專利名稱：一種微生物殺菌劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及促進(jìn)植物生長(zhǎng)、防治植物真菌病害及防蟲(chóng)的微生物殺菌劑及其制備方法。
植物的真菌病害如煙草赤星病(tobacco bromn spot)、煙草黑脛病、煙草炭疽病、煙草猝倒病等煙草真菌病害以及立枯病、炭疽病等是世界各地乃至我國(guó)煙草等植物從苗期到成熟期造成危害的主要真菌病害。近年來(lái)，由于受氣候、施肥條件、移栽品種等條件變化的影響，這些病害的發(fā)生與危害日益嚴(yán)重。在目前無(wú)優(yōu)良抗病品種的情況下，主要采取化學(xué)防治即化學(xué)殺菌劑(化學(xué)農(nóng)藥)作為控制上述病害流行的主要方法。但化學(xué)殺菌劑如菌核凈、保利安、甲霜寧等的大量使用，一方面會(huì)污染環(huán)境，另一方面長(zhǎng)期、反復(fù)使用會(huì)導(dǎo)致病菌產(chǎn)生抗藥性，藥劑對(duì)病菌無(wú)效，以及造成煙草葉片的嚴(yán)重藥害，煙草葉片上化學(xué)農(nóng)藥的殘留，影響煙草吸食的安全性。
本發(fā)明的目的是克服化學(xué)殺菌劑存在的問(wèn)題，提供一種微生物殺菌劑，其制作成本低，能改善土壤結(jié)構(gòu)，促進(jìn)土壤中有機(jī)質(zhì)轉(zhuǎn)化，促進(jìn)植物生長(zhǎng)，抑制病菌生長(zhǎng)，對(duì)病害防治效果達(dá)80％以上。
本發(fā)明的另一目的是提供上述微生物殺菌劑的制備方法。
本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的以煙草根際、葉面微生態(tài)學(xué)理論為基礎(chǔ)，篩選高效優(yōu)良菌株，采用獨(dú)特的發(fā)酵工藝，經(jīng)濃縮活化制成活菌制劑。
本殺菌劑含重量百分比煙梗末或木屑、麥麩等植物粉碎材料85-90％，木霉菌孢子粉8-12％。
所述的木霉菌為T(mén)V-1，或T918、Tr13、A405。
所述的微生物殺菌劑的制備方法按下列步驟制取1)基料的制備①將煙梗經(jīng)粉碎機(jī)粉碎成煙梗末后，過(guò)20目篩，按過(guò)篩煙梗末∶水＝1∶0.4-0.5的比例加入水，混勻，作為基料裝入棉布袋中；②將裝好基料的布袋放入蒸飯車內(nèi)，0.4磅壓力下滅菌，待蒸汽從蒸飯車密封門(mén)的底部冒出時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)，5-6小時(shí)后，關(guān)閉蒸汽閥門(mén)，打開(kāi)蒸飯車密封門(mén)，待蒸汽散盡后，將已滅菌的煙梗末倒入消毒好的塑料桶內(nèi)蓋嚴(yán)備用；2)菌漿的制備①菌種培養(yǎng)一級(jí)斜面菌種培養(yǎng)，采用固體PDA馬鈴薯培養(yǎng)基，將木霉菌種接種在試管培養(yǎng)基上，26-29℃下培養(yǎng)46-50小時(shí)，得一級(jí)斜面菌種；二級(jí)搖瓶菌種培養(yǎng)，采用液體PDA馬鈴薯培養(yǎng)液，將一級(jí)斜面菌種接入上述滅菌搖瓶培養(yǎng)液中，26-28℃下振蕩光照培養(yǎng)72-76小時(shí)作為種子液；②液體發(fā)酵培養(yǎng)采用理查氏酵母膏高溫滅菌培養(yǎng)液，待培養(yǎng)液冷卻至27.5℃時(shí)，將錐形瓶中的種子液按5‰的比例接種入500升發(fā)酵罐，保持27±1℃，通氣量每小時(shí)8立方米，保壓0.05Mpa，培養(yǎng)48-72小時(shí)得到相應(yīng)拮抗菌的菌漿；3)菌漿的處理制備好的菌漿經(jīng)過(guò)板框過(guò)濾機(jī)過(guò)濾后，得到濾渣，將制備好的基料與濾渣以重量比1∶0.8-1的比例混合均勻后，再以體積比3％加入抗菌素利福平母液，加入體積比2％的鏈霉素母液攪勻，備用；4)窗紗培養(yǎng)片、用具和培養(yǎng)室的消毒滅菌處理；5)培養(yǎng)將攪勻處理過(guò)的菌漿用刷均勻地刷在培養(yǎng)片上，刷時(shí)厚度為1-2mm，將刷好的培養(yǎng)片放在下鋪滅菌蒸餾水浸潤(rùn)的脫脂紗布培養(yǎng)盤(pán)上，保持相對(duì)濕度在90％以上，26±1℃光照培養(yǎng)2天后，室溫控制在27-28℃，待表面產(chǎn)生孢子較多時(shí)，室溫保持30±1℃，通氣、換氣、晾干培養(yǎng)片；6)菌劑的制備將培養(yǎng)片上樣品晾干至含水量2-3％后，取下粉碎，過(guò)100目篩后，進(jìn)行孢子含量測(cè)定，達(dá)到109個(gè)/克，即為合格成品。


