專利名稱：運用組織培養(yǎng)獲得龍須菜優(yōu)良種苗的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及海藻組織培養(yǎng)、海藻遺傳選育及養(yǎng)殖，具體來講是通過龍須菜野生種的篩選，對其不同組織部位進行篩選及培養(yǎng)；在適宜的光照、溫度及培養(yǎng)基的條件下，獲得具有優(yōu)良性狀的龍須菜；用于養(yǎng)殖生產，主要生產性狀是龍須菜的日生長率為10-13％，凝膠強度為800-1000g/cm2。
背景技術：
龍須菜含有瓊膠(瓊脂)，是制備瓊膠素(Agarose)的主要原料之一。目前已在食品、醫(yī)藥、化工、科研等領域中得到廣泛應用，全世界瓊膠的年產量有6000噸，其中江蘺屬產瓊膠的產量達到60％。隨著世界經濟等各方面的發(fā)展，世界各國對瓊膠的需求量會日益增大。
我國自50年代起，就開始進行江蘺(龍須菜)、石花菜栽培的研究，取得半人工養(yǎng)殖技術的成功，但江蘺、石花菜養(yǎng)殖規(guī)模仍停留在試驗階段，離規(guī)?；a還有相當的距離。另外，關鍵技術在于江籬優(yōu)良品種的選育及種苗來源依然沒有得到根本的解決，種苗生長速度較慢。另外有的單位采集野生種菜，進行人工養(yǎng)殖，但其生產性狀表現(xiàn)不穩(wěn)定。因此要從組織培養(yǎng)角度，進行龍須菜的組織培養(yǎng)及遺傳選育，培養(yǎng)出具有生產上可以應用的品種，即生長速度快，凝膠強度高的品種，以滿足我國江籬養(yǎng)殖及加工的需要。
國外智利、委內瑞拉、墨西哥等國進行了江籬的人工栽培試驗，但養(yǎng)殖技術等依然存在許多問題。菲律賓、南非等國主要靠采集野生江籬用于生產瓊膠，但這種靠開采野生資源的開發(fā)方式，必然會在將來導致了其海藻資源量的下降，破壞藻類的生物多樣性以及沿海的生態(tài)環(huán)境，導致江蘺自然資源難以恢復。因此，建立龍須菜優(yōu)良種苗繁育的核心技水，結合不同的養(yǎng)殖環(huán)境，開展龍須菜優(yōu)良品種的選育及人工栽培，是解決瓊膠原料短缺的有效途徑。
龍須菜優(yōu)良品種的選育及繁殖的研究課題，早在國家“八五”期間，我們在山東省科委立項“龍須菜全人工養(yǎng)成技術的中間試驗”的基礎上，結合組織培養(yǎng)技術，進一步開展遺傳選育技術。篩選出生長速率快，凝膠強度高的優(yōu)良苗。在此基礎上，與國內許多家養(yǎng)殖單位合作及協(xié)作，進行了龍須菜優(yōu)良品種生產推廣，所表現(xiàn)的生產性狀，達到了預期的目的，在養(yǎng)殖生產中取得良好的經濟效益及社會效益。
龍須菜優(yōu)良品種的選育及繁育，不僅為藻類人工養(yǎng)殖提供了新品種，也為生態(tài)養(yǎng)殖提供了良好的養(yǎng)殖對象。近年來，我國魚、蝦、貝人工養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展較快，局部海域環(huán)境惡化，導致病害發(fā)生，現(xiàn)在已經開展了龍須菜與魚、扇貝等混養(yǎng)，這可以改善沿海的養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境，緩解病害的發(fā)生。另外，鮑魚等需要一定活鮮植物餌料，如果以龍須菜喂養(yǎng)，可以緩解在夏季高溫期因海藻餌料短缺難以保證鮑魚餌料需求，這項工作在我國南方福建、海南等地區(qū)已經推廣，因此，開展龍須菜優(yōu)良品種的選育及規(guī)模養(yǎng)殖具有明顯的經濟及社會效益。

發(fā)明內容
