專利名稱：鑒別顯著影響豬背膘厚性狀的硬脂酰輔酶a去飽和酶基因單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一個(gè)鑒別顯著影響豬背膘厚性狀、可用于種豬遺傳改良的硬脂酰輔酶A去飽和酶基因單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)。
背景技術(shù)：
硬脂酰輔酶A去飽和酶(Stearoyl-CoA desaturase，SCD)是合成單不飽和脂肪酸的限速酶(rate-limiting enzyme)，它位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，主要催化飽和性脂肪酸一硬脂酰輔酶A(C16:0)和棕櫚酰輔酶A(C18:0)在第9和10碳原子間導(dǎo)入氫鍵，分別形成單不飽和脂肪酸—油酸(16:1)和棕櫚酸(C18:1)。
由于細(xì)胞內(nèi)飽和性脂肪酸與不飽和性脂肪酸的比例顯著影響著細(xì)胞膜的流體性(membrane fluidity)，進(jìn)而影響信號(hào)傳導(dǎo)，因而在人和小鼠中SCD酶活性的改變與高血壓、神經(jīng)性疾病、免疫失調(diào)和癌癥等疾病密切關(guān)聯(lián)。此外，SCD基因影響肥胖度。SCD基因缺失型小鼠(SCD-/-)盡管在高能量飼糧條件下增加了采食，體脂的沉積卻大大減少。瘦蛋白(leptin)缺失型小鼠(ob/ob)表現(xiàn)出極度肥胖的表型，而將ob/ob小鼠與SCD-/-小鼠雜交，形成的SCD和瘦體素Leptin基因雙缺失小鼠(ob/ob，SCD-/-)肥胖的表型消失。Cohen等通過(guò)基因表達(dá)芯片技術(shù)揭示出SCD是Leptin信號(hào)調(diào)控通路中一個(gè)重要成分，Leptin在抑制動(dòng)物進(jìn)食的同時(shí)，通過(guò)阻抑SCD基因的表達(dá)，促進(jìn)了機(jī)體的能量代謝，進(jìn)而使體重減輕，體脂沉積減少。當(dāng)SCD基因的表達(dá)被阻抑時(shí)，胞內(nèi)飽和性脂肪酸的含量上升，抑制己酰輔酶A羧化酶(Acetyl-CoA carboxylase，ACC)的活性，阻止丙二酰輔酶A(Malonyl CoA)的形成。丙二酰輔酶A阻抑著胞間游離脂肪酸向線粒體運(yùn)輸，進(jìn)行氧化反應(yīng)。因而，SCD酶活性下降可促進(jìn)脂肪酸的氧化分解。這些研究表明SCD是調(diào)控脂肪代謝的一種關(guān)鍵酶，SCD基因是研究哺乳動(dòng)物脂肪沉積性狀的理想侯選基因之一。
近幾年來(lái)，SCD基因相繼在小鼠、人、山羊、綿羊、牛等哺乳動(dòng)物中被定位、分離和鑒別。目前在小鼠中克隆了五種SCD基因，具有組織表達(dá)特異性。SCD功能基因定位于人10號(hào)染色體上，在17號(hào)染色體上存在一個(gè)假基因。綿羊和山羊的SCD基因定位于22q21。Taniguchi等在牛SCD基因開(kāi)放閱讀框架(ORF)中鑒別到3個(gè)SNPs位點(diǎn)，其中一個(gè)錯(cuò)義突變導(dǎo)致所編碼的氨基酸由纈氨酸突變?yōu)楸彼?。日本褐?Japanese Black Cattle)在此三個(gè)位點(diǎn)上表現(xiàn)為兩類單倍型(A和B型)，其中A型個(gè)體肌內(nèi)脂肪的單不飽和脂肪酸含量顯著高于B型個(gè)體，熔點(diǎn)卻低于B型個(gè)體(P＜0.001)[5]。申請(qǐng)者開(kāi)展了豬SCD基因的精細(xì)定位、分離、克隆、SNP多態(tài)位點(diǎn)的鑒別及其影響脂肪沉積性狀的研究，以期為種豬脂肪沉積性狀的選育改良提供新的分子育種的手段。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一個(gè)鑒別顯著影響豬背膘厚性狀的硬脂酰輔酶A去飽和酶基因單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)，通過(guò)現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)檢測(cè)該多態(tài)位點(diǎn)，利用標(biāo)記輔助選擇(MAS)選擇有利的等位基因型個(gè)體留種，可以顯著改善種群背膘厚性狀，提高瘦肉產(chǎn)出率。
本發(fā)明的第二個(gè)目的是硬脂酰輔酶A去飽和酶基因單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)在選育改良種豬中的應(yīng)用。
