專利名稱：一種雷蘑菌絲體及其培養(yǎng)方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種雷蘑菌絲體及其培養(yǎng)方法以及該雷蘑菌絲體在制備抑制肝癌癌細(xì)胞或抑制白血病癌細(xì)胞藥物中的用途。
背景技術(shù)：
目前，惡性腫瘤已成為人類主要的死亡原因之一。我國每年新出現(xiàn)的病人約100萬，死亡80萬左右。特別是白血病，近年來呈上升趨勢，而且大多是兒童和青少年，我國每年平均有兩萬左右十五歲以下的兒童患病。以白血病為代表的兒童惡性腫瘤目前已經(jīng)成為我國5-15歲兒童的第二大死亡原因，而在北京城區(qū)已經(jīng)成為第一大死因。科學(xué)家至今無法摸清造成白血病的原因。嚴(yán)重的危害人類的生命和健康。因此惡性腫瘤的防治成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)亟待解決的重大課題。許多科學(xué)家和醫(yī)學(xué)工作者進(jìn)行了大量研究，得到很多能夠殺死和抑制腫瘤細(xì)胞的藥物，但同時(shí)這些藥物也對正常細(xì)胞產(chǎn)生一定程度的危害性。
70年代初，人們開始研究是否可以通過誘導(dǎo)分化，使腫瘤細(xì)胞向正常細(xì)胞分化，從而可以治療惡性腫瘤。腫瘤細(xì)胞的誘導(dǎo)分化療法優(yōu)于傳統(tǒng)的化療和放療，該療法不是殺傷腫瘤細(xì)胞，而是在分化誘導(dǎo)劑的作用下，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞向成熟階段分化，恢復(fù)細(xì)胞的正常或接近正常的表型和功能。當(dāng)前，尋找腫瘤細(xì)胞分化誘導(dǎo)劑已成為新的研究領(lǐng)域。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)十余種化合物可以作為腫瘤細(xì)胞分化誘導(dǎo)劑。其中研究最多的是維甲酸類化合物(RA)與雜極性化合物，如二甲亞砜(DMSO)、六亞甲基雙乙酰胺(HMBA)、丁酸等。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)二甲亞砜誘導(dǎo)率為80％，被公認(rèn)最好的誘導(dǎo)劑。1986年我國首先應(yīng)用全反式維甲酸(ATRA，為分別起見下文均簡稱為ATRA)誘導(dǎo)分化治療急性早幼粒細(xì)胞白血病，取得良好效果。上海第二醫(yī)科大學(xué)瑞金醫(yī)院上海血液學(xué)研究所與哈爾濱醫(yī)科大學(xué)的研究發(fā)現(xiàn)可以使用As2O3治療急性早幼粒細(xì)胞白血病，其機(jī)制主要是促進(jìn)急性早幼粒細(xì)胞凋亡。雖然ATRA及As2O3在治療急性早幼粒細(xì)胞白血病上取得了成功，維甲酸、HMBA已進(jìn)入臨床階段，但是這些藥物都屬純化學(xué)藥劑，副作用很大，而且在適應(yīng)病情范圍、劑量依賴的毒性等方面存在著局限性，還不能廣泛應(yīng)用于臨床腫瘤治療。
雷蘑提取物作為有效成分在制備抑制肝癌癌細(xì)胞和白血病癌細(xì)胞的藥物中的用途，本申請人在另案中已申請。作為有效成分，雷蘑提取物在抑制肝癌癌細(xì)胞和白血病癌細(xì)胞中表現(xiàn)出令人滿意的效果。雷蘑是一種天然傘菌目白蘑科口蘑屬的口蘑，拉丁名為Leucopaxillus giganteus；其菌子實(shí)體夏秋季生長在草原上，子實(shí)體菌蓋約5-30cm，常見于秋季的內(nèi)蒙古錫林郭勒草原。目前天然雷蘑資源已瀕臨滅絕(已經(jīng)有連續(xù)幾年沒能采集到雷蘑)，不能滿足需要。因此，作為工業(yè)化生產(chǎn)以雷蘑提取物為有效成分的抑制肝癌癌細(xì)胞和白血病癌細(xì)胞的藥物幾乎是不可能的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種雷蘑菌絲體；本發(fā)明的目的在于一種工業(yè)化批量生產(chǎn)培養(yǎng)雷蘑菌絲體的方法，以解決作為在制備抑制肝癌癌細(xì)胞和白血病癌細(xì)胞的藥物的天然雷蘑原料的缺乏；本發(fā)明的另一目的在于本發(fā)明所培養(yǎng)的雷蘑菌絲體在制備抑制肝癌癌細(xì)胞和白血病癌細(xì)胞的藥物中的用途。