本發(fā)明目的是提供一種運用組織培養(yǎng)獲得龍須菜優(yōu)良種苗的方法，通過選擇龍須菜藻體不同部位篩選，進行組織培養(yǎng)，在適宜的光、溫及營養(yǎng)鹽條件下，獲得龍須菜快速繁育的優(yōu)良種苗，進行夾苗及快繁，并用于生產性養(yǎng)殖。其生產性狀表現(xiàn)為日生長率達到10-13％，凝膠強度為800-1000g/cm2，在我國南、北方沿海適宜的海區(qū)條件下，在溫度范圍內15-25℃，均表現(xiàn)為連續(xù)快速生長，并實現(xiàn)多茬養(yǎng)殖。
本發(fā)明解決其技術問題所采用的技術方案是一種運用組織培養(yǎng)獲得龍須菜優(yōu)良種苗的方法，通過龍須菜野生種的篩選，對藻體不同組織部位進行取材及處理、組織培養(yǎng)，在光照、溫度及培養(yǎng)基的條件下，獲得具有優(yōu)良性狀的龍須菜；具體步驟如下1)通過對龍須菜藻體頂端、中部、分枝部及基部的剪切，先去除藻體表面的附著物及雜藻，進行滅菌處理；然后在瓊脂半固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，待生長出幼芽后，將生長出的幼苗轉移到液體ES富營養(yǎng)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，經過30-40天培養(yǎng)，獲得頂端及分枝部的龍須菜組織；其中，半固體培養(yǎng)基的制備過程為將瓊脂1-1.5％(w/v)制成平板培養(yǎng)基，加過濾消毒海水，該海水中含1-1.5ppm NO3-、0.1-0.3ppm PO43-，液體ES富營養(yǎng)培養(yǎng)基按以下配方混制而成
按重量份數計，蒸餾水，90-110份；NaNO3，300-400份；甘油磷酸鈉，45-55份；乙二胺四己乙酸鐵，2.0-2.8份，其中鐵與乙二胺四己乙酸的摩爾比為1∶1；PII金屬元素溶液20-30份；PII金屬元素溶液的制備是在100份蒸餾水中溶解350-360份Fe(NH4)2(SO4)2·6H2O和280-320份乙二胺四己乙酸二鈉，維生素B12，0.01-0.03份；維生素B1，0.2-0.7份；生物素，0.005-0.008份；三羥甲氨基甲烷鈉，500-550份；H3BO3，110-120份；FeCl3·6H2O，4.0-5.0份；MnSO4·4H2O，15.0-17.0份；ZnSO4·7H2O，1.5-2.5份；CoSO4·7H2O，0.40-0.50份；乙二胺四己乙酸二鈉，90-110份，調節(jié)pH到7.5-8.0，每100mL消毒海水中加ES加富營養(yǎng)液2-5mL的培養(yǎng)液，然后再用于組織培養(yǎng)；2)在光照培養(yǎng)箱內進行組織培養(yǎng)培養(yǎng)液采用液體ES富營養(yǎng)培養(yǎng)基，光照強度18-25 uE.m-2.s-1；溫度20-25℃；光周期L∶D＝12∶12，培養(yǎng)液每4-5天更換1次，培養(yǎng)時間為35-40天；3)夾苗及海上養(yǎng)殖生長出的小幼苗，在室內夾苗于維尼龍繩上，培養(yǎng)溫度20-25℃，使用過濾消毒海水，并在其中加入含1ppm NO3-、0.1ppm PO43-的氮磷營養(yǎng)鹽，經過40-50天的培養(yǎng)，再將藻體取下，轉移到養(yǎng)殖用的苗上，轉移到海上養(yǎng)殖。
所述步驟3)之后進行龍須菜生長速率的測定，將放養(yǎng)的龍須菜分別夾苗在苗繩上，經過30-40天的海上養(yǎng)殖，測定龍須菜重量；再經過分苗及海上養(yǎng)殖，經過30-40天的養(yǎng)殖，測定龍須菜重量，從而獲得龍須菜的生長速率。
所述步驟3)之后進行瓊膠的提取及凝膠強度的測定。
