專利名稱：八角蓮的組培快速繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種八角蓮的組培快速繁殖方法。
背景技術(shù)：
植物是藥物的天然寶庫(kù)，人們利用藥用植物的歷史源遠(yuǎn)流長(zhǎng)，全世界約有75％的人口以植物作為治療預(yù)防疾病的藥物來(lái)源(邢建民，2001)。人類已經(jīng)從植物中發(fā)現(xiàn)了許多具有高度生理活性的藥物，目前從植物來(lái)源的藥物占藥物總量的25％以上(鄭光植，1987)。我國(guó)的傳統(tǒng)中草藥已有數(shù)千年的歷史，至今仍在我國(guó)和許多國(guó)家和地區(qū)廣為使用。但由于傳統(tǒng)的中草藥獲取方法是以采集和消耗大量的野生植物資源為代價(jià)的，當(dāng)采集和消耗量超過(guò)自然資源的再生能力時(shí)，必然會(huì)導(dǎo)致物種的瀕危甚至滅絕。同時(shí)隨著自然生態(tài)環(huán)境的日益破壞，也進(jìn)一步導(dǎo)致藥用植物資源的匱乏。生物技術(shù)的蓬勃發(fā)展為從根本上改變傳統(tǒng)藥材的生產(chǎn)提供了一個(gè)嶄新的方法，植物組織和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)則是其中一個(gè)重要的手段。我國(guó)自1964年羅士韋教授首先報(bào)道了人參組織培養(yǎng)獲得成功的研究成果以來(lái)，許多科學(xué)家先后從事了多種藥用植物的組織培養(yǎng)研究。至今，我國(guó)藥用植物的組織培養(yǎng)研究迅速發(fā)展。目前，世界各國(guó)對(duì)植物的藥用開發(fā)和研究都十分重視，就以美國(guó)來(lái)說(shuō)，其成藥中有47％是以植物為原料制成的(謝啟昆，1986)。為了解決藥用植物的供需矛盾，人們采用人工栽培的方法擴(kuò)大藥源。但在人工栽培的藥用植物中，有不少名貴藥材等生產(chǎn)周期較長(zhǎng)，如人參、黃連，如果以常規(guī)方法育種或育苗，需要花費(fèi)很長(zhǎng)的時(shí)間；另有一些藥用植物如貝母、番紅花等，因繁殖系數(shù)小、耗種量大，導(dǎo)致育種速度很慢，生產(chǎn)成本增加。所以利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)解決藥用植物的植株再生與繁殖問題迫在眉睫。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外在這方面已做了大量工作，已成功離體培養(yǎng)獲得試管植株的藥用植物至少有200種，如云南黑節(jié)草、延齡草、高山紅景天、莪術(shù)、水母雪蓮、星花繡線菊、溪黃草、玉葉金花、遼東楤木等；其中包括一些具有抗癌有效成分的珍稀植物，如紅豆杉、艾、黃楊、大戟屬植物、長(zhǎng)春花、米仔蘭、狗牙花和香榧等。
八角蓮Dysosma versipellis(Hance)M.Cheng是小檗科Berberidaceae八角蓮屬Dysosma的多年生草本植物，分布于我國(guó)湖南、湖北、浙江、江西、云南、貴州、四川、河南及陜西等地。生長(zhǎng)于海拔400-1400米山坡溝谷雜木林下濕潤(rùn)處或陰濕溪谷草叢中?；ㄆ?-6月，果期7-9月。八角蓮是我國(guó)傳統(tǒng)中藥中著名藥用植物，主要取其根狀莖供藥用，具有化痰及清熱解毒之功效，廣泛應(yīng)用于祛瘀解毒，治跌打損傷、關(guān)節(jié)酸痛、蟲蛇咬傷，咽喉腫痛和瘡癤等癥。在現(xiàn)代醫(yī)藥領(lǐng)域，八角蓮是著名抗癌藥物VP-16、VM-26的主要原料。
