專利名稱：葛仙米、地木耳培養(yǎng)中污染的控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微藻生物技術(shù)領(lǐng)域，更具體涉及葛仙米、地木耳培養(yǎng)中污染的控制方法。
背景技術(shù)：
念珠藻是藍(lán)藻門Cyanophyta藍(lán)藻綱Cyanophyceae段殖藻目Hormogonales念珠藻科Nostocaceae的一類分布地域廣、生態(tài)環(huán)境復(fù)雜、形態(tài)結(jié)構(gòu)多樣的藻類類群，其植物體膠狀或革狀，成熟植物體有球形、葉狀、絲狀、泡狀等多種形狀，中空或?qū)嵭?，營(yíng)漂浮或著生生長(zhǎng)。其原植體由許多直徑數(shù)微米的纖細(xì)藻絲集結(jié)成肉眼可見的群體，群體形狀因“種”而異，如發(fā)菜(Nostoc flageliforme Kütz.)、地木耳(Nostoc commune)、葛仙米(Nostoc sphaeroides)在新鮮狀態(tài)下分別呈頭發(fā)狀、扁平耳狀或小球(珠)狀，干燥后程度不等地有所縮變，均具有豐富的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，在《本草綱目》、《本草綱目拾遺》、《陜西中草藥》、《梧州府志》、《全國(guó)中草藥匯編》等書籍中已有記載。念珠藻不僅在自然界普遍發(fā)生，而且自古以來都是我國(guó)民間的傳統(tǒng)食物；其中葛仙米，學(xué)名擬球狀念珠藻，具有食療、保健、滋補(bǔ)等功效；同時(shí)又具有藥性，常食用能清熱解毒，涼血明目，促進(jìn)新陳代謝；葛仙米的天然生產(chǎn)狀況已經(jīng)衰落，需求和生產(chǎn)產(chǎn)量的矛盾不可回避。隨著人類活動(dòng)加劇，近年來，葛仙米的生長(zhǎng)地逐漸縮小，產(chǎn)量也不斷減少.其天然年產(chǎn)量不足一噸，而且日趨減少，遠(yuǎn)遠(yuǎn)滿足不了需求，隨著近年來的旅游資源開發(fā)，過度的采集又帶來了生態(tài)、環(huán)境破壞和自然資源萎縮。然而葛仙米產(chǎn)品在東南亞國(guó)際市場(chǎng)很受歡迎，在國(guó)內(nèi)市場(chǎng)難尋其“仙蹤”。地木耳，俗稱地皮菜、地耳、地衣、地軟，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，是典型的高蛋白、低脂肪、低熱值的綠色保健食品；野生地木耳的生長(zhǎng)受到自然界干旱少雨的限制，處于自生自滅狀態(tài)，同時(shí)地木耳對(duì)大氣污染十分敏感，生活環(huán)境具有一定的選擇性，隨著環(huán)境污染范圍的擴(kuò)大，其生長(zhǎng)區(qū)域逐年減少，過去很多生長(zhǎng)地木耳的地方都難見其蹤跡。近年來，在世界范圍內(nèi)的野生食物開發(fā)利用熱潮中，地木耳也已進(jìn)入人們的的菜譜；但由于野生地木耳的資源十分有限，極大地限制了人們對(duì)地木耳的食物需求。為了滿足人們物質(zhì)生活水平提高的需要，開展葛仙米、地木耳的人工養(yǎng)殖研究勢(shì)在必行。
葛仙米、地木耳培養(yǎng)過程中會(huì)受到各種污染生物的威脅，主要有雜藻、浮游動(dòng)物、及蚊子的幼蟲，污染生物使產(chǎn)量減少，蚊子的幼蟲以念珠藻為食，在收獲時(shí)很難除去，影響成品的質(zhì)量；嚴(yán)重時(shí)，使培養(yǎng)無法進(jìn)行。中國(guó)專利文獻(xiàn)一種培養(yǎng)葛仙米的方法，分類號(hào)C12N 1/12，申請(qǐng)日1999.10.22，