本發(fā)明的第一個(gè)目的是這樣實(shí)現(xiàn)的(1)、細(xì)菌人工染色體(PAC)文庫(kù)的篩選申請(qǐng)者根據(jù)人、羊SCD基因的同源區(qū)域及豬EST(表達(dá)序列標(biāo)簽)序列設(shè)計(jì)引物對(duì)1(F5’-ATC CGA GAG CCA AGATGC C-3’；R5’-ATG GTA GTG GTG GTT GTG TAG-3’)，擴(kuò)增含完整第一內(nèi)含子的591bp DNA(脫氧核糖核酸)片段。經(jīng)DNA測(cè)序后，再次設(shè)計(jì)豬SCD基因特異性引物對(duì)2(5’-CAC AAC TAC CAC CAC ACC-3’；R5’-GTC ATA AGC CAG ACC CAG-3’)，利用該對(duì)引物篩選豬PAC基因組DNA文庫(kù)，獲得含全長(zhǎng)SCD基因、插入片段長(zhǎng)100kb的單個(gè)PAC陽(yáng)性克隆(TAIGP714K1477)；(2)、豬全長(zhǎng)SCD基因的克隆陽(yáng)性PAC克隆DNA經(jīng)AccI，BamHI，HindIII，KpnI，PntI，SacI和XbaI限制性酶切后，與引物對(duì)1和2的擴(kuò)增產(chǎn)物雜交，選取有雜交信號(hào)的限制性片段，將其克隆至pGEM-4Z載體，采用重疊群(contig)構(gòu)建和亞克隆測(cè)序技術(shù)，獲得了20985bp的SCD基因全長(zhǎng)DNA序列(GenBank序列號(hào).AY487830)；(3)、豬全長(zhǎng)SCD基因mRNA(信使核糖核酸)的分離利用Trizaol試劑提取肝臟總RNA，采用Super SMARTTMPCR cDNA Synthesis Kit試劑盒合成全長(zhǎng)cDNA。通過(guò)5’RACE(Rapid Amplification of cDNA End，快速擴(kuò)增cDNA末端)和3’RACE技術(shù)，分離了豬SCD基因全長(zhǎng)5034bp的cDNA序列(GenBank序列號(hào).AY487830)，由此鑒別了豬SCD基因的詳細(xì)結(jié)構(gòu)。5’RACE的引物為5’-ATG GCGTAA CGA AGA AAG GTG-3’；3’RACE的引物為Outer primer，5’-CGA TGT CAAGGT TAC ACG GGT GG-3’；Inner primer，5’-GTG CCA CTG ACT TGC TAT GTG ACC-3’；(4)、外顯子2上SNP C3101T的鑒別根據(jù)豬SCD基因的全長(zhǎng)DNA序列，設(shè)計(jì)引物對(duì)3(F5’-GCA CTT CCA CTC TCT TTC-3’；R5’-GCT GGT GTT TCT ACTCTG-3’)，該對(duì)引物的395bp擴(kuò)增片段包括整個(gè)外顯子2。以中國(guó)二花臉豬×白色杜洛克豬資源家系群體的20個(gè)始祖?zhèn)€體(2個(gè)白色杜洛克個(gè)體，18個(gè)二花臉個(gè)體)DNA為模板，利用引物對(duì)3進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將PCR產(chǎn)物純化后，直接測(cè)序，比較不同個(gè)體的測(cè)序結(jié)果，鑒別到在第3101號(hào)核苷酸(若根據(jù)SCD基因開(kāi)放閱讀框、從起始密碼子算起，則為第641號(hào)核苷酸)存在一個(gè)由胞嘧啶(C)突變?yōu)樾叵汆奏?T)的多態(tài)性，即SNP C3101T位點(diǎn)，該位點(diǎn)為1tctagaccct ttgaatttcc acttaaattt tagaatctgc ttgtctattt cctcaaagaa61 atctgttgga tttctatagt gattaaatta atctatagat caacactgag tctgtccatt121 tatgaacaca gaatataaca aattcttttt ttctctctat ttaagagttt taaagttttt181 ctcagcattg ttttgatact ttcagtgtag ctatcctata aacatttaga tttattcttt241 gtgacatttt tgatgttctt ttaatttttg tttttttagg gccgcacctg tggcacatga381 agttcctggg ccaggggtcg aatcagagcc aaagctacca gcctatacca ccaccatagc361 aacgccaggt ctggaccgca tctgtgatgt acgccggagc tcgtgacaat gccagatcct421 taacccactg agcaaggcca gcatgtaacc cacaacctcg tggacactag tcgagttctt481 aacccgctga gccacaagga gaactccatt