專(zhuān)利名稱(chēng)：：動(dòng)物飼料的制作方法專(zhuān)利說(shuō)明動(dòng)物飼料發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及一種飼料。特別地，本發(fā)明涉及一種包含適于動(dòng)物消化的淀粉的飼料。對(duì)于某些實(shí)施方案，動(dòng)物為家禽或豬。
背景技術(shù)：
：飼料中淀粉的消化性高度可變并且依賴(lài)于包括淀粉和飼料基質(zhì)的物理結(jié)構(gòu)在內(nèi)的許多因素。受限于植物細(xì)胞或食物基質(zhì)內(nèi)的淀粉和一些未能充分膠化的淀粉顆粒，淀粉僅僅由α-淀粉酶十分緩慢地水解因而可以避免在小腸里的完全消化。在小腸中高度耐淀粉酶消化的淀粉和淀粉降解產(chǎn)物成為大腸中微生物發(fā)酵的底物。在大腸中由淀粉發(fā)酵產(chǎn)生的熱量收益小于在小腸中如果淀粉得以消化和吸收所獲得的熱量收益，導(dǎo)致了動(dòng)物的顯著能量損失。在微生物降解以前，于小腸中降解的淀粉由腸道上皮直接吸收，因而有效地將飼料的能量傳遞給動(dòng)物。由微生物菌落降解的淀粉，僅一部分能量被動(dòng)物吸收。這意味著易于降解的淀粉和由耐性淀粉降解酶消化的耐性淀粉能夠比耐性淀粉得以更有效地利用，后者由微生物菌落降解。DeSchrijver等(6)報(bào)道飼以耐性淀粉的大鼠和豬與飼以易降解淀粉的大鼠和豬相比具有顯著低的表觀回腸消化性，即使當(dāng)耐性淀粉量?jī)H占全部食物量的6％時(shí)亦是如此。膳食纖維和耐性淀粉是單胃動(dòng)物結(jié)腸中微生物菌落的底物。由于這些底物對(duì)于人類(lèi)健康的重要性，已經(jīng)進(jìn)行了廣泛研究以評(píng)估逃脫人類(lèi)小腸的耐性淀粉量。耐性淀粉最獲接受的效果是揮發(fā)性脂肪酸VFA的形成，而VFA防止結(jié)腸癌的發(fā)生，但耐性淀粉可能還具有其他有益效果(16)。報(bào)道最多的試驗(yàn)在人類(lèi)中進(jìn)行(最多是人類(lèi)ileostomates，例如在(11)中所評(píng)論的)，盡管豬和大鼠的試驗(yàn)也已經(jīng)做過(guò)。對(duì)于不同類(lèi)型淀粉的體內(nèi)(人類(lèi))和體外降解的比較研究表明體外模型提供可靠的結(jié)果。例如，Silvester等(24)基于Englyst等(8)描述的方法量化了ileostomates中未被小腸吸收的耐性淀粉量并將之與體外消化比較。他們發(fā)現(xiàn)全部耐性淀粉的97％未被小腸吸收。類(lèi)似地，Englyst等的研究顯示91％以上的耐性淀粉未被小腸吸收?？梢詫⒛托缘矸鄱x為由幾種不同類(lèi)型淀粉組成，一種為粗淀粉。這已為例如Muir等(20)的實(shí)驗(yàn)證實(shí)，Muir等顯示粗淀粉為耐性淀粉的一例。DeSchrijver等(6)報(bào)道糞便的可消化值和代謝能量值，這些值在飼以耐性淀粉的大鼠中明顯較低。此外，當(dāng)飼以退減的高直鏈淀粉玉米淀粉時(shí)，豬攝入的耐性淀粉明顯地降低了表觀回腸能量消化性。Ranhotra等(22)發(fā)現(xiàn)給以耐性淀粉的大鼠增重明顯地比給以可降解淀粉組的少。Ito等(15)量化了在用含有正常的淀粉、未經(jīng)處理的高耐性淀粉玉米和處理過(guò)的高耐性淀粉玉米的三種不同食物喂飼的大鼠的不同消化系統(tǒng)部分的淀粉量。他們發(fā)現(xiàn)飼以耐性淀粉，尤其是處理過(guò)的耐性淀粉的大鼠，在盲腸中具有較高的淀粉含量。另外，通過(guò)比較人與大鼠的耐性淀粉消化，Roe等(23)發(fā)現(xiàn)大鼠在利用耐性淀粉及非淀粉多糖方面比人類(lèi)更有效。相反，Moran(19)報(bào)道淀粉的消化在家禽中并不是問(wèn)題，意味著所有淀粉都可以在比如雞的消化系統(tǒng)中得以降解和吸收。本發(fā)明試圖提供一種生產(chǎn)可包含淀粉的動(dòng)物食用飼料的有用方法。本發(fā)明在一個(gè)寬的方面，本發(fā)明涉及一種用在含淀粉飼料上的包含一種酶的組分的應(yīng)用。本發(fā)明也涉及混有所述組分的飼料。在一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種用于含淀粉飼料的包含一種酶的組分的應(yīng)用，該酶具有淀粉酶活性并能夠降解耐性淀粉。本發(fā)明也涉及混有所述組分的飼料。發(fā)明陳述本發(fā)明的各個(gè)方面在隨附的權(quán)利要求書(shū)以及下面描述中得以呈現(xiàn)。例如，第一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種用于含淀粉飼料的組分，其中所述組分包含一種酶；其中該酶具有淀粉酶活性并能夠降解耐性淀粉。第二個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種包含淀粉和酶的飼料，其中該酶具有淀粉酶活性并能夠降解耐性淀粉。第三個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種降解飼料中耐性淀粉的方法，包括將所述耐性淀粉與具有淀粉酶活性并能夠降解所述耐性淀粉的酶接觸。第四個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種酶在生產(chǎn)含淀粉飼料中的應(yīng)用用以降解耐性淀粉，其中該酶具有淀粉酶活性并能夠降解所述的耐性淀粉。第五個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種酶在生產(chǎn)飼料中的應(yīng)用，以提高所述飼料熱量值，其中該酶具有淀粉酶活性并能夠降解耐性淀粉。第六個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種酶在生產(chǎn)飼料中的應(yīng)用，以提高動(dòng)物性能，其中該酶具有淀粉酶活性并能夠降解耐性淀粉。另一方面，本發(fā)明涉及一種生產(chǎn)飼料的方法包括混合淀粉和酶，其中該酶具有淀粉酶活性并能夠降解耐性淀粉。在另外一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及一種確定用于飼料的組分的方法，其中所述組分包含一種酶，所述方法包括將耐性淀粉與一種候選組分接觸并測(cè)定所述耐性淀粉的降解程度；其中所述酶具有淀粉酶活性并能夠降解耐性淀粉。一些優(yōu)選的方面在一個(gè)優(yōu)選的方面，本發(fā)明所用的酶是一種淀粉酶。在一個(gè)優(yōu)選的方面，本發(fā)明所用的酶是熱穩(wěn)定的。在一個(gè)優(yōu)選的方面，本發(fā)明所用的酶是pH穩(wěn)定的。在一個(gè)優(yōu)選的方面，本發(fā)明所用的酶是一種粗淀粉的降解酶。在一個(gè)優(yōu)選的方面，本發(fā)明所用的酶是一種選自由環(huán)狀芽孢桿菌(Bacilluscirculans)淀粉酶、牛鏈球菌(Streptococcusbovis)淀粉酶、隱球菌S-2(CryptococcusS-2)淀粉酶、曲霉K-27(AspergillusK-27)淀粉酶、地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis)淀粉酶和胎毛高溫菌淀粉酶組成的組的淀粉酶。在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的方面中，所述飼料用于豬和家禽。在本發(fā)明的一個(gè)更加優(yōu)選的方面中，所述飼料包含如豆類(lèi)和谷類(lèi)的原料。一些優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明的一些優(yōu)點(diǎn)在下面的評(píng)論中得以呈現(xiàn)。例如，由于動(dòng)物中淀粉和/或淀粉降解產(chǎn)物的降解有顯著的提高，因而使用一種含酶的組分是有利的，該酶具有淀粉酶活性并能夠降解耐性淀粉。此外，由于動(dòng)物淀粉和/或淀粉降解產(chǎn)物的消化性有顯著的提高，因而使用一種含酶的組分是有利的，該酶具有淀粉酶活性并能夠降解耐性淀粉。通過(guò)另一實(shí)施例的方式，由于一種含酶的組分提供了一種將能量由飼料轉(zhuǎn)移至動(dòng)物的效率提高的方法，因而使用它是有利的，所述酶具有淀粉酶活性并能夠降解耐性淀粉。此外，由于一種含酶的組分提供了一種提高耐性淀粉生物利用度的方法，因而使用它是有利的，所述酶具有淀粉酶活性并能夠降解耐性淀粉。飼料可以把本發(fā)明中所使用的飼料配制為滿(mǎn)足特定動(dòng)物群的特殊需要并以一種可被動(dòng)物代謝的形式提供必需的糖類(lèi)、脂肪、蛋白質(zhì)和其它營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。