專利名稱：生產(chǎn)復合氨基酸的地衣芽孢桿菌菌株及養(yǎng)殖用氨基酸液肥制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種生產(chǎn)復合氨基酸的地衣芽孢桿菌菌株及養(yǎng)殖用氨基酸液肥制備方法。
背景技術(shù)：
氨基酸液肥生產(chǎn)的關(guān)鍵是制作大量的復合氨基酸。制作復合氨基酸有多種技術(shù)，一是化學方法水解生物資源，如利用強酸強堿對角質(zhì)蛋白(毛發(fā)、羽毛、蹄角)、豆類、血粉、棉籽餅以及菜籽餅處理；二是利用發(fā)酵生產(chǎn)檸檬酸后的菌體；三是利用發(fā)酵方法生產(chǎn)氨基酸液肥。利用角質(zhì)蛋白或工業(yè)發(fā)酵后廢料水解，制作過程是利用高強度鹽酸或硫酸分解蛋白質(zhì)，處理過程中利用強酸強堿帶來的環(huán)境問題，而且原料成本和設(shè)備不利于大規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)于農(nóng)業(yè)。已經(jīng)有人研究通過好氧發(fā)酵產(chǎn)生復合氨基酸。如專利95119430在酸處理角質(zhì)蛋白加入產(chǎn)角蛋白酶米曲霉，使水溶蛋白轉(zhuǎn)化為氨基酸，最后配入植物和人體必需的微量元素，可以生產(chǎn)對植物有促長作用營養(yǎng)劑。專利92110718培養(yǎng)生產(chǎn)一種或多種氨基酸的短桿菌屬和棒狀桿菌屬菌株發(fā)酵制備氨基酸。專利94102211一種以酒廠生產(chǎn)下腳料酒糟為主要原料發(fā)酵制取氨基酸工藝。專利96109736是采用混合菌種制備含磷氨基酸液肥的制造方法。專利95197497是以微桿菌屬的菌株產(chǎn)生有機酸和氨基酸的方法。上述的專利提出了有效的復合氨基酸生產(chǎn)的技術(shù)，制作為氨基酸液肥后可以使用在農(nóng)業(yè)。農(nóng)業(yè)氨基酸肥大部分用于葉面肥和經(jīng)濟價值高的作物，這些氨基酸液肥由于成本限制，不適合用于水產(chǎn)養(yǎng)殖的大面積水體。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種生產(chǎn)復合氨基酸的地衣芽孢桿菌菌株及養(yǎng)殖用氨基酸液肥制備方法，利用誘變篩選得到的地衣芽孢桿菌菌種，在無碳源高濃度無機鹽條件下常溫厭氧得到復合氨基酸液，再復配銨鹽和磷酸鹽形成氨基酸液肥，按照每畝每米水深1-10公斤投放于對蝦養(yǎng)殖水體，可以有效促進水體藻類生長，也適合其它需要復合氨基酸作為促長物質(zhì)的場合。
本發(fā)明誘變選育的地衣芽孢桿菌菌株，可以在4-6.5％碳酸氫銨、0.4-2％磷酸鹽和無糖類、無脂肪酸和有機酸的條件下生長；在4-6.5％碳酸氫銨、0.4-2％磷酸鹽和無糖類、無脂肪酸和有機酸以及厭氧、溫度為25℃-35℃的條件下產(chǎn)生氨基酸并分泌到細胞外，不產(chǎn)生使培養(yǎng)液發(fā)臭的胺類物質(zhì)。