所述凝膠強度的測定，用1.2-1.5％(w/v)瓊膠溶液制成凝膠，放置18-24小時后，測定瓊膠強度。采用該方法獲得的龍須菜，在溫度范圍為15-25℃范圍內，其主要生產性狀是龍須菜的日生長率為10-13％，瓊膠的凝膠強度為800-1000g/cm2。
本發(fā)明的有益效果是1、本發(fā)明通過龍須菜野生種的篩選，對藻體不同組織部位進行取材及處理，組織培養(yǎng)，在適宜的光照、溫度及培養(yǎng)基的條件下，獲得具有優(yōu)良性狀的龍須菜，可用于養(yǎng)殖生產，采用本發(fā)明獲得龍須菜優(yōu)良種苗，在中國南方及北方的適宜養(yǎng)殖海區(qū)，在溫度范圍為15-25℃范圍內，所表現(xiàn)的生產性狀為日生長率為10-13％，瓊膠的凝膠強度為800-1000g/cm2。
2、本發(fā)明通過龍須菜藻體不同部位(藻體頂端、中部、分枝部及基部等)的剪切，經過篩選及處理，在適宜的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，獲得頂端及分枝部的龍須菜組織，可以快速繁殖，并能用于龍須菜種苗的規(guī)模培養(yǎng)。


圖1是經組織培養(yǎng)選育室內培養(yǎng)35天后龍須菜生長狀況圖片。
圖2是經過30天養(yǎng)殖后龍須菜選育品種的生長狀況圖片。
圖3是實施例1現(xiàn)場養(yǎng)殖狀況圖片。
圖4是實施例2現(xiàn)場養(yǎng)殖狀況圖片。
圖5是采集的野生龍須菜照片及經過35天養(yǎng)殖后的龍須菜的生長狀況。
圖6是本發(fā)明的工藝流程圖。
具體實施例方式
實施例1本發(fā)明運用組織培養(yǎng)獲得龍須菜優(yōu)良種苗的方法，通過龍須菜野生種的篩選，對藻體不同組織部位進行取材及處理、組織培養(yǎng)，在適宜的光照、溫度及培養(yǎng)基的條件下，獲得具有優(yōu)良性狀的龍須菜；其工藝流程如圖6所示，所涉及的步驟如下1)龍須菜藻體不同部位的篩選從青島海邊采集野生的龍須菜，經過3年以上的海上養(yǎng)殖馴化，再從中挑選新鮮的藻體，進行室內人工選育。先進行常規(guī)處理，用滅菌毛筆進行藻體的洗刷，去除藻體表面的附著物及雜藻，然后用70％酒精處理5-15秒，滅菌海水沖洗4-5遍。再剪取藻體頂端、中部、分枝部及基部，每段藻枝段長度2cm，在適宜的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，先在瓊脂半固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，待生長出幼苗后，將生長出幼苗轉移到液體ES(Enrichment solution)富營養(yǎng)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，每三角燒瓶(100ml)裝有液體ES富營養(yǎng)培養(yǎng)基50ml，經過30天培養(yǎng)，獲得頂端及分枝部的藻體組織，可用于龍須菜的快速繁殖及種苗培養(yǎng)。
龍須菜組織培養(yǎng)條件在光照培養(yǎng)箱內進行組織培養(yǎng)，培養(yǎng)條件光照強度20uE.m-2.s-1；溫度20℃；光周期12∶12(L∶D)，培養(yǎng)液每5天更換1次，培養(yǎng)時間為35天。
