專利名稱：一種促進(jìn)水產(chǎn)餌料微藻繁殖的制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微藻領(lǐng)域，涉及一種促進(jìn)水產(chǎn)餌料微藻繁殖的制劑。
背景技術(shù)：
水產(chǎn)餌料微藻指的是養(yǎng)殖魚、蝦、蟹等動物水體中含有的藍(lán)藻門(Cyanophyta)、綠藻門(Chlorophyta)、金藻門(Choysophyta)和紅藻門(Phodophyta)中的無毒微藻。餌料微藻在養(yǎng)殖水體中的密度，對于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)具有重要意義。作為養(yǎng)殖對象的餌料，微藻營養(yǎng)豐富，并能促進(jìn)養(yǎng)殖動物的健康。微藻還釋放氧氣，避免水體缺氧而影響?zhàn)B殖動物生長繁殖。微藻也是養(yǎng)殖水體中的一些浮游動物的餌料，這些動物又是養(yǎng)殖對象的餌料。微藻還有分解代謝水體中有害物和氨氮、亞硝酸鹽、硫化氫等的作用。
為了促進(jìn)水產(chǎn)餌料微藻的繁殖，常用以下方法(1)往水中撒(灑)動物糞便或人糞尿。即使經(jīng)過處理的糞便，也不免將病原菌帶入水中。(2)撒餅粕作為微藻營養(yǎng)物。餅粕易被養(yǎng)殖動物吃掉。由于可溶性物質(zhì)少，微藻很難直接利用，沒有被利用的餅粕腐敗產(chǎn)生硫化氫等有害物。(3)撒(灑)入化學(xué)肥料，如尿素、硫酸銨、氯化鉀等?；侍貏e是氮肥雖能被微藻利用，但殘存的氮素會造成水中的氨氮和亞硝酸鹽等有害物超標(biāo)。(4)撒(灑)入光合細(xì)菌、EM復(fù)合菌劑等微生物制劑。大量的實(shí)驗(yàn)證明，這些微生物可增加水中益生菌含量，分解部分有害的化學(xué)物質(zhì)如硫化氫、氨氮、亞硝酸鹽等，但對微藻繁殖的促進(jìn)作用不明顯。(5)灑入經(jīng)稀釋的植物激素如2，4-D、赤霉素、蕓苔素內(nèi)酯、三十烷醇等。這些物質(zhì)雖有一定促進(jìn)微藻繁殖的作用，但價(jià)格昂貴。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明之目的在于提供一種促進(jìn)水產(chǎn)餌料微藻繁殖的制劑，以達(dá)到促進(jìn)養(yǎng)殖水或?qū)ｉT培養(yǎng)水產(chǎn)餌料微藻的水中的餌料微藻繁殖之目的。
本發(fā)明是采用下列技術(shù)方案完成的(1)納豆芽孢桿菌(Bacilluns natto)菌粉的制作。
①斜面試管(一級菌種)培養(yǎng)采用BPY細(xì)菌培養(yǎng)基。0.14MPa下滅菌30～45min，擺成斜面后在無菌條件下接入原種，在37℃恒溫箱中培養(yǎng)24～36h，待菌落長滿后，在0～4℃環(huán)境下保存?zhèn)溆谩?br> ②液體培養(yǎng)(二級菌種)采用不加瓊脂的BPY細(xì)菌培養(yǎng)基，pH7.0。以500ml三角瓶培養(yǎng)。0.1MPa下滅菌45min，冷至40℃后接入斜面菌種，37℃恒溫?fù)u床培養(yǎng)16～24h，待細(xì)胞數(shù)達(dá)6.0億/ml以上時(shí)終止培養(yǎng)，在室溫下保存?zhèn)溆谩?br> ③液體培養(yǎng)(三級菌種)培養(yǎng)基及滅菌同二級菌種，培養(yǎng)容器為好氧種子罐，接入二級菌種量為10％。待細(xì)胞數(shù)達(dá)5.0億/ml后，終止培養(yǎng)。保存?zhèn)溆谩?br> ④固體培養(yǎng)取脫脂大豆粉25％～35％，小麥麩65％～75％，玉米粉7％～12％，蔗糖0.5％～1.5％，硫酸銨0.2％～0.4％，蛋白胨0.1％～0.3％，酵母膏0.1％～0.2％，總重量100％。加固形物總重的50％～60％的自來水，溶解蔗糖、硫酸銨、蛋白胨、酵母膏，然后將其與剩余水一起攪拌入固體粉中，在0.14MPa下滅菌120min，冷卻至40℃，在無菌條件下接入20％～30％的三級菌種。在固體好氧發(fā)酵罐中，于37℃下好氧培養(yǎng)36～48h，至細(xì)胞數(shù)達(dá)20.0億/g時(shí)終止培養(yǎng)。
⑤干燥與粉碎發(fā)酵成功的固體培養(yǎng)物，在60～70℃下以真空干燥機(jī)干燥至含水量≤9.0％。粉碎并過80目篩。質(zhì)量檢測細(xì)胞數(shù)達(dá)20.0億/g以上時(shí)，室溫下保存?zhèn)溆?。這樣的菌粉在室溫下24個月內(nèi)，活細(xì)胞數(shù)能保證≥10.0億/g。