本發(fā)明利用該地衣芽孢桿菌菌種生產(chǎn)氨基酸液肥的方法包括如下步驟(1)地衣芽孢桿菌菌種利用常規(guī)營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)，調(diào)整pH7.0-8.0，在121℃滅菌25-30分鐘，接種后在28℃-32℃、125轉(zhuǎn)/分搖床培養(yǎng)24-48小時，培養(yǎng)物加20％甘油作為保存菌種，于-20℃保存，每半年轉(zhuǎn)種一次。
(2)有氧發(fā)酵增加菌種量取NH4Cl0.5克-1克，NaCl0.3克-1克，K2HPO40.5克-1克，KH2PO40.1克-1克，MgSO4·7H2O0.1克-1克，CaCl20.1克-0.3克，酵母提取物0.1克-0.5克，羽毛蛋白粉5克-15克，水1000毫升，調(diào)pH7.4-8.0；擴大用量按照同等比例配制；按照常規(guī)滅菌，冷卻后按1％接種菌種，在30℃-35℃有氧發(fā)酵24-48小時，得到培養(yǎng)液；羽毛蛋白粉2-2.5倍30％-40％鹽酸混合，在121℃，蒸汽消毒器滅菌30-60分鐘，或者油浴126℃隔油處理60-120分鐘，用4molNaOH調(diào)pH7，得到處理羽毛粉；(8)在培養(yǎng)液中加入2％-6.5％碳酸氫銨(W/V)，0.4-2％的滅菌磷酸二氫鉀或過磷酸鈣(W/V)，溶解并攪拌均勻，以10升-20升容器分裝，密封后，在溫度28℃-35℃放置5-10天，得復合氨基酸液；(4)在得到的復合氨基酸液中加入7％-10％的碳酸氫銨和0.7％-2％磷酸二氫鉀或過磷酸鈣，得到氨基酸液肥，作為產(chǎn)品可以保存6個月。
本發(fā)明和同類方法比較，本發(fā)明使用的原料價格低廉，來源方便，產(chǎn)品工藝簡單，不需要大型發(fā)酵設(shè)備，大幅度減低成本，適合于大生產(chǎn)；產(chǎn)品不含任何不利于養(yǎng)殖水體及產(chǎn)品的成分，特別適合于對蝦養(yǎng)殖。


圖1是本發(fā)明高密度對蝦養(yǎng)殖水體葉綠素變化圖；圖2是本發(fā)明養(yǎng)殖水體溫度變化圖。
具體實施例方式
本發(fā)明的菌種源于中國普通微生物菌種保藏管理中心(北京，菌種為地衣芽孢桿菌Bαcillus licheniforms(Weigmann)Chester，菌株編號1.813)，取回實驗室后用95℃水浴處理40分鐘，馬上涂布于2216E海水平板培養(yǎng)基，經(jīng)30℃、24小時培養(yǎng)后，挑選菌落，菌落特征為不規(guī)則形。再用常規(guī)制作的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(蛋白胨5克，牛肉膏3克，酵母膏1克，氯化鈉5克，蒸餾水1000毫升，調(diào)整培養(yǎng)基pH7.4，常規(guī)滅菌)，在30℃，每分140轉(zhuǎn)搖床培養(yǎng)24小時。同上溫度處理，再用營養(yǎng)肉湯瓊脂平板純化菌種。挑選菌種，同上液體培養(yǎng)，培養(yǎng)液體加入20％甘油，保存于-20℃作為純化菌種。
在湛江海洋大學水產(chǎn)病害研究室對采用的菌種進行了再確定，確定特征如下細菌長桿狀或纖維狀，大小為1-10微米×0.3-0.8微米，運動，革蘭氏陽性，好氧和兼性厭氧，產(chǎn)芽孢，芽孢為短桿狀，單個，V-P測定陽性。利用丙酸鹽、葡萄糖、阿拉伯糖、木糖或甘露醇產(chǎn)酸、分解淀粉和明膠，在5℃和10℃不生長，在55℃有生長。根據(jù)上述生理化指標認為是Bαcilluslicheniforms。