優(yōu)選地，動(dòng)物飼料是用于豬或家禽的飼料。這里所用的術(shù)語(yǔ)“豬”是指像家豬、肉豬或野豬的非反芻類(lèi)雜食動(dòng)物。代表性地，豬飼料包括約50％糖類(lèi)、約20％蛋白質(zhì)和約5％脂肪。一種高能豬飼料的實(shí)例是在玉米的基礎(chǔ)上常?；旌弦燥暳涎a(bǔ)充物例如蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)、維生素和氨基酸如賴(lài)氨酸和色氨酸。豬飼料的實(shí)例包括動(dòng)物蛋白質(zhì)產(chǎn)品、海產(chǎn)品、奶產(chǎn)品、谷類(lèi)產(chǎn)品和植物蛋白產(chǎn)品，所有這些產(chǎn)品又可以進(jìn)一步包括自然調(diào)味料、人工調(diào)味料、小或大的礦物質(zhì)、動(dòng)物脂肪、植物脂肪、維生素、防腐劑或藥物如抗生素。在本說(shuō)明書(shū)中包括隨附的權(quán)利要求書(shū)中，應(yīng)當(dāng)理解當(dāng)提及“豬飼料”時(shí)此提法是指包括“過(guò)渡”或“起始”飼料(用于使幼豬斷乳)和“終結(jié)”或“生長(zhǎng)”飼料(在過(guò)渡期之后用于使豬生長(zhǎng)以達(dá)到適合上市的年齡和/或大小)。這里所用的術(shù)語(yǔ)“家禽”是指像雛雞、仔雞、母雞、公雞、閹雞、火雞、鴨、獵禽、小母雞或小雞的禽類(lèi)。家禽飼料可以指“完全”飼料，因?yàn)樗鼈儼康牡鞍踪|(zhì)、能量、維生素、礦物質(zhì)，和其它對(duì)于適當(dāng)生長(zhǎng)、產(chǎn)蛋和鳥(niǎo)類(lèi)健康所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。但是，家禽飼料可以進(jìn)一步包含維生素、礦物質(zhì)或藥物如球蟲(chóng)抑制藥(例如莫能星鈉、拉沙里菌素、安丙嘧吡啶、沙利霉素和磺胺喹啉)和/或抗生素(例如青霉素、桿菌肽、金霉素和土霉素)。用于產(chǎn)肉的幼年雛雞、仔雞、火雞和鴨的飼養(yǎng)不同于留作產(chǎn)蛋的小母雞。仔雞、火雞和鴨具有較大的身體并且較產(chǎn)蛋型雞更快地增重。因此，對(duì)這些禽類(lèi)飼以高蛋白和高能量水平的食物。在本說(shuō)明書(shū)中包括隨附的權(quán)利要求書(shū)中，應(yīng)當(dāng)理解當(dāng)提及“家禽飼料”時(shí)此提法是指包括“起始”飼料(孵化后)、“終結(jié)”、“生長(zhǎng)”或“發(fā)育”飼料(從6-8周齡直到屠宰大小)和“蛋雞”飼料(在產(chǎn)蛋期間喂飼)?？梢园驯景l(fā)明所使用的飼料配制成滿(mǎn)足關(guān)于，例如產(chǎn)肉、產(chǎn)奶、產(chǎn)蛋、繁殖和逆境反應(yīng)的動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)需求。此外，可以把本發(fā)明中所使用的動(dòng)物飼料配制為用以提高糞肥品質(zhì)。在一個(gè)優(yōu)選的方面，動(dòng)物飼料包含像豆類(lèi)，如豌豆或大豆，或像谷類(lèi)，如小麥、玉米(玉蜀黍)、黑麥或大麥。適當(dāng)?shù)兀牧峡梢允邱R鈴薯。淀粉淀粉是植物中的主要食物儲(chǔ)備物并提供全世界人類(lèi)消耗熱量的70-80％。淀粉、來(lái)自淀粉的產(chǎn)物和蔗糖構(gòu)成了動(dòng)物食物中最主要的可消化的碳水化合物。在食品生產(chǎn)中所用的淀粉量大大超出了所有其它飼料成份的組合。淀粉自然存在為離散的顆粒稱(chēng)為顆粒體，該顆粒體相對(duì)致密且不可溶。大多數(shù)淀粉顆粒體由兩種聚合體的混合物組成一種基本的稱(chēng)為直鏈淀粉的線性多聚糖和一種高度分枝的稱(chēng)為支鏈淀粉的多糖。支鏈淀粉是一種由通過(guò)(1→4)鍵連接的α-D-吡喃葡萄糖基鏈組成的非常大的分枝分子，其中所述鏈由α-D-(1→6)鍵相連以形成分枝。支鏈淀粉存在于所有的天然淀粉中，構(gòu)成了大多數(shù)普通淀粉的75％。完全由支鏈淀粉組成的淀粉稱(chēng)為蠟質(zhì)淀粉，例如蠟質(zhì)玉米(蠟質(zhì)玉蜀黍)。直鏈淀粉基本上是由通過(guò)(1→4)鍵連接的α-D-吡喃葡萄糖基組成的線性鏈，帶有少量的α-D-(1→6)分枝。大多數(shù)淀粉包含約25％的直鏈淀粉。未經(jīng)破壞的淀粉顆粒體在冷水中不可溶但能夠可逆地吸水膨脹。然而，在有水情況下加熱時(shí)，淀粉顆粒體內(nèi)的分子順序被打亂。這一過(guò)程稱(chēng)為膠凝作用。在過(guò)量的水中對(duì)淀粉顆粒體持續(xù)加熱可以導(dǎo)致進(jìn)一步膨脹和可溶組分的額外浸出。在剪力的作用下顆粒體被破壞并形成一種糊劑。冷卻時(shí)，一些淀粉分子開(kāi)始重聯(lián)，形成一種沉淀或膠凝。這一過(guò)程稱(chēng)為退減作用或退進(jìn)作用。淀粉分子，與其它多糖分子一樣，通過(guò)水解作用去多聚化形成單糖或寡糖如葡萄糖和麥芽糖。酶如淀粉酶和淀粉葡糖苷酶(葡萄糖淀粉酶)水解淀粉形成D-葡萄糖。去分枝酶，如異淀粉酶或支鏈淀粉酶水解分枝淀粉中的(1→6)鍵。環(huán)糊精葡聚糖轉(zhuǎn)移酶從直鏈淀粉和支鏈淀粉中形成(1→4)鍵連接的α-D-吡喃葡萄糖基環(huán)。天然淀粉的功能特性如凝膠化、退減作用和成糊作用可以通過(guò)改性得到提高。改性配合處理?xiàng)l件提高了淀粉糊耐熱和耐酸的能力并且引入了特殊的功能。改性后的淀粉為功能性的豐富的食物主要成份及添加物。代表性地，改性可以單獨(dú)進(jìn)行或結(jié)合例如交聯(lián)或多聚物鏈、非交聯(lián)衍生化和預(yù)凝膠化而進(jìn)行。可以獲得的特定改進(jìn)包括提高的溶解性、成膠作用的抑制、與其它物質(zhì)相互作用的改進(jìn)以及穩(wěn)定性的改進(jìn)。在本說(shuō)明書(shū)中包括隨附的權(quán)利要求書(shū)中，應(yīng)當(dāng)理解當(dāng)提及“淀粉”時(shí)此提法是指包括天然淀粉和經(jīng)過(guò)部分和全面改性的淀粉，例如穩(wěn)定化、交聯(lián)化、預(yù)凝膠化或衍生的。耐性淀粉將耐性淀粉定義為“不能為健康個(gè)體小腸吸收的淀粉和淀粉降解產(chǎn)物的總和”(3)。耐性淀粉是至少四種主要類(lèi)型的異質(zhì)混合物耐性淀粉1-物理隔離的淀粉，發(fā)現(xiàn)于粗研磨的或經(jīng)咀嚼的禾谷、豆類(lèi)和谷類(lèi)中；耐性淀粉2-耐性淀粉顆?；蛭茨z化的淀粉顆粒，膠化前高度耐α-淀粉酶的消化，例如粗淀粉像未煮熟的馬鈴薯、綠香蕉和高直鏈淀粉的淀粉；耐性淀粉3-經(jīng)退減的淀粉聚合物(主要為直鏈淀粉)，由淀粉經(jīng)膠凝作用后冷卻制得。經(jīng)退減的直鏈淀粉高度耐酶作用，而經(jīng)退減的支鏈淀粉則耐性較弱并能通過(guò)再加熱發(fā)生膠凝；以及耐性淀粉4-經(jīng)化學(xué)修飾的淀粉。所有四種耐性淀粉在食物中的量可以通過(guò)食品加工技術(shù)和植物栽培實(shí)踐(例如禾谷或谷類(lèi)直鏈淀粉量高低不同)來(lái)控制。到達(dá)大腸((結(jié)腸)的淀粉量在很大程度上受動(dòng)物食性(即淀粉的質(zhì)量和淀粉的植物來(lái)源)和含淀粉食物的生產(chǎn)加工方法的影響。例如未煮熟飼料中的耐性淀粉量已由等(10)分類(lèi)如下耐性淀粉材料(干物質(zhì)％)可忽略不計(jì)(＜1％)煮熟的馬鈴薯(熱)煮熟的大米(熱)意大利面早餐谷物(含糠麩)小麥粉低(1-2.5％)早餐谷物餅干面包意大利面煮熟的馬鈴薯(冷)煮熟的大米(冷)中等(2.5-5％)早餐谷物炸馬鈴薯壓縮蔬菜高(5-10％)煮熟的豆類(lèi)(小扁豆、雞豌豆，蠶豆)豌豆糙米高壓蒸汽處理并冷卻的淀粉(小麥、馬鈴薯、玉米)煮熟并冷凍的淀粉食物非常高(＞10％)生馬鈴薯生豆類(lèi)淀粉玉米生香蕉經(jīng)退減的直鏈淀粉本發(fā)明所使用的飼料可以包含上述1-4的四種類(lèi)型耐性淀粉中的任何一種或多種。此外，本發(fā)明所使用的飼料可以包含易降解淀粉和/或比如包被淀粉或粗淀粉的耐性淀粉。到目前為止，沒(méi)有人提出在含淀粉飼料中使用一種含酶組分，該酶具有淀粉酶活性并能夠降解耐性淀粉。例如，可在下述示教中獲得參考。Muir等(Am.J.Nutr.1995，61卷，82-89頁(yè))教導(dǎo)了食物處理和不同玉米品種的效果，而這些可以影響逃避小腸消化的淀粉量。特別地，他們教導(dǎo)了含淀粉食物能夠得到控制以提高逃避消化的淀粉量，例如通過(guò)使用高直鏈淀粉而非正常禾谷類(lèi)品種或通過(guò)對(duì)谷類(lèi)的更粗磨制。