2)培養(yǎng)基組分半固體培養(yǎng)基是將瓊脂1％(w/v)制成平板培養(yǎng)基，凝固以后，再加過濾消毒海水(含1ppm NO3-，0.1ppm PO43-)。液體ES(Enrichmentsolution)富營養(yǎng)液配方蒸餾水，100mg；NaNO3，350mg；甘油磷酸鈉(Na2glycerophosphate)，50mg；乙二胺四己乙酸鐵(Fe-EDTA，F(xiàn)e與EDTA的摩爾比為1∶1)，2.5mg；PII金屬元素(metals)溶液25mg(其中PII金屬元素溶液是在100mg蒸餾水中溶解351mg Fe(NH4)2(SO4)2·6H2O和300mg Na2EDTA)，維生素B12，10μg；維生素B1(Thiamine)，0.5mg；生物素(維生素H)，5μg；三羥甲氨基甲烷鈉(Tris.Na)，500mg；H3BO3，114mg；FeCl3·6H2O，4.9mg；MnSO4·4H2O，16.4mg；ZnSO4·7H2O，2.2mg；CoSO4·7H2O，0.48mg；乙二胺四己乙酸二鈉(Na2EDTA)，100mg，調節(jié)pH到7.8)。PII金屬元素溶液按體積100mL貯存?zhèn)溆?。配制好液體ES(Enrichment solution)富營養(yǎng)液后，使用時每100mL消毒海水中加2mL ES(Enrichment solution)富營養(yǎng)液。
3)夾苗及海上養(yǎng)殖生長出的小幼苗，在室內夾苗于維尼龍繩上，每根繩(15cm)，夾苗10棵，在室內塑料箱內培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度20℃，使用過濾消毒海水，加氮磷營養(yǎng)鹽(含NO3-，1ppm，PO43-0.1ppm)，每5天更換1次培養(yǎng)海水。培養(yǎng)50天，龍須菜長成7cm左右的藻體。再將藻體取下，轉移到養(yǎng)殖用的苗上，轉移到海上養(yǎng)殖。
4)生長速率的測定從放養(yǎng)龍須菜總重量1000g，分別夾苗在苗繩(維尼龍繩)上，經過30天(一茬養(yǎng)殖)的海上養(yǎng)殖，累計達到1300g。再經過分苗及海上養(yǎng)殖，經過30天的養(yǎng)殖，增加到1500g。
瓊膠的提取及凝膠強度的測定，采用以下常規(guī)的方法稱取一定重量的龍須菜，加入10-12倍重量的人工海水(ASW，artificial seawater)溶液(酒精95％∶水∶NaOH＝400∶100∶15，v/v/w)，室溫條件下保溫3小時，倒出殘液，用自來水反復沖洗藻體6-10次，再于淡水中浸泡24變成中性。另取20倍量的0.5％HCl溶液放入燒杯中，加入定量的固體亞氯酸鈉，使溶解起反應，將洗好的龍須菜到入，攪拌5分鐘，使藻體退色并變成軟滑為止。倒去液體，換水，在其中加入0.5％硫代硫酸鈉并攪拌10分鐘。水洗5次使之變成中性。24小時后，取比干原料重30-40倍的自來水，加熱至沸，再加漂白好的龍須菜，煮沸15分鐘，中間攪拌，待大量膠溶出，用四層紗布過濾，放入搪瓷盤內，冷凝后放入冰箱，在-15℃以下冷凍1-2天，然后取出，放在鐵絲網上曬干(1天)，得到瓊膠。
用1.5％(w/v)瓊膠溶液制成凝膠，24小時后，用凝膠強度測定儀器測定瓊膠強度。
如圖1所示經組織培養(yǎng)選育室內培養(yǎng)35天后龍須菜生長狀況，如圖2所示經過30天養(yǎng)殖后龍須菜選育品種的生長狀況。從2001年到2003年，在福建蒲田地區(qū)沿海，在水溫17-24℃的養(yǎng)殖季節(jié)內，開展了100畝中試，經過多茬分苗及養(yǎng)殖，從原來的夾苗1000kg，增加到5000kg。日生長速率為11％，凝膠強度為910g/cm2。如圖3所示現(xiàn)場養(yǎng)殖狀況。
