專利名稱：具有誘導植物廣譜抗病性的有機高分子活性絡(luò)合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及農(nóng)藥，尤其是環(huán)保型生物農(nóng)藥的開發(fā)、生產(chǎn)和應(yīng)用領(lǐng)域。
植物廣譜抗病性是植物體產(chǎn)生的抵抗細菌、真菌、病毒和有害昆蟲等病原物侵染或進一步侵染的特性，通常表現(xiàn)為侵染或接種部位的過敏反應(yīng)或系統(tǒng)獲得抗性反應(yīng)。該現(xiàn)象自1901年發(fā)現(xiàn)以來已被廣泛研究，特別是20世紀80年代以后研究領(lǐng)域已涉及抗性反應(yīng)信號傳遞的機理、信使物質(zhì)的種類、誘導過敏反應(yīng)或系統(tǒng)獲得抗性反應(yīng)的hrp基因族的克隆和轉(zhuǎn)化、Harpin蛋白或多肽的結(jié)構(gòu)和功能屬性及其表達和調(diào)控等。研究表明，誘導植物廣譜抗病性的生物誘導劑有真菌、細菌、病毒及其相關(guān)有機分子。真菌誘導劑包括病原性真菌和非病原性真菌，病原性真菌主要是弱致病力的真菌菌株，真菌中的某些有機成分如花生四烯酸、亞麻酸、亞油酸、油酸等也可誘導植物廣譜抗性反應(yīng)；細菌誘導劑包括死體或活體的病原性或非病原性細菌及其有關(guān)成分，如歐氏桿菌屬Erwinia、假單孢桿菌屬Pseudomonas、黃單胞桿菌屬Xanthomonas中的細菌及其產(chǎn)生的Harpin蛋白或多肽均可誘導植物的廣譜抗病性反應(yīng)；病毒誘導劑包括病毒本身及其輔助因子，如煙草花葉病毒等。誘導植物廣譜抗病性的非生物誘導劑主要是化學誘導劑，如水楊酸SA可誘導許多植物對不同病原性真菌、細菌、病毒產(chǎn)生抗性；二氯異煙酸DCINA及其酰胺在田間和溫室條件下均能很好地使水稻和黃瓜等作物獲得對真菌和細菌等病原物危害的抗性；新發(fā)現(xiàn)的苯并噻重氮BTH在小麥、水稻、煙草上應(yīng)用也獲得廣譜抗病性；此外還有草酸、聚氨基葡聚糖等也能適度誘導植物產(chǎn)生系統(tǒng)獲得抗性反應(yīng)。以上植物廣譜抗性誘導劑中，基于生物防治考慮的生物誘導劑的開發(fā)和利用是目前生物農(nóng)藥研究的熱門領(lǐng)域，其中Harpin蛋白或多肽制劑在某些國家已獲準商業(yè)化生產(chǎn)和應(yīng)用。
核酸、蛋白質(zhì)、多肽、寡多糖、有機酸等活性有機配位化合物在結(jié)構(gòu)和性質(zhì)上均具有功能性的親水性和疏水性基團，以及帶正電荷和負電荷的電性基團，在自然暴露情況下容易吸濕、光解和氧化；其次，這些活性有機配位化合物大多具有柔性結(jié)構(gòu)，難以與作用靶點達到理想的匹配，這使得單純活性有機配位化合物的生物活性受到一定限制。
本發(fā)明的目的是利用絡(luò)合技術(shù)使Harpin蛋白或多肽及具有相關(guān)功能的其他活性有機分子獲得更佳應(yīng)用效果。
本發(fā)明的目的還在于摸索合理的工藝條件生產(chǎn)具有誘導植物廣譜抗病性的有機高分子活性絡(luò)合物，并利用絡(luò)合物的一些顯著化學性質(zhì)，將穩(wěn)定可靠又無毒無公害的活性絡(luò)合物應(yīng)用于現(xiàn)代高新農(nóng)業(yè)生物技術(shù)領(lǐng)域，開辟一項新的絡(luò)合物應(yīng)用產(chǎn)業(yè)即誘導植物廣譜抗病性的穩(wěn)定、高效和功能活性更優(yōu)的環(huán)保型生物農(nóng)藥。
本發(fā)明的有機高分子活性絡(luò)合物具有如下的結(jié)構(gòu)。
具有誘導植物廣譜抗病性的有機高分子活性絡(luò)合物，以植物必需營養(yǎng)元素作絡(luò)合中心體，相關(guān)活性有機物質(zhì)為配位化合物而形成的可使處理后的植物誘發(fā)產(chǎn)生顯著的廣譜抗病性，并有效促進生長的穩(wěn)定、高效和功能活性更優(yōu)的有機高分子活性絡(luò)合物。
有機高分子活性絡(luò)合物是利用植物必需營養(yǎng)元素的相關(guān)離子或原子作中心離子或原子，以來源于生物體自身的兩性活性有機物分子或活性有機復合物分子為配位體，在一定pH和溫度條件下結(jié)合或鍵合形成的。其基本形成過程包括首先形成“活性中間體”，然后循“多點掛鉤、柔順結(jié)合、最大成鍵”的反應(yīng)原則，通過電荷控制和軌道控制這種電價性和共價性作用，最后結(jié)合形成穩(wěn)定的絡(luò)合物分子復合體。中心離子或原子也稱絡(luò)合物的形成體，是絡(luò)合物的核心部分，位于絡(luò)離子或絡(luò)分子的中心，一般多是帶正電荷的陽離子，但也有電中性原子甚至帶負電荷的陰離子作為中心離子的。中心離子或原子絕大多數(shù)是金屬離子，其中的過渡金屬離子是較強的絡(luò)合物形成體，而一些具有高氧化態(tài)的非金屬元素的離子如Si4+和P5+等也是較常見的中心離子。配位體是絡(luò)離子或絡(luò)分子中同中心離子絡(luò)合的離子或分子。在每一配位體中，直接同中心離子絡(luò)合的原子稱配位原子。經(jīng)常作為配位原子的主要是非金屬的N、O、S、C等原子和鹵素原子等。配位體中所含配位原子的數(shù)目稱為配位體基數(shù)，一個配位體中可能含有一個配位原子即單基配位體或多個配位原子即多基配位體。直接同中心離子或原子絡(luò)合的配位原子的數(shù)目稱為該中心離子或原子的配位數(shù)。一般中心離子或原子的配位數(shù)為2、4、6、8，其中最常見的是4和6。