本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明提供的雷蘑菌絲體，該雷蘑菌絲體由下述方法制備1)無菌條件下，將野生雷蘑子實(shí)體的組織塊接種于常規(guī)的土豆瓊脂斜面培養(yǎng)基，并放在28～30℃恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行原代培養(yǎng)10～20天，培養(yǎng)基表面生長出原代菌絲體；再將該原代菌絲體接入另一與上述組分相同的土豆瓊脂斜面培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)1～4代，得到馴化后的菌絲體，其菌種保藏于中國微生物菌種管理委員會(huì)普通微生物中心，其保藏登記入冊編號為CGMCC No.0921；2)將步驟1)中得到的菌絲體接入經(jīng)滅菌的液體培養(yǎng)基中，在28～30℃振蕩培養(yǎng)3～5天，然后接入發(fā)酵罐，接種量為10v％，在28～30℃恒溫下，培養(yǎng)3～5天，并經(jīng)過濾、干燥，得到雷蘑菌絲體。
步驟1)中所述土豆瓊脂培養(yǎng)基的組成組分及重量份配比為蔗糖20g、土豆200g、KH2PO43g、MgSO40.5g、維生素B12mg、瓊脂10g、水1000ml，其pH為6.0-6.2。
步驟2)中所述液體培養(yǎng)基的組分及重量份配比為蔗糖20g、黃豆粉10g、玉米粉10g、KH2PO43g、MgSO40.5g、維生素B12mg、酵母粉1g、CaCO31g、水1000ml。
所述步驟2)中的滅菌是將培養(yǎng)基置于1.5kg/cm2高壓的條件下高壓滅菌30分鐘。
本發(fā)明提供的雷蘑菌絲體的培養(yǎng)方法，包括如下步驟1、無菌條件下，將野生雷蘑子實(shí)體的組織塊接種于常規(guī)的土豆瓊脂斜面培養(yǎng)基，并放在28～30℃恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行原代培養(yǎng)10～20天，培養(yǎng)基表面生長出原代菌絲體；再將該原代菌絲體接入另一與上述組分相同的土豆瓊脂斜面培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)1～4代，得到馴化后的菌絲體，其菌種保藏于中國微生物菌種管理委員會(huì)普通微生物中心，其保藏登記入冊編號為CGMCC No.0921；2、步驟1中得到的菌絲體接入經(jīng)滅菌的液體培養(yǎng)基中，在28～30℃振蕩培養(yǎng)3～5天，然后接入發(fā)酵罐，接種量為10v％，在28～30℃恒溫下，培養(yǎng)3～5天，并經(jīng)過濾、干燥，得到雷蘑菌絲體；步驟1中所述土豆瓊脂培養(yǎng)基的組成組分及重量份配比為蔗糖20g、土豆200g、KH2PO43g、MgSO40.5g、維生素B12mg、瓊脂10g、水1000ml，其pH為6.0-6.2。
步驟2中所述液體培養(yǎng)基的組分及重量份配比為蔗糖20g、黃豆粉10g、玉米粉10g、KH2PO43g、MgSO40.5g、維生素B12mg、酵母粉1g、CaCO31g、水1000ml。
所述步驟2中的滅菌是將培養(yǎng)基置于1.5kg/cm2高壓的條件下高壓滅菌30分鐘。
本發(fā)明的雷蘑菌絲體在制備抑制肝癌癌細(xì)胞藥物中的用途。
本發(fā)明的雷蘑菌絲體在制備抑制白血病癌細(xì)胞藥物中的用。