誘變和選育利用滅菌(0.15MPa，25分鐘，250毫升瓶裝50毫升培養(yǎng)液)營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，在30℃每分鐘180轉(zhuǎn)搖床培養(yǎng)該菌種28小時，取培養(yǎng)物再接種到營養(yǎng)肉湯瓊脂上，在細菌對數(shù)期用無菌生理鹽水洗下菌苔，加入無菌玻璃株分散菌苔，再以每分3000轉(zhuǎn)離心，棄上清，沉淀物加入無菌生理鹽水制作菌懸液，血球計數(shù)板計數(shù)，調(diào)整濃度為108/毫升。取2-3ml置于無菌5厘米培養(yǎng)皿，放置于經(jīng)過無菌處理的家用微波爐(2450MHZ，700瓦)的中部，去蓋，照射10秒停止2秒，再照射10秒停止2秒，累積照射60秒-180秒。
取蛋白胨2克，酶母提取液0.1克，NaCl0.3克，K2HPO40.5克，KHXPO40.1克，MgSO4·7H2O0.3克，CaCl20.1克，蒸餾水800毫升，調(diào)整pH7.4，以壓力0.15MPa，15分鐘滅菌。分別制作12份，每份分別再增加10克，15克，20克，25克，30克，35克，40克，45克，5克，55克，60克，65克碳酸氫銨。
其中每種濃度碳酸氫銨分別溶解于200毫升蒸餾水中，經(jīng)過0.25微米孔徑的膜濾除菌，加入到已滅菌的上述制作的冷卻到室溫的培養(yǎng)液中，得到碳酸氫銨的梯度選育培養(yǎng)基。每次照射后菌懸液涂布于碳酸氫銨的梯度選育培養(yǎng)基，在避光厭氧30℃條件下培養(yǎng)誘變菌種36-48小時。在對每次培育結(jié)果重復一次照射后，逐步提高選育培養(yǎng)基銨鹽濃度，選擇可以在40克碳酸氫銨以上梯度選育培養(yǎng)基中生長的地衣芽孢桿菌繼續(xù)下面步驟。
再取蛋白胨2克，酶母提取液0.1克，NaCl0.3克，MgSO4·7H2O0.3克，CaCl20.1克，蒸餾水800毫升，分別制作5份，每份分別再增加4克，8克，12克，16克，20克磷酸鹽(磷酸二氫鉀或過磷酸鈣)，得到磷酸鹽的梯度選育培養(yǎng)基。調(diào)整pH7.4，以壓力0.15MPa，15分鐘滅菌。每一份再增加溶于200毫升蒸餾水中的45克同上膜濾除菌的碳酸氫銨，再接種選育的誘變菌種，接種量5％，靜置3-7日，顯微鏡血球計數(shù)板測定細菌生物量和紙層析茚三酮染色測定上清液中氨基酸。
如果不增加氨氮和無機磷，靜置厭氧發(fā)酵時，實驗菌的數(shù)量增加少，角蛋白水解時間長，產(chǎn)生的氨基酸數(shù)量少，而且需要增加溫度(如50℃)才能達到一定的分解速度。在本發(fā)明中，該菌在大于、等于4％氨鹽存在下，細菌數(shù)量增加迅速，氨基酸等物質(zhì)迅速增加，在常溫下(28℃-30℃)第7天時可以達到14克/升。實驗證明在這一過程中，由于培養(yǎng)基沒有其它碳水化合物作為碳源，細菌強化了對角蛋白的分解，同時在這一銨鹽和磷酸鹽濃度下產(chǎn)生并分泌氨基酸。
用次氯酸鈉-碘化鉀法以及鹽酸-乙醇滴定法測定胺，放棄產(chǎn)生胺使培養(yǎng)液發(fā)臭的菌株。通過以上誘變選育得到的菌株，在菌液中加入20％甘油，于-20℃保存。
