專利名稱：文心蘭優(yōu)質(zhì)種苗快速繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及文心蘭的優(yōu)質(zhì)種苗快速繁殖方法和所使用的培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
文心蘭(Oncidinm)又名舞女蘭、金蝶蘭、瘤瓣蘭等，是蘭科植物中最大的屬之一，本屬植物全世界原生種有400種以上，而商業(yè)上用的千姿百態(tài)的商品種多為雜交種。文心蘭原生于美洲熱帶地區(qū)，種類分布最多的有巴西、美國(guó)、哥倫比亞、厄瓜多爾及秘魯?shù)葒?guó)家。其分布地區(qū)較廣，有熱帶、暖帶、高山的溫帶和寒帶等。文心蘭是一種極美麗而又極具觀賞價(jià)值的蘭花，是世界上重要的蘭花盆花和切花品種之一，做切花時(shí)適合于家庭居室和辦公室瓶插，也是加工花束、小花籃的高檔用花材料，現(xiàn)世界各地均有栽培。它的形態(tài)變化較大，假鱗莖為扁卵圓形，較肥大，但有些種類沒(méi)有假鱗莖。葉片1~3枚，可分為薄葉種、厚葉種和劍葉種。薄葉種葉片較薄，稍革質(zhì)，多數(shù)植株生長(zhǎng)健壯，適合中溫溫室種植；厚葉種耐干旱能力強(qiáng)，在溫室內(nèi)栽培冬天幾十天不澆水也不至于因干旱而死亡；劍葉種株型較小，適于家庭栽培。一般一個(gè)假鱗莖上只有1個(gè)花莖，也有可能一些生長(zhǎng)粗壯的種有2個(gè)花莖。有些種類一個(gè)花莖只有1~2朵花，有些種類又可達(dá)數(shù)百朵，如作為切花用的小花種一枝花幾十朵，數(shù)枝上百朵到數(shù)百朵，其花朵色彩鮮艷，形似飛翔的金蝶，又似翩翩起舞的舞女，故又名金蝶蘭或舞女蘭。文心蘭的花色以黃色和棕色為主，還有綠色、白色、紅色或洋紅色等，其大小有的極小如迷你型文心蘭，有些又極大，花的直徑可達(dá)12厘米以上?；ǖ臉?gòu)造極為特殊，其花萼萼片大小相等，花瓣與背萼也幾乎相等或稍大；花的唇瓣通常三裂，或大或小，呈提琴狀，在中裂片基部有一脊?fàn)钔蛊鹞?，脊上又有凸起的小斑點(diǎn)，頗為奇特，故名瘤瓣蘭。文心蘭由于花色艷麗、花朵數(shù)量多，花形變化大，有些品種還具有清香，既可做盆花栽培，也可做切花觀賞，是世界上栽培最廣泛、最普及的蘭花種類之一。我國(guó)大陸近年來(lái)引進(jìn)了不少文心蘭品種，但種苗生產(chǎn)主要靠分株，繁殖速度慢，母本的病害也易感染給種苗。
國(guó)內(nèi)外對(duì)文心蘭的組織培養(yǎng)已進(jìn)行了較多的研究，但未有利用花梗和莖尖進(jìn)行原球莖和叢生芽增殖途徑進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)和專利申請(qǐng)的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了多種文心蘭原種和雜種的組織培養(yǎng)繁殖方法和所使用的培養(yǎng)基。對(duì)外植體的選擇，培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基成分進(jìn)行了系統(tǒng)闡述，應(yīng)用價(jià)值高。本發(fā)明采用的文心蘭種質(zhì)優(yōu)良，實(shí)驗(yàn)中利用文心蘭的花梗和莖尖為外植體，采用獨(dú)特的培養(yǎng)基進(jìn)行叢生芽增殖并獲得優(yōu)質(zhì)種苗的方法，技術(shù)簡(jiǎn)單實(shí)惠，切實(shí)可行，本發(fā)明所述的文心蘭優(yōu)質(zhì)種苗快速繁殖方法，包括如下步驟1、材料此發(fā)明已實(shí)驗(yàn)的材料有同色文心蘭(Oncidium concolor)、香水文心蘭(Oncidium Sweet Fragrance)、蜜糖文心蘭(Oncidium Sweet Sugar)、野貓文心蘭(Oncidium Wildcat)、金西文心蘭(Oncidium Kinsei)、達(dá)卡文心蘭(Oncidium Taka)、金寶文心蘭(Oncidium Golden Gem)等，材料均取自華南植物園。
