專利名稱：海南紅厚殼實生苗的培育方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種通過海南紅厚殼(Calophyllum inophyllumLinn.)種子萌發(fā)、培育得到海南紅厚殼實生苗的方法。
背景技術：
紅厚殼屬(Calophyllum L)為藤黃科(Guttiferae)植物，為國家二級保護植物。在我國的海南島和東南亞、印度、非洲等熱帶地區(qū)都有分布。紅厚殼又名胡桐、海棠果，經(jīng)濟價值高，應用范圍廣。具有油用、藥用、材用、觀賞、生態(tài)保護等多種用途。1992年美國國家癌癥研究所(NCI)從馬來西亞生長的紅厚殼屬植物C.Lanigerum中分離出的香豆素具有抗HIV-1活性成分，發(fā)現(xiàn)是目前抗HIV-1活性最強的天然活性成分。
我國有4種紅厚殼植物，其中海南分布2種，分別為紅厚殼(Calophyllum inophyllum Linn.)和薄葉紅厚殼(C.membranaceumGardn.et Champ.)。由于砍伐和土地利用等，使得紅厚殼僅在某些地區(qū)小范圍存在，目前大都處在野生狀態(tài)。目前國內(nèi)對紅厚殼資源利用、保護和開發(fā)還沒有進行過系統(tǒng)的科學研究，經(jīng)濟利用價值還沒有完全開發(fā)出來，特別是還缺乏栽培技術，產(chǎn)量低、株間差異大、經(jīng)濟效益差。根據(jù)陶忠良等(資源開發(fā)與市場2003，1985-87“紅厚殼在海南島的分布及其生長習性”)報道，紅厚殼植株生長較緩慢，幼苗生長6個月株高達40～50cm，但生長10年后才能結(jié)果。國外已有的研究表明，抗HIV-1活性成分存在于幼嫩枝葉。所以，建立紅厚殼種子萌發(fā)、獲得大量、整齊的實生苗，以此獲得足夠的幼嫩枝葉提供分離、提取有效成分的技術顯得十分必要和重要。
2003年何慧英、宋松泉發(fā)表的一篇相關報道“滇南紅厚殼種子的脫水敏感性及其影響萌發(fā)的因子”(云南植物研究，2003，25687-692)，以胚根突破種皮2mm時定為種子萌發(fā)，對滇南紅厚殼種子的脫水耐性和萌發(fā)條件進行了研究，但并沒有對種子的成苗情況(生根、出芽)進行研究，因為并不是所有能夠長根的種子都能夠出芽；而且對萌發(fā)后實生苗的生長狀態(tài)也沒有繼續(xù)的研究。海南紅厚殼種子萌發(fā)獲得實生苗和幼苗異地生長的研究至今未見報道。海南紅厚殼由于與云南的生態(tài)環(huán)境不同，種子萌發(fā)和幼苗生長的最適條件有所不同。
(三)發(fā)明的內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種海南紅厚殼種子高效萌發(fā)、獲得整齊實生苗的方法，該方法具有穩(wěn)定性好、操作簡便的優(yōu)點。
本發(fā)明的方法包括如下步驟(1)成熟紅厚殼果實去除果皮和內(nèi)外種皮，用0.1％的氯化汞溶液消毒種子8-12分鐘，將消毒的種子對半橫切開，將有胚的一半接種到瓊脂濃度為0.7-0.9％的無菌瓊脂培養(yǎng)基(不加任何營養(yǎng)成分)上，橫切面插入培養(yǎng)基中，胚朝上；(2)將培養(yǎng)瓶置于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，溫度為28±1℃，相對濕度為70±5％，光照條件為12小時/每天，光照強度為10±1μmol/m2·s(表示“微摩爾/平方米×秒”)；(3)待在瓶中萌發(fā)的幼苗展開3-4片葉時，此時幼苗高度為4-5cm，將幼苗移出瓶，移栽到含有普通泥土的容器中繼續(xù)培養(yǎng)，保持泥土和空氣濕潤、避免陽光直射，直至幼苗開始抽出新芽；(4)將幼苗置于戶外陰涼處生長，避免陽光直射，溫度為30±3℃，相對濕度為50±5％，前20天每4天澆一次水(澆透)，以后每2天澆一次，待幼苗生長到9-10片葉時獲得整齊的海南紅厚殼實生苗。
在上述方法中，步驟(3)中，泥土的濕度要求澆透水到手用力能捏出水來，保持空氣濕度的方法是在容器上覆蓋一個透明物，同時起到防風作用，所采用的覆蓋物可選用燒杯、培養(yǎng)瓶或透明薄膜等，覆蓋時要留出一條縫隙，避免完全密封。
本發(fā)明具有如下的優(yōu)點和效果1、種子萌發(fā)的條件簡單、易行，萌發(fā)時間短。
2、實生苗生長條件容易達到，海南紅厚殼萌發(fā)后，幼苗在廣州生長成為可能。
3、獲得整齊的實生苗，為大量獲得幼嫩枝葉提供有效途徑。由于并不是所有能夠長根的種子都能夠出芽，因此把出現(xiàn)完整根和芽的種子定義為種子完全萌發(fā)。統(tǒng)計結(jié)果表明，在所試驗的80粒種子中，經(jīng)過步驟(1)和(2)的培養(yǎng)萌發(fā)，20天后種子萌發(fā)率達到80％。經(jīng)過步驟(3)，幼苗成活率達100％。在步驟(4)的栽培條件下，經(jīng)過4個月的培養(yǎng)，可獲得9-10片葉，平均株高為30.4cm的整齊健壯的海南紅厚殼實生苗。