菌種安全性實驗選育的菌種用營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)，培養(yǎng)后利用顯微鏡檢和稀釋100倍計數(shù)，使菌液濃度為109/毫升。以養(yǎng)殖缸中32升15‰潔凈海水充氣養(yǎng)殖6尾10厘米左右健康凡納濱對蝦，每組3個養(yǎng)殖缸，共3組。每日分別投放0.5毫升，1毫升，2毫升營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)菌液，連續(xù)25日，每2日交換5-6升潔凈海水。觀察凡納濱對蝦的攝食、蛻皮、生長、活動均為正常。
氨基酸測定由于培養(yǎng)物中氨氮的干擾，不能用常規(guī)測定氨基酸的方法測定其氨基酸，采用紙層析法進行常規(guī)半定量測定。新華層析濾紙28×28厘米，上樣量10-20微升，展層液為正丁醇∶冰乙酸∶乙醇∶水＝4∶1∶1∶2(V/V)，顯色劑為0.5％茚三酮丙酮溶液。洗脫液為75％乙醇和0.1％硫酸銅溶液(38∶2，V/V)。分別用不同的標準氨基酸(生化純)制作各種氨基酸的標準曲線和斜率。層析結(jié)果按照斑點減下，洗脫，在OD520測定光吸收值。根據(jù)不同Rf值辨別氨基酸，采用不同斜率計算含量。
HPLC定量測定氨基酸樣品液經(jīng)過高速離心機10000g離心，取上清液，0.25微米膜濾，經(jīng)過預處理，用高效液相色譜儀測定上清液氨基酸。
用福林酚方法測定蛋白質(zhì)含量。用磷鉬藍法測定磷的含量?？扇苄蕴怯昧蛩岜椒臃z測。
氨基酸液肥的制作利用搖床和500毫升瓶進行種子培養(yǎng)。菌種培養(yǎng)基組成為蛋白胨5克，牛肉膏3克，酵母膏1克，NaCl5克，水1000毫升。調(diào)整pH7.4，在121℃，滅菌25-30分鐘。接種后在28-32℃，125轉(zhuǎn)/分搖床培養(yǎng)24-48小時。
配制生產(chǎn)培養(yǎng)基，可以采用以下兩種培養(yǎng)基(1)羽毛粉用2-2.5倍30％-40％鹽酸混合，在121℃，0.15MPa滅菌30-60分鐘，或者油浴126℃隔油處理60-120分鐘，用4molNaOH調(diào)pH7，得到處理羽毛粉；取NH4Cl0.5克-1克，NaCl0.3克-1克，K2HPO40.5克-1克，KH2PO40.1克-1克，MgSO4·7H2O0.1g，CaCl20.3克，酵母提取液0.1克-0.5克，羽毛蛋白粉5克-15克，水1000毫升，調(diào)pH7.4-8.0，擴大用量按照同等比例配制。
(2)NH4Cl0.5克-1克，NaCl0.3克-1克，K2HPO40.5克-1克，KH2PO40.1克-1克，MgSO4·7H2O0.1-1克，CaCl20.1克-0.3克，酵母提取液0.1克-0.5克，羽毛蛋白粉5克-10克，蛋白胨3克-5克，水1000毫升，調(diào)pH7.4-8.0。擴大用量按照同等比例配制。
在100升發(fā)酵罐中，加入培養(yǎng)基成分和水，在121℃滅菌60分鐘，冷卻到30℃，接種菌種，接種量1-5％。在溫度30℃-35℃有氧發(fā)酵24-36小時。
在上述培養(yǎng)液中加入2％-6.5％碳酸氫銨(W/V)，0.4％-2％的滅菌磷酸二氫鉀或過磷酸鈣(W/V)，充分攪拌，分裝到10升容器中。加蓋密封，在溫度28℃-35℃或室溫，或更高溫度，放置5-10天，得到氨基酸液。產(chǎn)物有特定酯味，呈稠的流質(zhì)態(tài)，黑色或黃褐色，pH值為8。
