專利名稱：樹蘭的無菌播種和組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及樹蘭的無菌播種和組織培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
樹蘭屬(Epidendrum)又名柱瓣蘭屬，是蘭科中最大的屬之一，本屬植物全球約有1000多種，附生或地生，多產(chǎn)于熱帶美洲，根據(jù)品種的不同習(xí)性可在高溫、中溫或低溫溫室中栽培。有些種類有休眠期，有些無明顯的休眠期。它的莖的變化也較大，有的具假鱗莖，有的具蘆葦狀的直立莖，假鱗莖的頂端有少數(shù)葉。樹蘭屬植物的花莖生于莖頂端，花有數(shù)朵到多朵，花大型或小型，萼片和花瓣均甚細(xì)窄，但唇瓣肥大，基部深凹，蕊柱甚發(fā)達(dá)，故名柱瓣蘭屬。樹蘭屬植物的花色繁多，其中許多種類具有很高的觀賞價(jià)值。樹蘭(Epidendrum radians)是較具代表性的種類。
樹蘭(Epidendrum radians)為附生蘭，原產(chǎn)墨西哥，莖細(xì)長圓柱形而多分枝，其上著生多數(shù)灰白色的氣生根，葉片細(xì)長，花鮮紅色，十幾朵花排成總狀花序生于一長花葶之頂，花期春夏至晚秋，花期長，具有很高的觀賞價(jià)值。樹蘭的繁殖可采用扦插和分株，但繁殖速度慢，而樹蘭種子由于胚發(fā)育不完全，自然狀態(tài)下極難萌發(fā)。
目前，國內(nèi)外未有樹蘭的無菌播種和組織培養(yǎng)及大規(guī)模生產(chǎn)和專利申請的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于解決樹蘭種子因胚發(fā)育不完全，在自然狀態(tài)下難以萌發(fā)的問題，開發(fā)一種可大規(guī)模繁殖樹蘭種苗的方法。
本發(fā)明采用人工營養(yǎng)液利用無菌播種的方法獲得大量試管苗，并利用無菌實(shí)生苗的莖尖或莖節(jié)進(jìn)行叢生芽的增殖并通過生根培養(yǎng)形成完整植株，實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明的目的。
本發(fā)明的技術(shù)特征在于，包括下列步驟(1)材料選擇選取生長健壯的母株開花時(shí)進(jìn)行人工授粉，授粉110-130天后的果實(shí)作為外植體；(2)無菌播種用70％-80％的酒精浸泡20-40秒后置于8％-15％的次氯酸鈉溶液中消毒10-30分鐘，無菌水沖洗4-5次后切開果實(shí)，用接種針將白色粉末狀胚均勻撒播接種到培養(yǎng)基中，所述培養(yǎng)基每升中含有的椰子水100毫升，瓊脂7克，蔗糖20克，其余成分為N6；(3)組織培養(yǎng)利用上述步驟生長的無菌實(shí)生苗的莖尖或莖節(jié)在培養(yǎng)基中形成叢生芽，所述的培養(yǎng)基每升中含有6-芐基嘌呤0.5毫克，瓊脂7克，蔗糖20克，其余成分為MS，在培養(yǎng)基中繼代增殖，所述的培養(yǎng)基每升中含有6-芐基嘌呤0.5毫克，瓊脂7克，蔗糖30克，其余成分為MS，叢生芽在生根時(shí)以培養(yǎng)基培養(yǎng)形成完整植株，所述的培養(yǎng)基每升中含有萘乙酸0.2毫克，香蕉汁100克，瓊脂7克，蔗糖20克，其余的成分為1/2MS；(4)試管苗移栽當(dāng)試管苗能長至3-4厘米高時(shí)，轉(zhuǎn)移到自然光下煉苗7-10天，然后將其從玻璃瓶中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，移入體積比為1∶1的泥炭和粗椰殼的混合基質(zhì)中。