2、外植體的消毒取文心蘭花芽的花梗和莖尖，用自來(lái)水沖洗干凈后，剪取2-3厘米帶節(jié)的花梗切段或新長(zhǎng)出的2-3厘米的幼芽，在超凈工作臺(tái)上用70％的酒精浸泡1分鐘，再用0.1％升汞溶液滅菌10分鐘，無(wú)菌水沖洗5次后，用無(wú)菌吸水紙吸干，花梗切段兩端各剪去0.5厘米，幼芽基部切去0.3厘米接種到原球莖和叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。
3、花梗叢生芽的誘導(dǎo)花梗苗的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為N6+6-芐基嘌呤2-5毫克/升+萘乙酸0.2-0.5毫克/升+15％椰子水培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)溫度(26±2)℃條件下，15天左右花芽開(kāi)始生長(zhǎng)，已發(fā)育完成的花蕾會(huì)繼續(xù)在試管內(nèi)開(kāi)花，腋芽中未發(fā)育完全的花芽能轉(zhuǎn)化成營(yíng)養(yǎng)芽，形成帶葉的花梗苗。培養(yǎng)基含蔗糖30克/升，pH 5.5-5.8，瓊脂0.7％。光照度1500～2000lx，光照12小時(shí)/天，培養(yǎng)條件下同。
4、莖尖叢生芽的誘導(dǎo)采用莖尖為外植體時(shí)，誘導(dǎo)培養(yǎng)基為N6+6-芐基嘌呤1-3毫克/升+萘乙酸0.2-0.5毫克/升+15％椰子水，在培養(yǎng)溫度(26±2)℃條件下，10天左右芽啟動(dòng)生長(zhǎng)，40天左右能長(zhǎng)成3-4厘米高。
5.、叢生芽增殖將利用花梗和莖尖培養(yǎng)得到的小苗，剪去部分葉片轉(zhuǎn)移到叢生芽增殖培養(yǎng)基N6+6-芐基嘌呤1-5毫克/升+萘乙酸0.2-0.5毫克/升+15％椰子水+蔗糖30克/升，能誘導(dǎo)原球莖和叢生芽形成。原球莖能在較高的6-芐基嘌呤濃度培養(yǎng)基上增殖，原球莖轉(zhuǎn)入較低6-芐基嘌呤濃度的培養(yǎng)基時(shí)會(huì)分化出叢生芽，叢生芽在較低6-芐基嘌呤濃度的培養(yǎng)基上能增殖。
6、生根壯苗培養(yǎng)叢生芽增殖多代后，可將叢生芽切割成單個(gè)芽，接種在1/2N6培養(yǎng)基+蔗糖15克/升+香蕉汁100克/升+活性碳0.5克/升的生根壯苗培養(yǎng)基上進(jìn)行生根壯苗培養(yǎng)。40天左右能形成株高3-4厘米的完整植株。
7、試管苗移栽春季與秋季為移栽的適宜季節(jié)。試管苗移栽時(shí)，在自然光照下煉苗7-14天，將文心蘭小苗從玻璃瓶中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，在0.1％的高錳酸鉀溶液中浸泡5分鐘后涼干，以小塑料盆為栽培容器，以浸泡過(guò)的小樹(shù)皮和蛭石為栽培基質(zhì)，保持適當(dāng)通風(fēng)和足夠的濕度，移栽的成活率均可達(dá)95％-100％。