在得到的氨基酸液中加入7％-10％的碳酸氫銨和0.7％-2％磷酸二氫鉀或過磷酸鈣，得到氨基酸液肥，作為產(chǎn)品可以保存6個月。使用的磷酸二氫鉀或過磷酸鈣在121℃滅菌30分鐘，碳酸氫銨要求選擇質(zhì)量良好，無其它雜質(zhì)者，直接使用。
利用高效液相譜定量檢查復合氨基酸液的氨基酸含量。


根據(jù)多個樣品的分析met，val，pro總是較高量，gly，ser，leu，ala在多數(shù)情況下有較高量，phe，cys以及l(fā)ys有中等量，arg和ile在少數(shù)情況下有一定量。其中his和asp的數(shù)量最少。
氨基酸液肥的安全性實驗以養(yǎng)殖缸中32升15‰潔凈海水充氣養(yǎng)殖6尾10厘米左右健康凡納濱對蝦，共3組，每組3個養(yǎng)殖缸。每日分別投放1毫升/升的制作的氨基酸液肥，連續(xù)25日，每2日交換5-6升潔凈海水。凡納濱對蝦的攝食、蛻皮、生長、活動均為正常。
實驗室培養(yǎng)微藻使用量富營養(yǎng)要求浮游藻類如海水小球藻1％(樣品/水，V/V)；中度營養(yǎng)要求如卵囊藻、骨條藻1‰(樣品/水，V/V)；貧營養(yǎng)要求如部分硅藻0.1‰。
對蝦養(yǎng)殖水體使用2-15ppm。潑灑。
產(chǎn)生的效果測定氨基酸液肥對于藻類生長的作用1、培養(yǎng)對蝦餌料微藻和養(yǎng)殖水浮游微藻。
潔凈海水煮沸后冷卻，分別加入適量微藻，1克/升氨基酸液肥，另外用同樣起始濃度的藻類加入無機鹽培養(yǎng)液，作為對照。培養(yǎng)結(jié)果用血球計數(shù)板在顯微鏡下計數(shù)。
表1氨基酸液肥對小球藻的培養(yǎng)

小球藻無機鹽培養(yǎng)液成分NaNO380毫克，K2HPO48毫克，F(xiàn)eC6H5O7(1％溶液)0.2毫升，VB1200微克，VB120.2微克，NaHCO30.5克。海水1000毫升。培養(yǎng)液體pH為7-8，培養(yǎng)溫度25-28℃，光照為2000-8000LUX，鹽度10。
表2氨基酸液肥對中肋骨條藻的培養(yǎng)

中肋骨條藻無機鹽培養(yǎng)液成分KNO360毫克，Na2HPO4·12H2O10毫克，Na2SiO310毫克，海水1000毫升。培養(yǎng)液體pH為8.4，培養(yǎng)溫度25-28℃，光照2000-8000LUX，鹽度25。
表3氨基酸液肥對湛江等鞭金藻數(shù)量的培養(yǎng)

湛江等鞭金藻無機鹽培養(yǎng)液成分NaNO330毫克，尿素15毫克，KH2PO46毫克，F(xiàn)eC6H5O7·5H2O0.5毫克，硅酸鈉1毫克，VB1200微克，VB120.2微克，海水1000毫升。培養(yǎng)液體pH為8.4，培養(yǎng)溫度25-28℃，光照2000-8000LUX，鹽度25。
此外，本產(chǎn)品對卵囊藻、微綠球藻、螺旋藻、扁藻、杜氏鹽藻有類似作用。
2、大面積使用狀況在湛江地區(qū)，4月水溫26-27℃，日照充分。對蝦養(yǎng)成期放苗前，每畝每米水深投放制作的氨基酸液肥2.5公斤，浮游植物在24小時后開始迅速增加，48小時使水色為淺綠色或淡茶色。72小時水體藻類達到104-105/毫升。投苗后，這種水色可以維持15-20日。