本發(fā)明提供的雷蘑菌絲體的培養(yǎng)方法的優(yōu)點(diǎn)在于1、以本發(fā)明提供的方法培養(yǎng)的雷蘑菌絲體與野生雷蘑具有相同的作用，其含有誘導(dǎo)分化因子，在一定的濃度下能誘導(dǎo)癌細(xì)胞向正常細(xì)胞分化；2、對于野生資源不能滿足需要(已瀕臨滅絕的雷蘑)，而提供了一種工業(yè)化生產(chǎn)的途徑，可以不受資源不足的限制使以雷蘑為有效成分的抗癌藥物生產(chǎn)成為可能，且該人工培養(yǎng)雷蘑菌絲體的方法成本低廉，使之具有市場前景；3、經(jīng)中國醫(yī)科院基礎(chǔ)所和北京醫(yī)科大學(xué)生物醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)室多次體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，該菌絲體不但能夠殺死白血病細(xì)胞而且對人體正常細(xì)胞無任何殺傷作用，無毒副作用；4、與目前國內(nèi)外常見同類藥物比較，其誘導(dǎo)分化率均高于其他誘導(dǎo)分化劑，例如我們在同等條件下做誘導(dǎo)分化試驗(yàn)比較，二甲亞砜DMSO誘導(dǎo)分化極微量，目前已上臨床試驗(yàn)的維甲酸僅為30％左右，而本發(fā)明方法生產(chǎn)的菌絲體誘導(dǎo)分化率達(dá)到40％以上；5、用本發(fā)明方法生產(chǎn)的菌絲體制成的制劑用量小，我們曾用培養(yǎng)物原液做體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，僅僅1％左右濃度200微升，就能100％殺死1000-5000個(gè)癌細(xì)胞，0.1％左右的濃度的培養(yǎng)液就能誘導(dǎo)癌細(xì)胞調(diào)亡，誘導(dǎo)分化率約40％以上。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1、培養(yǎng)雷蘑菌絲體將以蔗糖20g、土豆200g、KH2PO43g、MgSO40.5g、維生素B12mg、瓊脂10g、水1000ml為配方制成的pH為6.0的培養(yǎng)基裝入試管中，制成土豆瓊脂斜面固體培養(yǎng)基；取野生雷蘑子實(shí)體，在無菌條件下，去凈表面雜物，并用70％酒精消毒，用無菌解剖刀將蘑菇剖成兩半，割取子實(shí)體中間部分約黃豆大小的組織塊，置入試管培養(yǎng)基中；將試管放在28℃培養(yǎng)箱中，恒溫培養(yǎng)10天，在培養(yǎng)基表面生長出濃密的雷蘑原代菌絲體；再將該雷蘑原代菌絲體接入另一與上述培養(yǎng)基同組分的培養(yǎng)基上進(jìn)行傳代培養(yǎng)4代，得到馴化的雷蘑菌絲體；將上述轉(zhuǎn)接4代得到的雷蘑菌絲體接入經(jīng)滅菌(1.5kg/cm2高壓的條件下滅菌30分鐘)的液體培養(yǎng)基中，并在搖床上28℃恒溫培養(yǎng)4天，搖床轉(zhuǎn)速為120轉(zhuǎn)/分，然后接種入發(fā)酵罐培養(yǎng)，其接種量為10v％，在28～30℃下，恒溫培養(yǎng)3～5天，之后經(jīng)過濾，得到雷蘑菌絲體；所用的液體培養(yǎng)基組成組分及重量份配比為蔗糖20g、黃豆粉10g、玉米粉10g、KH2PO43g、MgSO40.5g、維生素B12mg、酵母粉1g、CaCO31g、水1000ml的液體。
實(shí)施例2、制備雷蘑菌絲體水溶液提取物將實(shí)施例1得到的雷蘑菌絲體10g，攪碎，加入100ml 0.7％濃度的NaCl水溶液，攪拌10～20分鐘，離心，除去沉淀物，得到雷蘑菌絲體提取物水溶液。
實(shí)施例3、急性毒性檢測實(shí)驗(yàn)將實(shí)施例1制備的雷蘑菌絲體對小鼠進(jìn)行喂養(yǎng)，或是使用實(shí)施例2的雷蘑菌絲體提取物水溶液，用0.7％NaCl或水稀釋至10wt％，給小鼠進(jìn)行灌胃。所用的小鼠為購自北京動(dòng)物飼養(yǎng)中心的昆明鼠，體重為20克。
將30只小鼠分為三組第一組10只為對照組，用北京動(dòng)物飼養(yǎng)中心配制的普通鼠食喂養(yǎng)；第二組10只，用含有雷蘑菌絲體的鼠食，按5g/d.Kg喂養(yǎng)；第三組10只，用雷蘑菌絲體提取物水溶液按5g/d.Kg灌胃。