本發(fā)明所述的文心蘭優(yōu)質(zhì)種苗快速繁殖方法，生產(chǎn)出的文心蘭種苗具有遺傳穩(wěn)定性高，出苗快，苗壯，種苗品質(zhì)好、抗性強(qiáng)、生長(zhǎng)良好等優(yōu)勢(shì)。本發(fā)明所提供的文心蘭優(yōu)質(zhì)種苗快速繁殖方法能成功地進(jìn)行優(yōu)良品種的文心蘭優(yōu)質(zhì)種苗的組織培養(yǎng)和快速繁殖，由于采用無(wú)性繁殖，特別是能獲得優(yōu)良品種的無(wú)病毒苗。具有投入少，產(chǎn)出高等優(yōu)勢(shì)，是利用植物組織細(xì)胞的全能性和植物組織培養(yǎng)等生物技術(shù)進(jìn)行植物優(yōu)質(zhì)種苗的規(guī)?；a(chǎn)，實(shí)施該方法只需有簡(jiǎn)單的植物組織培養(yǎng)設(shè)備即可進(jìn)行。已生產(chǎn)出優(yōu)質(zhì)的文心蘭種苗，市場(chǎng)十分看好。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例11、取材同色文心蘭(Oncidium concolor)2、外植體的消毒取同色文心蘭花芽的花梗和莖尖，用自來(lái)水沖洗干凈后，剪取2厘米帶節(jié)的花梗切段或新長(zhǎng)出的2厘米的幼芽，在超凈工作臺(tái)上用70％的酒精浸泡1分鐘，再用0.1％升汞溶液滅菌10分鐘，無(wú)菌水沖洗5次后，用無(wú)菌吸水紙吸干，花梗切段兩端各剪去0.5厘米，幼芽基部切去0.3厘米接種到原球莖和叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。
3、花梗叢生芽的誘導(dǎo)花梗苗的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為N6+6-芐基嘌呤3-5毫克/升+萘乙酸0.2-0.5毫克/升+15％椰子水培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)溫度(26±2)℃條件下，15天左右花芽開(kāi)始生長(zhǎng)，已發(fā)育完成的花蕾會(huì)繼續(xù)在試管內(nèi)開(kāi)花，腋芽中未發(fā)育完全的花芽能轉(zhuǎn)化成營(yíng)養(yǎng)芽，形成帶葉的花梗苗。培養(yǎng)基含蔗糖30克/升，pH 5.5-5.8，瓊脂0.7％。光照度1500～2000lx，光照12小時(shí)/天，培養(yǎng)條件下同。
4、莖尖叢生芽的誘導(dǎo)采用莖尖為外植體時(shí)，誘導(dǎo)培養(yǎng)基為N6+6-芐基嘌呤2-3毫克/升+萘乙酸0.2-0.5毫克/升+15％椰子水，在培養(yǎng)溫度(26±2)℃條件下，10天左右芽啟動(dòng)生長(zhǎng)，40天左右能長(zhǎng)成3-4厘米高。
5.、叢生芽增殖將利用花梗和莖尖培養(yǎng)得到的小苗，剪去部分葉片轉(zhuǎn)移到叢生芽增殖培養(yǎng)基N6+6-芐基嘌呤1-5毫克/升+萘乙酸0.2-0.5毫克/升+15％椰子水+蔗糖30克/升，能誘導(dǎo)原球莖和叢生芽形成。當(dāng)6-芐基嘌呤濃度為1-2毫克/升時(shí)只有叢生芽，無(wú)原球莖，當(dāng)6-芐基嘌呤濃度為3-4毫克/升時(shí)既有叢生芽，又有原球莖，當(dāng)6-芐基嘌呤濃度為5毫克/升以上時(shí)，生成的原球莖多，誘導(dǎo)出的叢生芽數(shù)量少。原球莖能在較高的6-芐基嘌呤濃度培養(yǎng)基上增殖，原球莖轉(zhuǎn)入較低6-芐基嘌呤濃度的培養(yǎng)基時(shí)會(huì)分化出叢生芽，叢生芽在較低6-芐基嘌呤濃度的培養(yǎng)基上能增殖。
6、生根壯苗培養(yǎng)叢生芽增殖多代后，可將叢生芽切割成單個(gè)芽，接種在1/2N6培養(yǎng)基+蔗糖15克/升+香蕉汁100克/升+活性碳0.5克/升的生根壯苗培養(yǎng)基上進(jìn)行生根壯苗培養(yǎng)。40天左右能形成株高3-4厘米的完整植株。