2001-2003年，在湛江遂溪下錄對蝦精養(yǎng)池使用了制作的氨基酸液肥，連續(xù)數(shù)年對蝦養(yǎng)殖成功率近于100％，而同樣蝦苗的對照池成功率低于50％。在整個對蝦養(yǎng)殖早中期，每15天-20天投放制作的氨基酸液肥一次，可以在整個養(yǎng)殖時期保持水色穩(wěn)定。其優(yōu)點有1、在對蝦養(yǎng)殖早期對水體投放無機營養(yǎng)鹽時迅速增加氨氮或亞硝氮濃度，容易使蝦苗產(chǎn)生病害，使用制作的氨基酸液肥避免了這一問題。2、能夠在15天-20天內(nèi)穩(wěn)定水色，保持浮游藻類數(shù)量。3、由于制作的氨基酸液肥屬于發(fā)酵物，投放后沒有污染。用化學方法制作的氨基酸液肥投放到對蝦養(yǎng)殖池，容易使水體變黑。2003年6月-9月，該對蝦精養(yǎng)池放苗13-15萬尾，早中期全部用制作的氨基酸液肥培養(yǎng)水色，前65天共使用4次，保持水色優(yōu)良。養(yǎng)殖時間為70天-90天，收獲對蝦64-76尾/公斤，產(chǎn)量每畝11500-1250公斤，每畝每茬有利潤12000左右。
2004年在湛江遂溪下錄和湛江東海島庵里對蝦精養(yǎng)池使用制作的氨基酸液肥的實驗結(jié)果良好，養(yǎng)殖得到成功。2004年7月東海島庵里收獲對蝦每畝1250-1777公斤，大小為90尾/公斤。
2004年2月13日至2004年5月31日在湛江東海島庵里對蝦精養(yǎng)池實驗使用制作的氨基酸液肥，除投餌外不再使用其它養(yǎng)殖用品和藥品。養(yǎng)殖前，投放制作的氨基酸液肥，每次每畝2.5公斤，放苗以后3天強化一次，以后每15日投放一次，共投放10次。從圖示可以看到，早期水溫18-25℃，高密度養(yǎng)殖水體藻類葉綠素在10-20微克/升，變化平穩(wěn)。在養(yǎng)殖中后期溫度升高到25-30℃，葉綠素增加，在實驗3#池(5畝面積)藻類葉綠素30-60微克/升，在實驗2#池(5畝面積)藻類葉綠素35-70微克/升。整個養(yǎng)殖過程沒有過濃的藻類突然死亡的“倒水”現(xiàn)象發(fā)生，保證了對蝦生長環(huán)境的穩(wěn)定，同時有力地抑制了水體病原菌的數(shù)量。
2004年2月13日至2004年5月31日實驗池藻類葉綠素數(shù)量圖，如圖1、2所示。
2004年5月31日對實驗池的水質(zhì)指標進行測定，數(shù)據(jù)說明養(yǎng)殖的水質(zhì)良好，數(shù)據(jù)如下實驗2#池pH為7.89，鹽度15，活性磷0.222毫克/升，總磷0.981毫克/升，化學耗氧量22.36毫克/升，硝酸氮0.008毫克/升，亞硝酸氮0.021毫克/升，氨氮0.805毫克/升，堿度2.891，硫化氫小于0.01毫克/升。
蛋白型好氧自養(yǎng)菌33000個/毫升，厭氧自養(yǎng)菌15000個/毫升，弧菌1475個/毫升，發(fā)酵型細菌2000個/毫升，硝化細菌2000個/毫升，葉綠素44.65毫克/升。
實驗3#池pH為7.86，鹽度13，活性磷0.210毫克/升，總磷1.2毫克/升，化學耗氧量29.19毫克/升，硝酸氮0.024毫克/升，亞硝酸氮0.074毫克/升，氨氮0.961毫克/升，堿度2.983，硫化氫小于0.01毫克/升。