在上述所有步驟中所述的培養(yǎng)基pH5.4-5.6，培養(yǎng)溫度(26±2)℃，光照度1500～2000lx，光照12小時(shí)/天。
在上述所有步驟的培養(yǎng)基中，加入瓊脂可固化培養(yǎng)基。
在所述的無菌播種的步驟中，所述的椰子水是從新鮮的椰子中取出的椰子水經(jīng)多層紗布過濾所得。所述的N6為國際通用的培養(yǎng)基，其成分和配制方法參看譚文澄、戴策剛主編，《觀賞植物組織培養(yǎng)技術(shù)》，北京中國林業(yè)出版社，1991。
在所述的無菌播種的步驟中，一般一個(gè)果能播3-5瓶，20-40天左右胚萌發(fā)，55-65天左右形成完整植株；當(dāng)培養(yǎng)基中無菌實(shí)生菌太密而實(shí)生苗較小時(shí)，可在相同的培養(yǎng)基上培養(yǎng)壯苗。
在所述的組織培養(yǎng)的步驟中，所述的香蕉汁是由香蕉去皮后用榨汁機(jī)打碎而成。所述的1/2MS是將MS中的大量元素和微量元素減半，其它成分不變而形成的培養(yǎng)基，所述的MS為國際通用的培養(yǎng)基，其成分和配制方法參看譚文澄、戴策剛主編，《觀賞植物組織培養(yǎng)技術(shù)》，北京中國林業(yè)出版社，1991。
在所述的試管苗移栽的步驟中，保持適當(dāng)通風(fēng)和足夠的濕度，移栽的成活率均可達(dá)90％以上。
本發(fā)明的最佳的實(shí)驗(yàn)條件和培養(yǎng)基配方見具體實(shí)施方式
。
本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)(1)增值倍數(shù)高叢生芽的增值可達(dá)3-5倍；(2)移栽的成活率高成活率可達(dá)90％以上；(3)設(shè)備簡單只需要簡單的植物組織培養(yǎng)設(shè)備即可進(jìn)行；(4)出苗快，穩(wěn)定性高，苗壯，種苗品質(zhì)好、抗性強(qiáng)、生長良好；(5)可作為樹蘭屬其它種、屬內(nèi)或與其它屬間雜種的無菌播種和組織培養(yǎng)的方法。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1樹蘭的無菌播種和組織培養(yǎng)繁殖1.選取生長健壯的母株開花時(shí)進(jìn)行人工授粉，授粉120天后取果實(shí)用作外植體；2.用75％的酒精浸泡30秒后置于10％的次氯酸鈉溶液中消毒20分鐘，無菌水沖洗4次后切開果實(shí)，用接種針將白色粉末狀胚均勻撒播接種到培養(yǎng)基中，所述培養(yǎng)基每升中含有的椰子水100毫升，瓊脂7克，蔗糖20克，其余成分為N6，一個(gè)果播了4瓶，30天胚萌發(fā)，60天形成完整植株；說明所述的椰子水是從新鮮的椰子中取出的椰子水經(jīng)多層紗布過濾所得。所述的培養(yǎng)基pH5.5，培養(yǎng)溫度(26±2)℃，光照度1500～2000lx，光照12小時(shí)/天。
3.利用上述步驟生長的無菌實(shí)生苗的莖尖或莖節(jié)在培養(yǎng)基中形成叢生芽，所述的培養(yǎng)基每升中含有6-芐基嘌呤0.5毫克，瓊脂7克，蔗糖20克，其余成分為MS，在培養(yǎng)基中繼代增殖5倍，所述的培養(yǎng)基每升中含有6-芐基嘌呤0.5毫克，瓊脂7克，蔗糖30克，其余成分為MS，叢生芽在生根時(shí)以培養(yǎng)基培養(yǎng)形成完整植株，所述的培養(yǎng)基每升中含有萘乙酸0.2毫克，香蕉汁100克，瓊脂7克，蔗糖20克，其余的成分為1/2MS；說明所述的香蕉汁是由香蕉去皮后用榨汁機(jī)打碎而成的。所述的培養(yǎng)基pH5.5，培養(yǎng)溫度(26±2)℃，光照度1500～2000lx，光照12小時(shí)/天。