tttgatgcta ttttaaacag tatattttaa541 atttcattct gcaattgttt tttaatagaa tataggacag aataattttt ttatactggt601 ttctatcttg acctttctaa attcacttac caattttgac acttttttgg tggtagattc661 tatacatttt tcatacacac agttaggtct tctgcaaata ataacagttt ctttcttctt721 ttcctatctt tatatctttc atttcttttt tcctgtccat catgcaacct aggatttcta781 gcacaatgtt gactagaaat ggtagacgat tatatgcttg cctgttctct taaggggaaa841 tttttttttt ttttttttgg tctttttaag cctgcaccca tggctaggaa ctgtagctgc901 tggcctatgc cacagccaca gcaacactgg atccgaactg tatctgtgac ctacaccaca961 gctcatggct atgccagatc cttaacccac tgagcgaggc cagggatcga accctcgacc1021 tcacggttcc tagtcggatt cgtctccgct gcgccacaac gggaactccc acgactaatg1081 attaagtaaa atgattcttg tggactgact tgcctaataa ttctatagct gatagctatt1141 tttgtcccac ttacaagtcc ttttgcctgc ttctggatga aggcacacgc tgcgcttcct1201 cccttttctc atgaaagcca ttccaaaatt acaactcgac aatctgaaga atttccaaaa1261 catcccgcac acgttcgggg tggggggggg gcgtgggcac aaggacggga tcgctcactg1321 gtgcctggcg gcgaacgtcc cctgctgggc ttgcctagta gctgaacgcc gtgcgcgcgt1381 gcaggtccac acatctatct atgcatctac gtgtgtgtac acggctgccg gcctggagac1441 cggcgagttc agcagtacgc atctatcgcc ccgccgccag tgggcggcgc agagccattg1501 ttccgccgcc ggccgaccct cagcccctgc ggcacgcgcg ttcgtcacgg agggaggtgg1561 ggcttcgccg ggcccccggc ccccaacccg gggtttgaag gcacgtctcc ccctcccacg1621 cgtctccgcg agctagaagg cgggagtgga gttgtgcgta gcggtcgccc gcgcggcttc1681 acccacactt tccccggaaa cttccctagt gcccatcctt tcgcgaagtg ccccagggcc1741 agtcctgggc tagcacccac ctcccacccc cctactgagt cctcttcctc ttccagggaa1801 gacgctctcg agcgcctccg aggaggcagg acgccgggca gaagcccagc ggccggtgga1861 agagaagctg aggaggagaa agggagggga gggggagtga ggagctcgcg gcagagggaa1921 cagcagattg cgccgagcca atggcaacgg caggacgagg tggcaccaaa ttcccttcgg1981 ccaatgacgc gccagagtct acagaagccc attagcattt ccccaggggc aggggcagag2041 gcaggggctg cggagaccga gccgcggagt gtctgcagca tccagttttt gcgtctccgg2101 cccccagcaa gccccggctc tctgtctcct cccctctccc gcccatgcgg ttctcccacg2161 gtgagccaac tctgcgcact ttgccccttc ttggcagcga ataaaagggg tcagaggaaa2221 tacaggatac ggtcgcccac tgccagctct agcctttaaa tacccagcct ggggagaccc2281 acgcacagca ggtcgggtgc agacaccgac ccaacgtgca gcaaagggtt ccgagcgcag2341 catcgctgat ctccgcgcaa gagccggctc cagcactagt ctacgctcag tgcggtctgc2401 cacgaactcc tccctgaagt ctcatccctg ggaaagtgat cccaacgtcc gagagcccag2461 atgccggccc acttgctgca agaggaggtg agtttccaag taatggcccc cagaccgcgg
