專利名稱：石首魚類精子激發(fā)大黃魚雌核發(fā)育二倍體的誘導(dǎo)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種魚類的養(yǎng)殖，尤其是采用異源精子誘導(dǎo)大黃魚雌核發(fā)育二倍體的方法。
背景技術(shù)：
以大黃魚(Pseudosciaena crocea Richardon)為母本，淺色黃姑魚(Nibea Chui，Trewavas)或鮸狀黃姑魚(Nibea miichthioides Chu Lo&Wu)或眼斑擬石首魚(Sciaenopsocellatus Linnaeus)等同科不同種魚類為父本的屬間遠緣雜交試驗中，受精率較高，但孵化率幾乎為零，死亡胚胎具十分明顯的單倍體癥狀，雖有極少部分受精卵可發(fā)育至孵化，但孵化仔魚均為畸形個體，無存活至開口攝食的個體。雜交胚胎典型的單倍體癥狀表現(xiàn)為細胞分裂不全、卵裂不規(guī)則、細胞邊界模糊、軀體短小、圍心腔擴大、肌節(jié)模糊、色素減少、血液循環(huán)不全、脊椎彎曲等。目前有關(guān)成功誘導(dǎo)大黃魚雌核發(fā)育二倍體的方法還沒有見正式報道。有關(guān)大黃魚三倍體的成功誘導(dǎo)僅見于1)王軍等的大黃魚三倍體誘導(dǎo)的初步研究(王軍，王德祥，尤穎哲，等，大黃魚三倍體誘導(dǎo)的初步研究[J]，廈門大學(xué)學(xué)報自然科學(xué)版，2001，40(4)927-930)；2)林琪等的靜水壓休克誘導(dǎo)大黃魚三倍體(林琪，吳建紹，曾志南，靜水壓休克誘導(dǎo)大黃魚三倍體[J]，海洋科學(xué)，2001，25(9)6-9)。其它魚類雌核發(fā)育二倍體的誘導(dǎo)方法一般如下取同種魚類的鮮活精子，用精子稀釋液稀釋，置于紫外線或X射線或γ射線下照射，一定時間后與新鮮的成熟卵子進行人工授精，而后采用靜水壓等方法誘導(dǎo)二倍體。由于精子受射線照射失活，只具備激活卵子發(fā)育的能力而不參與受精卵的遺傳調(diào)控，因此受精卵是雌核發(fā)育單倍體。該類方法的不足在于1)精子需要失活處理，不便于現(xiàn)場操作；2)精子失活操作要接觸紫外線或X射線或γ射線下照射，具有一定的危險性；3)精子失活操作的條件需要長期的試驗摸索，不便于掌握；4)由于精子失活操作不可能十分徹底，因此雌核發(fā)育子代中必然混有正常二倍體或三倍體，給實驗結(jié)果的分析帶來困難。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在提供一種結(jié)果純正，無須精子失活處理，受精率、誘導(dǎo)率和成活率高，便于現(xiàn)場操作、安全可靠、簡單易行的石首魚類精子激發(fā)誘導(dǎo)大黃魚雌核發(fā)育二倍體的方法。為此本發(fā)明采用異源精子進行誘導(dǎo)的方法。
本發(fā)明的步驟為1.采用人工受精，將雜交組合中同科不同種父本的精子與大黃魚的卵混合；2.將精卵混合后，用海水激活；3.將受精卵放入壓力容器，施壓；4.達到靶壓力38～55MPa時停止施壓；5.持續(xù)1～30min后降壓，完成壓力休克的誘導(dǎo)。
在步驟2)中，激活精卵所用海水的水溫最好為18～25℃。在步驟3)中，受精后施壓時間是受精后1～10min后將受精卵放入壓力容器，施壓；受精后最佳的施壓時間是受精后2.5min。在步驟4)中，最好達到靶壓力40～45MPa時停止施壓，持續(xù)10～15min后降壓，完成壓力休克的誘導(dǎo)。
本發(fā)明的優(yōu)點在于1)無須對異源精子進行射線失活處理，簡單可行，便于現(xiàn)場操作，安全可靠；2)對經(jīng)驗的要求不高，便于掌握；3)遠緣雜交產(chǎn)生單倍體，單倍體的致死效應(yīng)剔除了沒有成功進行二倍體誘導(dǎo)的個體，確保了存活個體均為雌核發(fā)育二倍體。
具體實施例方式
實施例1將淺色黃姑魚的精子與大黃魚的卵混合，采用干法受精，水溫為21～24℃，受精后2.5min將受精卵放入壓力容器施壓，當(dāng)靶壓力達到42～44MPa時停止施壓，持續(xù)10～15min后降壓，即完成壓力休克的誘導(dǎo)。實驗結(jié)果表明，受精率≥80％，孵化率≥50％，胚胎期二倍體誘導(dǎo)率≥88％。