研究表明，八角蓮的根狀莖和根富含鬼臼毒素、去氫鬼臼毒素和脫氧鬼臼毒素等有效成分(劉長(zhǎng)軍1997，陳敏亨1979)，其中主要有效成分是鬼臼毒素(Podophyllotoxin)，在植物體中含量可達(dá)1.4％，具有抗腫瘤、抗病毒等多種生理活性。但是天然成分鬼臼毒素的毒副作用太大，不適合直接臨床藥用(King1946)，而是通過(guò)化學(xué)修飾(Creaven.1975)生成鬼臼毒素衍生物VP-16、VM-26等抗癌藥物，這兩種藥物臨床測(cè)試具有廣譜抗癌活性，對(duì)睪丸癌、白細(xì)胞癌、淋巴肉癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、霍杰金氏癥等多種癌癥有特殊療效，現(xiàn)在已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床。但是由于八角蓮對(duì)生境要求嚴(yán)格，加之多年來(lái)生態(tài)環(huán)境的破壞，適合其生長(zhǎng)的環(huán)境越來(lái)越少；又由于其具有重要的藥用價(jià)值，招到濫挖亂采、過(guò)度利用，再加上本身的繁育機(jī)制不良，導(dǎo)致野生八角蓮的分布范圍和數(shù)量銳減，瀕于滅絕?，F(xiàn)在八角蓮已經(jīng)被列為國(guó)家三級(jí)瀕危保護(hù)植物?，F(xiàn)有的八角蓮野生資源根本難以滿足日益增長(zhǎng)的醫(yī)藥領(lǐng)域的需要。因此，為了滿足日益增大的藥用需求，同時(shí)保護(hù)八角蓮的野生資源，利用組培快繁技術(shù)，實(shí)現(xiàn)人工栽培是最好的解決方法。然而，由于野生八角蓮對(duì)生境要求苛刻，繁殖機(jī)制不良，不僅是導(dǎo)致其瀕危的原因，而且導(dǎo)致常規(guī)的組織培養(yǎng)技術(shù)十分難于對(duì)其進(jìn)行快繁。迄今為止，在國(guó)內(nèi)外尚未見關(guān)于八角蓮組織培養(yǎng)快繁成功的報(bào)道。我們通過(guò)大量試驗(yàn)，歷時(shí)三年終于摸索出一套成熟的方法，成功實(shí)現(xiàn)了八角蓮的組培快繁，可以快速培育出大量幼苗，為實(shí)現(xiàn)工業(yè)化人工栽培八角蓮提供可能。八角蓮的組培快繁技術(shù)方法的成功建立，可以為大規(guī)模人工栽培藥用植物八角蓮提供種苗，為現(xiàn)代科技農(nóng)業(yè)提供了一種切實(shí)可行的開發(fā)項(xiàng)目。
參考文獻(xiàn)邢建民，趙修德等.2000，水母雪蓮細(xì)胞生物反應(yīng)器懸浮培養(yǎng).植物學(xué)報(bào)，42(1)98-101.
鄭光植.1987，植物次生代謝細(xì)胞工程研究的新進(jìn)展第六屆國(guó)際植物組織與細(xì)胞培養(yǎng)會(huì)議評(píng)述.植物生理學(xué)通訊，(2)75-79.
謝啟昆.1986，藥用植物組織培養(yǎng).上海，上海科學(xué)技術(shù)出版社.劉長(zhǎng)軍，侯嵩生.1997，抗癌活性物質(zhì)鬼臼類木脂素的研究進(jìn)展.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，9(3)81～89.
陳毓亨.1979，我國(guó)鬼臼類植物資源的研究.藥學(xué)學(xué)報(bào)，14(2)101-106King L S，et al.1946，The similarity of the effect of podophyllin and colchicine andtheir use in the treatment of condylomata acuminata acuminata.Since，104244.Creaven P J，etal.1975，PTG a new antineoplastic epipodophyllotoxin，ibid，18227.