實施例2與實施例1不同之處在于1)通過對龍須菜藻體頂端、中部、分枝部及基部的剪切，先按常規(guī)方法去除藻體表面的附著物及雜藻，進行滅菌處理；然后在瓊脂半固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，待生長出幼芽后，將生長出的幼苗轉移到液體ES富營養(yǎng)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，經過35天培養(yǎng)，獲得頂端及分枝部的龍須菜組織；其中，半固體培養(yǎng)基的制備過程為將瓊脂1.5％(w/v)制成平板培養(yǎng)基，加過濾消毒海水，該海水中含1.5ppm NO3-、0.2ppm PO43-，液體ES富營養(yǎng)培養(yǎng)基按以下配方混制而成蒸餾水，110mg；NaNO3，300mg；甘油磷酸鈉，55mg；乙二胺四己乙酸鐵，2.0mg，其中鐵與乙二胺四己乙酸的摩爾比為1∶1；PII金屬元素溶液20mg；PII金屬元素溶液的制備是在100mg蒸餾水中溶解355mg Fe(NH4)2(SO4)2·6H2O和280mg乙二胺四己乙酸二鈉，維生素B12，0.02mg；維生素B1，0.2mg；生物素，0.008mg；三羥甲氨基甲烷鈉，520mg；H3BO3，110mg；FeCl3·6H2O，4.0mg；MnSO4·4H2O，17.0mg；ZnSO4·7H2O，1.5mg；CoSO4·7H2O，0.50mg；乙二胺四己乙酸二鈉，110mg，調節(jié)pH到7.5，每100mL消毒海水中加ES加富營養(yǎng)液3mL的培養(yǎng)液，然后再用于組織培養(yǎng)；2)在光照培養(yǎng)箱內進行組織培養(yǎng)培養(yǎng)液采用液體ES富營養(yǎng)培養(yǎng)基，光照強度18uE.m-2.s-1；溫度22℃；光周期L∶D＝12∶12，培養(yǎng)液每5天更換1次，培養(yǎng)時間為40天；3)夾苗及海上養(yǎng)殖生長出的小幼苗，在室內夾苗于維尼龍繩上，培養(yǎng)溫度25℃，使用過濾消毒海水，并在其中加入含1ppm NO3-、0.1ppm PO43-的氮磷營養(yǎng)鹽，經過40天的培養(yǎng)，再將藻體取下，轉移到養(yǎng)殖用的苗上，轉移到海上養(yǎng)殖。
4)龍須菜生長速率的測定，將放養(yǎng)的龍須菜分別夾苗在苗繩上，經過40天的海上養(yǎng)殖，測定龍須菜重量；再經過分苗及海上養(yǎng)殖，經過40天的養(yǎng)殖，測定龍須菜重量，從而獲得龍須菜的生長速率。
5)瓊膠的提取及凝膠強度的測定。用12％(w/v)瓊膠溶液制成凝膠，放置20小時后，測定瓊膠強度。
2002年到2003年，在山東榮成地區(qū)沿海，在水溫15-21℃的養(yǎng)殖季節(jié)內，開展了50畝的中試，經過多茬分苗及養(yǎng)殖，從原來的夾苗500kg，增加到1300kg。日生長速率達到12.5％，瓊膠的凝膠強度達到923g/cm2。如圖4所示現(xiàn)場養(yǎng)殖狀況。
實施例3與實施例1不同之處在于1)通過對龍須菜藻體頂端、中部、分枝部及基部的剪切，先按常規(guī)方法去除藻體表面的附著物及雜藻，進行滅菌處理；然后在瓊脂半固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，待生長出幼芽后，將生長出的幼苗轉移到液體ES富營養(yǎng)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，經過40天培養(yǎng)，獲得頂端及分枝部的龍須菜組織；其中，半固體培養(yǎng)基的制備過程為將瓊脂1.2％(w/v)制成平板培養(yǎng)基，加過濾消毒海水，該海水中含1.2ppm NO3-、0.3ppm