專利名稱：植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)草莓苗的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種通過(guò)植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)草莓苗的方法。具體講是以植物組織培養(yǎng)技術(shù)為手段，通過(guò)在一定的培養(yǎng)基上培養(yǎng)草莓葉片，并獲得大量再生草莓苗的方法。本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
草莓(Fragaria×ananassa Duch.)屬薔薇科草莓屬多年生草本植物，其漿果是營(yíng)養(yǎng)價(jià)值極其豐富、經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高的上等果品，素有“水果皇后”之稱，不僅含有比其他水果高十倍的維生素，而且果實(shí)中所含的鞣花酸具有抗癌效果，因此在歐美市場(chǎng)十分暢銷，售價(jià)是蘋(píng)果的五倍，葡萄的二倍，仍供不應(yīng)求。日本、東南亞和歐美國(guó)家都要求從我國(guó)每年進(jìn)口上萬(wàn)噸速凍草莓，是我國(guó)唯一的出口水果。這是因?yàn)樵谌毡尽|南亞和歐美國(guó)家，勞動(dòng)力價(jià)值很高，在日本每生產(chǎn)1公斤草莓需要的成本就達(dá)到20元人民幣。而從我國(guó)進(jìn)口1公斤草莓包括運(yùn)費(fèi)在內(nèi)僅為10元。因此日本、東南亞和歐美國(guó)家都紛紛要求擴(kuò)大草莓進(jìn)口。所以大力發(fā)展我國(guó)草莓生產(chǎn)，滿足日益增長(zhǎng)的出口需求將是利國(guó)富民、生產(chǎn)扶貧的重要舉措。長(zhǎng)期以來(lái)，雖然通過(guò)常規(guī)育種對(duì)草莓產(chǎn)量、果實(shí)大小及品質(zhì)等方面有所改良，但栽培草莓是高度的雜和體，遺傳上又存在多倍性，因此這種改良是緩慢的，也是有限的。同時(shí)，遠(yuǎn)緣雜交的不親和性及有限的基因資源也阻礙了常規(guī)雜交育種的進(jìn)程，尤其在培育抗病毒、抗真菌、抗除草劑、抗逆境、耐儲(chǔ)藏等草莓品種方面，都因找不到適合的親本而難以實(shí)現(xiàn)。而要解決這些草莓生產(chǎn)上長(zhǎng)期面臨的問(wèn)題，就需要育種工作者開(kāi)辟新的技術(shù)路線，創(chuàng)造新的育種途徑。因此，為了擴(kuò)大草莓市場(chǎng)占有量，追求低成本，高品質(zhì)和高效益，開(kāi)發(fā)新的繁育方式，已成為當(dāng)今草莓市場(chǎng)發(fā)展的熱點(diǎn)問(wèn)題.運(yùn)用細(xì)胞工程手段，通過(guò)植物組織培養(yǎng)方法快速繁殖草莓，固定雜種優(yōu)勢(shì)，保持品種特異性，實(shí)踐證明是可行的.利用草莓組織在合適的培養(yǎng)基上進(jìn)行離體繁殖，可加快品種繁殖速度，擴(kuò)大種源生產(chǎn)，保持優(yōu)良品種的性狀，用較少得空間，較少個(gè)體和較少時(shí)間可獲得遺傳上與親本植株相同的大量再生無(wú)毒苗.這種繁殖方式為草莓的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展開(kāi)拓了一條有效途徑，其社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益是巨大的.