Damayanthi Y.，Lown JW，1998，Curr.Med.Chem.，5(3)205文中所提及的縮寫字母的意義見如下縮略詞表MSMurashige and Skoog mediumMS培養(yǎng)基2，4-D2，4-dichlorophenoxy acetic acid 2，4-二氯苯氧乙酸NAA α-naphthal acetic acid α-萘乙酸IAA indole-3-acetic acid 引哚乙酸BA6-benzylaminopurine 6-芐氨基嘌呤KTkinetin 激動(dòng)素GAgibberellic acid 赤霉素ACactivated charcoal活性炭PVP polyvinglypyrrolidon 聚乙烯吡咯烷酮ZTzeatin玉米素IBA indolebutyic aci 引哚丁酸發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種八角蓮的組培快速繁殖方法。
方法的步驟如下1)外植體的選取與處理選用八角蓮的芽作為培養(yǎng)材料，經(jīng)洗潔精和自來(lái)水洗凈，置流水下沖洗10-30分鐘后，置于75％酒精中處理10-30秒，然后在經(jīng)0.1-0.15％的升汞(Hgcl)消毒1-10分鐘后用無(wú)菌水沖洗，切去外植體變色的部分，接種于培養(yǎng)基中；2)誘導(dǎo)培養(yǎng)使用MS+BA(0.2-0.5mg/l)+ZT(0-1.0mg/l)作為誘導(dǎo)培養(yǎng)基，將所選取的芽接種于上述培養(yǎng)基中；3)增殖培養(yǎng)將生長(zhǎng)于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上外植體轉(zhuǎn)接于MS+BA(0.2-1.0mg/l)+ZT(0-0.5mg/l)+GA(0-0.2mg/l)+PVP(0-0.5mg/l)上進(jìn)行連續(xù)培養(yǎng)。
4)生根培養(yǎng)選擇1/2 MS+BA(0.2-0.5mg/l)+ZT(0.1-0.5mg/L)作為生根培養(yǎng)基；5)移栽將已生根的植株取出，移栽到珍珠巖∶泥炭土(1∶1-1.5)混合的基質(zhì)上。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)(1)八角蓮的生產(chǎn)可以在人為控制條件下進(jìn)行，不受季節(jié)、氣候條件與土壤等因素的制約，可排除病蟲害的侵襲和農(nóng)藥殘留的影響，嚴(yán)格控制八角蓮的質(zhì)量。(2)增殖速度快，生產(chǎn)周期短，設(shè)備簡(jiǎn)單，占地面積少，能節(jié)省人力、物力等，便于工廠化生產(chǎn)。(3)在組培過(guò)程進(jìn)行脫毒處理，提高八角蓮品質(zhì)，有效解決野生八角蓮品質(zhì)不穩(wěn)定，外觀和有效成分不勻的問題，為生產(chǎn)地道藥材和產(chǎn)后加工銷售提供保障條件。(4)該技術(shù)方法解決了八角蓮快速繁殖及其穩(wěn)定生根的重要技術(shù)環(huán)節(jié)，達(dá)到了技術(shù)穩(wěn)定，繁殖系數(shù)高的要求，可應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)的目的。(5)使用本發(fā)明提供的組培快繁技術(shù)得到的八角蓮幼苗進(jìn)行人工栽培，可以得到個(gè)體差異小，品質(zhì)均一的八角蓮成品，可以為生產(chǎn)鬼臼毒素提供品質(zhì)穩(wěn)定的原材料。(6)可以保存八角蓮的種質(zhì)資源，同時(shí)有利于保護(hù)八角蓮野生資源，減少對(duì)自然資源的破壞。
具體實(shí)施例方式
八角蓮的組培快繁技術(shù)，包括外植體的選取與處理，誘導(dǎo)培養(yǎng)，增殖培養(yǎng)，生根培養(yǎng)，移栽等步驟。具體地操作中，可優(yōu)選八角蓮?fù)暾难繛榕囵B(yǎng)材料，經(jīng)洗潔精和自來(lái)水洗凈，置流水下沖洗30分鐘后，置于75％酒精中處理30秒，然后在經(jīng)0.1％的升汞(Hgcl)消毒8分鐘后用無(wú)菌水沖洗，切去外植體變色的部分，接種于MS+BA1.0mg/L+ZT0.5mg/L培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)。在溫度25±2℃，每天光照16小時(shí)，光照強(qiáng)度1000LX的條件下培養(yǎng)15-20天。然后將每瓶中得到的多個(gè)芽分別切開，置于MS+BA1.0mg/l+ZT0.5mg/l+GA0.2mg/l+PVP0.5mg/l培養(yǎng)基中進(jìn)行增值培養(yǎng)。