簡單配位化合物由單基配位體與中心離子簡單配位而形成，這類絡(luò)合物一般沒有環(huán)狀結(jié)構(gòu)，在溶液中容易發(fā)生逐級解離現(xiàn)象，稱為維爾納型絡(luò)合物。螯合物又稱內(nèi)絡(luò)合物，由中心離子和多基配位體絡(luò)合而成，具有環(huán)狀結(jié)構(gòu)，穩(wěn)定性高，很少發(fā)生逐級解離現(xiàn)象，是目前應(yīng)用最廣和在生物界普遍存在的一類絡(luò)合物。如果一個配位體中有一個或兩個配位原子同時與兩個中心離子絡(luò)合，從而使內(nèi)界含有兩個或兩個以上的中心離子，這樣的絡(luò)合物稱多核絡(luò)合物。很多金屬都能形成多核絡(luò)合物，如飲用水工業(yè)常用的聚合氯化鋁和聚合氯化鐵等。植物在其正常生理活動中需要11種必需大量或常量營養(yǎng)元素和14種微量營養(yǎng)元素，這些元素的原子或離子既可充當中心離子，又可充當配位體中的配位原子。有機體中存在大量擔負不同生命活動功能的兩性有機化合物分子或兩性有機復合物分子，如核酸、多核苷酸、寡核苷酸、核苷酸、蛋白質(zhì)、多肽、寡多肽、二肽、氨基酸、糖、多糖、寡多糖、脂多糖、糖肽、糖蛋白、單糖、維生素、激素、有機酸等，這些化合物均可作為絡(luò)合物的有機配位體。
有機高分子活性絡(luò)合物基于其絡(luò)合物的化學屬性和活性有機配位化合物的特殊功能屬性而表現(xiàn)出穩(wěn)定、高效和功能活性更優(yōu)的特點。經(jīng)與中心離子發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)以后，由于相互間依靠共價鍵、電荷轉(zhuǎn)移、離子鍵、離子-偶極、偶極-偶極、氫鍵、范德華力、疏水作用等形成空間和電性上彼此互恰的和匹配更優(yōu)的剛性結(jié)構(gòu)，從而使其穩(wěn)定性增強。鑒于有機高分子活性絡(luò)合物的上述性質(zhì)，降低了其不良的疏水-親水相互作用，溶液狀態(tài)構(gòu)象和非溶液狀態(tài)構(gòu)象更趨一致，與靶點結(jié)合的區(qū)域增加，與靶點作用的構(gòu)象匹配性增強，并使植物自催化的一系列生理生化反應(yīng)的時間延長，從而使有機高分子活性絡(luò)合物表現(xiàn)出更優(yōu)的功能活性。
應(yīng)用有機高分子活性絡(luò)合物處理植物可誘發(fā)植物的廣譜抗病抗蟲性和其他生理生化活性，并促進植物生長。其適用植物包括各種自然條件和人工條件下的所有單子葉和雙子葉植物，以及來自這些植物的種子、營養(yǎng)繁殖外植體、組織、細胞或原生質(zhì)體培養(yǎng)的無性系再生植株等，如各種糧食作物、蔬菜作物、經(jīng)濟作物、果樹、觀賞性花卉和藤蔓植物、藥用植物、經(jīng)濟或綠化用林木或苗木以及各種牧草和綠化用草皮等。該絡(luò)合物對人、畜、禽、鳥、魚、蜜蜂等無毒無害，在土壤和植物體內(nèi)能自行降解或被光分解，無積留。其用藥方法有噴、灑、澆、浸、涂、注射以及拌種、種子包衣、遺傳轉(zhuǎn)化或與其他肥料或殺菌殺蟲劑一起混用等；用藥時間一般宜選在植物1-5片真葉時期或植物疫病發(fā)生之前，一季作物可連續(xù)用藥1-6次，每次間隔7-15天；用藥效果以細胞分裂活動和生理生化事件最活躍的植物分生組織或器官生長點為最佳，如植物幼嫩葉片、莖尖、芽尖以及花芽形成、果實膨大、種子萌發(fā)等，通常用藥12-24小時即可觸發(fā)或激活藥效反應(yīng)，7天左右即可使被用藥的植物產(chǎn)生新的廣譜的系統(tǒng)獲得抗性，從而使植物對病原性或致病原性的細菌、真菌、病毒或有害昆蟲的侵染或進一步侵染產(chǎn)生抵抗。
有機高分子活性絡(luò)合物誘發(fā)植物的廣譜抗病性，基于植物體內(nèi)在有機高分子活性絡(luò)合物作用下建立起來的對各種病原物的系統(tǒng)獲得抗性反應(yīng)。植物的這種系統(tǒng)獲得抗性具有以下顯著特點一、植物系統(tǒng)啟動了防衛(wèi)基因，而不是直接作用于病原物；二、無劑量效應(yīng)，即抗性誘導與誘導物的濃度無關(guān)；三、抗性反應(yīng)受多基因控制，故抗性穩(wěn)定可靠持久；四、抗性反應(yīng)具有廣譜性而非專一性，即對不同病原物均可產(chǎn)生抗性；五、抗性反應(yīng)是系統(tǒng)性的而非局部性的，即可在寄主植物體內(nèi)傳導，如對第一片真葉接種或誘導抗性反應(yīng)，第三片真葉也會表現(xiàn)出抗性。
有機高分子活性絡(luò)合物誘發(fā)植物的廣譜抗病性，可能具有以下三種實現(xiàn)途徑一、抗性誘導包括從植物細胞壁到細胞內(nèi)的一系列結(jié)構(gòu)性抗性反應(yīng)。細胞壁強化是第一個環(huán)節(jié)，包括木質(zhì)素沉淀、乳突體形成、膠質(zhì)體形成、侵填體產(chǎn)生等。木質(zhì)素一方面增加了寄主細胞的機械強度，使寄主能抵抗病原物分泌酶的降解作用；另一方面木質(zhì)素細胞壁限制了病原物對寄主營養(yǎng)物的利用，使其處于“饑餓”狀態(tài)。再者植物細胞壁還可通過過氧化物酶POD的催化和富含羥輔氨酸胞壁糖蛋白的交聯(lián)作用使細胞壁得到加強。二、與抗性誘導有關(guān)的生理生化反應(yīng)包括可溶性碳水化合物和酚類物質(zhì)含量的增加、植保素和病程相關(guān)蛋白PR的產(chǎn)生及多種酶活性的變化等。酚類物質(zhì)可作為病原菌的拮抗劑，抑制孢子萌發(fā)和菌絲生長，同時還可抑制或鈍化病原菌所分泌毒素或酶的活性；苯丙氨酸氨解酶PAL是植保素、木質(zhì)素和酚類化合物等次生代謝物合成的關(guān)鍵酶和限速酶，其活性增強與抗性反應(yīng)的激活和誘導呈明顯的相關(guān)性。