公開日2001.05.09，申請(qǐng)?zhí)?9120005.5，申請(qǐng)人中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所，該專利中僅僅提到在葛仙米培養(yǎng)中微生物污染嚴(yán)重時(shí)需徹底更換培養(yǎng)液，并對(duì)反應(yīng)器進(jìn)行滅菌處理，未提出具體的操作方法。中國(guó)專利文獻(xiàn)一種培養(yǎng)地木耳的方法，分類號(hào)C12N 1/12，申請(qǐng)?zhí)?3119091.X，申請(qǐng)人中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所，該專利僅僅涉及在地木耳培養(yǎng)中污染嚴(yán)重時(shí)需徹底更換培養(yǎng)液，對(duì)反應(yīng)器或培養(yǎng)池滅菌，也未提出地木耳污染控制的具體方法。經(jīng)檢索未見到一種葛仙米、地木耳培養(yǎng)中污染的預(yù)防、控制方法被公開或使用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是在于提供一種葛仙米、地木耳培養(yǎng)中污染的控制方法，該方法簡(jiǎn)單易行，除去污染生物的效率高，可以將培養(yǎng)池中污染的生物量控制在葛仙米、地木耳總生物量的1％以內(nèi)，在收獲時(shí)采用清洗的方法，進(jìn)一步減少了雜藻、浮游動(dòng)物的量。
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案進(jìn)行葛仙米、地木耳的人工養(yǎng)殖，污染控制方法的步驟是1、在用葛仙米和地木耳群體制備藻絲或者藻殖段時(shí)整個(gè)過程均采用無菌處理；藻絲或藻殖段的培養(yǎng)也在無菌條件下進(jìn)行，一般每8-20天更換一次培養(yǎng)液，換培養(yǎng)液時(shí)在超凈工作臺(tái)中進(jìn)行，直至葛仙米、地木耳的球形群體直徑增大到0.04-0.1毫米。2、當(dāng)葛仙米、地木耳直徑至0.04-0.1毫米時(shí)，培養(yǎng)過程可不需要嚴(yán)格的無菌處理，但在不同培養(yǎng)容器中轉(zhuǎn)接或擴(kuò)大培養(yǎng)規(guī)模時(shí)，要用水清洗培養(yǎng)容器、培養(yǎng)池內(nèi)壁，用水洗后，最好用60-95％的乙醇溶液在容器內(nèi)壁擦洗一遍，或者用0.001％-5％的高錳酸鉀擦洗一遍或者浸泡2-6小時(shí)。3、對(duì)生產(chǎn)用的種藻進(jìn)行清洗或篩洗在開放式培養(yǎng)中，培養(yǎng)液會(huì)被雜藻、浮游動(dòng)物等污染，在更換培養(yǎng)液時(shí)，藻體表面會(huì)附著這些污染物，當(dāng)藻體直徑在0.2毫米以上時(shí)，可以利用葛仙米、地木耳在水中的沉降速度較快，雜藻沉降速度慢，浮游動(dòng)物也集中在上清液中，倒掉上清中的污染；反復(fù)傾倒沉降可除去大部分的污染生物；當(dāng)藻體直徑在1毫米以上時(shí)，可以用孔徑為0.7-1毫米的不銹鋼篩對(duì)藻體進(jìn)行篩洗。4、為了避免配制培養(yǎng)液的水中可能帶來的各種浮游生物及其卵的污染，用8-16層紗布將水過濾后再使用。5、室外培養(yǎng)中蚊子的幼蟲很容易在培養(yǎng)池中繁殖，并在池底以藻為巢，可通入0.5％-20％的二氧化碳30分鐘-4小時(shí)，液體缺氧而殺死蚊子幼蟲；或在培養(yǎng)池底筑一小坑，等蚊子幼蟲聚積在小坑后將其除去。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)和效果解決了葛仙米、地木耳人工培養(yǎng)過程污染的控制，可以有效的預(yù)防、控制培養(yǎng)池中的污染的量，使培養(yǎng)能順利進(jìn)行，保證培養(yǎng)藻體的質(zhì)量。設(shè)備簡(jiǎn)單，安全性高，操作方便，對(duì)藻的生長(zhǎng)無不良影響，成本低，能有效的將培養(yǎng)過程中培養(yǎng)液的污染生物量控制在1％以內(nèi)，葛仙米、地木耳成品的污染生物量控制在0.05％，適合工廠規(guī)?；a(chǎn)中污染的控制。
具體實(shí)施例方式
