專利名稱：滅嚙齒動(dòng)物的誘餌凝膠中的微生物制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種在凝膠中含有不同期致病原蟲(chóng)的制劑及其在滅嚙齒動(dòng)物中的應(yīng)用。
人們熟知，肉孢子蟲(chóng)類群的原生動(dòng)物(原生動(dòng)物門、孢子蟲(chóng)綱、球蟲(chóng)亞綱、真球蟲(chóng)目、艾美球蟲(chóng)亞目)對(duì)嚙齒動(dòng)物(家鼠類、害鼠、水 、Nosokia、鼠屬)是致病菌，在足夠的劑量下可使動(dòng)物致死(Rzepczyk 1974，Intern.J.Parasitol.4，447-449；Brehm，F(xiàn)rank1980，Z.Parasitenkd.62，15-30)。一種這類群中的特別對(duì)于多種鼠類致病的寄生蟲(chóng)是Singaporensis肉孢子蟲(chóng)(Zamman等人，1975，z.Parasitenkd.47，169-185)。
寄生蟲(chóng)的終宿主是食肉動(dòng)物或雜食動(dòng)物；對(duì)于singaporensis肉孢子蟲(chóng)則是蛇亞目，例如蟒蛇。在終宿主的腸內(nèi)形成孢子囊寄生蟲(chóng)。這種孢子囊將持續(xù)從糞便排出。如果中間宿主，在Singaporensis肉孢子的情況下例如鼠，通過(guò)口腔感染孢子囊，則孢子囊在鼠的腸內(nèi)孵化并穿過(guò)腸壁。通過(guò)血液循環(huán)這時(shí)到達(dá)另外的器官，在那里它們能通過(guò)分裂(裂配生殖)繁殖。
在這種情況下可證實(shí)有兩種裂配生殖，其一是在感染后約第六天，其二是在感染后約第14-16天。特別大量的裂殖體(裂殖子)出現(xiàn)在肺中，那里它們?cè)趦?nèi)皮細(xì)胞中繁殖。
如果由于嚴(yán)重感染而使裂殖子在肺中大量繁殖，則鼠將在感染后約第16天的第二個(gè)寄生蟲(chóng)裂配生殖期間染病，并且大多數(shù)在數(shù)小時(shí)內(nèi)死亡。
有可能將這種病源體的孢子囊施加給嚙齒動(dòng)物，以致使其死于感染。這種原理可用于滅嚙齒動(dòng)物(Wood 1985，J.Plant Protect.Trop．2，67-69)。已用Singaporensis肉孢子蟲(chóng)成功地進(jìn)行滅鼠(Jkel等人，1996，J.Parasitol.82280-287)。
鼠類和norvegicus感染20000以上孢子囊(與門類有關(guān))照例會(huì)致死。動(dòng)物在感染后14天之前無(wú)任何癥狀。然后很快衰弱，并在感染后的約第16天死于感染。
亞致死感染的鼠也在感染后14天無(wú)任何病狀，并在抗過(guò)感染后未喪命。感染數(shù)天之后這些動(dòng)物已具有抗病菌的免疫力。這些動(dòng)物在以后對(duì)用Singaporensis肉孢子蟲(chóng)制劑殺滅已不敏感了。
孢子囊可在水性懸浮應(yīng)付中保存兩年，而不明顯喪失及致病性。這種懸浮液可通過(guò)食管飼法對(duì)鼠給藥，并表明在相應(yīng)劑量下的致死作用。但是在干燥狀態(tài)下孢子囊不能存活。
為了滅鼠應(yīng)利用誘餌，并被動(dòng)物吞食。這種帶有Singaporensis肉孢子蟲(chóng)的孢子囊的誘餌在潮濕時(shí)都是致病的。在干燥后孢子囊很快喪失其致病能力。因此通常的基于谷物的誘餌不能用于這種寄生蟲(chóng)的有效施藥。在申請(qǐng)人的研究中，亦未能在基于谷物的誘餌中保持Singaporensis肉孢子蟲(chóng)的孢子囊的傳染能力。在混合后僅一天，這種誘餌已喪失作用。
含孢子囊的誘餌應(yīng)該以濕狀態(tài)包裝在薄膜中。這種濕制劑的缺點(diǎn)是難于保存，因?yàn)楣任镌跀?shù)天內(nèi)便會(huì)發(fā)霉或發(fā)芽。一種方案是在誘餌的空腔內(nèi)配入懸浮液。膏狀誘餌的碎塊是成功應(yīng)用的例子，該誘餌內(nèi)部的空腔中皆含有致死劑量的懸浮液。但是，這種誘餌也應(yīng)在制備后數(shù)天中應(yīng)用，因?yàn)樗畷?huì)散發(fā)，或者膏狀基質(zhì)吸收水并脹起或發(fā)酵，從而使這種誘餌不能使用。