(四)具體的實施方式實施例1(1)把40個成熟紅厚殼果實去除果皮和內(nèi)外種皮后，用0.1％的氯化汞溶液消毒種子8分鐘，將消毒的種子對半橫切開，將有胚的一半接種到無菌的瓊脂培養(yǎng)基(瓊脂濃度0.7％，不加任何營養(yǎng)成分)上，橫切面插入培養(yǎng)基中，胚朝上。
(2)將培養(yǎng)瓶置于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，溫度為28±1℃，相對濕度為70±5％，光照條件為12小時/每天，光照強度為10±1μmol/m2·s。海南紅厚殼種子在培養(yǎng)瓶中經(jīng)歷了胚尖端變紅→胚端突起伸長→胚端頂部開始出現(xiàn)白色突起點→從白色突起點中開始長根→胚端沿著脊開始出現(xiàn)裂痕→裂痕慢慢裂開→從裂痕中能看到開始長芽→芽伸出體外的種子萌發(fā)過程，在該過程中，種子第3±1天開始胚尖端變紅，第11±1天時開始長芽，培養(yǎng)第20天統(tǒng)計，種子出現(xiàn)完整的根和芽的個數(shù)為32個，萌發(fā)率為80％。
(3)待在瓶中萌發(fā)的幼苗展開3-4片葉時，此時幼苗高度約為4-5cm，將幼苗移出瓶，轉(zhuǎn)移到含有普通泥土的容器中，將土澆透水到手用力能捏出水來，將幼苗置于戶外陰涼處，避免陽光直射，在幼苗上覆蓋一個透明物(如燒杯、培養(yǎng)瓶或透明薄膜等)用來保濕防風。當幼苗開始抽新芽，即幼苗成活時卸除覆蓋物，此時觀察和統(tǒng)計，幼苗成活率達到100％，幼苗高度為4-5cm。
(4)將幼苗置于戶外陰涼處生長，避免陽光的直射，溫度為30±3℃，相對濕度為50±5％，前20天每4天澆一次水(澆透)，以后每2天澆一次，待幼苗生長到9-10片葉時獲得整齊的海南紅厚殼實生苗。此時海南紅厚殼幼苗從幼苗成活開始經(jīng)過4個月到4個半月的生長，實生苗平均葉數(shù)達9.9片，株高平均達到30.7cm。
在該實施例中，種子沒有污染情況出現(xiàn)，第11±1天就開始出芽，而種子播種到土壤中后，帶果肉的種子要到70±2天才能夠出芽，去掉果肉帶內(nèi)外種皮的種子需要60±2天，不帶內(nèi)外種皮的需要25±3天。
實施例2其它內(nèi)容和操作同實施例1，不同的是步驟(1)中，消毒時間改為用0.1％的氯化汞溶液消毒種子12分鐘，瓊脂培養(yǎng)基中瓊脂濃度為0.9％；步驟(4)中，海南紅厚殼幼苗從幼苗成活開始經(jīng)過4個月到4個半月的生長，實生苗平均葉數(shù)達9.3片，株高平均達到30.1cm。
權利要求
1.一種海南紅厚殼實生苗的培育方法，其特征在于包括如下步驟(1)成熟紅厚殼果實去除果皮和內(nèi)外種皮，用0.1％的氯化汞溶液消毒種子8-12分鐘，將消毒的種子對半橫切開，將有胚的一半接種到瓊脂濃度為0.7-0.9％的無菌瓊脂培養(yǎng)基上，橫切面插入培養(yǎng)基中，胚朝上；(2)將培養(yǎng)瓶置于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，溫度為28±1℃，相對濕度為70±5％，光照條件為12小時/每天，光照強度為10±1μmol/m2·s；(3)待在瓶中萌發(fā)的幼苗展開3-4片葉時，將幼苗移出瓶，移栽到含有普通泥土的容器中繼續(xù)培養(yǎng)，保持泥土和空氣濕潤、避免陽光直射，直至幼苗開始抽出新芽；(4)將幼苗置于戶外陰涼處生長，避免陽光直射，溫度為30±3℃，相對濕度為50±5％，前20天每4天澆一次水(澆透)，以后每2天澆一次，待幼苗生長到9-10片葉時獲得整齊的海南紅厚殼實生苗。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于步驟(3)中，泥土的濕度要求澆透水到手用力能捏出水來，保持空氣濕度的方法是在容器上覆蓋一個透明物，同時起到防風作用，所采用的覆蓋物選用燒杯、培養(yǎng)瓶或透明薄膜，覆蓋時要留出一條縫隙，避免完全密封。
全文摘要
海南紅厚殼實生苗的培育方法，首先將經(jīng)消毒的種子對半橫切開，將有胚的一半接種到瓊脂濃度為0.7－0.9％的無菌瓊脂培養(yǎng)基上，溫度為28±1℃，相對濕度為70±5％，光照條件為12小時/每天，光照強度為10±1μmol/m
文檔編號A01H4/00GK1636441SQ20041005249
公開日2005年7月13日 申請日期2004年12月3日 優(yōu)先權日2004年12月3日
發(fā)明者王小菁, 張盛春 申請人:華南師范大學