我們經(jīng)多年的時(shí)間，在分析、研究國(guó)內(nèi)外草莓研究成果的基礎(chǔ)上，系統(tǒng)地研究了植物組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)用到草莓生產(chǎn)的理論、工藝及可行性，包括從材料選擇、外植體誘導(dǎo)、高頻再生和定植等過(guò)程，完成了實(shí)驗(yàn)室和中試研究，使下一步產(chǎn)業(yè)化更具有實(shí)際意義，并為此提供了可能與保障。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種提高植物組織培養(yǎng)草莓苗生產(chǎn)率，使其達(dá)到產(chǎn)業(yè)化水平。本項(xiàng)目經(jīng)多年研究，根據(jù)植物葉片再生原理，首創(chuàng)了以葉片為外植體，建立高頻穩(wěn)定再生體系。為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，采用下述技術(shù)方案選擇具有30——45天苗齡的草莓幼嫩葉片，在其葉片中部切斷，近軸面向下至于再生培養(yǎng)基上誘導(dǎo)胚狀體發(fā)生。在上述基礎(chǔ)上，葉片再生不定芽培養(yǎng)15天為一個(gè)周期。
培養(yǎng)溫度25℃±1，光照強(qiáng)度2500lux，光照時(shí)間14h/d。
誘導(dǎo)和再生培養(yǎng)基組成是MB基本培養(yǎng)基，即MS培養(yǎng)基的大量元素B5培養(yǎng)基的微量元素組合，同時(shí)附加6-BA 0——4.0mg/l，IBA0——1.5mg/l。
再生的草莓苗培養(yǎng)40天后，可直接轉(zhuǎn)到MB培養(yǎng)基上生根。
所添加的6-BA、IBA用量為6-BA 0-4.0mg/l、IBA 0——1.5mg/l。
上述的培養(yǎng)基中需添加蔗糖1.5-3.0％，并調(diào)PH值4.5-6.5。
上述的培養(yǎng)條件為14h/d光照，2500Lx光照強(qiáng)度，溫度25℃±1。
本發(fā)明的最佳離體再生培養(yǎng)條件是MB培養(yǎng)基附加6-BA 3.0mg/l+IBA 0.5mg/l+蔗糖2.5％。
本發(fā)明提供了一種草莓離體快繁的方法，是在MB培養(yǎng)基上培養(yǎng)草莓葉片，再生草莓幼苗，得到草莓無(wú)性系。草莓再生率達(dá)到97.0％以上，生根率達(dá)100％。該方法不僅能明顯提高草莓再生苗的數(shù)量和質(zhì)量，具有生產(chǎn)成本低、不污染環(huán)境，達(dá)到產(chǎn)業(yè)化水平的特點(diǎn)，其發(fā)展前景十分看好。
實(shí)施例本項(xiàng)技術(shù)以不同基因型品種哈尼，寶交，麗寶，豐香，美香莎和早豐進(jìn)行培養(yǎng)。外植體均選擇具有30——45天苗齡的草莓幼嫩葉片。在無(wú)菌下將其葉片中部切斷，近軸面向下至于再生培養(yǎng)基MB附加6-BA 3.0mg/l mg/l+IBA0.5mg/l+蔗糖2.5％上，PH值為5.5±1。培養(yǎng)15天后葉片再生不定芽。在再生培養(yǎng)基MB上進(jìn)行繼代培養(yǎng)，再生苗約培養(yǎng)40天后，可直接轉(zhuǎn)到MB培養(yǎng)基上生根。整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程條件為培養(yǎng)溫度25±1℃，光照強(qiáng)度2500lux，光照時(shí)間14h/d。
不同品種葉片在MB培養(yǎng)基上的再生結(jié)果品種 單葉片平均再生芽數(shù) 平均再生頻率(％) 生根率(％)哈尼 15.4 99.6 100寶交 13.0 97.1 100麗寶 12.8 97.0 100豐香 14.7 98.8 100美香莎 13.5 97.5 100早豐 13.3 97.3 100在MB培養(yǎng)基上6個(gè)草莓品種的單葉片平均再生芽數(shù)在13％以上，平均再生率在97％以上，再生苗生根率均達(dá)到100％。
權(quán)利要求
1.一種植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)草莓苗的方法，其特征在于該方法包括在MB培養(yǎng)基上進(jìn)行葉片培養(yǎng)，在MB培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)，獲得草莓無(wú)性系。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)草莓苗的方法，其特征是選取的草莓葉片是具有30——45天苗齡的幼嫩葉片，在其葉片中部切斷，近軸面向下至于再生培養(yǎng)基上。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)草莓苗的方法，其特征是葉片再生不定芽培養(yǎng)15天為一個(gè)周期。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)草莓苗的方法，其特征是培養(yǎng)溫度25±1℃，光照強(qiáng)度2500lux，光照時(shí)間14小時(shí)/天。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)草莓苗的方法，其特征是誘導(dǎo)和再生培養(yǎng)基組成是MB基本培養(yǎng)基，即MS培養(yǎng)基的大量元素B5培養(yǎng)基的微量元素組合，同時(shí)附加6-BA O——4.Omg/l，IBA 0——1.5mg/l。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)草莓苗的方法，其特征是PH值為5.5±1。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)草莓苗的方法，其特征是再生的草莓苗培養(yǎng)40天后，可直接轉(zhuǎn)到MB培養(yǎng)基上生根。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種采用植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)草莓苗的方法。該方法是在MB培養(yǎng)基上培養(yǎng)草莓葉片，再生草莓幼苗，得到草莓無(wú)性系。草莓再生率達(dá)到97.0％以上，生根率達(dá)100％。本發(fā)明方法生產(chǎn)成本低，不污染環(huán)境，達(dá)到產(chǎn)業(yè)化水平。
文檔編號(hào)A01H4/00GK1423927SQ03110849
公開(kāi)日2003年6月18日 申請(qǐng)日期2003年1月13日 優(yōu)先權(quán)日2003年1月13日
發(fā)明者賈景明 申請(qǐng)人:賈景明