淀粉酶本發(fā)明所使用的合適的酶能夠水解或降解淀粉如耐性淀粉和/或淀粉降解產(chǎn)物。在一方面，本發(fā)明所使用的酶是淀粉酶，即能夠水解淀粉為單糖和/或寡糖，和/或其生物(即糊精)。這里所用的“淀粉酶”是指胞內(nèi)酶如α-淀粉酶，該酶參與裂解淀粉成還原糖，如單糖或寡糖例如像麥芽糖的二糖的途徑。特別地，α-淀粉酶催化1，4-α-葡糖苷鍵的內(nèi)水解，以從直鏈淀粉(由α-(1→4)鍵連成的葡萄糖同聚物)或支鏈淀粉中主要生成α-麥芽糖。α-淀粉酶具有相當(dāng)?shù)纳虡I(yè)價(jià)值，用于淀粉處理的起始階段(液化)；用于酒精生產(chǎn)；用作清潔劑基質(zhì)的清潔劑；及用于紡織工業(yè)淀粉退漿。α-淀粉酶由諸多種微生物包括芽孢桿菌屬(Bacillus)、曲霉屬(Aspergillus)和高溫菌屬(Thermomyces)產(chǎn)生。大多數(shù)商業(yè)淀粉酶由地衣芽孢桿菌(B.licheniformis)、淀粉液化芽孢桿菌(B.amyloliquefaciens)、枯草芽孢桿菌(B.subtilis)或嗜脂肪熱桿菌(B.stearothermophilus)產(chǎn)生。近年來(lái)商業(yè)上優(yōu)選的酶是由地衣芽孢桿菌產(chǎn)生的，這是由于它們至少在中性和弱堿性pH下的熱穩(wěn)定性和性能。優(yōu)選地，淀粉酶選自環(huán)狀芽孢桿菌F2淀粉酶、牛鏈球菌淀粉酶、隱球菌S-2淀粉酶、曲霉K-27淀粉酶、地衣芽孢桿菌淀粉酶和/或胎毛高溫霉菌淀粉酶。已經(jīng)將重組DNA技術(shù)用于探究哪些殘基對(duì)于淀粉酶的代謝活性是重要的和/或探究改進(jìn)在不同淀粉酶的活性位點(diǎn)內(nèi)特定氨基酸的效果(Vihinen，M.等(1990)J.Bichem.107267-272；Holm，L等(1990)ProteinEngineering3181-191；Takase，K.等(1992)BiochemicaetBiophysicaActa，1120281-288；Matsui，L.等(1992)FebsLetters310卷3期216-218頁(yè))；哪些殘基對(duì)于熱穩(wěn)定性是重要的(Suzuki，Y.等(1989)J.Biol.Chem.26418933-18938)；一個(gè)研究組已經(jīng)用這些方法在一種地衣芽孢桿菌淀粉酶(已知為熱穩(wěn)定的)的不同的組氨酸殘基處引入了突變。當(dāng)與其它類(lèi)似的芽孢桿菌淀粉菌比較時(shí)，一種地衣芽孢桿菌具有過(guò)多的組氨酸，因此，有人提出替換一個(gè)組氨酸可能會(huì)影響酶的熱穩(wěn)定性(Declerck，N等(1990)J.Biol.Chem.26515481-15488；FR2655178-A1；Joyet，P等(1992)Bio/Technology101579-1583)。在商業(yè)上，α-淀粉酶可以依賴(lài)于商業(yè)應(yīng)用，在如高和低的pH條件的迥然不同條件下使用。例如，α-淀粉酶可以用于淀粉的液化，這一過(guò)程優(yōu)選在低pH下進(jìn)行(pH＜5.5)。另一方面，淀粉酶可以用于商業(yè)上器皿保養(yǎng)或衣服清潔劑，而這些則經(jīng)常含有諸如漂白劑或過(guò)酸的氧化劑，而且它們用于更加堿性的條件下。為了在不同條件下改變淀粉酶的穩(wěn)定性或活性分布圖，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)選擇性地替換、取代或刪除氨基酸，如甲硫氨酸、色氨酸、酪氨酸、組氨酸或半胱氨酸，會(huì)導(dǎo)致變異酶與其前體相比分布圖發(fā)生了改變。由于當(dāng)前商業(yè)上現(xiàn)有的淀粉酶在不同條件下是不能令人接受的(穩(wěn)定的)，因而對(duì)具有改變的穩(wěn)定性和/或活性分布圖的淀粉酶有所需求。與野生型或前體酶相比，這種改變的穩(wěn)定性(氧化性、熱或pH特性分布圖)能夠在保持足夠酶活力的情況下獲得。通過(guò)引入這些突變所影響的特性可以是在保持熱穩(wěn)定性時(shí)氧化穩(wěn)定性的變化或反之亦然。此外，在α-淀粉酶前體序列中不同的氨基酸取代為可氧化氨基酸或是一個(gè)或多個(gè)可氧化氨基酸的刪除可以導(dǎo)致在一個(gè)pH上改變的酶活性，而不認(rèn)為是前體α-淀粉酶的最適pH。換句話說(shuō)，本發(fā)明的突變酶也可以具有變化的pH性能分布圖，而這可能歸因于提高的酶氧化穩(wěn)定性。這里所用的術(shù)語(yǔ)“淀粉酶”也指包括編碼α-淀粉酶的突變DNA序列的表達(dá)產(chǎn)物α-淀粉酶突變體在內(nèi)的各種形式的α-淀粉酶，其中所述突變?chǔ)?淀粉酶通常通過(guò)在體外對(duì)編碼一種自然存在的或重組的α-淀粉酶的前體DNA序列進(jìn)行修飾獲得，以編碼在前體氨基酸序列中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的取代或刪除。產(chǎn)生淀粉酶的生物包括動(dòng)物、植物、藻類(lèi)、真菌、古細(xì)菌和細(xì)菌。已經(jīng)對(duì)編碼α-淀粉酶的基因進(jìn)行了分離和表征。例如，EP-B-0470145披露了馬鈴薯植物中的α-淀粉酶核酸序列。α-淀粉酶由至少由5個(gè)單獨(dú)基因構(gòu)成的基因家族編碼，這5個(gè)基因基于它們的同源性可以分入兩個(gè)亞家族，3型淀粉酶和1型淀粉酶。例如在馬鈴薯植物中兩組α-淀粉酶得以不同地表達(dá)；3型淀粉酶在根、塊莖、芽和莖組織中表達(dá)；而1型α-淀粉酶在芽和莖組中表達(dá)。到目前為止，沒(méi)有人提出在含淀粉飼料中使用一種含酶組分，該酶具有淀粉酶活性并能夠降解耐性淀粉。例如，可在下述示教中獲得參考。Taniguchi等(26)描述了一種環(huán)狀芽孢桿菌F2淀粉酶，它可以在37℃在降解天然馬鈴薯淀粉方面比胰淀粉酶和牛鏈球菌淀粉酶有效得多，而這兩者都被提到對(duì)天然淀粉具有高活性。這三種淀粉酶對(duì)玉米淀粉的作用十分相似。芽孢桿菌淀粉酶具有一個(gè)原生淀粉結(jié)合域而蛋白質(zhì)水解去除這個(gè)結(jié)構(gòu)域則將原生馬鈴薯的活性降低至17％(17)。同樣地，隱球菌S-2淀粉酶的原生淀粉結(jié)合域?qū)τ谄浣Y(jié)合和降解原生淀粉的能力是必要的(14)。對(duì)于小麥和玉米淀粉，隱球菌淀粉酶與胰淀粉酶具有相同的活性，而米曲霉(Aspergillusoryzae)淀粉酶則有減弱15倍的活性。對(duì)于原生馬鈴薯淀粉，隱球菌淀粉酶具有比胰淀粉酶高三倍而比米曲霉高70倍的活性。隱球菌淀粉酶是熱穩(wěn)定的(在80℃在無(wú)底物而有2mMCaCl2的情況下30分鐘后有50％存活)并且在pH3具有大于50％的活性(pH最適值為6)。1992年，Gruchala和Pomeranz(12)展示了不同淀粉在降解耐性淀粉能力方面的差異。將淀粉玉米煮熟以提高退減耐性淀粉的量。隨后將已知量的退減耐性淀粉用兩種不同的淀粉酶在60℃處理12小時(shí)，過(guò)濾上清，測(cè)量殘余淀粉量并與對(duì)照比較(沒(méi)有加入淀粉酶的處理)。他們發(fā)現(xiàn)來(lái)自地衣芽孢桿菌的一種熱穩(wěn)定的α-淀粉酶能夠溶解16％的耐性淀粉，而一種來(lái)自曲霉菌K-27的淀粉酶溶解了41％的耐性淀粉。粗淀粉降解淀粉酶本發(fā)明所使用的淀粉酶包括粗淀粉降解淀粉酶。粗淀粉降解淀粉酶可以包含淀粉結(jié)合域并且發(fā)現(xiàn)其在降解如存在于天然玉米和小麥淀粉中的粗淀粉時(shí)與豬胰淀粉酶相當(dāng)，而作用于馬鈴薯或其它更加耐降解的淀粉時(shí)則較優(yōu)。環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移酶(CGT酶)與傳統(tǒng)淀粉酶類(lèi)似，通過(guò)形成環(huán)糊精、通過(guò)水解作用及歧化/轉(zhuǎn)糖基作用來(lái)降解淀粉。已經(jīng)報(bào)道CGT酶s是可降解粗淀粉的(25)(27)。與CGT酶相關(guān)的麥芽糖淀粉酶NovamylTM(NovoNordiskA/S)可以用于從粗淀粉生產(chǎn)麥芽糖(4)。另外，在一些應(yīng)用中，CGT酶可以用于淀粉液化以代替液化淀粉酶像地衣芽孢桿菌淀粉酶(TermamylTM，NovoNordiskA/S)或慣用的淀粉液化芽孢桿菌淀粉酶。一種得自高溫產(chǎn)硫黃嗜熱厭氧菌(ToruzymeTMNovoNordiskA/S)的CGT酶，是高度熱穩(wěn)定的并能夠在90℃于淀粉存在的情況下存活數(shù)小時(shí)。隱球菌K-27淀粉酶和豬胰淀粉酶相似地降解天然小麥和玉米淀粉，而曲霉菌K-27淀粉酶在降解天然馬鈴薯和高直鏈淀粉的玉米淀粉時(shí)較后者的酶有效得多(21)。