圖1為本發(fā)明的生產(chǎn)工藝流程圖。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下積極效果在植物侵染性病害中，80％以上是真菌引起的。采用本發(fā)明的微生物殺菌劑進(jìn)行植物病害的生物防治，其效果持久，病害難以產(chǎn)生抗藥性，對(duì)人體和作物無(wú)危害，對(duì)病害的選擇性大，具有廣譜殺菌劑效果，不污染環(huán)境，不會(huì)對(duì)植物產(chǎn)生藥害，安全、無(wú)毒、無(wú)殘留。對(duì)土壤及葉部真菌，特別是疫霉菌、腐霉菌、鐮刀菌及絲核菌、鏈格孢菌、毛盤(pán)孢菌等有顯著防治效果，同時(shí)對(duì)煙草有一定的促生作用。此外本發(fā)明的殺菌劑還有投入低，充分利用廢棄煙梗、麥桿、木屑、麥麩等作為原料，變廢為寶，減少煙梗積壓，以及煙梗、麥桿焚燒帶來(lái)的環(huán)境污染，煙梗燃燒后焦油阻塞管道等問(wèn)題，具有易于工業(yè)化和商品化開(kāi)發(fā)的優(yōu)勢(shì)。
以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳述。
實(shí)施例本殺菌劑的制備方法按下列步驟制取1)基料的制備①將煙梗經(jīng)粉碎機(jī)粉碎成煙梗末后，過(guò)20目篩，按過(guò)篩煙梗末∶水＝1∶0.5的比例加入水，混勻，作為基料裝入棉布袋中；②將裝好基料的布袋放入蒸飯車內(nèi)，0.4磅壓力下滅菌，待蒸汽從蒸飯車密封門(mén)的底部冒出時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)，5-6小時(shí)后，關(guān)閉蒸汽閥門(mén)，打開(kāi)蒸飯車密封門(mén)，待蒸汽散盡后，將已滅菌的煙梗末倒入消毒好的塑料桶內(nèi)蓋嚴(yán)備用；2)菌漿的制備①菌種培養(yǎng)一級(jí)斜面菌種培養(yǎng)，采用固體PDA馬鈴薯培養(yǎng)基，將木霉菌種(TV-1，或T918、Tr13、A405)接種在試管培養(yǎng)基上，26-29℃下培養(yǎng)46-50小時(shí)，得一級(jí)斜面菌種；二級(jí)搖瓶菌種培養(yǎng)，采用液體PDA馬鈴薯培養(yǎng)液(121℃滅菌30-45分鐘)，將一級(jí)斜面菌種接入上述滅菌搖瓶培養(yǎng)液中，26-28℃下振蕩光照培養(yǎng)72-76小時(shí)作為種子液；②液體發(fā)酵培養(yǎng)采用理查氏酵母膏高溫滅菌培養(yǎng)液(121℃滅菌30-45分鐘)，待培養(yǎng)液冷卻至27.5℃時(shí)，將錐形瓶中的種子液按5‰的比例接種入500升發(fā)酵罐，保持27±1℃，通氣量每小時(shí)8立方米，保壓0.05Mpa，培養(yǎng)48小時(shí)得到相應(yīng)拮抗菌的菌漿；3)菌漿的處理制備好的菌漿經(jīng)過(guò)板框過(guò)濾機(jī)過(guò)濾后，得到濾渣，將制備好的基料與濾渣以重量比1∶0.8的比例混合均勻后，再以體積比3％加入抗菌素利福平母液(濃度為10mg/l)，加入體積比2％的鏈霉素母液(濃度為10mg/l)攪勻，備用；4)窗紗培養(yǎng)片、用具和培養(yǎng)室的消毒滅菌處理①窗紗培養(yǎng)片、用具的消毒窗紗培養(yǎng)片采用烤種用的不銹鋼紗網(wǎng)，用75％酒精噴霧進(jìn)行表面消毒，刷子，勺子用75％酒精泡5-10分鐘；②培養(yǎng)室的消毒采用熏蒸消毒，用甲醛∶高錳酸鉀＝2∶1進(jìn)行熏蒸5-7小時(shí)，然后通風(fēng)10小時(shí)左右后備用；5)培養(yǎng)將攪勻處理過(guò)的菌漿用刷子均勻地刷在培養(yǎng)片上，刷時(shí)厚度在1-2mm將刷好的培養(yǎng)片放在下鋪滅菌蒸餾水浸潤(rùn)的脫脂紗布培養(yǎng)盤(pán)上，保持相對(duì)濕度在90％以上，26±1℃光照培養(yǎng)2夭后，室溫控制在27-28℃，待表面產(chǎn)生孢子較多時(shí)，室溫保持30±1℃，通氣、換氣、晾干培養(yǎng)片；6)菌劑的制備將培養(yǎng)片上樣品晾干至含水量2-3％后，取下用粉碎機(jī)粉碎，過(guò)100目篩后，采用血球計(jì)數(shù)器進(jìn)行孢子含量測(cè)定，達(dá)到109個(gè)/克(樣品)，即為合格成品，用分裝機(jī)分裝入袋中。