2521 gctcgccagt gctggttggg cttctaggtg actcggtgta gaagagagtt gagatcgccg2581 aggacagcca cctttttcga gttgtatagt cttcagtttg ttgggaatgt ggattgtaat2641 ttgggaactt agttctccaa cttttgtttc ctaaagcttc aaagaaaaat ctggtggtac2701 ctgtaccctg atgtgtgtag gcatgcgggc tttcctttgt gtgtttgaag gggtgcgagt2761 gttttacccc tctatttccc cttcccctga ggtttcaccc tcctccccaa tttctccgca2821 cagttcctgg ggacttgcgt ctcttccatc taggatagac cttgccctca ggtaacctgg2881 gtattggggc caggtctgtg cctatacccc gcccttcccc cagctagacc agggagtgaa2941 gtggccccta gtgtctccac gtgtcctccc ctctctccca gctctgcact tccactctct3001 ttcagatctc tagctcctac acaaccacca ctaccatcac agcaccttcc tccagggtcc3061 tgcagaatgg agggggcaag ttggagaaga ctccccaata cgtggaagaa gacatccgcc3121 ctgaaatgaa agatgacatc tatgacccaa cctaccagga taaggagggc ccaaggccca3181 agcttgaata tgtttggaga aacatcatcc tcatgagtct gctacacttg ggagccctgt3241 atgggatcat attgatcccc acctgcaaga tatacacctt gctctggggt aagaggtccc3301 cttgtcctcc tgtctcagta tcccaggttc tctccactct tttaatacag tagcaactta3361 cacagagtag aaacaccagc ccctccaggc cgaggttttt ccaaccattt ctcttaggtg3421 ttgtggtggg ctgggaaggg agtctagggg gtttgggatg caggagtgtc gattctgggg3481 cctttaattt gggggggggg ttggagaggg agccctggga ccatgggcca caggctttga3541 agtgagtaga tctgtgccag ggagtcagct tttctgtttc aagtcatttt cttgactgct3601 tgtcccagcc ctgccagcct agaaagaatc aaggccctta cctggatgca tgggaacatg3661 gggctagact agtgtgactt tagagggcac atgctgggta tagtcacggg gtagcaagag3721 aaactactca ggaagagggt taagcagaag aggggggaag agagctgtgg tcatccatga3781 aattattttg ccctgatcct tagccttatc aggctcctta attacacaga cagaggaagg3841 cggctcctgc ataactcatg ttacatggat gtcttgctct gtgactccac gtgggtctcc3901 agggaactgc acatgccact caagaaaatg ttctaatgaa ataaggttaa agaaacgttt3961 cctgccccat tccccaccca tcctgctcca gcccctctcc cctgatgcca ggagtgcctc；(5)、SNP C3101T的判型該多態(tài)位點(diǎn)改變了Ta/iI限制性內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)，可采用PCR-TaiI-RFLP(Restriction fragment length polymorphism，RFLP限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性)法判定該位點(diǎn)的基因型。