合適的淀粉酶可以包括嗜糖假單胞菌的麥芽四糖酶產(chǎn)生的淀粉酶和同源的EC3.2.1.60的葡聚糖1，4-α-麥芽四糖水解酶。優(yōu)選地，淀粉酶得自和/或分離自環(huán)狀芽孢桿菌F2淀粉酶、牛鏈球菌淀粉酶、隱球菌S-2淀粉酶、曲霉菌K-27淀粉酶、地衣芽孢桿菌淀粉酶和胎毛高溫菌淀粉酶。例如在PCT出版物WO9601323和EnzymeMicrobiol.Technol.(1992)中披露了胎毛高溫菌淀粉酶。淀粉酶活性這里所用的術(shù)語(yǔ)“淀粉酶活性”是指任何能夠水解或降解像耐性淀粉和/或淀粉降解物的淀粉的酶。不同酶降解耐性淀粉的能力可以通過(guò)本領(lǐng)域公知技術(shù)，如Gruchala和Pomeranz(12)的方法進(jìn)行測(cè)量，其中測(cè)量了幾種酶降解后的淀粉殘余量且呈現(xiàn)顯著性差異。代表性地，淀粉酶對(duì)耐性淀粉的活性可以用基于例如Englyst等(9)；(8)，Silvester等(24)和Morales等(18)的方法進(jìn)行測(cè)量。這些方法采用一種刺激人類(lèi)大腸前消化系統(tǒng)的體外消化法。淀粉結(jié)合域本發(fā)明所用的淀粉酶可以包括淀粉結(jié)合域。這里所用的術(shù)語(yǔ)“淀粉結(jié)合域”用以定義所有具有結(jié)合淀粉的親和力的多肽或肽序列。淀粉結(jié)合域可以包括單基淀粉結(jié)合域、分離自如細(xì)菌、絲狀真菌或酵母的微生物的淀粉結(jié)合域，或一種結(jié)合蛋白的淀粉的淀粉結(jié)合域抑或一種經(jīng)設(shè)計(jì)和/或工程化以便能夠結(jié)合淀粉的蛋白。淀粉結(jié)合域可以作為一種單體結(jié)構(gòu)域多肽或作為一種二聚體、三聚體或一種多聚體，或作為一種蛋白雜合體的一部分而有效。一種單基淀粉結(jié)合域也可稱(chēng)之為“隔離的淀粉結(jié)合域”或“分離的淀粉結(jié)合域”。一個(gè)單基淀粉結(jié)合域包括多至完整的含單基淀粉結(jié)合域酶的氨基酸序列，例如一種基本上無(wú)催化結(jié)構(gòu)域但保留淀粉結(jié)合域的多糖水解酶。因此一個(gè)淀粉降解酶(如一種葡萄糖淀粉酶)的完整的有催化活性的氨基酸序列或其它含一個(gè)或多個(gè)淀粉結(jié)合域的酶不能認(rèn)為是一個(gè)單基淀粉結(jié)合域。一個(gè)單基淀粉結(jié)合域可以構(gòu)成多糖水解酶的一個(gè)或多個(gè)淀粉結(jié)合域、結(jié)合蛋白的淀粉的一個(gè)或多個(gè)淀粉結(jié)合域或一種經(jīng)設(shè)計(jì)和/或工程化以便能夠結(jié)合淀粉的蛋白。熱穩(wěn)定的優(yōu)選地，具有淀粉酶活性并能夠降解耐性淀粉的酶是熱穩(wěn)定的。這里所用的術(shù)語(yǔ)“熱穩(wěn)定的”是指該酶暴露于高溫后保持活性的能力。優(yōu)選地，本發(fā)明所使用的具有淀粉酶活性的酶能夠于約20℃到約50℃的溫度下降解耐性淀粉。在適當(dāng)情況下，該酶可在暴露于高達(dá)95℃的溫度后保持活性。pH穩(wěn)定的優(yōu)選地，具有淀粉酶活性并能夠降解耐性淀粉的酶是pH穩(wěn)定的。這里所用的術(shù)語(yǔ)“pH穩(wěn)定的”是指該酶在一個(gè)寬的pH范圍上保持活性的能力。優(yōu)選地，本發(fā)明所使用的具有淀粉酶活性的酶能夠在pH值約為3至約為7時(shí)降解耐性淀粉?；旧夏偷矸勖缸枰值木哂械矸勖富钚院湍軌蚪到饽托缘矸鄣拿笧榛旧夏偷矸勖缸枰值摹Ｔ诘矸巯杏绊懙矸勖感实囊粋€(gè)重要因子是它們對(duì)來(lái)自飼料物質(zhì)的淀粉酶阻抑物的易感性。Al-Kahtani曾報(bào)道過(guò)一種商業(yè)用枯草芽孢桿菌淀粉酶和豬胰淀粉酶受大豆提取物的顯著阻抑作用(1)。據(jù)報(bào)道黑麥含有對(duì)豬胰淀粉酶和地衣芽孢桿菌淀粉酶有效的大量淀粉酶抑制物(7)。在結(jié)構(gòu)上，地衣芽孢桿菌淀粉酶和豬胰淀粉酶相近。同樣地，已經(jīng)報(bào)道在玉米及大多數(shù)其它飼料植物中存在著淀粉酶抑制物(2)。這里所用的術(shù)語(yǔ)“基本上耐淀粉酶阻抑的”是指酶保持一定水平的活性足以部分或全部降解耐性淀粉例如產(chǎn)自含淀粉飼料的降解的能力。能夠降解耐性淀粉的本發(fā)明所使用的酶是能夠降解耐性淀粉的。這里所用的術(shù)語(yǔ)“降解”是指耐性淀粉部分或完全水解或降解為單糖如葡萄糖和/或寡糖，例如二糖如麥芽糖和/或糊精。本發(fā)明所使用的酶可以降解沒(méi)有被動(dòng)物淀粉酶完全降解的殘余耐性淀粉。例如，本發(fā)明所使用的酶可以在促進(jìn)耐性淀粉降解中輔助動(dòng)物淀粉酶(例如胰淀粉酶-如胰α-淀粉酶)。胰α-淀粉酶由動(dòng)物在消化系統(tǒng)中分泌。胰α-淀粉酶降解飼料中的淀粉。但是，部分淀粉，像耐性淀粉，不能由胰α-淀粉酶充分降解并因此不能在小腸中吸收(見(jiàn)耐性淀粉的定義)。本發(fā)明所使用的酶能夠在消化系統(tǒng)內(nèi)輔助胰α-淀粉酶降解淀粉并因而提高了動(dòng)物的淀粉利用率。一種酶降解耐性淀粉的能力可以用例如由MegazymeInternationalIrelandLtd.開(kāi)發(fā)并公布的方法進(jìn)行分析，這種方法可以測(cè)量樣品的耐性淀粉、溶解淀粉和全部淀粉含量(耐性淀粉分析方法，AOACMethod2002.02，AACCMehtod32-40)。組分適當(dāng)?shù)?，本發(fā)明所使用的包含一種酶的組分是一種食品。這里所用的術(shù)語(yǔ)“食品”可以包括適于動(dòng)物食用的食物成份。代表性的食物成份可以包括任何一種或多種添加物如動(dòng)物或植物脂肪、天然或人合成的調(diào)味品、抗氧化劑、粘性調(diào)節(jié)劑、必要的油和/或香料、染料和/或著色劑、維生素、礦物質(zhì)、天然的和/或非天然的氨基酸、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、添加的酶(包括遺傳修飾的酶)、粘合劑如瓜耳膠或黃原膠、緩沖劑、乳化劑、潤(rùn)滑劑、佐料、沉淀劑、防腐劑、包衣料或溶解劑等諸如此類(lèi)的東西。本發(fā)明所使用的組分包含一種具有淀粉活性或能夠降解耐性淀粉的酶。代表性地，本發(fā)明所使用的組分通過(guò)間接或直接地將本發(fā)明的組分應(yīng)用在飼料中而用于動(dòng)物食用飼料的生產(chǎn)。用于本發(fā)明的應(yīng)用方法的實(shí)例包括，但不限于，將飼料包于含該組分的材料中，通過(guò)將該組分與飲料混合而直接應(yīng)用，將該組分噴在飼料表面中或?qū)暳辖朐摻M分的配制品中?？蓛?yōu)選通過(guò)將該組分與飼料混合或噴在動(dòng)物用飼料顆粒上而利用本發(fā)明的組分。或者，可以將該組分包含在飼料的乳狀液中，或通過(guò)注射或翻抄包含在固體產(chǎn)品的內(nèi)部。組分的應(yīng)用本發(fā)明的組分可以用控制量的具淀粉酶活性或能夠降解耐性淀粉的酶散布、包被和/或注入飼料中。含酶組分的混合物也可以獨(dú)立地、同時(shí)或順序地進(jìn)行使用或應(yīng)用。螯合劑、粘合劑、乳化劑和其它添加物如小的和大的礦物質(zhì)、氨基酸、維生素、動(dòng)物脂肪、植物脂肪、防腐劑、香料、著色劑，可以類(lèi)似地同時(shí)應(yīng)用于飼料上(混合或單獨(dú)地)或按順序地應(yīng)用。組分的量本發(fā)明所用的組分的最適量依賴(lài)于待處理的飼料和/或?qū)暳吓c組分接觸的方法和/或?yàn)榱送瑯幽康牡挠?jì)劃使用。用在組分中的酶量應(yīng)該足以有效地在飼料攝取后和消化過(guò)程中充分降解耐性淀粉。有利地，含酶組分要在動(dòng)物用飼料攝取后和在飼料消化的過(guò)程中保持有效，直到所獲飼料完全消化，即飼料的全部熱值被釋放。生產(chǎn)飼料飼料可以通過(guò)本領(lǐng)域公知的技術(shù)如這里實(shí)施例7所提到的技術(shù)進(jìn)行生產(chǎn)。本發(fā)明所用的一種特別適宜的飼料制劑是圓粒狀的飼料。本發(fā)明所用的特別適宜的淀粉酶必須對(duì)降解含耐性淀粉的粒狀飼料有效。測(cè)量耐性淀粉測(cè)量耐水解的淀粉量的方法是本領(lǐng)域公知的。例如耐酶水解的淀粉部分的存在由Englyst等1982年(Analyst，107，307-318頁(yè)，1982)在進(jìn)行非淀粉多糖的測(cè)量研究時(shí)第一次認(rèn)識(shí)到(1)。這一工作由Berry(J.Cereal.Science，4，301-303頁(yè)，1986)繼續(xù)進(jìn)行，他結(jié)合Englyst等(Analyst，107，307-318頁(yè)，1982)所用的α-淀粉酶/支鏈淀粉酶處理發(fā)展了一種方法，但是忽略了于100℃的起始加熱步驟，以便更近似地模仿生理?xiàng)l件。