(2)枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)菌粉的制作。
整套制作工藝及設(shè)備同納豆芽孢桿菌。不同的是①斜面試管(一級菌種)采用營養(yǎng)肉汁瓊脂，組成如下(％)蛋白胨0.5，牛肉膏0.3，NaC10.5，瓊脂1.5，pH7.0。②二、三級菌種(液體)采用不加瓊脂的斜面試管(一級菌種)培養(yǎng)基。③固體培養(yǎng)基組成(％)脫脂大豆粉20～30，小麥麩70～85，蔗糖1.0～1.5，硫酸銨0.2～0.3，蛋白胨0.1～0.2，酵母膏0.1～0.2，NaHCO30.05～0.1?？傊亓?00％。④干燥并粉碎后的菌粉，活細(xì)胞數(shù)要求≥36.0億/g以上。這樣的菌粉在室溫下24個月內(nèi)，活細(xì)胞數(shù)能保證12.0億/g以上。
(3)本發(fā)明制劑的制作①組成納豆芽孢桿菌菌粉76％～86％，枯草芽孢桿菌菌粉18％～26％，維生素B6(含量98％)0.0000001～0.0000003％，維生素B12(含量1％)0.0000001％～0.0000004％，維生素B2(含量98％)0.0000002％～0.0000005％。
優(yōu)選為納豆芽孢桿菌菌粉76％，枯草芽孢桿菌菌粉23.9999995％，維生素B60.0000001％，維生素B120.0000002％，維生素B20.0000002％。
②原料要求納豆芽孢桿菌菌粉粒度60目，含水量≤9.0％，自出廠之曰起24個月內(nèi)活細(xì)胞數(shù)≥10.0億/g以上。
枯草芽孢桿菌菌粉粒度60目，含水量≤9.0％，自出廠之日起24個月內(nèi)活細(xì)胞數(shù)≥12.0億/g以上。
維生素B6食品添加劑。含量98％。應(yīng)符合GB14573-1993之規(guī)定。過60目篩。
維生素B12含量1％。飼料添加劑。應(yīng)符合GB9841-1988之規(guī)定。過60目篩。
維生素B2食品添加劑。含量98％。應(yīng)符合GB14752-1993之規(guī)定。過60目篩。
③制作按組成百分比稱取并過60目篩的各原料納豆芽孢桿菌菌粉、枯草芽孢桿菌菌粉、維生素B6、維生素B12和維生素B2，合并，在不銹鋼藥物混和機(jī)中混勻，裝入無毒塑料袋或瓶中。
(4)本發(fā)明制劑的使用方法①加入對象需要提高繁殖速度的含有水產(chǎn)餌料微藻的水產(chǎn)養(yǎng)殖水或?qū)ｉT培養(yǎng)水產(chǎn)餌料微藻的水。
②加入量每立方米水體用本制劑8～15mg。
③加入方法按水的體積計(jì)算，準(zhǔn)確稱取所需的本發(fā)明制劑，經(jīng)500～1000倍的水稀釋并存放2h后，盡可能均勻地潑灑入水中。
含水產(chǎn)餌料微藻的水中加入本發(fā)明制劑后，水產(chǎn)餌料微藻的繁殖速度加快。
具體實(shí)施例方式
以下通過試驗(yàn)例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明所述制劑的有效效果。這些試驗(yàn)包括了本發(fā)明制劑和其他制劑促進(jìn)水產(chǎn)餌料微藻繁殖的效果試驗(yàn)。
試驗(yàn)例1本發(fā)明制劑促進(jìn)水產(chǎn)餌料微藻繁殖的效果試驗(yàn)(1)試驗(yàn)材料制劑A納豆芽孢桿菌菌粉76％，枯草芽孢桿菌菌粉23.9999995％，維生素B60.0000001％，維生素B120.0000002％，維生素B20.0000002％。
制劑B納豆芽孢桿菌菌粉76％，枯草芽孢桿菌菌粉24％。
對照組納豆芽孢桿菌菌粉固體培養(yǎng)原料76％，枯草芽孢桿菌菌粉固體培養(yǎng)原料24％，均過60目篩。
(2)試驗(yàn)方法①各制劑分別用1000倍的自來水稀釋并在26～28℃(水溫)下存放2h。
②各制劑加入量10mg/m3水。
③試驗(yàn)水及微藻各組均為1立方米養(yǎng)蝦池水。將水加熱至100℃，10min，殺死全部藻類。冷卻后接種菱形藻(Nitzschia)，小球藻(Chlorella)、杜氏藻(Dunaliella)各50個/ml水。
④培養(yǎng)在21～25℃水溫和5月睛天陽光下培養(yǎng)，培養(yǎng)池(水泥池)長×寬×高＝1m×1m×1m，每組設(shè)2個重復(fù)，72h后對微藻進(jìn)行計(jì)數(shù)。
試驗(yàn)結(jié)果見表1。
表1加入各制劑培養(yǎng)72h后的水中微藻數(shù)目(X±SD，n＝2)