培養(yǎng)條件同上述誘導(dǎo)培養(yǎng)。20-30天后每個(gè)培養(yǎng)瓶中都可以得到一株綠色健壯的幼苗，將需要生根的幼苗轉(zhuǎn)移至1/2 MS+BA 0.5mg/l+ZT0.5mg/L培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)。培養(yǎng)條件同上述誘導(dǎo)培養(yǎng)。25-30天左右即生根完成。將已生根的植株取出，于自然環(huán)境下放置5-7天，打開瓶蓋，洗凈培養(yǎng)基，將苗移栽到珍珠巖∶泥炭土(1∶1-1.5)的混合基質(zhì)上。前7天保持環(huán)境溫度25±2℃，濕度在70％左右，隨后即可逐漸過(guò)渡到自然的環(huán)境條件。練苗一個(gè)月后移栽到大田中，可達(dá)到80％的存活率。
上述技術(shù)中誘導(dǎo)、增殖和生根步驟的PH值均為5.8，培養(yǎng)溫度25±2℃，每天光照16小時(shí)，光照強(qiáng)度1000LX。
使用本發(fā)明將八角蓮的芽接種后，20-25天可誘導(dǎo)形成叢生芽，一般誘導(dǎo)率可達(dá)75-90％。在此基礎(chǔ)上繼代培養(yǎng)，叢生芽可大量增殖，大約每25天繼代一次，平均增殖倍數(shù)為3.3倍。把繼代后的叢生芽轉(zhuǎn)移到本發(fā)明提供的生根培養(yǎng)基中25-35天可大量發(fā)根，出根率在80％左右，培養(yǎng)30-45天后即可出瓶煉苗。
采用上述措施的本發(fā)明，掌握了八角蓮組織培養(yǎng)中叢生芽的誘導(dǎo)和生長(zhǎng)，壯苗生根兩個(gè)關(guān)鍵階段的技術(shù)，成功解決了八角蓮組培中生根困難、增值率低、成活率低等困難，使八角蓮這一瀕危重要藥用植物實(shí)現(xiàn)快速育苗、工廠化栽培成為可能。使用本發(fā)明同時(shí)可以有效地保護(hù)這一珍稀野生植物資源、減少私挖濫采、形成可持續(xù)利用和合理開發(fā)相互協(xié)調(diào)的良性循環(huán)。
本發(fā)明的優(yōu)異性體現(xiàn)在提供了八角蓮的植物組織培養(yǎng)和快速繁殖技術(shù)，摸索出了快速繁殖及其穩(wěn)定生根等重要環(huán)節(jié)的關(guān)鍵性技術(shù)，一個(gè)外植體一年就可克隆繁殖出數(shù)萬(wàn)株后代，為該藥用植物的商品化生產(chǎn)提供了一套切實(shí)可行的生產(chǎn)技術(shù)路線，可以應(yīng)用于八角蓮的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
本發(fā)明采用下述非限定性實(shí)施例作進(jìn)一步的說(shuō)明。
實(shí)施例1取采自峨眉山的八角蓮的芽，用自來(lái)水洗凈，再流水沖洗半個(gè)小時(shí)后進(jìn)行表面消毒，消毒方法為70％酒精浸泡30s后，用無(wú)菌水沖洗兩次，再用0.1％升汞100ml(加入2-3滴吐溫T-20)消毒8min，最后用無(wú)菌水沖洗干凈。接入滅菌后的培養(yǎng)基MS+BA 0.5mg/l+ZT1.0mg/l上。溫度25±2℃培養(yǎng)15天，可見每個(gè)外植體上有5左右個(gè)新芽出現(xiàn)。將長(zhǎng)有芽的外植體在無(wú)菌條件下取出，將每個(gè)芽用解剖刀分開，分別置于裝有上述相同的培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器中培養(yǎng)，20天后，各培養(yǎng)容器內(nèi)的芽可再生出數(shù)個(gè)新芽。再將每個(gè)芽分開，轉(zhuǎn)接于MS+BA1.0mg/l+ZT0.5mg/l+GA0.2mg/l+PVP0.5mg/l上進(jìn)行連續(xù)培養(yǎng)，以達(dá)到快速增值的目的，其中加入抗氧化劑PVP防止褐化。培養(yǎng)20天后，將需要生根的八角蓮植株轉(zhuǎn)移至1/2 MS+BA 0.5mg/l+ZT0.5mg/L培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)。30天左右即可生根。將已生根的植株取出，于自然環(huán)境下放置5-7天，打開瓶蓋，洗凈培養(yǎng)基，將苗移栽到珍珠巖∶泥炭土(1∶1)混合的基質(zhì)上。保持環(huán)境濕度在70％左右。一個(gè)月后移栽到大田中，可達(dá)到75％的存活率。