在這些條件下，測(cè)量的樣品的耐性淀粉成份相當(dāng)高。這一發(fā)現(xiàn)繼而被Englyst等(Am.J.Clin.Nutr，42，778-787頁(yè)，1985；Am.J.Clin.Nutr，44，42-50頁(yè)，1986；Am.J.Clin.Nutr，45，423-431頁(yè)，1987)通過(guò)健康回腸造口術(shù)課題的研究證實(shí)。在1990年代早期耐性淀粉的生理意義充分得到認(rèn)識(shí)。在歐洲研究計(jì)劃期間(Englyst等，EuropeanJ.Clin.Nutr，46，supp1.2，S33-S50)發(fā)展了幾種新的/改造的方法。Champ(Eur.J.Clin.Nutr.46，supp1.2，S51-S62)法是基于對(duì)Berry(J.CerealScience，4，301-304頁(yè)，1986)法的改造的基礎(chǔ)上的，它給出了一種利用胰α-淀粉酶直接測(cè)量耐性淀粉的方法，其中溫育于pH6.9進(jìn)行。Muir和O’Dea(Muir，J.G.&O’Dea，K.(1992)Am.J.Clin.Nutr.56，123-127)發(fā)展了一種方法，其中樣品經(jīng)咀嚼、胃蛋白酶處理以及隨后在搖動(dòng)的水浴中于pH5.0和37℃下以胰α-淀粉酶和淀粉葡萄糖苷酶混合物處理15小時(shí)。殘余的顆粒(含耐性淀粉)通過(guò)離心回收，以醋酸鹽緩沖液離心洗滌并且將耐性淀粉通過(guò)加熱、DMSO和熱穩(wěn)定α-淀粉酶的綜合處理進(jìn)行消化。最近，這些方法已被Faisant等(Faisant，N.，Planchot，V.，Kozlowski，F(xiàn).，M.-P.Pacouret，P.Colonna.&M.Champ.(1995)SciencesdesAliments，15，83-89)、Goni等(Goni，L.，Garcia-Diz，E.，Manas，E&Saura-Calixto，F(xiàn).(1996)，F(xiàn)d.Chem.，56，445-449)、Akerberg等(Akerberg，A.K.E.，Liljberg，G.M.，Granfeldt，Y.E.Drews，A.W.&Bjorck，M.E.(1998)，Am.Soc.Nutr.Sciences，128，651-660)和Champ等(Champ，M.，Martin，L.，Noah，L&Gratas，M.(1999)見(jiàn)“食物中的復(fù)合糖類(lèi)”(S.S.Cho，L.Prosky&M.Dreher編)169-187頁(yè).MarcelDekker，Inc.，NewYork，USA)所改進(jìn)。這些改進(jìn)包括酶的使用濃度的改變、所用酶類(lèi)型的改變、樣品預(yù)處理(咀嚼)的改變、溫育pH的改變和α-淀粉酶溫育步驟后乙醇的添加(或不加)。所有這些改進(jìn)都會(huì)在測(cè)量樣品中耐性淀粉的水平中起作用。另外，MegazymeInternationalIrelandLtd.發(fā)展了一種對(duì)樣品中耐性淀粉、溶解淀粉和全部淀粉含量測(cè)量的分析法(耐性淀粉分析方法，AOACMethod2002.02，AACCMehtod32-40)。動(dòng)物品質(zhì)在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明涉及一種這里所述的酶在生產(chǎn)用于提高動(dòng)物品質(zhì)的飼料中的應(yīng)用。如這里用到的，術(shù)語(yǔ)“提高動(dòng)物品質(zhì)”是指，例如，提高動(dòng)物的一個(gè)或多個(gè)特性-如促進(jìn)生長(zhǎng)或促進(jìn)食物轉(zhuǎn)化?？梢岳枚喾N本領(lǐng)域公知方法對(duì)動(dòng)物品質(zhì)進(jìn)行測(cè)量-如測(cè)量生長(zhǎng)、飼料轉(zhuǎn)化率和/或吸收。而糞便質(zhì)量、死亡發(fā)生率、骨中磷的量等也可以作為動(dòng)物品質(zhì)的參數(shù)來(lái)測(cè)量。現(xiàn)在通過(guò)實(shí)施例對(duì)發(fā)明作進(jìn)一步描述，實(shí)施例意在幫助本領(lǐng)域普通技術(shù)人員實(shí)施本發(fā)明，而不是要以任何方式限定本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1.測(cè)定對(duì)含淀粉飼料具有淀粉酶活性的候選酶活性的分析。取飼料原料如小麥、大豆或玉米并除代表性消化酶之外還加入候選酶。在體外消化之后，由殘余的(未消化的)淀粉量測(cè)定耐性淀粉量，并與未加入候選淀粉酶的對(duì)照組比較。2.測(cè)定飼料原料中淀粉酶抑制物的存在。利用飼料原料的提取物以及一種標(biāo)準(zhǔn)的淀粉分析法對(duì)淀粉酶候選物的抑制水平進(jìn)行測(cè)定。在分析實(shí)驗(yàn)中加入增加量的飼料提取物，抑制水平由淀粉酶活性的減少來(lái)計(jì)算。α-淀粉酶抑制物的分析方案定義一個(gè)單位的淀粉酶活性在所述條件下于一分鐘催化水解一微摩爾糖苷鍵。抑制作用以％測(cè)量，是與未被抑制的淀粉酶溶液相比，活性的相對(duì)減少。試劑底物體外診斷用Phadebas淀粉酶測(cè)定片劑(PharmaciaDiagnostics).試劑溶液(9.0克氯化鈉、2.0克牛血清白蛋白和2.2克氯化鈣溶于蒸餾水中至總體積1000ml)。二倍濃度的試劑溶液(9.0克氯化鈉、2.0克牛血清白蛋白和2.2克氯化鈣溶于蒸餾水中至總體積為500ml)。含可能抑制物的測(cè)試材料的提取物(將樣品徹底研碎，取2克與10ml冷水混合10分鐘，隨后將混懸液過(guò)濾)。0.5MNaOH溶液濾紙分光光度計(jì)測(cè)量640nm的吸光率被測(cè)酶的樣品步驟測(cè)試酶樣將0.2ml溶于試劑溶液中的酶和4.0ml試劑溶液用吸管移入一只試管中并在+37℃平衡5分鐘。用夾子加入底物片劑，充分混勻10秒并于+37℃溫育15分鐘。在加入片劑時(shí)開(kāi)始記錄反應(yīng)的起始時(shí)間。加入1ml的0.5MNaOH溶液攪拌均勻。將溶液過(guò)濾或以3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，相對(duì)于一種空白試劑測(cè)定620nm的吸光率。酶樣品的吸光率一般在0.3-0.5之間。阻抑作用測(cè)試以與上述相同的步驟對(duì)酶樣品進(jìn)行測(cè)試，但使用2.0ml的二倍濃度試劑溶液和2.0ml含可能抑制物的測(cè)試材料提取物以代替4.0ml的試劑溶液?？瞻自噭?.2ml的試劑溶液于+37℃平衡5分鐘。用夾子加入底物片劑，充分?jǐn)嚢?0秒并于+37℃溫育15分鐘。加入1ml的0.5MNaOH溶液充分?jǐn)嚢琛⑷芤哼^(guò)濾或以3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘。計(jì)算樣品的吸收率與α-淀粉酶活性成比例。每種酶稀釋液的淀粉酶活性由附于片劑試劑盒上校對(duì)表來(lái)確定。淀粉酶活性由下式計(jì)算其中Act＝由Phadebas淀粉酶測(cè)試表讀得的酶稀釋液的淀粉酶活性值(表述為單位/升)Df＝稀釋倍數(shù)(ml/g)1000＝從升到毫升的轉(zhuǎn)換系數(shù)對(duì)純酶和含材料提取物的測(cè)試樣品都計(jì)算了活性。當(dāng)加入提取物時(shí)測(cè)定該提取物的阻抑作用，表示為占純酶活性的百分比。3.測(cè)定耐性淀粉的量將低水含量的淀粉樣品研磨以通過(guò)1mm濾網(wǎng)。將脂肪含量≥5％的樣品在研磨前進(jìn)行脫脂(采用石油-乙醚提取法)。隨后將樣品攪勻并放在離心管中待分析。將100mg干的研磨樣品放入一個(gè)50ml離心管中，并加入pH1.5的10mlKCl-HCl緩沖液(以2MHCl或0.5MNaOH調(diào)節(jié))。對(duì)于濕的樣品，將重量與100mg干物質(zhì)相當(dāng)?shù)囊环菁尤雙H1.5的10mlKCl-HCl緩沖液中，攪勻并放入一離心管中。加入0.2ml胃蛋白酶溶液(1胃蛋白酶/10ml緩沖液KCl-HCl)，混和并將管置于不斷搖動(dòng)的40℃水浴60分鐘。40℃溫育后移去樣品并置于室溫冷卻。加入9mlpH6.9的0.1MTris-馬來(lái)酸鹽緩沖液(以2MHCl或0.5MNaOH調(diào)節(jié))和1ml的α-淀粉酶溶液(40mgα-淀粉酶/1mlTris-馬來(lái)酸鹽緩沖液)?；旌虾髮悠酚诓粩鄵u動(dòng)的37℃水浴中溫育16小時(shí)。隨后離心樣品(15分鐘，3000g)并棄去上清。在殘余物中加入3ml蒸餾水，仔細(xì)濕潤(rùn)樣品。