喂養(yǎng)、灌胃30天，稱重，第一組小鼠平均體重為31.2g，第二組小鼠平均體重為32.8g，第三組小鼠平均體重為32.9g。
飼喂菌絲體的小鼠和用雷蘑菌絲體提取物水溶液灌胃的小鼠平均體重略高于對照組；且無任何不良反應(yīng)，由此結(jié)果可知，本發(fā)明制備的雷蘑菌絲體及雷蘑菌絲體提取物水溶液沒有毒性。
實(shí)施例4、抑制肝癌細(xì)胞用中國科學(xué)院動(dòng)物所提供的S180腹水癌細(xì)胞對小鼠進(jìn)行接種實(shí)驗(yàn)。所用的小鼠為購自北京動(dòng)物飼養(yǎng)中心的昆明公鼠，體重為20克。將30只小鼠分為六組，每組5只，第1～第3組喂養(yǎng)30天，第4～6組喂養(yǎng)60天。
用北京動(dòng)物飼養(yǎng)中心配制的普通鼠食，或是同時(shí)使用實(shí)施例2的雷蘑菌絲體提取物水溶液，用0.7％NaCl或水稀釋至10wt％，給小鼠進(jìn)行灌胃。
第1組接種癌細(xì)胞，使用普通鼠食進(jìn)行喂養(yǎng)，30天后死亡4只；第2組接種癌細(xì)胞，并在接種癌細(xì)胞同時(shí)每只用0.2毫升/天的雷蘑菌絲體水溶液灌胃，30天后全部存活，無腹水出現(xiàn)；第3組接種癌細(xì)胞，先用普通鼠食喂養(yǎng)被接種的小鼠，一周后小鼠產(chǎn)生腹水，腹部與對照相比明顯漲大，用手觸摸腹部有腹水感覺；此時(shí)開始每只用0.2毫升/天的雷蘑菌絲體提取液灌胃，30天后全部存活，腹部變??；第4組接種癌細(xì)胞，使用普通鼠食進(jìn)行喂養(yǎng)，60天后全部死亡；第5組接種癌細(xì)胞，并在接種癌細(xì)胞同時(shí)每只用0.2毫升/天的雷蘑菌絲體提取液灌胃，60天后全部存活，無腹水出現(xiàn)；第6組接種癌細(xì)胞，先用普通鼠食喂養(yǎng)被接種的小鼠，一周后小鼠產(chǎn)生腹水，腹部與對照相比明顯漲大，用手觸摸腹部有腹水感覺；此時(shí)開始每只用0.2毫升/天的雷蘑菌絲體提取液灌胃，60天后全部存活，腹部變小。
將喂藥組解剖肝部觀察，無異常，且癌細(xì)胞抑制率達(dá)95％，說明本發(fā)明制備的雷蘑菌絲體對正常細(xì)胞無副作用。
將實(shí)施例3中第2、3、5和6組存活的20只小鼠分為兩組，與正常小鼠一起進(jìn)行體能實(shí)驗(yàn)和耐缺氧實(shí)驗(yàn)。體能實(shí)驗(yàn)將小鼠的尾部用鐵絲捆綁5克重物，使負(fù)重的小鼠剛好可以下沉，又能不斷上浮呼吸。耐缺氧實(shí)驗(yàn)把做好記號的小鼠置入密閉容器中，然后逐漸抽取空氣，使容器內(nèi)只剩少量空氣。體能實(shí)驗(yàn)和耐缺氧實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，存活的20只小鼠在體能和耐缺氧方面與正常小鼠并無差異，說明使用雷蘑菌絲提取物可以治愈癌癥，使小鼠恢復(fù)正常。
將接種了癌細(xì)胞的小鼠使用菌絲體按5g/d.Kg喂養(yǎng)，進(jìn)行同樣的實(shí)驗(yàn)，結(jié)果與使用菌絲體提取液的效果相似。
實(shí)施例5、培養(yǎng)雷蘑菌絲體將以蔗糖20g、土豆200g、KH2PO43g、MgSO40.5g、維生素B12mg、瓊脂10g、水1000ml為配方制成的pH為6.2或6.1的培養(yǎng)基裝入試管中，制成土豆瓊脂斜面固體培養(yǎng)基；取新鮮雷蘑子實(shí)體，在無菌條件下，去凈表面雜物，并用70％酒精消毒，用無菌解剖刀將蘑菇剖成兩半，割取子實(shí)體中間部分約黃豆大小的組織塊，置入試管培養(yǎng)基中；將試管放在30℃或29℃的培養(yǎng)箱中，恒溫培養(yǎng)20天或10天，在培養(yǎng)基表面生長出濃密的雷蘑原代菌絲體；再將該雷蘑原代菌絲體接入另一組分相同的培養(yǎng)基上進(jìn)行傳代培養(yǎng)3代(當(dāng)然也可為1代或2代)，得到馴化的雷蘑菌絲體種；將上述轉(zhuǎn)接3代得到的雷蘑菌絲體接入經(jīng)滅菌(1.5kg/cm2高壓的條件下高壓滅菌30分鐘)的液體培養(yǎng)基中，并在搖床上30℃或29℃恒溫培養(yǎng)5天(也可培養(yǎng)3天)，其轉(zhuǎn)速為120轉(zhuǎn)/分，然后接入發(fā)酵罐經(jīng)培養(yǎng)，其接種量為10v％，在30℃或29℃下，恒溫培養(yǎng)5天或4天，并經(jīng)過濾，得到雷蘑菌絲體(含有一定量的子實(shí)體)；所用的液體培養(yǎng)基的組成組分及重量份配比為蔗糖20g、黃豆粉10g、玉米粉10g、KH2PO43g、MgSO40.5g、維生素B12mg、酵母粉1g、CaCO31g、水1000ml的液體。
實(shí)施例6、制備雷蘑菌絲提取物體水溶液將實(shí)施例5得到的雷蘑菌絲體10g，攪碎，加入100ml 0.7％NaCl水溶液，攪拌10～20分鐘，離心，除去沉淀物，得到雷蘑菌絲粗提取物體水溶液。
實(shí)施例7、抑制白血病癌細(xì)胞人紅白血病細(xì)胞株(K562)是人造血系統(tǒng)的惡性腫瘤細(xì)胞，K562白血病細(xì)胞系源自美國ATCC。本實(shí)驗(yàn)使用的K562為協(xié)和醫(yī)科大學(xué)細(xì)胞生物室儲存，并用含10％小牛血清的1640培養(yǎng)基按常規(guī)培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)。
將實(shí)施例6制得的雷蘑菌絲提取物水溶液，用鹽水稀釋成1％、0.5％、0.1％的溶液，對人紅白血病K562細(xì)胞進(jìn)行抑制生長驗(yàn)證。將3×104/ml K562細(xì)胞分別接種到96孔板，按8孔一組，分為12組，分別加入1％、0.5％、0.1％的菌絲體水溶液，培養(yǎng)1、3、5天后，分別記數(shù)細(xì)胞，并繪制生長曲線。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，200微升的1％，0.5％的提取物，均能100％殺死1000～5000個(gè)癌細(xì)胞，0.1％的提取物的培養(yǎng)液能誘導(dǎo)分化癌細(xì)胞，誘導(dǎo)率約40％以上。
實(shí)施例8使用實(shí)施例6培養(yǎng)雷蘑菌絲體時(shí)的液體培養(yǎng)液做體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，即將該培養(yǎng)液稀釋100倍，500倍，按實(shí)施例7中所述的方法做抑制白血病細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，該培養(yǎng)液同樣能明顯抑制腫瘤細(xì)胞的生長，抑制率為100％。
權(quán)利要求
1.一種雷蘑菌絲體，其特征在于，該雷蘑菌絲體由下述方法制備1)無菌條件下，將野生雷蘑子實(shí)體的組織塊接種于常規(guī)的土豆瓊脂斜面培養(yǎng)基，并放在28～30℃恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行原代培養(yǎng)10～20天，培養(yǎng)基表面生長出原代菌絲體；再將該原代菌絲體接入另一與上述組分相同的土豆瓊脂斜面培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)1～4代，得到馴化后的菌絲體，其菌種保藏于中國微生物菌種管理委員會(huì)普通微生物中心，其保藏登記入冊編號為CGMCC No.0921；2)將步驟1)中得到的菌絲體種接入經(jīng)滅菌的液體培養(yǎng)基中，在28～30℃振蕩培養(yǎng)3～5天，然后接入發(fā)酵罐，接種量為10v％，在28～30℃恒溫下，培養(yǎng)3～5天，并經(jīng)過濾、干燥，得到雷蘑菌絲體。