人工養(yǎng)殖的葛仙米、地木耳主要為球形，少為啞鈴形、橢圓形；由藻絲或藻殖段長(zhǎng)成直徑為5-7毫米的成品，需要2-3個(gè)月時(shí)間；將葛仙米、地木耳由藻絲或藻殖段培養(yǎng)為5-7毫米的成品期間，每8-20天更換一次培養(yǎng)液。在葛仙米、地木耳培養(yǎng)中污染的預(yù)防控制方法的步驟如下1、在制種階段采用純培養(yǎng)制備藻絲或藻殖段時(shí)所用的錐形瓶、玻璃勻漿器、涂棒、移液管、培養(yǎng)液、水、培養(yǎng)容器均需在高壓蒸汽滅菌15分鐘，藻絲的制備在無菌條件下操作進(jìn)行，需要通氣培養(yǎng)時(shí)通入無菌氣體；葛仙米、地木耳的藻絲或藻殖段需要15-30天才能長(zhǎng)成0.05毫米以上的微球體，期間更換培養(yǎng)基時(shí)在超凈工作臺(tái)中進(jìn)行，培養(yǎng)時(shí)通入無菌的空氣。
在本發(fā)明中所涉及到的培養(yǎng)液均為下面的培養(yǎng)液，培養(yǎng)液為磷酸氫二鉀20-60mg/L、硫酸鎂40-80mg/L、氯化鈣20-40mg/L、檸檬酸4-8mg/L、檸檬酸鐵銨5-9mg/L、乙二胺四乙酸二鈉鹽1-2mg/L、碳酸鈉5-30mg/L、微量元素0.5-3ml/L、余者為水；其中微量元素為每1000毫升含硼酸1.5-3g、氯化錳1-2g、硫酸鋅0.1-0.25g、鎳酸鈉0.2-0.4g、硫酸銅0.02-0.1g、硝酸鈷0.03-0.05g、余者為水；2、接種前對(duì)培養(yǎng)池、培養(yǎng)容器進(jìn)行清洗當(dāng)葛仙米、地木耳球體直徑長(zhǎng)到0.04-0.1毫米時(shí)，可以在室內(nèi)或室外采用開放式培養(yǎng)，在室內(nèi)可用1-10升試劑瓶、玻璃缸等透明容器培養(yǎng)葛仙米、地木耳；室外可采用長(zhǎng)0.4-1.2米，寬0.1-0.8米，高0.2-0.5米的方框或表面積為6-1000平方米的跑道式培養(yǎng)池培養(yǎng)。在接種前，用優(yōu)質(zhì)地表水或自來水刷洗培養(yǎng)容器或培養(yǎng)池內(nèi)壁，重復(fù)1-3遍；最好先用優(yōu)質(zhì)地表水或自來水將培養(yǎng)容器或培養(yǎng)池內(nèi)壁刷洗一遍；再用60-95％的乙醇溶液或0.1-5％的高錳酸鉀溶液刷洗一遍，也可用0.001-0.1％的高錳酸鉀溶液浸泡2-6個(gè)小時(shí)；最后再用水清洗1-3遍。
3、對(duì)生產(chǎn)用的種藻進(jìn)行清洗或篩洗在開放式培養(yǎng)中，培養(yǎng)液會(huì)被雜藻、浮游動(dòng)物等污染，在更換培養(yǎng)液時(shí)，藻體表面會(huì)附著這些污染生物；當(dāng)藻體直徑在0.2毫米以上時(shí)，葛仙米、地木耳在接種前，可用水對(duì)藻體進(jìn)行清洗，葛仙米、地木耳球形群體在水中沉降速度較快，雜藻、浮游動(dòng)物沉降速度較慢，通過向葛仙米、地木耳容器注水，靜置30秒-4分鐘，倒掉上清液，重復(fù)2-4次，可以除去70-90％的污染生物。當(dāng)培養(yǎng)的藻體直徑大于1毫米時(shí)，也可用孔徑大小為0.7-1毫米篩子進(jìn)行篩洗，對(duì)于工廠大規(guī)模生產(chǎn)，可用一定孔徑的重力斜篩進(jìn)行清洗，該方法能除去80-95％的污染生物；在開放式培養(yǎng)中，培養(yǎng)液中含有雜藻和輪蟲、纖毛類等浮游動(dòng)物，用上述方式有較好的效果；對(duì)于收獲的成品球體也可以用上述方法進(jìn)行清洗。對(duì)于清洗葛仙米、地木耳的水可用4-12層紗布過濾后可反復(fù)使用。
4、配制培養(yǎng)液的水過濾可用自來水或二級(jí)以上(包括)地表水配制培養(yǎng)液，為了避免水中可能帶來的各種污染，用8-16層紗布進(jìn)行過濾后再使用。