三、用有機高分子活性絡(luò)合物或其他誘導物處理植物后首先在細胞膜上誘發(fā)一系列復雜的化學反應(yīng)，從而形成一種或多種信號物質(zhì)；然后這些信號物通過傳導進入相鄰細胞或其他未被誘導或接種的組織；收到信號的細胞或組織繼而產(chǎn)生一系列非特異的廣譜的防衛(wèi)或抗性反應(yīng)。這些抗性反應(yīng)是受多基因族控制的，既有細胞結(jié)構(gòu)上的表現(xiàn)，也有細胞生理生化反應(yīng)上的變化，但其詳細情況尚不十分清楚。目前已證實，水楊酸是植物抗性反應(yīng)信號級聯(lián)傳導中的一種內(nèi)源信號分子；細胞壁受體激酶Wakl參與了抗性誘導的信號傳導途徑；活性氧被認為與過敏反應(yīng)時細胞的死亡有關(guān)。
有機高分子活性絡(luò)合物誘發(fā)植物的廣譜抗蟲性，可能具有以下幾種表現(xiàn)一、阻止昆蟲直接接觸寄主植物的細胞或組織；二、阻止昆蟲對植物體因啃食而造成的直接傷害；三、迫使昆蟲離開其已經(jīng)定殖的寄主植物；四、直接殺死定殖在寄主植物上的昆蟲；五、干擾寄主植物上昆蟲的幼蟲發(fā)育；六、阻止昆蟲在寄主植物上定殖；七、使昆蟲在寄主植物上不釋放有害的植物毒素。
有機高分子活性絡(luò)合物促進植物生長表現(xiàn)在一、提高種子萌發(fā)的百分率；二、使幼苗生長更快、更茁壯；三、增加植株的大小或生物產(chǎn)量；四、縮短生長發(fā)育周期，使植株提早成熟；五、促進果實或籽粒膨大，增加經(jīng)濟產(chǎn)量。
有機高分子活性絡(luò)合物的功能活性主要取決于其活性有機配位化合物的屬性。由于這些化合物在結(jié)構(gòu)和性質(zhì)上總是存在著親水性和疏水性、正電性和負電性的兩極，并且在等電點附近具有不同的荷電基團，易與帶相反電荷的基團結(jié)合，從而產(chǎn)生對金屬絡(luò)合物的增敏作用，并進而發(fā)生多元絡(luò)合反應(yīng)，形成更穩(wěn)定、高效和功能活性更強的多元絡(luò)合物。
有機高分子活性絡(luò)合物具有廣泛的植物抗病、抗蟲性，并有效促進植物生長。這些活性絡(luò)合物首先與植物細胞表面的受體分子識別并結(jié)合，從而誘發(fā)一系列與抗性有關(guān)的生理生化事件，并同時產(chǎn)生一種或多種信號物質(zhì)；這些信號物質(zhì)經(jīng)級聯(lián)傳導進入其他組織或細胞，進而誘發(fā)系統(tǒng)的抗性反應(yīng)；抗性反應(yīng)既有細胞壁結(jié)構(gòu)上的表現(xiàn)，也有細胞內(nèi)部生理生化反應(yīng)上的變化。
我們對植物生長、代謝和發(fā)育必需的十一種大量元素氫、碳、氮、氧、鈉、鎂、磷、硫、氯、鉀、鈣和十四種微量元素氟、硅、釩、鉻、錳、鐵、鈷、鎳、銅、鋅、硒、鉬、錫、碘等元素的離子化合物、絡(luò)合物或絡(luò)離子進行了篩選試驗，所篩選出的離子化合物、絡(luò)合物或絡(luò)離子包括醋酸鹽、磷酸鹽、碳酸鹽、可溶性碘化物、錳酸鹽、高錳酸鹽、硝酸鹽、高氯酸鹽、氯酸鹽、次氯酸鹽、硫酸鹽、硫代硫酸鹽、硒酸鹽、亞硒酸鹽、硼酸鹽、檸檬酸鹽、等金屬離子化合物，以及它們形成的絡(luò)合物或絡(luò)離子。
這些金屬離子化合物、絡(luò)合物或絡(luò)離子因其無毒無公害，并為生命活動所必需，目前已廣泛用于各類無機復合肥料、醫(yī)用藥品、食品添加劑、飲用水處理、飼料添加劑等。但其效率或利用率較低。據(jù)調(diào)查，有效利用率大約20％-50％。
試驗表明，堿土金屬和過渡金屬元素的離子化合物、絡(luò)合物或絡(luò)離子中的金屬離子可作為首選的絡(luò)合中心離子，它們能與作為配位體的活性有機物分子和有機復合物分子發(fā)生不同程度的絡(luò)合反應(yīng)或多元絡(luò)合反應(yīng)，并能形成穩(wěn)定、高效和功能活性更優(yōu)的二元至多元的有機高分子活性絡(luò)合物。
充當絡(luò)合中心離子或原子以及有機配位化合物中配位原子的植物必需營養(yǎng)元素包括植物正常生長、發(fā)育和代謝所必需的十一種大量營養(yǎng)元素和十四種微量營養(yǎng)元素，它們是碳、氫、氧、氮、鈉、鎂、磷、硫、氯、鉀、鈣、氟、硅、釩、鉻、錳、鐵、鈷、鎳、銅、鋅、硒、鉬、錫、碘；其中，充當絡(luò)合中心體的部分營養(yǎng)元素主要是鈣、鎂、鐵、鈷、銅、鋅、錳等堿土金屬或過渡金屬元素的離子或原子，以及這些元素的二元或多元結(jié)合態(tài)，即金屬絡(luò)離子或絡(luò)合物；充當活性有機配位化合物中配位原子的部分營養(yǎng)元素主要是氮、氧、硫、碳和鹵素原子等。
我們對活性有機配位化合物進行了篩選試驗。試驗中，分別對天然來源的非病原性或非致病性的兩性活性有機物分子或活性有機復合物分子，以及經(jīng)人工或化學方法合成的同類或類似的兩性活性有機物分子或活性有機復合物分子進行了配位篩選。
結(jié)果表明，許多生理活性物質(zhì)如核酸、多核甘酸、寡核甘酸、核甘酸、蛋白質(zhì)、多肽、寡多肽、二肽、氨基酸、糖、多糖、寡多糖、脂多糖、糖肽、維生素、生長發(fā)育調(diào)節(jié)激素、有機酸等，都能與金屬離子化合物、絡(luò)合物或絡(luò)離子中的絡(luò)合中心離子發(fā)生不同程度的絡(luò)合反應(yīng)或多元絡(luò)合反應(yīng)。其中，與誘導植物抗性反應(yīng)直接有關(guān)的有機配位化合物Harpin蛋白或多肽等能形成穩(wěn)定、高效和功能活性更優(yōu)的有機高分子活性絡(luò)合物。