加入3ml4M的NaOH混合樣品并在室溫不斷搖晃放置30分鐘。繼加入80μl淀粉葡糖苷酶后，加入5.5ml的2MHCl和3mlpH4.75的0.4M醋酸鈉緩沖液(以2MHCl或0.5MNaOH調(diào)節(jié))。混勻后將樣品置于不斷搖動(dòng)的60℃水浴中56分鐘。將樣品離心(15分鐘，3000g)，并收集上清。將殘余物以每次至少10ml的蒸餾水進(jìn)行洗滌，經(jīng)再次離心并將上清與前面所得的上清合并。3.1.制備測(cè)定葡萄糖濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線(10-60ppm)將0.5ml的水、樣品和標(biāo)準(zhǔn)物以移液管移至試管。加入1ml葡萄糖測(cè)定試劑盒(GOD-PAP)中的試劑?；靹蛉芤翰⒂?7℃水浴中放置30分鐘。在溫育后的5到45分鐘，從對(duì)照空白試劑讀出樣品和標(biāo)準(zhǔn)物的吸光率。用從標(biāo)準(zhǔn)物構(gòu)建的標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算樣品中的葡萄糖濃度(10-60ppm)。計(jì)算測(cè)試樣品的耐性淀粉濃度，表示為葡萄糖濃度×0.9mg。4.純淀粉和植物材料中耐性淀粉的測(cè)定4.1測(cè)試樣品的制備將50克谷物或麥芽在磨碎機(jī)上研磨以通過(guò)1mm濾網(wǎng)。將新鮮的樣品(例如罐裝豆、香蕉、馬鈴薯)在手動(dòng)絞肉機(jī)中絞碎以通過(guò)4mm濾網(wǎng)。通過(guò)AOAC法925.10(14)測(cè)定干燥樣品的水分含量，并根據(jù)AOAC法925.10，在烤箱中干燥后通過(guò)凍干進(jìn)行新鮮樣品水分含量的測(cè)定。4.2耐性淀粉的測(cè)定直接稱(chēng)取100mg樣品至螺旋蓋管。每管加入4.0ml在醋酸鈉緩沖液中的含AMG(3U/ml)的胰α-淀粉酶(10mg/ml)。樣品混勻后于37℃溫育并不斷搖動(dòng)(200次/分)。16小時(shí)后用4.0mlIMS(99％v/v)處理樣品并在3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘。輕輕潷去上清并將沉淀在2ml50％IMS中于渦旋器上劇烈振蕩重懸。加入6ml50％IMS并混勻，將管在3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘。重復(fù)懸浮及離心的步驟。向每管中加入2ml2M的KOH，在冰/水浴中攪拌約20分鐘以重懸沉淀(溶解耐性淀粉)。每管都以8ml1.2M的醋酸鈉緩沖液(pH3.8)處理并同時(shí)攪拌。立即加入0.1mlAMG(3200U/ml)并將管置于不斷搖晃的50℃水浴中30分鐘。將含大于10％耐性淀粉的樣品轉(zhuǎn)移到一個(gè)100ml容量瓶(用水洗瓶)中并用水調(diào)節(jié)到容積。溶液的等分樣在3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘。將含少于10％耐性淀粉的樣品(未稀釋)在3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘。將0.1ml稀釋和未稀釋的上清等分樣(一式兩份)轉(zhuǎn)移至玻璃試管中(16×100mm)中，以3.0ml的GOPOD試劑(葡萄糖氧化酶-過(guò)氧化酶-氨基安替比林緩沖液混合物-一種葡萄糖氧化酶，大于12000U/L；過(guò)氧化物酶，大于650U/L；和4-氨基安替比林，0.4mM在pH7.4磷酸緩沖液中的混合物)處理并在50℃溫育20分鐘。通過(guò)混合0.1ml的0.1M醋酸鈉緩沖液(pH4.5)和3.0ml的GOPOD試劑來(lái)制備空白試劑溶液。通過(guò)混合0.1ml葡萄糖(1mg/ml)和3.0ml的GOPOD試劑來(lái)制備葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)。50℃溫育20分鐘后，于510nm處相對(duì)于空白試劑測(cè)量每種溶液的吸光率。4.3計(jì)算測(cè)試樣品中的耐性淀粉含量(％，在干重基礎(chǔ)上)計(jì)算如下對(duì)于含大于10％耐性淀粉的樣品＝ΔE×F×100/0.1×1/1000×100/W×162/180＝ΔE×F/W×90對(duì)于含少于10％耐性淀粉的樣品＝ΔE×F×10.3/0.1×1/1000×100/W×162/180＝ΔE×F/W×9.27其中ΔE＝相對(duì)于空白試劑的吸光率(反應(yīng))讀數(shù)；F＝從吸光率到微克的轉(zhuǎn)換系數(shù)＝100(μg葡萄糖)/100μg葡萄糖的吸光率；100/0.1＝體積校正(從100ml中取0.1ml)；1/1000＝從微克到毫克的轉(zhuǎn)換系數(shù)；W＝被分析樣品的干重[＝稱(chēng)得的重量×(100-水分含量)/100]；100/W＝體現(xiàn)淀粉占樣品重的百分率系數(shù)；162/180＝測(cè)定的發(fā)生于淀粉中的從游離葡萄糖轉(zhuǎn)換至脫水葡萄糖的系數(shù)；10.3/0.1＝溫育溶液未稀釋且終體積為~10.3ml的含0-10％耐性淀粉的樣品體積校正系數(shù)(從10.3ml中取0.1ml)。5.已降解的粗淀粉的測(cè)定在這一實(shí)施例中，測(cè)定了兩種具有淀粉酶活性的酶在輔助胰α-淀粉酶降解粗淀粉中的能力。該酶為在WO9601323中披露的淀粉液化芽孢桿菌淀粉酶(LTTA，GenencorInternationalInc.)和胎毛高溫菌淀粉酶。5.1.原理本分析是基于來(lái)自Megazyme(MegazymeInternationalIrelandLimited)的耐性淀粉測(cè)定試劑盒(Cat.no.K-RSTAR)。為了這一實(shí)施例的目的對(duì)耐性淀粉測(cè)定方法(AOACMethod2002.02AACCMethod32-40)方法進(jìn)行了修飾，因而溫育時(shí)間僅為1.5小時(shí)而非16小時(shí)。將樣品在搖動(dòng)的水浴中與胰α-淀粉酶和淀粉葡糖苷酶(AMG)，任選地與淀粉衣液化芽孢桿菌淀粉酶(LTTA，GenencorInternationalInc.)或胎毛高溫菌淀粉酶于37℃溫育1.5小時(shí)，期間，結(jié)合酶的作用淀粉得以溶解并水解為葡萄糖。通過(guò)加入等體積的工業(yè)甲醇(IMS，變性乙醇)終止反應(yīng)。以AMG將上清中的溶解淀粉定量水解為葡萄糖。用氧化酶/過(guò)氧化物酶試劑(GOPOD)測(cè)定葡萄糖。這是對(duì)樣品中溶解淀粉含量的一種直接測(cè)量。通過(guò)PhadebasR淀粉酶測(cè)試(Pharmacia&Upjohn)來(lái)測(cè)量淀粉液化芽孢桿菌淀粉酶(LTAA)或胎毛高溫菌淀粉酶的活力單位。5.2.易降解淀粉的測(cè)量直接稱(chēng)取100mg樣品至螺帽管(康寧培養(yǎng)管；16×125mm)。向每管中加入4.0ml含AMG(3U/ml)的胰α-淀粉酶(10mg/ml)，和任選擇地加入總共0.4單位的在馬來(lái)酸鈉緩沖液中的淀粉液化芽孢桿菌淀粉酶或胎毛高溫淀粉酶?；靹蚝?，將樣品在37℃持續(xù)搖動(dòng)(200次/分)溫育1.5小時(shí)。1.5小時(shí)后樣品用4.0ml的IMS(99％v/v)在渦旋振蕩器上劇烈處理并在3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘。將上清液輕輕倒入100ml容量瓶中并以軟化水加滿(mǎn)至100ml。取2ml樣品，加入0.2mlAMG(3200U/ml)。將管置于50℃水浴中持續(xù)混合水浴30分鐘。將0.1ml稀釋和未稀釋的上清等分樣轉(zhuǎn)移至玻璃試管中(16×100mm)中，以3.0ml的GOPOD試劑處理并在50℃溫育20分鐘。通過(guò)混合0.1ml的0.1M醋酸鈉緩沖液(pH4.5)和3.0ml的GOPOD試劑制備空白試劑溶液。通過(guò)混合0.1ml葡萄糖(1mg/ml)和3.0ml的GOPOD試劑制備葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)。在50℃溫育20分鐘后，于510nm處相對(duì)于水測(cè)量每種溶液的吸光率。5.3.計(jì)算樣品中溶解的淀粉含量(％，在干重基礎(chǔ)上)計(jì)算如下＝ΔE×G×D×100/0.1×1.1×1/1000×100/W×162/180＝ΔE×(G×D)/W×99.