迄今用如Singaporensis肉孢子蟲(chóng)的原生動(dòng)物滅嚙齒動(dòng)物的唯一實(shí)際可能是用含孢子囊的水性懸浮液和誘餌基質(zhì)，例如谷物就在應(yīng)用前制成誘餌。但問(wèn)題在于很難取出計(jì)算量的孢子囊，因?yàn)樗趹腋∫褐泻芸煜鲁敛饧谌萜鞯牡撞俊Ｒ虼?，這樣制成的誘餌含不確定量的、不均勻分布的孢子囊。這種誘餌很快變干，常常在混制過(guò)程中變干。其結(jié)果是孢子囊死亡，而誘餌則在數(shù)小時(shí)后即不再有效。
現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)，肉孢子蟲(chóng)屬-孢子囊出人意料地能在某些凝膠中長(zhǎng)期保持其感染性，雖然過(guò)去的研究曾經(jīng)表明，在谷物上、在如膨潤(rùn)土的膏狀物和凝膠中在數(shù)天之后不再具有感染性。它們?cè)诒疚乃龅哪z中能存活幾個(gè)月是令人吃驚和意料之外的。從文獻(xiàn)已知，在溫和地區(qū)的很強(qiáng)的肉孢子蟲(chóng)，例如gigantea肉孢子蟲(chóng)對(duì)pH-值的變化和化學(xué)物質(zhì)的反應(yīng)敏感(McKenna等人，Veterinary Parasitology 1992，451-16)。因此，特別意外的是甚至地pH-值可能變化，此外還加防腐劑的情況下，寄生物的存活概率無(wú)明顯的減小。
因此，本發(fā)明能夠?qū)㈡咦幽冶４嬖谀z中以便以后用于滅嚙齒動(dòng)物。它們的這種基質(zhì)中均勻分布。從而有可能取出確定量的孢子囊。確定量的這種凝膠能與誘餌基質(zhì)混合，直至達(dá)到均勻狀態(tài)，因?yàn)槟z只是很慢地被基質(zhì)吸收。由于所采用的凝膠只是很慢地通過(guò)蒸發(fā)脫水，誘餌在干燥氣氛中應(yīng)用時(shí)亦能保持潮濕，從而保留其感染性。
通過(guò)這種方式可能將孢子囊保存數(shù)月，而不致使凝膠分離或使病原體感染性明顯降低。所引的應(yīng)用Carbopo1-凝膠的例子證明，這種混合物可應(yīng)用數(shù)月。
本發(fā)明要求保護(hù)在凝膠中保存單細(xì)胞寄生蟲(chóng)狀態(tài)的原理。這種凝膠單獨(dú)或與餌劑混合用于滅嚙齒動(dòng)物。
原則上孢子蟲(chóng)綱的全部原生動(dòng)物皆適宜作為致病生物。特別適宜的是球蟲(chóng)亞綱類，最適宜的是艾美球蟲(chóng)亞目的代表。例如，但不限于肉孢子蟲(chóng)屬，如Singaporensis肉孢子蟲(chóng)。
本發(fā)明的制劑可以所有常規(guī)為制備嚙齒動(dòng)物的飼料誘餌的配方加工，例如加工成基于谷物的誘餌，呈膏、凝膠和蠟塊形式，以及呈谷物和配方助劑的擠壓混合物。其次，病源體可以水基飲用誘餌的形式提供。本發(fā)明意義中的誘餌可如滅有害嚙齒動(dòng)物的常規(guī)誘餌那樣使用。它們可放在改建的空間和野外，根據(jù)目標(biāo)物和誘餌放置密度，每個(gè)誘餌放置位置可放5g-500g。它們也可放在擬滅嚙齒動(dòng)物的建筑物的入口。
凝膠中病源體的劑量可任意調(diào)整。優(yōu)選的劑量為1000-10000000孢子囊/ml。特別優(yōu)選500000-2000000孢子囊/ml。
誘餌中病源體的劑量應(yīng)為1000-200000孢子囊/g誘餌，優(yōu)選2000-100000孢子囊/g，更優(yōu)選的濃度為10000-30000，特別優(yōu)選20000孢子囊/g。亦可采用更高的劑量，但通常不需要。而且既可采用一種病源體的孢子囊，又可采用不同病源體的孢子囊的混合物。
本發(fā)明意義上的擬滅的嚙齒動(dòng)物系指嚙齒目的嚙齒動(dòng)物，特指家鼠類、鼠屬、害鼠、Nosokia和田鼠屬。尤其指鼠類和害鼠的代表，例如家鼠類、norvegicus鼠、bengalensis鼠、indica鼠。
本發(fā)明意義上的凝膠系指水基和與相應(yīng)增稠劑混合的凝膠。作為增稠劑可采用如纖維素衍生物的高分子，例如羥丙基纖維素、羥乙基纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥乙基甲基纖維素、羥乙基丙基纖維素或黃原膠、藻酸鹽、聚乙烯基醇、聚乙烯基吡咯烷酮、聚丙烯酸和它們的衍生物或無(wú)機(jī)凝膠形成劑如高分散的二氧化硅(參見(jiàn)，例如，Rudolf Voigt，PharmazeutischeTechnologie(藥物工業(yè))，362-385頁(yè)，Ulstein Mosby)。特別適宜的是纖維素衍生物和聚丙烯酸。
凝膠的水含量變化寬，例如30-98重量％，尤其是50-90重量％，更優(yōu)選70-80重量％。