廣義地說，活性有機配位化合物包括來源于植物、動物和微生物體內(nèi)天然存在的非病原性或非致病性的活性有機物分子或活性有機復合物分子，以及人工或化學方法合成的同類或類似的活性有機物分子或活性有機復合物分子；其中主要有與誘導植物廣譜抗病性直接或間接有關(guān)的天然或人工合成的DNA片段；與誘導植物廣譜抗病性直接或間接有關(guān)的天然或人工合成的蛋白質(zhì)、多肽及短肽；與誘導植物廣譜抗病性有關(guān)的天然或人工合成的信號物質(zhì)及信號傳導物質(zhì)；與誘導植物廣譜抗病性有關(guān)的其他有機化合物分子等。
所述與誘導植物廣譜抗病性有關(guān)的活性有機配位化合物涉及來源于歐氏桿菌屬Erwinia、假單孢桿菌屬Pseudomonas、黃單胞桿菌屬Xanthomonas、疫霉屬Phtophthora或某些工程菌中的hrp基因及其載體分子；來源于歐氏桿菌屬Erwinia、假單孢桿菌屬Pseudomonas、黃單胞桿菌屬Xanthomonas、疫霉屬Phtoph thora或某些工程菌中的hrp基因產(chǎn)物，即Harpin蛋白或多肽；水楊酸及其類似物分子；植物病程相關(guān)蛋白PR-1、PR-2、PR-3、PR-4、PR-5分子等。
在生產(chǎn)方法上，采用如下步驟獲得所述物質(zhì)。
(1)對于天然致病細菌和人工構(gòu)建的攜帶hrp基因族的工程細菌采用不同的處理方法對于天然致病細菌Erwinia carotovorasubsp.cabbge和Erwinia aroideae subsp.rape，通過在特定的pH值段獲得相應(yīng)的蛋白質(zhì)(或蛋白質(zhì)復合物)；對于人工構(gòu)建的攜帶hrp基因族的工程細菌，采用細胞破碎和常規(guī)的蛋白質(zhì)分離制備技術(shù)，獲得Harpin蛋白或多肽；(2)將(1)得到的特定pH值段蛋白質(zhì)(或蛋白質(zhì)復合物)或Harpin蛋白或多肽在控制反應(yīng)器內(nèi)加入適量配比的金屬絡(luò)離子，調(diào)節(jié)適量的pH值，溫度控制在45℃-55℃完成絡(luò)合反應(yīng)，從而獲90％以上的活性Harpin蛋白或多肽絡(luò)合物。
下面通過實施例對本發(fā)明的要點作進一步的詳述。
實施例1、用來源于白菜軟腐病致病細菌Erwinia carotovora subsp.cabbage的蛋白質(zhì)進行酸水解制取氨基酸或氨基酸復合物，然后與堿式碳酸銅反應(yīng)制取氨基酸銅絡(luò)合物，以此建立主要的工藝路線和操作條件及方法。
反應(yīng)條件和方式在多元絡(luò)合反應(yīng)中，控制好反應(yīng)條件十分重要。主要是氨基酸或氨基酸復合物與絡(luò)離子的反應(yīng)質(zhì)量比、PH值、反應(yīng)溫度、靜置處理時間、反應(yīng)處理時間和反應(yīng)器反應(yīng)方式如靜置、攪拌、回流、震蕩、電磁場震蕩等。進一步用正交試驗設(shè)計，建立相應(yīng)的優(yōu)化條件組合。
操作步驟在反應(yīng)容器中，加入200ml水和12g硫酸錳，不斷攪拌使其溶解；然后小心加入100ml濃硫酸和80g細菌蛋白質(zhì)，加熱振蕩，其間用甲醛法測定氨基酸總含量，當氨基酸總含量不變時即為反應(yīng)終點，水解反應(yīng)約需5小時，冷卻至70℃；分批加入8g堿式碳酸銅，加完后振蕩1小時；滴加氫氧化鈉溶液，調(diào)節(jié)PH至7.0～7.5進行絡(luò)合反應(yīng)；靜置處理時間8-19小時，反應(yīng)溫度45℃-55℃，反應(yīng)處理時間6-8小時，用EDTA法測定螯合率；反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)脫水干燥，獲得最終產(chǎn)品氨基酸絡(luò)合銅。絡(luò)合產(chǎn)物經(jīng)紅外光譜KBr測定，COO(-1)和NH3(+1)的伸展振動都向低波數(shù)位移，表明COO(-1)和NH3(+1)與銅配位，形成了絡(luò)合物。
實施例2用來源于油菜軟腐病的革蘭氏陰性致病細菌Erwinia aroideaesubsp.rape和白菜軟腐病的革蘭氏陽性致病細菌Erwiniacarotovora subsp.Cabbage(這兩類軟腐性致病桿菌分離自四川省什邡市無公害蔬菜生產(chǎn)基地)的pH2.0-4.0、pH4.0-4.5、pH4.5-5.0、pH5.0-7.0、pH7.0-9.0區(qū)段蛋白質(zhì)(或蛋白質(zhì)復合物)與硫酸鈣、硫酸鐵、硫酸鋅、硫酸錳、硫酸銅和硫酸鈷分別以100∶10至100∶30的組合質(zhì)量比進行不同組合的絡(luò)合試驗。
結(jié)果表明，共處理溶液的最適pH值為5-5.5，處于蛋白質(zhì)(或其復合物)等電點堿性區(qū)，混合預處理時間8小時，在常壓和45℃-50℃溫度條件下，在反應(yīng)器中回流處理6-8小時進行絡(luò)合反應(yīng)，以100∶15-20的組合質(zhì)量比效果最佳，并分別得到了以上各pH區(qū)段蛋白質(zhì)及其復合物的鈣-絡(luò)合物、鐵-絡(luò)合物、鋅-絡(luò)合物、錳-絡(luò)合物、銅-絡(luò)合物和鈷-絡(luò)合物，鈣、鐵、鋅、錳、銅和鈷的絡(luò)合或螯合率達到92-95％％。其中，pH4.0-4.5區(qū)段的蛋白質(zhì)及其絡(luò)合物具有誘導植物廣譜抗性反應(yīng)的活性。
實際上，用硫酸鈣、硫酸鐵、硫酸鋅、硫酸錳、硫酸銅和硫酸鈷之一種或多種來完成絡(luò)合，也可得到相似的結(jié)果。