PO43-，液體ES富營養(yǎng)培養(yǎng)基按以下配方混制而成蒸餾水，90mg；NaNO3，400mg；甘油磷酸鈉，45mg；乙二胺四己乙酸鐵，2.gmg，其中鐵與乙二胺四己乙酸的摩爾比為1∶1；PII金屬元素溶液30mg；PII金屬元素溶液的制備是在100mg蒸餾水中溶解360mgFe(NH4)2(SO4)2·6H2O和320mg乙二胺四己乙酸二鈉，維生素B12，0.03mg；維生素B1，0.7mg；生物素，0.006mg；三羥甲氨基甲烷鈉，550mg；H3BO3，120mg；FeCl3·6H2O，4.5mg；MnSO4·4H2O，15.0mg；ZnSO4·7H2O，2.5mg；CoSO4·7H2O，0.40mg；乙二胺四己乙酸二鈉，90mg，調節(jié)pH到8.0，每100mL消毒海水中加ES加富營養(yǎng)液5mL的培養(yǎng)液，然后再用于組織培養(yǎng)；2)在光照培養(yǎng)箱內進行組織培養(yǎng)培養(yǎng)液采用液體ES富營養(yǎng)培養(yǎng)基，光照強度25uE.m-2.s-1；溫度25℃；光周期L∶D＝12∶12，培養(yǎng)液每4天更換1次，培養(yǎng)時間為36天；3)夾苗及海上養(yǎng)殖生長出的小幼苗，在室內夾苗于維尼龍繩上，培養(yǎng)溫度22℃，使用過濾消毒海水，并在其中加入含1ppm NO3-、0.1ppm PO43-的氮磷營養(yǎng)鹽，經過45天的培養(yǎng)，再將藻體取下，轉移到養(yǎng)殖用的苗上，轉移到海上養(yǎng)殖。
4)龍須菜生長速率的測定，將放養(yǎng)的龍須菜分別夾苗在苗繩上，經過35天的海上養(yǎng)殖，測定龍須菜重量；再經過分苗及海上養(yǎng)殖，經過35天的養(yǎng)殖，測定龍須菜重量，從而獲得龍須菜的生長速率。
5)瓊膠的提取及凝膠強度的測定。用1.3％(w/v)瓊膠溶液制成凝膠，放置18小時后，測定瓊膠強度。在溫度范圍為20-25℃范圍內，其主要生產性狀是龍須菜的日生長率為12％，瓊膠的凝膠強度為880g/cm2。
比較例1從2002年采集的野生龍須菜，在山東膠南沿海，進行了10畝的養(yǎng)殖，在水溫16-21℃養(yǎng)殖季節(jié)內，野生菜所表現(xiàn)的性狀不穩(wěn)定，而且養(yǎng)殖中藻體顏色變淺，原來的夾苗20kg，增加到60kg。日生長速率達到8.5％，瓊膠的凝膠強度達到787g/cm2。如圖5所示采集的野生龍須菜照片及經過35天養(yǎng)殖后的龍須菜的生長狀況。
權利要求
1.一種運用組織培養(yǎng)獲得龍須菜優(yōu)良種苗的方法，其特征在于通過龍須菜野生種的篩選，對藻體不同組織部位進行取材及處理、組織培養(yǎng)，在光照、溫度及培養(yǎng)基的條件下，獲得具有優(yōu)良性狀的龍須菜；具體步驟如下1)通過對龍須菜藻體頂端、中部、分枝部及基部的剪切，先去除藻體表面的附著物及雜藻，進行滅菌處理；然后在瓊脂半固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，待生長出幼芽后，將生長出的幼苗轉移到液體ES富營養(yǎng)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，經過30-40天培養(yǎng)，獲得頂端及分枝部的龍須菜組織；其中，半固體培養(yǎng)基的制備過程為將瓊脂1-1.5％(w/v)制成平板培養(yǎng)基，加過濾消毒海水，該海水中含1-1.5ppm NO3-、0.1-0.3ppm