2.按權(quán)利要求1所述的雷蘑菌絲體，其特征在于，步驟1)中所述土豆瓊脂培養(yǎng)基的組成組分及重量份配比為蔗糖20g、土豆200g、KH2PO43g、MgSO40.5g、維生素B12mg、瓊脂10g、水1000ml，其pH為6.0-6.2。
3.按權(quán)利要求1所述的雷蘑菌絲體，其特征在于步驟2)中所述液體培養(yǎng)基的組分組分及重量份配比為蔗糖20g、黃豆粉10g、玉米粉10g、KH2PO43g、MgSO40.5g、維生素B12mg、酵母粉1g、CaCO31g、水1000ml。
4.按權(quán)利要求1所述的雷蘑菌絲體，其特征在于所述步驟2)中的滅菌是將培養(yǎng)基置于1.5kg/cm2高壓的條件下高壓滅菌30分鐘。
5.一種雷蘑菌絲體的培養(yǎng)方法，包括如下步驟1)無菌條件下，將野生雷蘑子實(shí)體的組織塊接種于常規(guī)的土豆瓊脂斜面培養(yǎng)基，并放在28～30℃恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行原代培養(yǎng)10～20天，培養(yǎng)基表面生長出原代菌絲體；再將該原代菌絲體接入另一與上述組分相同的土豆瓊脂斜面培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)1～4代，得到馴化后的菌絲體，其菌種保藏于中國微生物菌種管理委員會(huì)普通微生物中心，其保藏登記入冊編號為CGMCC No.0921；2)將步驟1)中得到的菌絲體接入經(jīng)滅菌的液體培養(yǎng)基中，在28～30℃振蕩培養(yǎng)3～5天，然后接入發(fā)酵罐，接種量為10v％，在28～30℃恒溫下，培養(yǎng)3～5天，并經(jīng)過濾、干燥，得到雷蘑菌絲體。
6.按權(quán)利要求5所述的雷蘑菌絲體的培養(yǎng)方法，其特征在于步驟1)中所述土豆瓊脂培養(yǎng)基的組成組分及重量份配比為蔗糖20g、土豆200g、KH2PO43g、MgSO40.5g、維生素B12mg、瓊脂10g、水1000ml，其pH為6.0-6.2。
7.按權(quán)利要求5所述的雷蘑菌絲體的培養(yǎng)方法，其特征在于步驟2)中所述液體培養(yǎng)基的組分組分及重量份配比為蔗糖20g、黃豆粉10g、玉米粉10g、KH2PO43g、MgSO40.5g、維生素B12mg、酵母粉1g、CaCO31g、水1000ml。
8.按權(quán)利要求5所述的雷蘑菌絲體的培養(yǎng)方法，其特征在于所述步驟2)中的滅菌是將培養(yǎng)基置于1.5kg/cm2高壓的條件下高壓滅菌30分鐘。
9.一種雷蘑菌絲體在制備抑制肝癌癌細(xì)胞藥物中的用途。
10.一種雷蘑菌絲體在制備抑制白血病癌細(xì)胞藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種雷蘑菌絲體及其培養(yǎng)方法和該雷蘑菌絲體在制備抑制肝癌癌細(xì)胞或抑制白血病癌細(xì)胞藥物中的用途；所述雷蘑菌絲體由下述方法制備將野生雷蘑子實(shí)體組織塊接入常規(guī)的土豆瓊脂斜面培養(yǎng)基中進(jìn)行原代培養(yǎng)，轉(zhuǎn)接繼代培養(yǎng)1～4代，得到馴化后的菌絲體一菌種；將菌絲體接入液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，然后接入發(fā)酵罐中培養(yǎng)，得到雷蘑菌絲體；所培養(yǎng)的雷蘑菌絲體具有與野生雷蘑相同的抑制癌細(xì)胞功能，可作為有效成分在制備抑制肝癌癌細(xì)胞或白血病癌細(xì)胞的藥物中進(jìn)行應(yīng)用；該方法對于野生資源不能滿足需要已瀕臨滅絕的雷蘑，提供了一種工業(yè)化生產(chǎn)的途徑，且成本低廉，使之更具有市場應(yīng)用前景。
文檔編號A01G1/04GK1565159SQ0314856
公開日2005年1月19日 申請日期2003年7月4日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月4日
發(fā)明者關(guān)秀清, 姜薇 申請人:中國科學(xué)院植物研究所