實施例3直接從穩(wěn)定生長期的攜帶hrp基因族的RsmA--RsmC--Erwiniacarotovora subsp.cabbage、RsmA--Erwinia carotovora subsp.cabbage和E.coli JM109工程菌中分離提取Harpin蛋白或多肽，然后讓其分別與硫酸鈣、硫酸鐵、硫酸鋅、硫酸錳、硫酸銅和硫酸鈷進行不同條件組合的絡(luò)合反應(yīng)。按照正交試驗設(shè)計，組合質(zhì)量比的水平分別為100∶10、100∶15、100∶20、100∶25和100∶30，共處理溶液的pH值分別為3.5、4.5、5.5、6.5和7.5，混合預處理時間分別為0、5、10、15和20小時，絡(luò)合反應(yīng)溫度分別為35℃、45℃、55℃、65℃和75℃，反應(yīng)器中絡(luò)合反應(yīng)進行的時間分別是4、6、8、10和12小時，反應(yīng)器中絡(luò)合反應(yīng)的方式分別是靜置、回流、攪拌、振蕩和電磁場振蕩。
結(jié)果表明，組合質(zhì)量比以100∶15和100∶20效果佳，共處理溶液的pH值以5.5和6.5效果佳，混合預處理時間以5和10小時效果佳，絡(luò)合反應(yīng)溫度以45℃和55℃效果佳，反應(yīng)器中絡(luò)合反應(yīng)進行的時間以6和8小時效果佳，反應(yīng)器中絡(luò)合反應(yīng)的方式以回流、振蕩和電磁場振蕩效果佳，并獲得了多組不同處理條件的適宜組合或配合的優(yōu)化反應(yīng)條件組合，并分別得到了Harpin蛋白或多肽的鈣-絡(luò)合物、鐵-絡(luò)合物、鋅-絡(luò)合物、錳-絡(luò)合物、銅-絡(luò)合物和鈷-絡(luò)合物，鈣、鐵、鋅、錳、銅和鈷的絡(luò)合或螯合率達到90-95％％。
就實施例3獲得的部分Harpin蛋白或多肽-絡(luò)合物與相應(yīng)的Harpin蛋白或多肽的穩(wěn)定性進行了比較。結(jié)果如下在100℃條件下，Harpin蛋白或多肽10分鐘后喪失活性，由它們作為配位體形成的鈣-絡(luò)合物、鐵-絡(luò)合物和鋅-絡(luò)合物30分鐘仍保持活性，50分鐘后才喪失活性。
在pH14條件下，Harpin蛋白或多肽100分鐘后喪失活性，由它們作為配位體形成的鈣-絡(luò)合物、鐵-絡(luò)合物和鋅-絡(luò)合物100分鐘仍保持活性，500分鐘后才喪失活性。
在pH1條件下，Harpin蛋白或多肽200分鐘后喪失活性，由它們作為配位體形成的鈣-絡(luò)合物、鐵-絡(luò)合物和鋅-絡(luò)合物200分鐘仍保持活性，1000分鐘后才喪失活性。
在10000Lux強光照條件下，Harpin蛋白或多肽60分鐘后喪失活性，由它們作為配位體形成的鈣-絡(luò)合物、鐵-絡(luò)合物和鋅-絡(luò)合物60分鐘仍保持活性，300分鐘后才喪失活性。
以上結(jié)果表明，有機高分子活性絡(luò)合物比其相應(yīng)有機配位體更為穩(wěn)定。
實施例4就實施例3獲得的部分Harpin蛋白或多肽-絡(luò)合物與相應(yīng)的Harpin蛋白或多肽在誘導植物抗性反應(yīng)方面的活性效果進行了比較。
結(jié)果表明，在相同處理條件下，單純的Harpin蛋白或多肽4小時后引起植物葉面明顯出現(xiàn)枯萎斑，而被鈣、鐵或鋅絡(luò)合的Harpin蛋白或多肽僅1小時后就引起植物葉面明顯出現(xiàn)枯萎斑；48小時后，前者出現(xiàn)枯萎斑的面積只有后者的二分之一；1周后，前者出現(xiàn)枯萎斑的面積只有后者的三分之一。說明Harpin蛋白或多肽被金屬離子絡(luò)合以后，能提早觸發(fā)或誘發(fā)抗性反應(yīng)事件，并且其維持抗性反應(yīng)的時間和強度均優(yōu)于單純的Harpin蛋白或多肽。
實施例5就實施例3中含攜帶brp基因族的pAKC930載體的E.coli JM109中制備的Harpin蛋白或多肽及其鈣-、鐵-、鋅-絡(luò)合物對種子萌發(fā)和幼苗生長的影響進行了比較。
以種子發(fā)芽率、幼苗株高和干重作為測定指標，Harpin蛋白或多肽及其鈣-、鐵-、鋅-絡(luò)合物的作用濃度均為100μg/ml，并以pH6.5的5mM磷酸鉀緩沖液作對照處理，在28℃條件下分別對油菜種子、水稻種子和小麥種子浸種24小時，然后分別播于三組花盆中，7天后統(tǒng)計種子發(fā)芽率，15天后測量幼苗平均株高和平均干重。結(jié)果如下Harpin蛋白或多肽處理組，油菜種子發(fā)芽率92％、水稻種子發(fā)芽率90％、小麥種子發(fā)芽率86％；油菜平均株高4.7cm、水稻平均株高12.4cm、小麥平均株高13.5cm；油菜平均干物質(zhì)重1.2g、水稻平均干物質(zhì)重2.3g、小麥平均干物質(zhì)重2.2g。
Harpin蛋白或多肽的鈣-、鐵-、鋅-絡(luò)合物處理組，油菜種子發(fā)芽率95％、水稻種子發(fā)芽率93％、小麥種子發(fā)芽率89％；油菜平均株高4.9cm、水稻平均株高14.1cm、小麥平均株高15.3cm；油菜平均干物質(zhì)重1.3g、水稻平均干物質(zhì)重2.7g、小麥平均干物質(zhì)重2.5g。
磷酸鉀緩沖液對照處理組，油菜種子發(fā)芽率90％、水稻種子發(fā)芽率88％、小麥種子發(fā)芽率84％；油菜平均株高4.5cm、水稻平均株高11.5cm、小麥平均株高12.6cm；油菜平均干物質(zhì)重1.1g、水稻平均干物質(zhì)重2.0g、小麥平均干物質(zhì)重1.9g。