實(shí)施例2取采自峨眉山的八角蓮的芽，用自來(lái)水洗凈，再流水沖洗半個(gè)小時(shí)后70％酒精浸泡30s后，用無(wú)菌水沖洗兩次，再用0.1％升汞100ml(加入2-3滴吐溫T-20)消毒15min，最后用無(wú)菌水沖洗干凈。用無(wú)菌紙吸干，切成1厘米左右，接種在培養(yǎng)基MS+BA 0.5mg/l+NAA 0.2mg/l+GA 0.2mg/l中。培養(yǎng)溫度25±2℃，光照強(qiáng)度1500LX，光照時(shí)間10-12h/d。培養(yǎng)20天，可見外植體上有5-7個(gè)新芽出現(xiàn)。將長(zhǎng)有數(shù)個(gè)芽的外植體在無(wú)菌條件下取出，用解剖刀把每個(gè)芽切開，分置于轉(zhuǎn)接于1/2 MS+BA 0.2mg/l+IBA0.5mg/L+PVP0.05％培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)。培養(yǎng)30天左右即可生根。將已生根的植株取出，于自然溫度和光照條件下放置5-7天，打開瓶蓋，洗凈培養(yǎng)基，將苗移栽到珍珠巖∶泥炭土(1∶1)混合的基質(zhì)上。保持環(huán)境濕度在70％左右，最初兩周避免直射光照射，練苗一個(gè)月后就可以移栽到大田中，可達(dá)到存活率75％以上。
實(shí)施例3取采自峨眉山的八角蓮的芽，用自來(lái)水洗凈，再流水沖洗半個(gè)小時(shí)后進(jìn)行表面消毒，消毒方法為70％酒精浸泡30s后，用無(wú)菌水沖洗兩次，再用0.1％升汞100ml(加入2-3滴吐溫T-20)消毒10min，最后用無(wú)菌水沖洗干凈。接入滅菌后的培養(yǎng)基MS+BA 0.5mg/l+ZT1.0mg/l上。黑暗條件下培養(yǎng)1～2天，再轉(zhuǎn)入40W雙管日光燈下培養(yǎng)，光強(qiáng)為2000lx，溫度保持在25±2℃，培養(yǎng)15天，可見每個(gè)外植體上有5左右個(gè)新芽出現(xiàn)。將長(zhǎng)有芽的外植體在無(wú)菌條件下取出，將每個(gè)芽用解剖刀分開，分別置于裝有上述連續(xù)培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器中培養(yǎng)，在10-20天內(nèi)，各培養(yǎng)容器內(nèi)的芽可再生出數(shù)個(gè)新芽。將生長(zhǎng)于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上外植體轉(zhuǎn)接于MS+BA0.5mg/l+ZT0.5mg/l+GA0.1mg/l+PVP0.5mg/l上進(jìn)行連續(xù)培養(yǎng)。將需要生根的八角蓮植株轉(zhuǎn)移至1/2 MS+BA 0.5mg/l+ZT0.2mg/L培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)。25天左右即可生根。將已生根的植株取出，于自然環(huán)境下放置5-7天，打開瓶蓋，洗凈培養(yǎng)基，將苗移栽到珍珠巖∶泥炭土(1∶1)混合的基質(zhì)上。保持環(huán)境濕度在70％左右。一個(gè)月后移栽到大田中，可達(dá)到75％的存活率。
實(shí)施例4練苗與移栽將實(shí)施例3得到的八角蓮無(wú)菌苗，在自然光照下煉苗7天后開瓶。從培養(yǎng)基上鉗取壯苗，移栽到以泥炭土∶珍珠巖(1∶1)為基質(zhì)的12cm塑料盆，每盆1株，每15盆為一個(gè)單位。置于溫室大棚中，保持最高晝溫＜35℃，最低夜溫＞18℃，相對(duì)濕度50～80％，遮光75％。移栽后用塑料膜覆蓋，最初7天避免直射光照，每天對(duì)葉面噴1次水，7天后進(jìn)行一次葉面追肥，并除去覆蓋的塑料膜。以后每半個(gè)月澆一次1/2MS營(yíng)養(yǎng)液。1個(gè)月后幼苗成活率達(dá)80％以上，可以移栽到大田種植。
權(quán)利要求
1.一種八角蓮的組培快速繁殖方法，其特征在于1)外植體的選取與處理選用八角蓮的芽作為培養(yǎng)材料，經(jīng)洗潔精和自來(lái)水洗凈，置流水下沖洗10-30分鐘后，置于75％酒精中處理10-30秒，然后在經(jīng)0.1-0.15％的升汞(Hgcl)消毒1-10分鐘后用無(wú)菌水沖洗，切去外植體變色的部分，接種于培養(yǎng)基中；2)誘導(dǎo)培養(yǎng)使用MS+BA(0.2-0.5mg/l)+ZT(0-1.0mg/l)作為誘導(dǎo)培養(yǎng)基，將所選取的芽接種于上述培養(yǎng)基中；3)增殖培養(yǎng)將生長(zhǎng)于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上外植體轉(zhuǎn)接于MS+BA(0.2-1.0mg/l)+ZT(0-0.5mg/l)+GA(0-0.2mg/l)+PVP(0-0.5mg/l)上進(jìn)行連續(xù)培養(yǎng)；4)生根培養(yǎng)選擇1/2 MS+BA(0.2-0.5mg/l)+ZT(0.1-0.5mg/L)作為生根培養(yǎng)基；5)移栽將已生根的植株取出，移栽到珍珠巖∶泥炭土(1∶1-1.5)混合的基質(zhì)上。