其中ΔE＝相對(duì)于空白試劑的吸光率(反應(yīng))讀數(shù)；G＝從吸光率到微克的轉(zhuǎn)換系數(shù)＝100(μg葡萄糖)/100μg葡萄糖的吸光率；D＝上清液的稀釋倍數(shù)；100/0.1＝體積校正系數(shù)(從100ml中取0.1ml)；1.1＝在1.5小時(shí)當(dāng)把AMG加入樣品中時(shí)的稀釋倍數(shù)，1/1000＝從微克到毫克的轉(zhuǎn)換系數(shù)；162/180＝所測(cè)定的發(fā)生于淀粉中的從游離葡萄糖轉(zhuǎn)換為脫水葡萄糖的系數(shù)。5.4.結(jié)果首先，分析地衣液化芽孢桿菌淀粉酶的作用，并與一種僅含一種胰α-淀粉酶和淀粉葡糖苷酶(AMG)的參照物進(jìn)行比較。處理后樣品中的可溶性淀粉量(％)示于表1。表1無(wú)酶0.4單位LTAA48,9749,4551,0249,5150,0952,27平均49,99550,33這些結(jié)果指示LTAA與胰α-淀粉酶和AMG單獨(dú)相比在降解不可溶淀粉方面不具任何增加的效果。其次，分析淀粉液化芽孢桿菌淀粉酶的作用并與胎毛高溫菌淀粉酶比較。經(jīng)淀粉液化芽孢桿菌淀粉酶和胎毛高溫菌淀粉酶處理后樣品中的可溶性淀粉量(％)示于表2中。表20.4單位LTAA0.4單位thermomyces49,4553,9949,5156,0350,0955,9852,2756,64平均50,3355,66這些結(jié)果提示胎毛高溫菌淀粉酶在降解不可溶淀粉方面具有增加的效果(平均數(shù)具有顯著性差異，可信度為99％)。6.動(dòng)物飼料的制備由下列成份制備一種代表性的飼料玉米57.71％大豆粗粉31.52％大豆油6.30％NaCl0.40％DL甲硫氨酸0.20％磷酸氫鈣1.46％維生素/礦物質(zhì)混合物1.25％合計(jì)100％通過(guò)注入蒸汽加熱飼料混合物達(dá)到80℃的溫度維持30秒并進(jìn)一步在成粒器中成粒。隨后將顆粒干燥。這一方法對(duì)于飼料工業(yè)獲得顆?；暳鲜谴硇缘?。7.給含淀粉的動(dòng)物飼料添加淀粉酶的效果7.1喂飼試驗(yàn)-豬食料對(duì)照豬用一種商業(yè)食料喂飼，而五種實(shí)驗(yàn)食料每克飼料提供1-10U的外源淀粉酶。食料無(wú)限制地提供。水也在每個(gè)候宰欄從飲水頭無(wú)限制地獲得。每種食料具有一個(gè)起始期和生長(zhǎng)期。給豬分配6種處理中的一種并且將每種食料的組合(起始期和生長(zhǎng)期)重復(fù)喂飼6次。動(dòng)物/圈舍將從商業(yè)單位獲得的剛斷乳的36只雌性小豬圈養(yǎng)在各自的圈舍中。方法動(dòng)物在剛到來(lái)時(shí)即被分別稱(chēng)重，立即轉(zhuǎn)移至實(shí)驗(yàn)單位，圈養(yǎng)在適當(dāng)編號(hào)的圈舍中并分配到一個(gè)對(duì)照或一個(gè)實(shí)驗(yàn)起始期食料。以后每7天對(duì)豬稱(chēng)重。對(duì)豬進(jìn)行無(wú)限制地喂養(yǎng)并且從零天起每周記錄消耗的飼料。當(dāng)豬重達(dá)16.0千克或以上時(shí)將它們轉(zhuǎn)移至生長(zhǎng)期食料。每周記錄攝入的飼料和體重。在喂飼時(shí)對(duì)動(dòng)物進(jìn)行檢查，每天兩次。記錄健康、清潔度和任何其它相關(guān)的觀察。當(dāng)小豬體重達(dá)到27.5千克時(shí)進(jìn)行試驗(yàn)總結(jié)。這樣在大約10和25千克活體重量之間測(cè)定小豬的生長(zhǎng)率、攝入飼料以及飼料轉(zhuǎn)化率。結(jié)論含耐性淀粉降解淀粉酶的動(dòng)物飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)食料顯示了飼料轉(zhuǎn)化率(FCR)的顯著下降，提示與對(duì)照相比只需較少的飼料就可獲得特定的體重增加。喂飼實(shí)驗(yàn)食料的豬也在生長(zhǎng)率上顯示了顯著的提高而在飼料攝入上顯示了下降。7.2喂飼試驗(yàn)—仔雞食料對(duì)照動(dòng)物用一種商業(yè)食料喂飼，而五種實(shí)驗(yàn)食料每克飼料提供1-10U的外源淀粉酶。食料無(wú)限制地提供。水也無(wú)限制地提供。每種食料具有一個(gè)起始期和生長(zhǎng)期。動(dòng)物給仔雞分配6種食料中的一種并且將每種食料的組合(起始期和生長(zhǎng)期)重復(fù)喂飼42只動(dòng)物，每只8次。定期觀察動(dòng)物。記錄健康、清潔度和任何其它相關(guān)的觀察。方法動(dòng)物在剛到來(lái)時(shí)即被分別稱(chēng)重，立即轉(zhuǎn)移至實(shí)驗(yàn)單位，圈養(yǎng)在適當(dāng)編號(hào)的圈舍中并分配到一個(gè)對(duì)照或一個(gè)實(shí)驗(yàn)起始期食料。仔雞在20和40天后稱(chēng)重。也記錄20和40天后飼料的用量。測(cè)定生長(zhǎng)率、攝入飼料以及飼料轉(zhuǎn)化率。結(jié)論含耐性淀粉降解淀粉酶的動(dòng)物飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)食料顯示了飼料轉(zhuǎn)化率(FCR)的顯著下降，提示與對(duì)照相比只需較少的飼料就可獲得特定的體重增加。喂飼實(shí)驗(yàn)食料的仔雞也在生長(zhǎng)率上顯示了顯著的提高而在飼料攝入上顯示了下降。本發(fā)明的總結(jié)方面在一個(gè)寬的方面，本發(fā)明涉及一種用于含淀粉飼料的組分，其中所述組分包含一種酶；其中酶具有淀粉酶活性并能夠降解耐性淀粉。在另一個(gè)寬的方面，本發(fā)明涉及一種降解飼料中的耐性淀粉的方法，包括將所述耐性淀粉與一種具有淀粉酶活性并能夠降解耐性淀粉的酶接觸。本發(fā)明的其它方面現(xiàn)在通過(guò)標(biāo)號(hào)段落的方式描述本發(fā)明的其它方面。1.一種用于含淀粉飼料的組分，其中所述組分包含一種酶；其中所述酶具有淀粉酶活性并能夠降解耐性淀粉并且其中所述酶包含一種或多種下述特性a.一個(gè)淀粉結(jié)合域b.是熱穩(wěn)定的c.是pH穩(wěn)定的d.是基本上耐淀粉酶抑制物的。2.一種根據(jù)段落1所述的組分，其中所述酶包含一個(gè)淀粉結(jié)合域。3.一種根據(jù)段落1或段落2所述的組分，其中所述酶是熱穩(wěn)定的。4.一種根據(jù)段落1、2或3所述的組分，其中所述酶是pH穩(wěn)定的。5.一種根據(jù)前述任一段落所述的組分，其中所述酶是基本上耐淀粉酶抑制物的。6.一種根據(jù)前述任一段落所述的組分，其中所述酶是一種粗淀粉降解酶。7.一種根據(jù)前述任一段落所述的組分，其中所述酶是一種環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移酶(CGT酶)。8.一種根據(jù)段落7所述的組分，其中所述CGT酶源自高溫產(chǎn)硫黃嗜熱厭氧菌。9.一種根據(jù)段落7或段落8所述的組分，其中所述CGT酶是ToruzymeTM。10.一種根據(jù)段落7所述的組分，其中所述CGT酶是麥芽糖配基淀粉酶如NovamylTM。11.一種根據(jù)段落1所述的組分，其中所述酶是一種選自由環(huán)狀芽孢桿菌F2淀粉酶、牛鏈球菌淀粉酶、隱球菌S-2淀粉酶、米曲霉淀粉酶、曲霉K-27淀粉酶、地衣芽孢桿菌淀粉酶、枯草芽孢桿菌淀粉酶和淀粉液化芽孢桿菌淀粉酶。12.一種根據(jù)段落11所述的組分其中所述酶是一種液化淀粉酶如地衣芽孢桿菌淀粉酶(Termamyl)或淀粉液化芽孢桿菌淀粉酶。13.根據(jù)前面任一段落所述的用在飼料中的組分，其中所述飼料為豬或家禽用飼料。14.根據(jù)段落13所述的用在飼料中的組分，其中所述飼料為一種如豆類(lèi)或谷類(lèi)的原料。15.含一種淀粉和一種酶的飼料，其中所述酶具有淀粉酶活性且能夠降解耐性淀粉并且其中所述酶包含一種或多種下列特性a.一個(gè)淀粉結(jié)合域b.是熱穩(wěn)定的c.是pH穩(wěn)定的d.是基本上耐淀粉酶抑制物的。16.根據(jù)段落15所述的飼料，其中所述酶包含一個(gè)淀粉結(jié)合域。17.根據(jù)段落15或段落16所述的飼料，其中所述酶是熱穩(wěn)定的。18.根據(jù)段落15、16或17所述的飼料，其中所述酶是pH穩(wěn)定的。19.根據(jù)段落15到18任一項(xiàng)所述的飼料，其中所述酶是基本上耐淀粉酶抑制物的。20.根據(jù)段落15到19任一項(xiàng)所述的飼料，其中所述酶是一種粗淀粉降解酶。21.根據(jù)段落15到120任一項(xiàng)所述的飼料，它是豬或家禽用飼料。22.根據(jù)段落21所述的飼料，它是一種如豆類(lèi)或谷類(lèi)的原料。23.一種降解飼料中的耐性淀粉的方法，包含將所述耐性淀粉與一種具有淀粉酶活性并能夠降解所述耐性淀粉的酶接觸，其中所述酶包含一種或多種下列特性a.一個(gè)淀粉結(jié)合域b.是熱穩(wěn)定的c.是pH穩(wěn)定的d.是基本上耐淀粉酶抑制物的。24.