蛋白型好氧自養(yǎng)菌10000個/毫升，厭氧自養(yǎng)菌10000個/毫升，弧菌1010個/毫升，發(fā)酵型細菌300個/毫升，硝化細菌2300個/毫升，葉綠素41.86毫克/升。
權(quán)利要求
1.一種生產(chǎn)復合氨基酸的地衣芽孢桿菌菌株，其特征是誘變選育的地衣芽孢桿菌菌株，可以在4-6.5％碳酸氫銨、0.4-2％磷酸鹽和無糖類、無脂肪酸和有機酸條件下生長；在4-6.5％碳酸氫鍍、0.4-2％磷酸鹽和無糖類、無脂肪酸和有機酸以及厭氧、溫度為25℃-35℃的條件下產(chǎn)生氨基酸并分泌到細胞外，不產(chǎn)生使培養(yǎng)液發(fā)臭的胺類物質(zhì)。
2.一種養(yǎng)殖用氨基酸液肥制備的方法，其特征是包括如下步驟(1)地衣芽孢桿菌菌株利用常規(guī)營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)，調(diào)整pH7.0-8.0，在121℃滅菌25-30分鐘，接種后在28℃-32℃、125轉(zhuǎn)/分搖床培養(yǎng)24-48小時，培養(yǎng)物加20％甘油作為保存菌種，于-20℃保存，每半年轉(zhuǎn)種一次；(2)有氧發(fā)酵增加菌種量取NH4Cl 0.5克-1克，NaCl 0.3克-1克，K2HPO40.5克-1克，KH2PO40.1克-1克，MgSO4·7H2O 0.1克-1克，CaCl20.1克-0.3克，酵母提取物0.1克-0.5克，羽毛蛋白粉5克-15克，水1000毫升，調(diào)pH7.4-8.0；擴大用量按照同等比例配制；按照常規(guī)滅菌，冷卻后按1％接種菌種，在30℃-35℃有氧發(fā)酵24-48小時，得到培養(yǎng)液；羽毛蛋白粉和2-2.5倍30％-40％鹽酸混合，在121℃，蒸汽消毒器滅菌30-60分鐘，或者油浴126℃隔油處理60-120分鐘，用4mol NaOH調(diào)pH7，得到處理羽毛粉；(8)在培養(yǎng)液中加入2％-6.5％碳酸氫銨(W/V)，0.4-2％的滅菌磷酸二氫鉀或過磷酸鈣(W/V)，溶解并攪拌均勻，以10升-20升容器分裝，密封后，在溫度28℃-35℃放置5-10天，得復合氨基酸液；(4)在得到的復合氨基酸液中加入7％-10％的碳酸氫鍍和0.7％-2％磷酸二氫鉀或過磷酸鈣，得到氨基酸液肥，作為產(chǎn)品可以保存6個月。
全文摘要
一種生產(chǎn)復合氨基酸的地衣芽孢桿菌菌株及養(yǎng)殖用氨基酸液肥制備方法，利用誘變篩選得到的地衣芽孢桿菌菌種，在無碳源高濃度無機鹽條件下常溫厭氧得到復合氨基酸液，再復配銨鹽和磷酸鹽形成氨基酸液肥，按照每畝每米水深1－10公斤投放于對蝦養(yǎng)殖水體，可以有效促進水體藻類生長，也適合其它需要復合氨基酸作為促長物質(zhì)的場合。本發(fā)明和同類方法比較，本發(fā)明使用的原料價格低廉，來源方便，產(chǎn)品工藝簡單，不需要大型發(fā)酵設(shè)備，大幅度減低成本，適合于大生產(chǎn)；產(chǎn)品不含任何不利于養(yǎng)殖水體及產(chǎn)品的成分，特別適合于對蝦養(yǎng)殖。
文檔編號C05F15/00GK1715399SQ20051003311
公開日2006年1月4日 申請日期2005年2月1日 優(yōu)先權(quán)日2005年2月1日
發(fā)明者邱德全, 邱明生 申請人:湛江海洋大學