時后，加入終濃 度為0.25mg/mL的MTT，置于37 °C、5 % C〇2細(xì)胞培養(yǎng)箱中4小時，之后吸干溶劑，每孔加入10化 1 DMS0,用酶聯(lián)免疫儀于570nm處測定吸光度(OD值），所得數(shù)據(jù)用于計算ICso值。測定不同濃 度下的化合物作用時間不同對人腫瘤細(xì)胞周期和調(diào)亡的影響。
[0050] 不同濃度的受試化合物用96孔板進(jìn)行粗篩，根據(jù)所得的抑制率，計算ICso值，結(jié)果 見下表。
[0051] 表1、含麥芽糖巧結(jié)構(gòu)=氮挫類去甲斑莖素衍生物對六種腫瘤細(xì)胞株的ICso值
[0化2]
[0053]通過上表數(shù)據(jù)可W看出：本發(fā)明制備的化合物，對于六種腫瘤細(xì)胞株均具有抑制 作用，其中對于HL-60(白血病細(xì)胞）具有突出的抑制率和選擇性，可W單獨制備抗腫瘤藥 物、也可W作為活性成分與其他抗腫瘤藥物制備抗腫瘤組合物，具有非常好的工業(yè)應(yīng)用前 旦 O
【主權(quán)項】
1. 一種含麥芽糖苷結(jié)構(gòu)三氮唑類去甲斑蝥素衍生物，其結(jié)構(gòu)式如下：2. -種含麥芽糖苷結(jié)構(gòu)三氮唑類去甲斑蝥素衍生物的制備方法，其特征在于，包括以 下步驟： (1 )、去甲去氫斑蝥素的合成： 將順丁烯二酸酐研細(xì)，加入乙醚，室溫條件下攪拌至溶解，滴入呋喃，室溫攪拌24~48小 時，呋喃與順丁烯二酸酐發(fā)生Diels-Alder反應(yīng)，制得去甲去氫斑蝥素； (2) 、N-苯基取代去甲去氫斑蝥酰亞胺的合成： 將去甲去氫斑蝥素溶于丙酮溶劑中，在攪拌下滴加苯胺的丙酮溶液，反應(yīng)1小時后加入 醋酸錳、三乙胺和醋酐，在室溫下反應(yīng)8小時;將干燥后的沉淀溶于二甲基甲酰胺中，冰水浴 中與二環(huán)己基碳二亞胺攪拌反應(yīng)10小時，將濾液置于冰水中得到結(jié)晶，再重結(jié)晶得到產(chǎn)物； (3) 、導(dǎo)入麥芽糖苷三氮唑結(jié)構(gòu)： 室溫氮氣保護(hù)下將N-苯基取代去甲去氫斑蝥酰亞胺和1-疊氮-全乙?；溠刻腔旌嫌?甲醇中，進(jìn)行加成反應(yīng)，回流2小時后冰水浴冷卻至0°C，氮氣保護(hù)下緩慢滴加甲醇鈉的甲醇 溶液;滴加完畢后，升至室溫繼續(xù)反應(yīng)10~12小時，T L C監(jiān)測至原料點消失，用732強(qiáng)酸苯 乙烯陽離子交換樹脂調(diào)節(jié)體系至中性，過濾，用甲醇洗滌離子交換樹脂數(shù)次，濾液減壓除去 甲醇后得黃色固體，柱層析后甲醇再結(jié)晶，真空干燥得到目標(biāo)化合物含麥芽糖苷結(jié)構(gòu)三氮 唑類去甲斑蝥素衍生物。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種含麥芽糖苷結(jié)構(gòu)三氮唑類去甲斑蝥素衍生物的制備方 法，其特征在于:步驟(1)中，反應(yīng)得到的沉淀需減壓過濾。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種含麥芽糖苷結(jié)構(gòu)三氮唑類去甲斑蝥素衍生物的制備方 法，其特征在于:步驟(2)中，反應(yīng)得到的沉淀需要真空干燥;冰水浴應(yīng)將溫度降至0°C;重結(jié) 晶應(yīng)用甲醇。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種含麥芽糖苷結(jié)構(gòu)三氮唑類去甲斑蝥素衍生物的制備方 法，其特征在于:步驟(3)中，1-疊氮-全乙?；溠刻堑暮铣煞椒ㄈ缦拢?0毫升圓底燒瓶中 加入溴代乙酰麥芽糖，疊氮化鈉以及無水DMF，氮氣保護(hù);室溫攪拌過夜，體系顏色由白變淺 黃色；劇烈攪拌下，將體系倒入200毫升水中，出現(xiàn)大量固體，抽濾，冷水洗滌出去鹽和DMF， 干燥，得到1 -疊氮-全乙?；溠刻?。6.-種含麥芽糖苷結(jié)構(gòu)三氮唑類去甲斑蝥素衍生物在制備抗腫瘤藥物方面的應(yīng)用。
【文檔編號】C07H1/00GK105924486SQ201610395205
【公開日】2016年9月7日
【申請日】2016年6月6日
【發(fā)明人】鄧?yán)蚱? 王瑋, 胡純琦, 許燕飛, 張耀紅, 任小榮, 左樹峰
【申請人】紹興文理學(xué)院