7、試管苗移栽春季與秋季為移栽的適宜季節(jié)。試管苗移栽時(shí)，在自然光照下煉苗7-14天，將文心蘭小苗從玻璃瓶中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，在0.1％的高錳酸鉀溶液中浸泡5分鐘后涼干，以小塑料盆為栽培容器，以浸泡過(guò)的小樹(shù)皮和蛭石為栽培基質(zhì)，保持適當(dāng)通風(fēng)和足夠的濕度，移栽的成活率均可達(dá)95％。
實(shí)施例2取文心蘭雜交品種蜜糖文心蘭(Oncidium Sweet Sugar)為外植體?；静僮鞣椒ㄍ瑢?shí)施例1一致。但培養(yǎng)基成分略有不同，其叢生芽誘導(dǎo)和增殖的培養(yǎng)6-芐基嘌呤的濃度比同色文心蘭低。高濃度的6-芐基嘌呤會(huì)產(chǎn)生過(guò)多的原球莖。
在培養(yǎng)過(guò)程中，花梗苗的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為N6+6-芐基嘌呤1-3毫克/升+萘乙酸0.2-0.5毫克/升+15％椰子水；采用莖尖為外植體時(shí)，誘導(dǎo)培養(yǎng)基為N6+6-芐基嘌呤1-2毫克/升+萘乙酸0.2-0.5毫克/升+15％椰子水。叢生芽增殖培養(yǎng)基為N6+6-芐基嘌呤1-3毫克/升+萘乙酸0.2-0.5毫克/升+15％椰子水+蔗糖30克/升。生根培養(yǎng)基為1/2N6培養(yǎng)基+蔗糖15克/升+香蕉汁100克/升+活性碳0.5克/升，試管苗移栽的成活率可達(dá)100％。
權(quán)利要求
1.一種文心蘭優(yōu)質(zhì)種苗快速繁殖方法，采用種質(zhì)優(yōu)良的文心蘭，利用文心蘭的花梗和莖尖為外植體，采用獨(dú)特的培養(yǎng)基進(jìn)行叢生芽增殖，其特征在于該方法包括如下步驟1)、取材優(yōu)良文心蘭種質(zhì)；2)、外植體的消毒取同色文心蘭花芽的花梗和莖尖，用自來(lái)水沖洗干凈后，剪取2厘米帶節(jié)的花梗切段或新長(zhǎng)出的2厘米的幼芽，在超凈工作臺(tái)上用70％的酒精浸泡1分鐘，再用0.1％升汞溶液滅菌10分鐘，無(wú)菌水沖洗5次后，用無(wú)菌吸水紙吸干，花梗切段兩端各剪去0.5厘米，幼芽基部切去0.3厘米接種到原球莖和叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；3)、花梗叢生芽的誘導(dǎo)花梗苗的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為N6+6-芐基嘌呤3-5毫克/升+萘乙酸0.2-0.5毫克/升+15％椰子水培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)溫度26±2℃條件下，15天花芽開(kāi)始生長(zhǎng)，已發(fā)育完成的花蕾會(huì)繼續(xù)在試管內(nèi)開(kāi)花，腋芽中未發(fā)育完全的花芽能轉(zhuǎn)化成營(yíng)養(yǎng)芽，形成帶葉的花梗苗，培養(yǎng)基含蔗糖30克/升，pH5.5-5.8，瓊脂0.7％；4)、莖尖叢生芽的誘導(dǎo)采用莖尖為外植體時(shí)，誘導(dǎo)培養(yǎng)基為N6+6-芐基嘌呤2-3毫克/升+萘乙酸0.2-0.5毫克/升+15％椰子水，在培養(yǎng)溫度26±2℃條件下，10天芽啟動(dòng)生長(zhǎng)，40天能長(zhǎng)成3-4厘米高；5)、叢生芽增殖將利用花梗和莖尖培養(yǎng)得到的小苗，剪去部分葉片轉(zhuǎn)移到叢生芽增殖培養(yǎng)基N6+6-芐基嘌呤1