利用引物對(duì)3擴(kuò)增個(gè)體基因組DNA，25μl PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))反應(yīng)體系中包括50ng基因組DNA，1×PCR buffer(緩沖液)(QIAGEN，Hilden，Germany)，1.5mM MgCl2，100μMofdNTP(雙脫氧核苷酸)，10pmol引物，1.5單位DNA聚合酶(Taq酶)。循環(huán)參數(shù)為95℃，5min；92℃，30s，54℃，30s，72℃，30s；35個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10min。利用Ta/iI酶切PCR產(chǎn)物，25μl酶切反應(yīng)體系含15μlPCR產(chǎn)物，2單位PsyI酶及配套1×buffer(MBI，Shanghai，China)，65℃溫育3小時(shí)，經(jīng)1.5％瓊脂糖凝膠電泳分離、溴化乙錠染色拍照留底。TT型為395bp DNA片段；CC型為280和115bpDNA片段，TC雜合子則表現(xiàn)為395、280和115bp三條DNA片段。
本發(fā)明的第二個(gè)目的是這樣實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明利用這個(gè)多態(tài)位點(diǎn)及側(cè)翼DNA序列信息，采用分子生物技術(shù)鑒別個(gè)體基因型，針對(duì)脂肪沉積性狀選育改良種豬。
本發(fā)明鑒別了一個(gè)影響豬背膘厚性狀的硬脂酰輔酶A去飽和酶(SCD)基因單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點(diǎn)，通過(guò)現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)檢測(cè)該多態(tài)位點(diǎn)，利用標(biāo)記輔助選擇(MAS)選擇有利的等位基因型個(gè)體留種，可以顯著改善種豬群體背膘厚性狀，提高瘦肉產(chǎn)出率。


圖1為本發(fā)明鑒別的豬SCD基因SNP C3101T位點(diǎn)的PCR-TaiI-RFLP判型圖，其中2、3、5、6、7、9、10、11、12、13號(hào)個(gè)體為CC型，14號(hào)個(gè)體為T(mén)T型，1、4、8個(gè)體為T(mén)C型。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例并對(duì)照附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。
選擇種豬核心群個(gè)體，采用上述的PCR-TaiI-RFLP法鑒別SCD基因SNPC3101T位點(diǎn)的基因型，選擇有利等位基因型個(gè)體留種，群體繼代選育后改良種群的脂肪沉積性能。
實(shí)施例利用自身構(gòu)建的、以白色杜洛克和中國(guó)二花臉豬為祖代親本、用于功能基因定位的豬資源家系為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。132頭資源家系第二代(F2代)公豬個(gè)體46天斷奶，閹割后，在保育欄養(yǎng)至120天，日糧營(yíng)養(yǎng)水平為21％粗蛋白、3300 KJ消化能、1.25％賴氨酸；然后轉(zhuǎn)送測(cè)定站，每欄關(guān)10-12頭豬，采用自由采食飼養(yǎng)方式，日糧營(yíng)養(yǎng)水平為16％粗蛋白、3100KJ消化能、0.78％賴氨酸。采用ACEMA64電子喂料自動(dòng)識(shí)別系統(tǒng)(ACEMO，Pontivy Cedex，F(xiàn)rance)測(cè)定記錄日采食量、飼料轉(zhuǎn)化率等性狀。在240日齡時(shí)將測(cè)定個(gè)體屠宰，測(cè)定記錄240日齡體重時(shí)的肩部、第6-7肋骨、最后肋骨及髖關(guān)節(jié)處的四點(diǎn)背膘厚，腹部脂肪重，板油重，花油重等脂肪沉積性狀。
采用上述PCR-TaiI-RFLP法對(duì)132頭F2個(gè)體進(jìn)行SNP C3101T基因型判定，采用SAS軟件包(version 8.2，SAS Inc.，2001)的FREQ程序、GLM統(tǒng)計(jì)模型分析該位點(diǎn)的遺傳變異與脂肪沉積性狀的相關(guān)性。統(tǒng)計(jì)模型中以基因型為固定效應(yīng)、胴體重為協(xié)變量。統(tǒng)計(jì)結(jié)果如表1所示，從中可見(jiàn)，該位點(diǎn)與背膘厚性狀顯著相關(guān)，CC型與TC型個(gè)體在第6-7肋骨背膘厚、最后肋骨背膘厚及四點(diǎn)均膘厚差異顯著(P＜0.05)，CC型個(gè)體的背膘更薄，是瘦肉型豬的選育改良所需的基因型個(gè)體。在商業(yè)種豬核心群中，繼代選育CC型個(gè)體，可以進(jìn)一步改良種群的背膘厚性狀，提高瘦肉產(chǎn)出率。