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種八角蓮的組培快速繁殖方法，其特征在于所說(shuō)的使用MS+BA(0.1-0.5mg/l)+ZT(0.5-1.0mg/l)作為誘導(dǎo)培養(yǎng)基，將所選取的芽接種于上述培養(yǎng)基中誘導(dǎo)培養(yǎng)基的PH值5.8±0.1，培養(yǎng)溫度25±1℃，每天光照時(shí)間12-16時(shí)，光照強(qiáng)度1900-2300LX。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種八角蓮的組培快速繁殖方法，其特征在于所說(shuō)的將生長(zhǎng)于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上外植體轉(zhuǎn)接于MS+BA(0.3-1.0mg/l)+ZT(0.1-0.5mg/l)+GA(0.1-0.2mg/l)+PVP(0.1-0.5mg/l)培養(yǎng)基上進(jìn)行連續(xù)培養(yǎng)是培養(yǎng)15-20天，可見外植體上有1-5個(gè)新芽出現(xiàn)，隨培養(yǎng)時(shí)間增加，芽的數(shù)目增加。將長(zhǎng)有數(shù)個(gè)芽的外植體在無(wú)菌條件下取出，將每個(gè)芽用解剖刀分開，置于上述連續(xù)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在10-20天內(nèi)，各培養(yǎng)容器內(nèi)的芽可再生出一至數(shù)個(gè)新芽，以達(dá)到增殖的目的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種八角蓮的組培快速繁殖方法，其特征在于所說(shuō)的選擇1/2 MS+BA(0.2-0.5mg/l)+ZT(0.1-0.5mg/L)作為生根培養(yǎng)基是將連續(xù)培養(yǎng)中的植株轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)。首先在黑暗條件下培養(yǎng)1-2天，隨后轉(zhuǎn)到光下培養(yǎng)10-15天可誘導(dǎo)形成根，再培養(yǎng)15-25天可形成發(fā)達(dá)的根系。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種八角蓮的組培快速繁殖方法，其特征在于所說(shuō)的將已生根的植株取出，移栽到珍珠巖∶泥炭土(1∶1-1.5)混合的基質(zhì)上是將裝有生根幼苗的培養(yǎng)容器置于自然溫度、光照的環(huán)境下鍛煉2-5天，然后打開瓶蓋，放置2-10天，再將已生根的植株幼苗取出，用清水洗凈根部的瓊脂，移栽到珍珠巖∶泥炭土(1∶1-1.5)混合基質(zhì)上培養(yǎng)20-35天，隨后可栽培于大田。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種八角蓮的組培快速繁殖方法。包括外植體的選取與處理，誘導(dǎo)培養(yǎng)，增殖培養(yǎng)，生根培養(yǎng)，移栽等步驟。本發(fā)明以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，加入了輔助劑活性炭、6－芐基腺嘌呤、赤霉素、玉米素，用于八角蓮叢生芽的誘導(dǎo)生長(zhǎng)和壯苗生根兩個(gè)關(guān)鍵階段。采用本發(fā)明所提供的成套技術(shù)方法對(duì)八角蓮進(jìn)行組織培養(yǎng)和微繁，解決了八角蓮難于快速繁殖及穩(wěn)定生根的重要技術(shù)難題，達(dá)到了繁殖系數(shù)高，技術(shù)穩(wěn)定的要求?？梢詾榘私巧彽墓I(yè)化生產(chǎn)提供一種周期短、繁殖率高、成本低廉的育苗方法。
文檔編號(hào)A01H3/02GK1586168SQ20041005324
公開日2005年3月2日 申請(qǐng)日期2004年7月22日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月22日
發(fā)明者傅承新, 潘琦, 姜維梅, 陳士超 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)