4.試管苗移栽當(dāng)試管苗能長至3-4厘米高時(shí)，轉(zhuǎn)移到自然光下煉苗10天，然后將其從玻璃瓶中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，移入體積比為1∶1的泥炭和粗椰殼的混合基質(zhì)中。
5.結(jié)果移植的成活率為95％。
權(quán)利要求
1.一種樹蘭的無菌播種和組織培養(yǎng)方法，其特征在于包括4個(gè)步驟(1)材料選擇授粉110-130天后的果實(shí)作為外植體；(2)無菌播種用70％-80％的酒精浸泡20-40秒后置于8％-15％的次氯酸鈉溶液中消毒10-30分鐘，無菌水沖洗4-5次后切開果實(shí)，用接種針將白色粉末狀胚均勻撒播接種到培養(yǎng)基中，所述培養(yǎng)基每升中含有的椰子水100毫升，瓊脂7克，蔗糖20克，其余成分為N6；(3)組織培養(yǎng)利用上述步驟生長的無菌實(shí)生苗的莖尖或莖節(jié)在培養(yǎng)基中形成叢生芽，所述的培養(yǎng)基每升中含有6-芐基嘌呤0.5毫克，瓊脂7克，蔗糖20克，其余成分為MS，在培養(yǎng)基中繼代增殖，所述的培養(yǎng)基每升中含有6-芐基嘌呤0.5毫克，瓊脂7克，蔗糖30克，其余成分為MS，叢生芽在生根時(shí)以培養(yǎng)基培養(yǎng)形成完整植株，所述的培養(yǎng)基每升中含有萘乙酸0.2毫克，香蕉汁100克，瓊脂7克，蔗糖20克，其余的成分為1/2MS；(4)試管苗移栽當(dāng)試管苗能長至3-4厘米高時(shí)，轉(zhuǎn)移到自然光下煉苗7-10天，然后將其從玻璃瓶中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，移入體積比為1∶1的泥炭和粗椰殼的混合基質(zhì)中；在上述所有步驟中所述的培養(yǎng)基pH5.4-5.6，培養(yǎng)溫度(26±2)℃，光照度1500～2000lx，光照12小時(shí)/天。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種樹蘭的無菌播種和組織培養(yǎng)方法，其特征在于(1)所述的材料選擇中，選取授粉120天后的果實(shí)作為外植體；(2)在所述的無菌播種的步驟中，用75％的酒精浸泡30秒后置于10％的次氯酸鈉溶液中消毒20分鐘；(3)在所述的試管苗移栽的步驟中，當(dāng)試管苗能長至3-4厘米高時(shí)，轉(zhuǎn)移到自然光下煉苗10天。
全文摘要
本發(fā)明涉及樹蘭(Epidendrum radians)的無菌播種和組織培養(yǎng)方法。其特征在于采用人工營養(yǎng)液利用無菌播種的方法獲得大量試管苗，并利用無菌實(shí)生苗的莖尖或莖節(jié)進(jìn)行叢生芽的增殖，再通過生根培養(yǎng)形成完整植株。本發(fā)明具有投入少，產(chǎn)出高的特點(diǎn)，能成功地進(jìn)行樹蘭種苗的無菌播種和組織培養(yǎng)快速繁殖，出苗快，穩(wěn)定性高，苗壯，種苗品質(zhì)好、抗性強(qiáng)、生長良好，并可為樹蘭屬其它種、屬內(nèi)或與其它屬間雜種的無菌播種和組織培養(yǎng)提供方法。
文檔編號(hào)A01H4/00GK1535571SQ03114178
公開日2004年10月13日 申請日期2003年4月10日 優(yōu)先權(quán)日2003年4月10日
發(fā)明者曾宋君, 段俊, 黃向力 申請人:中國科學(xué)院華南植物研究所