實施例2將眼斑擬石首魚的精子與大黃魚的卵混合，采用干法受精，水溫為20～23℃，受精后1min將受精卵放入壓力容器施壓，當(dāng)靶壓力達到40～42MPa時停止施壓，持續(xù)2～2.5min后降壓，即完成壓力休克的誘導(dǎo)。實驗結(jié)果表明，受精率≥82％，孵化率≥84.8％，胚胎期二倍體誘導(dǎo)率≥93.75％。
實施例3與實施例1相似，其不同在于激活所用海水的水溫為18～20℃，受精后10min將受精卵放入壓力容器施壓，靶壓力達到38～40MPa時停止施壓，持續(xù)1～4min后降壓，即完成壓力休克的誘導(dǎo)。實驗結(jié)果表明，受精率≥80％，孵化率≥81％，胚胎期二倍體誘導(dǎo)率≥75％。
實施例4與實施例2相似，其不同在于激活所用海水的水溫為23～25℃，受精后8min將受精卵放入壓力容器施壓，靶壓力達到50～55MPa時停止施壓，持續(xù)25～30min后降壓，即完成壓力休克的誘導(dǎo)。實驗結(jié)果表明，受精率≥78％，孵化率≥45％，胚胎期二倍體誘導(dǎo)率≥98％。
實施例5與實施例1相似，其不同在于激活所用海水的水溫為20～22℃，受精后4min將受精卵放入壓力容器施壓，靶壓力達到45～50MPa時停止施壓，持續(xù)15～20min后降壓，即完成壓力休克的誘導(dǎo)。實驗結(jié)果表明，受精率≥81.1％，孵化率≥65％，胚胎期二倍體誘導(dǎo)率≥98％。
實施例6與實施例2相似，其不同在于激活所用海水的水溫為21～23℃，受精后6min將受精卵放入壓力容器施壓，靶壓力達到40～45MPa時停止施壓，持續(xù)5～10min后降壓，即完成壓力休克的誘導(dǎo)。實驗結(jié)果表明，受精率≥78.8％，孵化率≥77％，胚胎期二倍體誘導(dǎo)率≥75％。
權(quán)利要求
1.石首魚類精子激發(fā)大黃魚雌核發(fā)育二倍體的誘導(dǎo)方法，其特征在于其步驟為1)采用人工受精，將雜交組合中同科不同種父本的精子與大黃魚的卵混合；2)將精卵混合后，用海水激活3)將受精卵放入壓力容器，施壓；4)達到靶壓力38～55MPa時停止施壓；5)持續(xù)1～30min后降壓，完成壓力休克的誘導(dǎo)。
2.如權(quán)利要求1所述的石首魚類精子激發(fā)大黃魚雌核發(fā)育二倍體的誘導(dǎo)方法，其特征在于在步驟2)中，激活受精卵所用海水水溫為18～25℃。
3.如權(quán)利要求1所述的石首魚類精子激發(fā)大黃魚雌核發(fā)育二倍體的誘導(dǎo)方法，其特征在于在步驟3)中，受精后施壓時間是受精后1～10min后將受精卵放入壓力容器，施壓。
4.如權(quán)利要求3所述的石首魚類精子激發(fā)大黃魚雌核發(fā)育二倍體的誘導(dǎo)方法，其特征在于在步驟3)中，受精后施壓時間是受精后2.5min。
5.如權(quán)利要求1所述的石首魚類精子激發(fā)大黃魚雌核發(fā)育二倍體的誘導(dǎo)方法，其特征在于在步驟4)中，達到靶壓力40～45MPa時停止施壓。
6.如權(quán)利要求1所述的石首魚類精子激發(fā)大黃魚雌核發(fā)育二倍體的誘導(dǎo)方法，其特征在于在步驟5)中，持續(xù)10～15min后降壓，完成壓力休克的誘導(dǎo)。
全文摘要
石首魚類精子激發(fā)大黃魚雌核發(fā)育二倍體的誘導(dǎo)方法，涉及一種魚類的養(yǎng)殖，尤其是采用異源精子誘導(dǎo)大黃魚雌核發(fā)育二倍體的方法。其步驟為采用人工受精，將雜交組合中同科不同種父本的精子與大黃魚的卵混合；將精卵混合后，用海水激活；將受精卵放入壓力容器，施壓；達到靶壓力38～55MPa時停止施壓；持續(xù)1～30min后降壓，完成壓力休克的誘導(dǎo)。無須對異源精子進行射線失活處理，簡單可行，便于現(xiàn)場操作，安全可靠；對經(jīng)驗的要求不高，便于掌握；遠緣雜交產(chǎn)生單倍體，單倍體的致死效應(yīng)剔除了沒有成功進行二倍體誘導(dǎo)的個體，確保了存活個體均為雌核發(fā)育二倍體。
文檔編號A61D19/02GK1586430SQ200410060148
公開日2005年3月2日 申請日期2004年6月28日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月28日
發(fā)明者王軍, 王德祥, 蘇永全, 王世鋒, 丁少雄 申請人:廈門大學(xué)