本發(fā)明的殺菌劑防治對(duì)象是煙草立枯病、猝倒病、黑脛病、赤星病等真菌病害。
權(quán)利要求
1.一種微生物殺菌劑，其特征在于含重量百分比煙梗末或木屑、麥麩等植物粉碎材料85-90％，木霉菌孢子粉8-12％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物殺菌劑，其特征在于所述的木霉菌為T(mén)V-1，或T918、Tr13、A405。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物殺菌劑的制備方法，其特征在于按下列步驟制取1)基料的制備①將煙梗經(jīng)粉碎機(jī)粉碎成煙梗末后，過(guò)20目篩，按過(guò)篩煙梗末∶水＝1∶0.4-0.5的比例加入水，混勻，作為基料裝入棉布袋中；②將裝好基料的布袋放入蒸飯車內(nèi)，0.4磅壓力下滅菌，待蒸汽從蒸飯車密封門(mén)的底部冒出時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)，5-6小時(shí)后，關(guān)閉蒸汽閥門(mén)，打開(kāi)蒸飯車密封門(mén)，待蒸汽散盡后，將已滅菌的煙梗末倒入消毒好的塑料桶內(nèi)蓋嚴(yán)備用；2)菌漿的制備①菌種培養(yǎng)一級(jí)斜面菌種培養(yǎng)，采用固體PDA馬鈴薯培養(yǎng)基，將木霉菌種接種在試管培養(yǎng)基上，26-29℃下培養(yǎng)46-50小時(shí)，得一級(jí)斜面菌種；二級(jí)搖瓶菌種培養(yǎng)，采用液體PDA馬鈴薯培養(yǎng)液，將一級(jí)斜面菌種接入上述滅菌搖瓶培養(yǎng)液中，26-28℃下振蕩光照培養(yǎng)72-76小時(shí)作為種子液；②液體發(fā)酵培養(yǎng)采用理查氏酵母膏高溫滅菌培養(yǎng)液，待培養(yǎng)液冷卻至27.5℃時(shí)，將錐形瓶中的種子液按5‰的比例接種入500升發(fā)酵罐，保持27±1℃，通氣量每小時(shí)8立方米，保壓0.05Mpa，培養(yǎng)48-72小時(shí)得到相應(yīng)拮抗菌的菌漿；3)菌漿的處理制備好的菌漿經(jīng)過(guò)板框過(guò)濾機(jī)過(guò)濾后，得到濾渣，將制備好的基料與濾渣以重量比1∶0.8-1的比例混合均勻后，再以體積比3％加入抗菌素利福平母液，加入體積比2％的鏈霉素母液攪勻，備用；4)窗紗培養(yǎng)片、用具和培養(yǎng)室的消毒滅菌處理；5)培養(yǎng)將攪勻處理過(guò)的菌漿用刷均勻地刷在培養(yǎng)片上，刷時(shí)厚度在1-2mm，將刷好的培養(yǎng)片放在下鋪滅菌蒸餾水浸潤(rùn)的脫脂紗布培養(yǎng)盤(pán)上，保持相對(duì)濕度在90％以上，26±1℃光照培養(yǎng)2夭后，室溫控制在27-28℃，待表面產(chǎn)生孢子較多時(shí)，室溫保持30±1℃，通氣、換氣、晾干培養(yǎng)片；6)菌劑的制備將培養(yǎng)片上樣品晾干至含水量2-3％后，取下粉碎，過(guò)100目篩后，進(jìn)行孢子含量測(cè)定，達(dá)到109個(gè)/克，即為合格成品。
全文摘要
本發(fā)明是一種微生物殺菌劑及其制備方法。其特征在于含重量百分比煙梗末或木屑、麥麩等植物粉碎材料85－90%,木霉菌孢子粉8－12%。該殺菌劑按一定的步驟制取。采用本發(fā)明的微生物殺菌劑進(jìn)行植物病害的生物防治,其效果持久,病害難以產(chǎn)生抗藥性,對(duì)人體和作物無(wú)危害,對(duì)病害的選擇性大,具有廣譜殺菌劑效果,不污染環(huán)境,不會(huì)對(duì)植物產(chǎn)生藥害,安全、無(wú)毒、無(wú)殘留。對(duì)土壤及葉部真菌,特別是疫霉菌、腐霉菌、鐮刀菌及絲核菌、鏈格孢菌、毛盤(pán)孢菌等有顯著防治效果,同時(shí)對(duì)煙草有一定的促生作用。
文檔編號(hào)A01N63/00GK1337164SQ0010999
公開(kāi)日2002年2月27日 申請(qǐng)日期2000年8月9日 優(yōu)先權(quán)日2000年8月9日
發(fā)明者王革 申請(qǐng)人:玉溪紅塔煙草(集團(tuán))有限責(zé)任公司, 云南煙草科學(xué)研究院農(nóng)業(yè)研究所