以上結(jié)果表明，Harpin蛋白或多肽及其鈣-、鐵-、鋅-絡(luò)合物與對照處理相比，對被處理種子的發(fā)芽率、株高和干物質(zhì)積累方面均具有明顯的促進作用，但Harpin蛋白或多肽的金屬絡(luò)合物比單純的Harpin蛋白或多肽在這方面的功能活性更具優(yōu)越性。
實施例6就實施例3中從穩(wěn)定生長期的工程菌RsmA--RsmC--Erwiniacarotovora subsp.cabbage中制備的Harpin蛋白或多肽及其鈣-、鐵-、鋅-絡(luò)合物對有害昆蟲的防治作用進行了比較。
以煙草蚜蟲為例，用100μg/ml濃度的Harpin蛋白或多肽溶液和100μg/ml濃度的Harpin蛋白或多肽的鈣-、鐵-、鋅-絡(luò)合物溶液在25℃條件下對煙草種子浸種24-48小時，并以pH6.5的5mM磷酸鉀緩沖液作對照處理，然后分別播于三個培養(yǎng)盤中萌發(fā)，待出苗以后分組移栽于同一塊大田中，隨后每天觀察記錄感染蚜蟲的數(shù)目。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對照處理組第1、2、3、6、7、8、9、10天單株感染蚜蟲的平均數(shù)分別為0、3、3、6、7、9、13、17；Harpin蛋白或多肽處理組第1、2、3、6、7、8、9、10天單株感染蚜蟲的平均數(shù)分別為0、0、0、1、0、0、2、2；Harpin蛋白或多肽的鈣-、鐵-、鋅-絡(luò)合物處理組第1、2、3、6、7、8、9、10天單株感染蚜蟲的平均數(shù)分別為0、0、0、0、0、0、1、0。
同樣以煙草蚜蟲為例，用25μg/ml濃度的Harpin蛋白或多肽溶液和25μg/ml濃度的Harpin蛋白或多肽的鈣-、鐵-、鋅-絡(luò)合物溶液對已嚴重感染蚜蟲的煙草植株葉片進行滲透或噴灑處理，并以pH6.5的5mM磷酸鉀緩沖液處理作對照，然后每天觀察統(tǒng)計煙草植株上蚜蟲的數(shù)目。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對照處理組的蚜蟲數(shù)量在處理期間基本穩(wěn)定或略有增加；Harpin蛋白或多肽處理組的蚜蟲在處理的第2-3天開始離開該植株，到第10天左右蚜蟲基本上消失，偶有個別蚜蟲被殺死；Harpin蛋白或多肽的鈣-、鐵-、鋅-絡(luò)合物處理組的蚜蟲在處理的第1-2天開始離開該植株，到第8-10天左右蚜蟲基本上消失，偶爾也有少數(shù)蚜蟲被直接殺死。
以上結(jié)果表明，Harpin蛋白或多肽及其鈣-、鐵-、鋅-絡(luò)合物與對照處理相比，均能有效防治植物有害昆蟲的侵害，但Harpin蛋白或多肽的金屬絡(luò)合物比單純的Harpin蛋白或多肽在控制害蟲方面似乎更具優(yōu)越性。
實施例7就實施例3中從穩(wěn)定生長期的工程菌RsmA--Erwinia carotovorasubsp.cabbage中制備的Harpin蛋白或多肽及其鈣-、鐵-、鋅-絡(luò)合物在誘導植物廣譜抗病性方面的作用進行了比較。
結(jié)果表明，用100μg/ml濃度的Harpin蛋白或多肽溶液和100μg/ml濃度的Harpin蛋白或多肽的鈣-、鐵-、鋅-絡(luò)合物溶液對植物種子浸種24小時以上，或在植物疫病發(fā)生前以稀釋4-10倍的濃度每隔2周定期噴灑植物幼苗或葉片，均可有效防治油菜軟腐病、白菜軟腐病、蕃茄潰瘍病、甘藍黑腐病、辣椒瘡痂病、水稻白葉枯病等細菌類病害和水稻稻瘟病、水稻紋枯病、玉米大斑病、玉米小斑病、玉米紋枯病、小麥赤霉病、小麥白粉病、小麥銹病、白菜霜霉病、黃瓜枯萎病、萵苣菌黑病、辣椒疫病、茄子綿疫病、馬鈴薯早疫病、馬鈴薯晚疫病等真菌類病害，以及油菜病毒病、馬鈴薯病毒病、蕃茄病毒病等病毒類病害。但Harpin蛋白或多肽的金屬絡(luò)合物比單純的Harpin蛋白或多肽更能提早觸發(fā)或誘發(fā)植物的抗性反應(yīng)機制，并能使抗性反應(yīng)維持更長的作用時間和強度。
本發(fā)明誘導植物廣譜抗病性的有機高分子活性絡(luò)合物可采用噴施、浸種、拌種、種子包衣、浸苗、涂莖葉、注射、滲透；或用攜帶hrp基因族的Ti或Ri質(zhì)粒對無性培養(yǎng)的植物組織、細胞和原生質(zhì)體進行遺傳轉(zhuǎn)化；或用含hrp基因族的DNA片斷或質(zhì)粒載體通過電激或注射對植物組織、細胞和原生質(zhì)體直接進行轉(zhuǎn)化，并將被轉(zhuǎn)化的植物組織、細胞和原生質(zhì)體再生成植株。
實驗表明，本發(fā)明誘導植物廣譜抗病性的有機高分子活性絡(luò)合物適合用于多種植物，包括各種自然條件和栽培條件下的所有單子葉植物和雙子葉植物，以及來自這些植物的種子和無性繁殖系，如營養(yǎng)繁殖器官或外植體、組織培養(yǎng)物、細胞或原生質(zhì)體培養(yǎng)物及其再生植株等；其中，適用的糧食作物、蔬菜作物、經(jīng)濟作物和果樹包括水稻、小麥、大麥、玉米、高粱、青稞、大豆、蠶豆、豌豆、綠豆、甘薯、馬鈴薯、萵苣、蕃茄、甘藍、菠菜、蘿卜、胡蘿卜、洋蔥、茄子、芹菜、大白菜、大蒜、小白菜、花椰菜、南瓜、冬瓜、西瓜、絲瓜、黃瓜、瓠瓜、空心菜、青菜、韭菜、辣椒、姜、蔥、菜花、豇豆、四季豆、菜豆、甜菜、苜蓿、向日葵、花生、芝麻、蓖麻、油菜、棉花、亞麻、桑、甘蔗、煙草、胡椒、花椒、蘋果、梨、柑桔、柚、橘、葡萄、草莓、桃、杏、李、枇杷、荔枝、桂圓、波蘿、香蕉等；適用的室內(nèi)室外觀賞性花卉植物和藤蔓植物包括蘭花、牽牛、郁金香、風信子、百合、月季、玫瑰、菊花、牡丹、康乃馨、薔薇等；適用的各種藥用植物包括川芎、天麻、當歸、芍藥、紫蘇、薄荷、板蘭根、連翹、金銀花、薯蕷、山藥、杜仲、丁香、人參、三七、貝母、枸杞子等；此外還適用于各種經(jīng)濟用林木或苗木、綠化用林木或苗木以及各種牧草和綠化用草皮等。