PO43-，液體ES富營養(yǎng)培養(yǎng)基按以下配方混制而成按重量份數計，蒸餾水，90-110份；NaNO3，300-400份；甘油磷酸鈉，45-55份；乙二胺四己乙酸鐵，2.0-2.8份，其中鐵與乙二胺四己乙酸的摩爾比為1∶1；PII金屬元素溶液20-30份；PII金屬元素溶液的制備是在100份蒸餾水中溶解350-360份Fe(NH4)2(SO4)2·6H2O和280-320份乙二胺四己乙酸二鈉，維生素B12，0.01-0.03份；維生素B1，0.2-0.7份；生物素，0.005-0.008份；三羥甲氨基甲烷鈉，500-550份；H3BO3，110-120份；FeCl3·6H2O，4.0-5.0份；MnSO4·4H2O，15.0-17.0份；ZnSO4·7H2O，1.5-2.5份；CoSO4·7H2O，0.40-0.50份；乙二胺四已乙酸二鈉，90-110份，調節(jié)pH到7.5-8.0，每100mL消毒海水中加ES加富營養(yǎng)液2-5mL的培養(yǎng)液，然后再用于組織培養(yǎng)；2)在光照培養(yǎng)箱內進行組織培養(yǎng)培養(yǎng)液采用液體ES富營養(yǎng)培養(yǎng)基，光照強度18-25 uE.m-2.s-1；溫度20-25℃；光周期L∶D＝12∶12，培養(yǎng)液每4-5天更換1次，培養(yǎng)時間為35-40天；3)夾苗及海上養(yǎng)殖生長出的小幼苗，在室內夾苗于維尼龍繩上，培養(yǎng)溫度20-25℃，使用過濾消毒海水，并在其中加入含1ppmNO3-、0.1ppmPO43-的氮磷營養(yǎng)鹽，經過40-50天的培養(yǎng)，再將藻體取下，轉移到養(yǎng)殖用的苗上，轉移到海上養(yǎng)殖。
2.按照權利要求1所述運用組織培養(yǎng)獲得龍須菜優(yōu)良種苗的方法，其特征在于所述步驟3)之后進行龍須菜生長速率的測定，將放養(yǎng)的龍須菜分別夾苗在苗繩上，經過30-40天的海上養(yǎng)殖，測定龍須菜重量；再經過分苗及海上養(yǎng)殖，經過30-40天的養(yǎng)殖，測定龍須菜重量，從而獲得龍須菜的生長速率。
3.按照權利要求1所述運用組織培養(yǎng)獲得龍須菜優(yōu)良種苗的方法，其特征在于所述步驟3)之后進行瓊膠的提取及凝膠強度的測定。
4.按照權利要求3所述運用組織培養(yǎng)獲得龍須菜優(yōu)良種苗的方法，其特征在于所述凝膠強度的測定，用1.2-1.5％(w/v)瓊膠溶液制成凝膠，放置18-24小時后，測定瓊膠強度。
5.按照權利要求1所述運用組織培養(yǎng)獲得龍須菜優(yōu)良種苗的方法，其特征在于采用該方法獲得的龍須菜，在溫度范圍為15-25℃范圍內，其主要生產性狀是龍須菜的日生長率為10-13％，瓊膠的凝膠強度為800-1000g/cm2。
全文摘要
本發(fā)明涉及海藻組織培養(yǎng)、海藻遺傳選育及養(yǎng)殖，運用組織培養(yǎng)技術獲得龍須菜優(yōu)良種苗的方法。本發(fā)明通過龍須菜野生種的篩選，對其不同組織部位進行篩選及培養(yǎng)；在適宜的光照、溫度及培養(yǎng)基條件下，獲得具有優(yōu)良性狀的龍須菜，步驟為1)通過龍須菜藻體不同部位的篩選及處理，獲得頂端及分枝部的藻體組織，可用于龍須菜的快速繁殖及種苗培養(yǎng)；2)在光照培養(yǎng)箱內進行組織培養(yǎng)；3)培養(yǎng)基組分半固體培養(yǎng)基及液體ES富營養(yǎng)培養(yǎng)基；4)夾苗及海上養(yǎng)殖；5)生長速率的測定；6)瓊膠的提取及凝膠強度的測定。采用本發(fā)明獲得優(yōu)良性狀的龍須菜，用于養(yǎng)殖生產，龍須菜的日生長率為10－13％，凝膠強度為800～1000g/cm
文檔編號A01H4/00GK1739342SQ20041005030
公開日2006年3月1日 申請日期2004年8月24日 優(yōu)先權日2004年8月24日
發(fā)明者段德麟, 王繼成, 劉吉東 申請人:中國科學院海洋研究所