表1自身淬滅引物和其它熒光探針技術(shù)的比較

本發(fā)明所述試劑盒利用自身淬滅引物技術(shù)檢測(cè)分泌物中淋病奈瑟菌，并經(jīng)檢測(cè)淋病患者標(biāo)本，獲得了很好的檢測(cè)效果，該試劑盒能夠準(zhǔn)確、靈敏、快速檢測(cè)淋病奈瑟菌，并能夠極大地降低成本。
以下結(jié)合具體實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。

圖1為自身淬滅引物熒光強(qiáng)度變化的原理圖，其中橫坐標(biāo)代表自身淬滅引物構(gòu)象，縱坐標(biāo)代表相對(duì)熒光強(qiáng)度。該圖表明，隨著自身淬滅引物構(gòu)象的變化，相對(duì)熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)。
圖2為將本發(fā)明試劑盒陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)模板進(jìn)行梯度稀釋后，實(shí)施熒光定量PCR所得熒光曲線，橫坐標(biāo)代表循環(huán)數(shù)，縱坐標(biāo)代表相對(duì)熒光強(qiáng)度，圖中平行于橫坐標(biāo)的直線代表熒光閾值。
圖3為將本發(fā)明試劑盒陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)模板進(jìn)行梯度稀釋后，實(shí)施熒光定量PCR所得標(biāo)準(zhǔn)曲線，橫坐標(biāo)代表不同稀釋度陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)模板的濃度，縱坐標(biāo)代表熒光閾值。
權(quán)利要求
1.一個(gè)鑒別顯著影響豬背膘厚性狀的硬脂酰輔酶A去飽和酶基因單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)，其特征在于該多態(tài)位點(diǎn)序列如下1 tctagaccct ttgaatttcc acttaaattt tagaatctgc ttgtctattt cctcaaagaa61 atctgttgga tttctatagt gattaaatta atctatagat caacactgag tctgtccatt121 tatgaacaca gaatataaca aattcttttt ttctctctat ttaagagttt taaagttttt181 ctcagcattg ttttgatact ttcagtgtag ctatcctata aacatttaga tttattcttt241 gtgacatttt tgatgttctt ttaatttttg tttttttagg gccgcacctg tggcacatga301 agttcctggg ccaggggtcg aatcagagcc aaagctacca gcctatacca ccaccatagc361 aacgccaggt ctggaccgca tctgtgatgt acgccggagc tcgtgacaat gccagatcct421 taacccactg agcaaggcca gcatgtaacc cacaacctcg tggacactag tcgagttctt481 aacccgctga gccacaagga gaactccatt tttgatgcta ttttaaacag tatattttaa541 atttcattct gcaattgttt tttaatagaa tataggacag aataattttt ttatactggt601 ttctatcttg acctttctaa attcacttac caattttgac acttttttgg tggtagattc661 tatacatttt tcatacacac agttaggtct tctgcaaata ataacagttt ctttcttctt721 ttcctatctt tatatctttc atttcttttt tcctgtccat catgcaacct aggatttcta781 gcacaatgtt gactagaaat ggtagacgat tatatgcttg cctgttctct taaggggaaa841 tttttttttt ttttttttgg tctttttaag cctgcaccca tggctaggaa ctgtagctgc901 tggcctatgc cacagccaca gcaacactgg atccgaactg tatctgtgac ctacaccaca961 