-5毫克/升+萘乙酸0.2-0.5毫克/升+15％椰子水+蔗糖30克/升，能誘導(dǎo)原球莖和叢生芽形成，當(dāng)6-芐基嘌呤濃度為1-2毫克/升時(shí)只有叢生芽，無(wú)原球莖，當(dāng)6-芐基嘌呤濃度為3-4毫克/升時(shí)既有叢生芽，又有原球莖，當(dāng)6-芐基嘌呤濃度為5毫克/升以上時(shí)，生成的原球莖多，誘導(dǎo)出的叢生芽數(shù)量少，原球莖能在較高的6-芐基嘌呤濃度培養(yǎng)基上增殖，原球莖轉(zhuǎn)入較低6-芐基嘌呤濃度的培養(yǎng)基時(shí)會(huì)分化出叢生芽，叢生芽在較低6-芐基嘌呤濃度的培養(yǎng)基上能增殖；6)、生根壯苗培養(yǎng)叢生芽增殖多代后，可將叢生芽切割成單個(gè)芽，接種在1/2 N6培養(yǎng)基+蔗糖15克/升+香蕉汁100克/升+活性碳0.5克/升的生根壯苗培養(yǎng)基上進(jìn)行生根壯苗培養(yǎng)；40天能形成株高3-4厘米的完整植株；7)、試管苗移栽試管苗移栽時(shí)，在自然光照下煉苗7-14天，將文心蘭小苗從玻璃瓶中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，在0.1％的高錳酸鉀溶液中浸泡5分鐘后涼干，以小塑料盆為栽培容器，以浸泡過(guò)的小樹(shù)皮和蛭石為栽培基質(zhì)，保持適當(dāng)通風(fēng)和足夠的濕度。
2.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的文心蘭優(yōu)質(zhì)種苗快速繁殖方法，其特征在于方法步驟7)中所述試管苗移栽的適宜季節(jié)為春季與秋季。
3.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的文心蘭優(yōu)質(zhì)種苗快速繁殖方法，其特征在于方法中所用的材料為同色文心蘭、香水文心蘭、蜜糖文心蘭、野貓文心蘭、金西文心蘭、達(dá)卡文心蘭、金寶文心蘭，材料均取自華南植物園。
4.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的文心蘭優(yōu)質(zhì)種苗快速繁殖方法，其特征在于方法步驟中的培養(yǎng)條件為光照度1500～2000lx，光照12小時(shí)/天。
全文摘要
本發(fā)明涉及文心蘭的優(yōu)質(zhì)種苗快速繁殖方法和所使用的培養(yǎng)基。文心蘭又名舞女蘭、金蝶蘭、瘤瓣蘭等，是蘭科植物中最大的屬之一，文心蘭由于花色艷麗、花朵數(shù)量多，花形變化大，有些品種還具有清香，既可做盆花栽培，也可做切花觀賞，是世界上栽培最廣泛、最普及的蘭花種類之一。我國(guó)大陸近年來(lái)引進(jìn)了不少文心蘭品種，但種苗生產(chǎn)主要靠分株，繁殖速度慢，母本的病害也易感染給種苗。本發(fā)明提供了多種文心蘭原種和雜種的組織培養(yǎng)繁殖方法和所使用的獨(dú)特培養(yǎng)基。生產(chǎn)出的文心蘭種苗具有遺傳穩(wěn)定性高，出苗快，苗壯，種苗品質(zhì)好、抗性強(qiáng)、生長(zhǎng)良好等優(yōu)勢(shì)。已生產(chǎn)出優(yōu)質(zhì)的文心蘭種苗，市場(chǎng)十分看好。
文檔編號(hào)A01H4/00GK1631108SQ20041007772
公開(kāi)日2005年6月29日 申請(qǐng)日期2004年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月29日
發(fā)明者曾宋君, 陳之林, 段俊, 陳建通 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院華南植物園