表1示明①本發(fā)明制劑(制劑A)對促進(jìn)3種微藻繁殖有顯著促進(jìn)作用(制劑A與制劑B和對照組比較，p＜0.01，t檢驗(yàn))。②制劑B也有一定效果(制劑B與對照組比較，p＜0.01，t檢驗(yàn))。
試驗(yàn)例2本發(fā)明制劑灑入東方對蝦養(yǎng)殖池中對促進(jìn)水產(chǎn)餌料微藻繁殖的效果試驗(yàn)(1)試驗(yàn)材料本發(fā)明制劑(即試驗(yàn)例1中之制劑A)。對照組用試驗(yàn)例中之對照組料。
(2)試驗(yàn)蝦池海水池，每個池1000m2，水深1.2m，養(yǎng)有東方對蝦，每組均設(shè)2個重復(fù)。
(3)試驗(yàn)時(shí)間2004年8月7日～14日，共7d。其中1d為陰天，其他6d為晴天。平均水溫26.7℃。
(4)試驗(yàn)方法制劑A和對照組料的稀釋方法及用量同試驗(yàn)例1。統(tǒng)計(jì)水中微藻總數(shù)，不分類。
試驗(yàn)結(jié)果見表2表2加入各制劑7d后對蝦池水中微藻數(shù)目(X±SD，n＝2)

從表2可見本發(fā)明制劑(制劑A)對促進(jìn)蝦養(yǎng)殖池水中微藻的繁殖有明顯的促進(jìn)作用(制劑A與對照組比較，p＜0.01，t檢驗(yàn))。
上述2個試驗(yàn)例表明，使用本發(fā)明制劑能顯著促進(jìn)水產(chǎn)餌料微藻的繁殖。
權(quán)利要求
1.一種促進(jìn)水產(chǎn)餌料微藻繁殖的制劑，其特征是，它由下述原料組成納豆芽孢桿菌(Bacillus natto)菌粉70％～80％，枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)18％～26％，維生素B6(含量98％)0.0000001％～0.0000003％，維生素B12(含量1％)0.0000001％～0.0000004％，維生素B2(含量98％)0.0000002％～0.0000005％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)水產(chǎn)餌料微藻繁殖的制劑，其特征是，水產(chǎn)餌料微藻包括藍(lán)藻門(Cyanophyta)，綠藻門(Chlorophyta)，金藻門(Choysophyta)和紅藻門(Rhodophyta)中的無毒微藻。它們可作為水產(chǎn)養(yǎng)殖動物和養(yǎng)殖水中的浮游小動物的餌料。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種促進(jìn)水產(chǎn)餌料微藻繁殖的制劑，其特征是，其中原料的用量為納豆芽孢桿菌菌粉76％，枯草芽孢桿菌菌粉23.9999995％，維生素B60.0000001％，維生素B120.0000002％，維生素B20.0000002％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的一種促進(jìn)水產(chǎn)餌料微藻繁殖的制劑，其特征是，納豆芽孢桿菌菌粉含納豆芽孢桿菌活菌10.0億個/g以上，枯草芽孢桿菌菌粉含枯草芽孢桿菌活菌12.0億個/g以上。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或3或4所述的一種促進(jìn)水產(chǎn)餌料微藻繁殖的制劑，其特征是，制備方法稱取經(jīng)粉碎并過60目篩的各原料納豆芽孢桿菌菌粉、枯草芽孢桿菌菌粉、維生素B6、維生素B12和維生素B2，合并，混勻，就制備成了本發(fā)明制劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5所述的一種促進(jìn)水產(chǎn)餌料微藻繁殖的制劑，其特征是，制劑經(jīng)500～1000倍水稀釋后潑灑入含餌料微藻的水產(chǎn)養(yǎng)殖水中或?qū)ｉT培養(yǎng)水產(chǎn)餌料微藻的水中，每立方米水體用制劑8～15mg。
全文摘要
一種促進(jìn)水產(chǎn)餌料微藻繁殖的制劑，屬微藻領(lǐng)域，涉及一種促進(jìn)水產(chǎn)餌料微藻繁殖的制劑，它由納豆芽孢桿菌菌粉、枯草芽孢桿菌菌粉、維生素B
文檔編號A01K61/00GK1765177SQ20041008623
公開日2006年5月3日 申請日期2004年10月28日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月28日
發(fā)明者王厚德, 張志棟, 王防修 申請人:張志棟