gctcatggct atgccagatc cttaacccac tgagcgaggc cagggatcga accctcgacc1021 tcacggttcc tagtcggatt cgtctccgct gcgccacaac gggaactccc acgactaatg1081 attaagtaaa atgattcttg tggactgact tgcctaataa ttctatagct gatagctatt1141 tttgtcccac ttacaagtcc ttttgcctgc ttctggatga aggcacacgc tgcgcttcct1201 cccttttctc atgaaagcca ttccaaaatt acaactcgac aatctgaaga atttccaaaa1261 catcccgcac acgttcgggg tggggggggg gcgtgggcac aaggacggga tcgctcactg1321 gtgcctggcg gcgaacgtcc cctgctgggc ttgcctagta gctgaacgcc gtgcgcgcgt1381 gcaggtccac acatctatct atgcatctac gtgtgtgtac acggctgccg gcctggagac1441 cggcgagttc agcagtacgc atctatcgcc ccgccgccag tgggcggcgc agagccattg1501 ttccgccgcc ggccgaccct cagcccctgc ggcacgcgcg ttcgtcacgg agggaggtgg1561 ggcttcgccg ggcccccggc ccccaacccg gggtttgaag gcacgtctcc ccctcccacg1621 cgtctccgcg agctagaagg cgggagtgga gttgtgcgta gcggtcgccc gcgcggcttc1681 acccacactt tccccggaaa cttccctagt gcccatcctt tcgcgaagtg ccccagggcc1741 agtcctgggc tagcacccac ctcccacccc cctactgagt cctcttcctc ttccagggaa1801 gacgctctcg agcgcctccg aggaggcagg acgccgggca gaagcccagc ggccggtgga1861 agagaagctg aggaggagaa agggagggga gggggagtga ggagctcgcg gcagagggaa1921 cagcagattg cgccgagcca atggcaacgg caggacgagg tggcaccaaa ttcccttcgg1981 ccaatgacgc gccagagtct acagaagccc attagcattt ccccaggggc aggggcagag2041 gcaggggctg cggagaccga gccgcggagt gtctgcagca tccagttttt gcgtctccgg2101 cccccagcaa gccccggctc tctgtctcct cccctctccc gcccatgcgg ttctcccacg2161 gtgagccaac tctgcgcact ttgccccttc ttggcagcga ataaaagggg tcagaggaaa2221 tacaggatac ggtcgcccac tgccagctct agcctttaaa tacccagcct ggggagaccc2281 acgcacagca ggtcgggtgc agacaccgac ccaacgtgca gcaaagggtt ccgagcgcag2341 catcgctgat ctccgcgcaa gagccggctc cagcactagt ctacgctcag tgcggtctgc2401 cacgaactcc tccctgaagt ctcatccctg ggaaagtgat cccaacgtcc gagagcccag2461 atgccggccc acttgctgca agaggaggtg agtttccaag taatggcccc cagaccgcgg2521 gctcgccagt gctggttggg cttctaggtg actcggtgta gaagagagtt gagatcgccg2581 aggacagcca cctttttcga gttgtatagt cttcagtttg ttgggaatgt ggattgtaat2641 ttgggaactt agttctccaa cttttgtttc ctaaagcttc aaagaaaaat ctggtggtac2701 ctgtaccctg atgtgtgtag gcatgcgggc tttcctttgt gtgtttgaag gggtgcgagt2761 gttttacccc tctatttccc cttcccctga ggtttcaccc