有高分子活性絡(luò)合物誘導的植物廣譜抗病性包括植物對各種病原性或致病原性的細菌、真菌、病毒和有害昆蟲等的侵害或進一步侵害產(chǎn)生的過敏反應(yīng)或系統(tǒng)獲得抗性反應(yīng)；其中，有機高分子活性絡(luò)合物可有效防治的細菌性植物病害包括各種蔬菜、糧食和經(jīng)濟作物的軟腐病、環(huán)腐病、黑腐病、黑斑病、黑脛病、黑星病、黑粉病、葉枯病、青枯病、斑枯病、蔓枯病、紋枯病、枯萎病、炭疽病、角斑病、褐斑病、褐紋病、紫斑病、瘡痂病、菌核病、白葉枯病、白粉病、白斑病、白銹病、銹病等；有機高分子活性絡(luò)合物可有效防治的真菌性植物病害包括多種蔬菜、糧食和經(jīng)濟作物的霜霉病、灰霉病、葉霉病、煤霉病、疫霉病、早疫病、晚疫病、綿疫病等；有機高分子活性絡(luò)合物可有效防治的病毒性植物病害包括白菜孤丁病、蕃茄花葉病、煙草花葉病、白菜褪綠斑駁病毒病、白菜花葉斑駁病毒病以及由X-和Y-病毒復合感染引起的馬鈴薯病毒病等；有機高分子活性絡(luò)合物可有效防治的植物有害昆蟲包括蚜蟲、菜蛾、菜粉蝶、棉鈴蟲、煙青蟲、玉米鉆孔蟲、馬鈴薯瓢蟲、甜菜甲蟲、粉螨、金針蟲、螻蛄、蠅等。
在本發(fā)明產(chǎn)品的實際生產(chǎn)中，有機高分子活性絡(luò)合物在制備、儲存和應(yīng)用中的劑型原藥包括固體即原粉和液體即原油；儲存和應(yīng)用的產(chǎn)品劑型包括可濕性粉劑、水劑、緩釋劑以及與其他肥料或殺菌劑、殺蟲劑的混合制劑等。
權(quán)利要求
1.具有誘導植物廣譜抗病性的有機高分子活性絡(luò)合物，以植物必需營養(yǎng)元素作絡(luò)合中心體，相關(guān)活性有機物質(zhì)為配位化合物而形成的可使處理后的植物誘發(fā)產(chǎn)生顯著的廣譜抗病性，并有效促進生長的穩(wěn)定、高效和功能活性更優(yōu)的有機高分子活性絡(luò)合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有誘導植物廣譜抗病性的有機高分子活性絡(luò)合物，其特征在于，所述絡(luò)合中心體為離子或原子，或含有這些離子或原子的基團或化合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的具有誘導植物廣譜抗病性的有機高分子活性絡(luò)合物，其特征在于，充當絡(luò)合中心離子或原子以及有機配位化合物中配位原子的植物必需營養(yǎng)元素包括植物正常生長、發(fā)育和代謝所必需的十一種大量營養(yǎng)元素和十四種微量營養(yǎng)元素，它們是碳、氫、氧、氮、鈉、鎂、磷、硫、氯、鉀、鈣、氟、硅、釩、鉻、錳、鐵、鈷、鎳、銅、鋅、硒、鉬、錫、碘；其中，充當絡(luò)合中心體的部分營養(yǎng)元素主要是鈣、鎂、鐵、鈷、銅、鋅、錳等堿土金屬或過渡金屬元素的離子或原子，以及這些元素的二元或多元結(jié)合態(tài)，即金屬絡(luò)離子或絡(luò)合物；充當活性有機配位化合物中配位原子的部分營養(yǎng)元素主要是氮、氧、硫、碳和鹵素原子等。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有誘導植物廣譜抗病性的有機高分子活性絡(luò)合物，其特征在于，所述活性有機配位化合物包括來源于植物、動物和微生物體內(nèi)天然存在的非病原性或非致病性的活性有機物分子或活性有機復合物分子，以及人工或化學方法合成的同類或類似的活性有機物分子或活性有機復合物分子；其中主要有與誘導植物廣譜抗病性直接或間接有關(guān)的天然或人工合成的DNA片段；與誘導植物廣譜抗病性直接或間接有關(guān)的天然或人工合成的蛋白質(zhì)、多肽及短肽；與誘導植物廣譜抗病性有關(guān)的天然或人工合成的信號物質(zhì)及信號傳導物質(zhì)；與誘導植物廣譜抗病性有關(guān)的其他有機化合物分子等。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的具有誘導植物廣譜抗病性的有機高分子活性絡(luò)合物，其特征在于，所述與誘導植物廣譜抗病性有關(guān)的活性有機配位化合物涉及來源于歐氏桿菌屬Erwinia、假單孢桿菌屬Pseudomonas、黃單胞桿菌屬Xanthomonas、疫霉屬Phtophthora或某些工程菌中的hrp基因及其載體分子；來源于歐氏桿菌屬Erwinia、假單孢桿菌屬Pseudomonas、黃單胞桿菌屬Xanthomonas、疫霉屬Phtophthora或某些工程菌中的hrp基因產(chǎn)物，即Harpin蛋白或多肽；水楊酸及其類似物分子；植物病程相關(guān)蛋白PR-1、PR-2、PR-3、PR-4、PR-5分子等。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的具有誘導植物廣譜抗病性的有機高分子活性絡(luò)合物，其特征在于，所述hrp基因及Harpin蛋白或多肽來源于白菜或甘藍類軟腐病致病細菌Erwinia carotovora subsp.cabbage和油菜軟腐病致病細菌Erwinia aroideae subsp.rape。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有誘導植物廣譜抗病性的有機高分子活性絡(luò)合物，其特征在于，有機高分子活性絡(luò)合物在制備、儲存和應(yīng)用中的劑型原藥包括固體即原粉和液體即原油；儲存和應(yīng)用的產(chǎn)品劑型包括可濕性粉劑、水劑、緩釋劑以及與其他肥料或殺菌劑、殺蟲劑的混合制劑等。