5、殺死或清除浮游動(dòng)物室外開放培養(yǎng)易受到蚊子幼蟲污染，除去蚊子幼蟲，可在更換培養(yǎng)液時(shí)，將收獲的藻體盛于一長(zhǎng)0.5-4米，寬0.5-4米，深0.3-2米的方框內(nèi)，同時(shí)向方框內(nèi)注入1-5倍藻體重量的水或培養(yǎng)液，通入0.5-20％的二氧化碳30分鐘-4小時(shí)，可因水或培養(yǎng)液缺氧而殺死蚊子幼蟲，然后在將藻體接入培養(yǎng)池中繼續(xù)培養(yǎng)，也可直接向培養(yǎng)池中通入0.5-20％的二氧化碳而殺死蚊子幼蟲；或在培養(yǎng)池底筑一小坑，蚊子幼蟲喜歡聚集在培養(yǎng)池中水流較緩的地方，等蚊子幼蟲聚積在小坑后將其除去。
權(quán)利要求
1.一種葛仙米地木耳培養(yǎng)中污染的控制方法，它包括下列步驟A、在制種階段采用純培養(yǎng)制備藻絲所用錐形瓶、玻璃勻漿器、涂棒、移液管、培養(yǎng)液、水、培養(yǎng)容器在高壓蒸汽滅菌，藻絲的制備在無菌條件下操作進(jìn)行，葛仙米、地木耳的藻絲長(zhǎng)成微球體，更換培養(yǎng)基時(shí)在超凈工作臺(tái)中進(jìn)行，培養(yǎng)時(shí)通入無菌的氣體；B、接種前對(duì)培養(yǎng)池、培養(yǎng)容器進(jìn)行清洗，當(dāng)葛仙米、地木耳球體直徑長(zhǎng)到0.04-0.1毫米時(shí)，采用開放式培養(yǎng)，在接種前，用自來水刷洗培養(yǎng)容器或培養(yǎng)池內(nèi)壁，重復(fù)1-3遍；或用水將培養(yǎng)容器或培養(yǎng)池內(nèi)壁刷洗一遍，再用60-95％的乙醇溶液或0.1-5％的高錳酸鉀溶液刷洗一遍，也可用0.001-0.1％的高錳酸鉀溶液浸泡2-6個(gè)小時(shí)，最后用水清洗1-3遍；C、對(duì)生產(chǎn)用的種藻進(jìn)行清洗或篩洗，在開放式培養(yǎng)中，當(dāng)藻體直徑在0.2毫米時(shí)，葛仙米、地木耳在接種前，用水對(duì)藻體進(jìn)行清洗，向葛仙米、地木耳容器注水，靜置30秒-4分鐘，倒掉上清液，重復(fù)2-4次；當(dāng)培養(yǎng)的藻體直徑1毫米時(shí)，用孔徑大小為0.7-1毫米篩子進(jìn)行篩洗，清洗葛仙米、地木耳的水用4-12層紗布過濾；D、用8-16層紗布對(duì)配制培養(yǎng)液的水進(jìn)行過濾再使用；E、殺死或清除浮游動(dòng)物，更換培養(yǎng)基時(shí)，將收獲的藻體盛于框內(nèi)，向框內(nèi)注入1-5倍藻體重量的水或培養(yǎng)液，通入0.5-20％的二氧化碳30分鐘-4小時(shí)，因水或培養(yǎng)液缺氧而殺死蚊子幼蟲，然后在將藻體接入培養(yǎng)池中繼續(xù)培養(yǎng)，也可直接向培養(yǎng)池中通入0.5-20％的二氧化碳而殺死蚊子幼蟲；或在培養(yǎng)池底筑一小坑，蚊子幼蟲聚積在小坑后將其除去。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種葛仙米、地木耳培養(yǎng)中污染的控制方法，首先在制種階段采用純培養(yǎng)；其次是接種前對(duì)培養(yǎng)池、培養(yǎng)容器進(jìn)行清洗；第三是對(duì)生產(chǎn)用的種藻進(jìn)行清洗或篩選；第四是配制置培養(yǎng)液的水過濾，用紗布過濾；第五是殺死或清除浮游動(dòng)物。本發(fā)明方法簡(jiǎn)單易行，效率高，操作方便，成本低，能有效的將培養(yǎng)過程中培養(yǎng)液的污染物生物量控制在1％內(nèi)，適合工廠化生產(chǎn)中污染的控制。
文檔編號(hào)A01G33/00GK1544612SQ20031011145
公開日2004年11月10日 申請(qǐng)日期2003年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2003年11月25日
發(fā)明者鄧中洋, 胡征宇 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所