tcctccccaa tttctccgca2821 cagttcctgg ggacttgcgt ctcttccatc taggatagac cttgccctca ggtaacctgg2881 gtattggggc caggtctgtg cctatacccc gcccttcccc cagctagacc agggagtgaa2941 gtggccccta gtgtctccac gtgtcctccc ctctctccca gctctgcact tccactctct3001 ttcagatctc tagctcctac acaaccacca ctaccatcac agcaccttcc tccagggtcc3061 tgcagaatgg agggggcaag ttggagaaga ctccccaata cgtggaagaa gacatccgcc3121 ctgaaatgaa agatgacatc tatgacccaa cctaccagga taaggagggc ccaaggccca3181 agcttgaata tgtttggaga aacatcatcc tcatgagtct gctacacttg ggagccctgt3241 atgggatcat attgatcccc acctgcaaga tatacacctt gctctggggt aagaggtccc3301 cttgtcctcc tgtctcagta tcccaggttc tctccactct tttaatacag tagcaactta3361 cacagagtag aaacaccagc ccctccaggc cgaggttttt ccaaccattt ctcttaggtg3421 ttgtggtggg ctgggaaggg agtctagggg gtttgggatg caggagtgtc gattctgggg3481 cctttaattt gggggggggg ttggagaggg agccctggga ccatgggcca caggctttga3541 agtgagtaga tctgtgccag ggagtcagct tttctgtttc aagtcatttt cttgactgct3601 tgtcccagcc ctgccagcct agaaagaatc aaggccctta cctggatgca tgggaacatg3661 gggctagact agtgtgactt tagagggcac atgctgggta tagtcacggg gtagcaagag3721 aaactactca ggaagagggt taagcagaag aggggggaag agagctgtgg tcatccatga3781 aattattttg ccctgatcct tagccttatc aggctcctta attacacaga cagaggaagg3841 cggctcctgc ataactcatg ttacatggat gtcttgctct gtgactccac gtgggtctcc3901 agggaactgc acatgccact caagaaaatg ttctaatgaa ataaggttaa agaaacgttt3961 cctgccccat tccccaccca tcctgctcca gcccctctcc cctgatgcca ggagtgcctc。
2.硬脂酰輔酶A去飽和酶基因單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)在脂肪沉積性狀選育改良種豬中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一個(gè)鑒別顯著影響豬背膘厚性狀的硬脂酰輔酶A去飽和酶基因單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)及應(yīng)用，它先進(jìn)行PAC文庫(kù)的篩選，再經(jīng)過(guò)豬全長(zhǎng)SCD基因的克隆、豬全長(zhǎng)SCD基因mRNA的分離、外顯子2上SNP C3101T的鑒別，最后經(jīng)過(guò)PCR－RFLP法等方法進(jìn)行SNP C3101T基因型判定。本發(fā)明通過(guò)現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)檢測(cè)該多態(tài)位點(diǎn)，利用標(biāo)記輔助選擇(MAS)選擇有利的等位基因型個(gè)體留種，可以顯著改善種豬群體背膘厚性狀，提高瘦肉產(chǎn)出率。
文檔編號(hào)A01K67/00GK1680600SQ200510023930
公開(kāi)日2005年10月12日 申請(qǐng)日期2005年2月5日 優(yōu)先權(quán)日2005年2月5日
發(fā)明者黃路生, 任軍, 丁能水, 艾華水, 麻駿武, 郭源梅, 陳從英, 高軍 申請(qǐng)人:江西農(nóng)業(yè)大學(xué)