8.實現(xiàn)權(quán)利要求1或2或3或4或5或6所述具有誘導植物廣譜抗病性的有機高分子活性絡(luò)合物的生產(chǎn)方法，采用如下步驟獲得所述物質(zhì)(1)對于天然致病細菌Erwinia carotovora subsp.cabbage和Erwinia aroideae subsp.rape，通過在特定的pH值段獲得相應(yīng)的蛋白質(zhì)(或蛋白質(zhì)復合物)；對于人工構(gòu)建的攜帶hrp基因族的工程細菌，通過細胞破碎和常規(guī)的蛋白質(zhì)分離制備技術(shù)獲得Harpin蛋白或多肽；(2)將(1)得到的特定pH值段蛋白質(zhì)(或蛋白質(zhì)復合物)或Harpin蛋白或多肽在控制反應(yīng)器內(nèi)加入適量配比的金屬絡(luò)離子，調(diào)節(jié)適量的pH值，溫度控制在45℃-55℃完成絡(luò)合反應(yīng)，反應(yīng)混合液需用電磁場或超聲波進行不間斷的振蕩或回流，必要時可間以適當時間的靜置處理；絡(luò)合反應(yīng)時，絡(luò)合中心離子或原子與活性有機配位化合物的質(zhì)量配比依據(jù)二者的荷電屬性、電荷當量以及絡(luò)合反應(yīng)的性質(zhì)而定；從而獲得90％以上的活性Harpin蛋白或多肽絡(luò)合物。
9.權(quán)利要求1所述誘導植物廣譜抗病性的有機高分子活性絡(luò)合物的用途，采用噴施、浸種、拌種、種子包衣、浸苗、涂莖葉、注射、滲透；或用攜帶hrp基因族的Ti或Ri質(zhì)粒對無性培養(yǎng)的植物組織、細胞和原生質(zhì)體進行遺傳轉(zhuǎn)化；或用含hrp基因族的DNA片斷或質(zhì)粒載體通過電激或注射對植物組織、細胞和原生質(zhì)體直接進行轉(zhuǎn)化，并將被轉(zhuǎn)化的植物組織、細胞和原生質(zhì)體再生成植株。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述誘導植物廣譜抗病性的有機高分子活性絡(luò)合物的用途，其特征在于，適用的植物包括各種自然條件和栽培條件下的所有單子葉植物和雙子葉植物，以及來自這些植物的種子和無性繁殖系，如營養(yǎng)繁殖器官或外植體、組織培養(yǎng)物、細胞或原生質(zhì)體培養(yǎng)物及其再生植株等；其中，適用的糧食作物、蔬菜作物、經(jīng)濟作物和果樹包括水稻、小麥、大麥、玉米、高粱、青稞、大豆、蠶豆、豌豆、綠豆、甘薯、馬鈴薯、萵苣、蕃茄、甘藍、菠菜、蘿卜、胡蘿卜、洋蔥、茄子、芹菜、大白菜、大蒜、小白菜、花椰菜、南瓜、冬瓜、西瓜、絲瓜、黃瓜、瓠瓜、空心菜、青菜、韭菜、辣椒、姜、蔥、菜花、豇豆、四季豆、菜豆、甜菜、苜蓿、向日葵、花生、芝麻、蓖麻、油菜、棉花、亞麻、桑、甘蔗、煙草、胡椒、花椒、蘋果、梨、柑桔、柚、橘、葡萄、草莓、桃、杏、李、枇杷、荔枝、桂圓、波蘿、香蕉等；適用的室內(nèi)室外觀賞性花卉植物和藤蔓植物包括蘭花、牽牛、郁金香、風信子、百合、月季、玫瑰、菊花、牡丹、康乃馨、薔薇等；適用的各種藥用植物包括川芎、天麻、當歸、芍藥、紫蘇、薄荷、板蘭根、連翹、金銀花、薯蕷、山藥、杜仲、丁香、人參、三七、貝母、枸杞子等；此外還適用于各種經(jīng)濟用林木或苗木、綠化用林木或苗木以及各種牧草和綠化用草皮等。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述誘導植物廣譜抗病性的有機高分子活性絡(luò)合物的用途，其特征在于，有機高分子活性絡(luò)合物誘導的植物廣譜抗病性包括植物對各種病原性或致病原性的細菌、真菌、病毒和有害昆蟲等的侵害或進一步侵害產(chǎn)生的過敏反應(yīng)或系統(tǒng)獲得抗性反應(yīng)；可有效防治的細菌性植物病害包括各種蔬菜、糧食和經(jīng)濟作物的軟腐病、環(huán)腐病、黑腐病、黑斑病、黑脛病、黑星病、黑粉病、葉枯病、青枯病、斑枯病、蔓枯病、紋枯病、枯萎病、炭疽病、角斑病、褐斑病、褐紋病、紫斑病、瘡痂病、菌核病、白葉枯病、白粉病、白斑病、白銹病、銹病等；有機高分子活性絡(luò)合物可有效防治的真菌性植物病害包括多種蔬菜、糧食和經(jīng)濟作物的霜霉病、灰霉病、葉霉病、煤霉病、疫霉病、早疫病、晚疫病、綿疫病等；有機高分子活性絡(luò)合物可有效防治的病毒性植物病害包括白菜孤丁病、蕃茄花葉病、煙草花葉病、白菜褪綠斑駁病毒病、白菜花葉斑駁病毒病以及由X-和Y-病毒復合感染引起的馬鈴薯病毒病等；有機高分子活性絡(luò)合物可有效防治的植物有害昆蟲包括蚜蟲、菜蛾、菜粉蝶、棉鈴蟲、煙青蟲、玉米鉆孔蟲、馬鈴薯瓢蟲、甜菜甲蟲、粉螨、金針蟲、螻蛄、蠅等。
全文摘要
具有誘導植物廣譜抗病性的有機高分子活性絡(luò)合物，以植物必需營養(yǎng)元素作絡(luò)合中心體，相關(guān)活性有機物質(zhì)為配位化合物而形成的可使處理后的植物誘發(fā)產(chǎn)生顯著的廣譜抗病性，并有效促進生長的穩(wěn)定、高效和功能活性更優(yōu)的有機高分子活性絡(luò)合物。有機高分子活性絡(luò)合物在適當條件下處理植物，可誘發(fā)植物體內(nèi)產(chǎn)生某些應(yīng)激反應(yīng)機制，如局部過敏反應(yīng)或系統(tǒng)獲得抗性反應(yīng)，從而使植物對各種病原性細菌、真菌、病毒和昆蟲等的侵害或進一步侵害產(chǎn)生抵抗，并有效促進植物生長。
文檔編號A01N55/00GK1602691SQ0313505
公開日2005年4月6日 申請日期2003年9月30日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月30日
發(fā)明者吳彥, 張玨 申請人:吳彥, 張玨