根據(jù)段落23所述的方法，其中所述酶包含一個(gè)淀粉結(jié)合域。25.根據(jù)段落23或段落24所述的方法，其中所述酶是熱穩(wěn)定的。26.根據(jù)段落23、24或25所述的方法，其中所述酶是pH穩(wěn)定的。27.根據(jù)段落23到26任一項(xiàng)所述的方法，其中所述酶是基本上耐淀粉酶抑制物的。28.根據(jù)段落23到27任一項(xiàng)所述的方法，其中所述酶是一種粗淀粉降解酶。29.根據(jù)段落23到28任一項(xiàng)所述的方法，其中所述飼料是豬或家禽用飼料。30.根據(jù)段落29所述的方法，其中飼料是一種如豆類(lèi)或谷類(lèi)的原料。31.一種酶在制備含淀粉飼料中的應(yīng)用，用以降解耐性淀粉，其中所述酶具有淀粉酶活性并能夠降解所述耐性淀粉，而且其中所述酶包含一種或多種下列特性a.一個(gè)淀粉結(jié)合域b.是熱穩(wěn)定的c.是pH穩(wěn)定的d.是基本上耐淀粉酶抑制物的。32.一種酶在生產(chǎn)飼料中的應(yīng)用，用以提高可從所述飼料中獲得能量的數(shù)量，其中所述酶具有淀粉酶活性并能夠降解耐性淀粉。33.一種生產(chǎn)飼料的方法，包括將淀粉和酶混合，其中所述酶具有淀粉酶活性并能夠降解耐性淀粉。34.一種鑒別用于飼料中的組分的方法，其中所述組分包含一種酶，所述方法包括將耐性淀粉與一種候選組分接觸并測(cè)定所述耐性淀粉的降解程度；其中所述酶具有淀粉酶活性并能夠降解耐性淀粉，而且其中所述酶包含一種或多種下列特性a.一個(gè)淀粉結(jié)合域b.是熱穩(wěn)定的c.是pH穩(wěn)定的d.是基本上耐淀粉酶抑制物的。上面說(shuō)明書(shū)中所提及的所有出版物在這里都通過(guò)參考文獻(xiàn)引入。在不背離本發(fā)明范圍和精神的情況下對(duì)于本發(fā)明所述方法和系統(tǒng)的不同改進(jìn)和變化對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員將是顯而易見(jiàn)的。盡管已對(duì)本發(fā)明連同特定的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行了描述，應(yīng)如要求保護(hù)的那樣理解本發(fā)明而不應(yīng)不適當(dāng)?shù)貙⒈景l(fā)明限制于這些特定實(shí)施例中。事實(shí)上，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見(jiàn)的是，對(duì)實(shí)施本發(fā)明所述方式的不同改進(jìn)都將在下述權(quán)利要求書(shū)的保護(hù)范圍之內(nèi)。參考文獻(xiàn)1.Al-Kahtani，HA.，(1999)SomeantinutritionalfactorsinMoringaperegrina(AlYassarorAl-Ban)andsoybeanproducts.JournalofFoodSciencevol60.pp.395-398.2.Buonocore，V.，andSilano，V.，(1986)Biochemical，nutritional，andtoxicologisalaspectsofalpha-amylaseinhibitorsfromplantfoods.InNutritionalandtoxicologicalsignificanceofenzymeinhibitorsinfoods，M.Friedman，Ed.(PlenumPress，NewYork)，p.483.3.Champ，MandFaisant，N.1996.Resistantstarch.InCarbohydratesasorganicrawmaterials，vol.3，(H.VanBekkum，Ed.)pp.189-215.4.Christophersen，C.，Pedersen，S.andChristensen，T.，(1993)Methodforproductionofmaltoseanalimitdextrinthelimitdextrin，anduseofthelimitdextrin.Denmark.WO95/10627.5.Colonna，P.，Leloup，V.，andBuléon，A.，(1992)Limitingfactorsofstarchhydrolysis.EuropeanJournalofClinicalNutrition.vol46.pp.517-532.6.DeSchrijver，R.，Vanhoof，K.，andVandeGinste，J.，(1999)Nutrientutilizationinratsandpigsfedenzymeresistantstarch.NutritionResearchvol19.pp.1349-1361.7.Dojczew，D.，Andrzejczuk-Hydel，J.，andKaczkowski，J.，(1986)Theproteininhibitorsofamylasesandpeptidasesisolatedfromcerealgrains.DieNahrung.vol30.pp.275-279.8.Englyst，H.N.，Kingman，S.M.，andCummings，J.，(1992)Classificationandmeasurementofnutritionallyimportantstarchfractions.EuropeanJournalofClinicalNutrition.vol46.S33-S50.9.Englyst，H.N.，Kingman，S.M.，Hudson，G.J.，andCummings，J.，(1996)Measurementofresistantstarachfractionsinvitroandinvivo.BritishJournalofNutrition.vol75.pp.749-755.10.，I.，Garcia-Diz，L.，，E.，andSaura-Calixto，F(xiàn).，(1996)AnalysisofresistantstarchAmethodforfoodsandfoodproducts.FoodChemistry.vol56.pp.445-449.11.Gordon，D.T.，Topp，K.，Shi，Y.-C.，Zallie，J.，andJeffcoat，R.，(1997)Resistantstarchphysicalandphysiologicalproperties.InFrontiersinFeedandFeedingredients，p.157.12.Gruchala，L.，andPomeranz，Y.，(1992)Raw-starchdegradingamylase(s)affectenzyme-resistantstarch.JournalofFoodScience.vol57.pp.1433-1434.13.Haralampu，S.G.，(2000)Resistantstarch-areviewofthephysicalpropertiesandbiologicalimpactofresistantstarch3.CarbohydratePolymers.vol41.pp.285-292.14.Lefuji，H.，Chino，M.，Kato，M.，andLimura，Y.，(1996)Raw-starch-digestionandthermostable-amylasefromtheyeastCryptococcussp.S-2purification，characterization，cloningandsequencing.BiochemicalJournal.vol318.pp.989-996.15.Ito，T.，Saito，K.，Sugawara，M.，Mochida，K.，andNakakuki，T.，(1999)Effectofrawandheat-moisturetreatedhigh-amylosecornstarchesontheprocessofdigestionintheratdigestivetract.JournaloftheScienceofFoodandAgriculture.vol79.pp.1203-1207.16.Jenkins，D.J.A.，Kendall，C.W.C.，(2000)Resistantstarches.CurrentOpinionInGastroenterology.vol16.pp.178-183.17.Kim，C.-H.，Kwon，S.-T.，Taniguchi，H.，andLee，D.S.，(1992)Proteolyticmodificationofraw-starch-degestingamylasefromBacilluscirculansF-2withsubtilisinSeparationoft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