凝膠的pH-值變化也寬，例如pH2-10，尤其是pH4-9，更優(yōu)選pH6-8。
凝膠可添加防府劑如對(duì)羥基苯甲酸酯、苯甲酸鹽、山梨酸、檸檬酸鹽或?qū)αu基苯甲酸酯；保濕劑如甘油或丙二醇；氧化穩(wěn)定劑如丁基羥甲苯或丁基羥苯甲醚、維生素E、抗壞血酸、調(diào)味劑或其它配方助劑。
在本發(fā)明的制劑中，病源原生物的孢子囊還可與另一些如對(duì)滅嚙齒動(dòng)物有作用的化學(xué)活性物組合使用。這里可列舉，但不限于香豆素的例子。
本發(fā)明的制劑通過(guò)相應(yīng)量的組分的混合來(lái)制備。混合可采用機(jī)械的，例如在攪拌罐或其它適合此目的的設(shè)備中實(shí)現(xiàn)。
下列實(shí)施例應(yīng)對(duì)本發(fā)明作出闡明，但不作限制。實(shí)施例方法所采用的S5門類的孢子囊(由Hohenheim大學(xué)，寄生蟲(chóng)系提供)在1998年8月17日取自泰國(guó)的一個(gè)海峽。計(jì)數(shù)采用NeubauerHmozytometer計(jì)。凝膠用1％Carbopol 974P(Carbopole弱交聯(lián)的聚丙烯酸)和水(342ppm)制備。pH值采用2N NaOH滴定。作為防腐劑采用0.02％Solbrol P和0.14％Solbrol M(Solbrole對(duì)-羥基苯甲酸酯(-甲基，-乙基，-丁基)。一個(gè)試樣含20％甘油。向所有的凝膠加入50000孢子囊/ml，并劇烈攪拌，以便達(dá)到均勻分布。凝膠在約6℃下保存在冷箱中，并按相應(yīng)的試驗(yàn)計(jì)劃按各種試驗(yàn)日期進(jìn)行施藥。
用野生的norvegicus鼠作試驗(yàn)動(dòng)物。在喂孢子囊誘餌前14小時(shí)動(dòng)物不隨意進(jìn)食和水。誘餌基于麥屑。每只鼠得到5g與1ml凝膠混合的麥屑。只是在鼠吞食孢子囊誘餌之后，鼠才能再隨意得到標(biāo)準(zhǔn)飼料。每種劑量采用2只鼠，對(duì)它們?cè)诮邮軇┝亢笥^察21天。死亡率按與凝膠配方和貯存時(shí)間的關(guān)系來(lái)確定。在預(yù)期的病源體作用期(第13-第17天)內(nèi)癥狀表現(xiàn)重的鼠在自然條件下不能活下來(lái)，因此被滅掉。結(jié)果表1攝取含50000孢子囊(*為100000孢子囊)的不同凝膠的麥屑誘餌后的死亡率與凝膠貯存時(shí)間的關(guān)系。凝膠 貯存期(周)內(nèi)的死亡率(％)pHSolbrol 甘油 0246810121419246,17 + -100100 100 5007,04 + +10050 00 07,05 - -100 100 1000 50*8,19 + -100100 100 0 0
權(quán)利要求
1.一種在含水凝膠中含孢子囊致病原生動(dòng)物的制劑。
2.權(quán)利要求1的制劑，其特征在于，該水性凝膠基于水和增稠劑，增稠劑選自纖維素衍生物、黃原膠、藻酸鹽、聚乙烯基醇、聚乙烯基吡咯烷酮、聚丙烯酸和無(wú)機(jī)凝膠形成劑。
3.權(quán)利要求1和2的制劑，其特征在于，它們含有濃度為1000-10000000/ml的孢子囊致病原生動(dòng)物。
4.權(quán)利要求1和2的制劑，其特征在于，它們含30-98％的水。
5.一種滅嚙齒動(dòng)物的制劑，其特征在于，除常規(guī)誘餌物質(zhì)之外，還含有權(quán)利要求1和2的制劑。
6.權(quán)利要求1和2的制劑在制備滅嚙齒動(dòng)物的誘餌中的應(yīng)用，其特征在于，將該制劑與常規(guī)誘餌物質(zhì)混合。
7.權(quán)利要求1、2和5的制劑在滅嚙齒動(dòng)物中的應(yīng)用，其特征在于，將制劑撒在嚙齒動(dòng)物的生活空間。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種含不同階段的致病單細(xì)胞生物的凝膠制劑及其在滅嚙齒動(dòng)物中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A01N63/00GK1429076SQ01809153
公開(kāi)日2003年7月9日 申請(qǐng)日期2001年5月4日 優(yōu)先權(quán)日2000年5月12日
發(fā)明者J·卡爾貝, T·貝克, S·恩德波爾斯, T·耶克爾, S·洪納克 申請(qǐng)人:拜爾農(nóng)作物科學(xué)股份公司