專利名稱：一種北冬蟲夏草的固體培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種提高人工培養(yǎng)北冬蟲夏草(簡稱北蟲草)的功能成分含量的固體培養(yǎng)基配方，屬于北冬蟲夏草的人工栽培的技術(shù)領(lǐng)域。專用于提高人工栽培的北冬蟲夏草子實體中的功能成分含量，有利于提高人工北冬蟲夏草的保健功效和藥用價值。
二、技術(shù)背景北冬蟲夏草作為著名的食、藥用真菌，其主要活性成分為蟲草素(3’-脫氧腺苷)、蟲草酸(D-甘露醇)及蟲草多糖等。蟲草素具有諸多生理活性成分和醫(yī)療保健功效，如抗腫瘤作用、抗病毒作用、抗菌作用、增強(qiáng)免疫功能作用等，并被作為衡量蟲草品質(zhì)好壞的主要指標(biāo)。北冬蟲夏草是蟲草素的主要產(chǎn)生菌，因其培養(yǎng)基的配方不同，蟲草菌素的含量也有所不同。用本發(fā)明提供的培養(yǎng)基栽培的北蟲草中蟲草素含量是野生冬蟲夏草的幾倍乃至幾十倍，同時蟲草酸和蟲草多糖的含量也很高。提高北冬蟲夏草的品質(zhì)，主要就是進(jìn)一步提高蟲草素等活性成分的含量，特別是蟲草素的含量。人們已認(rèn)識到北冬蟲夏草在醫(yī)療保健領(lǐng)域中的重要價值，正積極研究、培養(yǎng)和開發(fā)北冬蟲夏草。
目前普遍使用的北冬蟲夏草人工栽培的培養(yǎng)基質(zhì)中缺乏專門針對提高北冬蟲夏草功能成分蟲草素的生物激勵因子。生產(chǎn)的人工北蟲草功能成分含量偏低。限制了北冬蟲夏草的后繼開發(fā)和產(chǎn)業(yè)化。因此、在擴(kuò)大規(guī)模和增加產(chǎn)量的同時，提高北冬蟲夏草的內(nèi)外品質(zhì)，已成為我們迫切需要解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容
技術(shù)問題 北蟲草產(chǎn)生蟲草菌素要求培養(yǎng)基能提供絲肽類營養(yǎng)成分，而目前的固體培養(yǎng)基大都采用添加蠶蛹粉提供營養(yǎng)物質(zhì)。本發(fā)明通過改進(jìn)北冬蟲夏草的固體培養(yǎng)基配方，使得人工北蟲草子實體中功能成分蟲草菌素(3′-脫氧腺苷)含量提高，達(dá)到具有推廣性強(qiáng)、效果明顯，無毒副作用，無藥殘的目的。
技術(shù)方案 一種北冬蟲夏草的固體培養(yǎng)方法，其特征在于1000ML蟲草培養(yǎng)營養(yǎng)液中含葡萄糖15-25g、蛋白胨15-25g、硫酸鎂1.5-2.5g、磷酸二氫鉀0.5-1.5g、檸檬酸三氨1.5-2.5g、維生素B1200-250mg；每栽培瓶固體培養(yǎng)基中秈米30-40g、蠶蟲粉0.5-1.5g。
上述一種北冬蟲夏草的固體培養(yǎng)方法，其特征在于葡萄糖、蛋白胨、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、檸檬酸三氨、維生素B1均為分析純。蠶蟲粉為四齡蠶蟲在40℃以下低溫烘干后粉碎并過60目篩備用。營養(yǎng)液配置方法為先將葡萄糖、蛋白胨、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、檸檬酸三氨、維生素B1、水按比例在自來水中溶解，再添加蠶蟲粉、秈米，然后混合均勻，高壓滅菌1.0小時后即可。
有益效果本發(fā)明與現(xiàn)有的人工北蟲草固體培養(yǎng)基質(zhì)相比，具有如下優(yōu)點(1)目前的北蟲草人工培養(yǎng)基質(zhì)中大都以蠶蛹粉作為北蟲草生長所需要的蛋白質(zhì)來源。本研究組對各種生物性和非生物性激勵因子進(jìn)行了優(yōu)化組合研究，在配方中添加了四齡蠶蟲粉，北蟲草中蟲草素的含量比原配方提高10％以上，北蟲草產(chǎn)量提高10％以上。
(2)本發(fā)明采用活體四齡蠶蟲低溫烘干粉碎后加入培養(yǎng)基中，避免了采用蠶蛹粉在蠶蛹加工中引起污染。
(3)本發(fā)明所提供的培養(yǎng)基配方，成本低、工藝簡單，生產(chǎn)者容易接受，具有推廣性強(qiáng)、效果明顯，無毒副作用，無藥殘的優(yōu)點。
具體實施例方式
一種提高人工培養(yǎng)北冬蟲夏草的功能成分含量的固體培養(yǎng)基配方，其組分含量為1000g蟲草培養(yǎng)營養(yǎng)液中中含葡萄糖20g、蛋白胨20g、硫酸鎂2g、磷酸二氫鉀1g、檸檬酸三氨2g、維生素B1200mg；每栽培瓶培養(yǎng)基中秈米35g、蠶蟲粉1g.
其制備方法為(1)、營養(yǎng)液配制方法準(zhǔn)確稱量上述營養(yǎng)液中各組分，按比例溶解于所需要量的水中，備用。
(2)、把蠶蟲粉、秈米放入洗凈的耐高溫高壓的的栽培容器(玻璃廣口瓶)，每瓶放入秈米35g、蠶蟲粉1g。
(3)、每瓶加入配制好的營養(yǎng)液55～60ML。
(4)、選用5絲的耐高溫高壓的聚丙烯塑料薄膜封住玻璃瓶口。
(5)、將配制好的培養(yǎng)基放入高壓滅菌鍋，在121℃、1.05Mpa的條件下保持1.0小時。
(6)、將滅菌后的培養(yǎng)基質(zhì)放入接種室，對接種室進(jìn)行整體消毒后在超凈工作臺中進(jìn)行接種生產(chǎn)。
(7)接種后蟲草栽培瓶放進(jìn)蟲草專用栽培室，按北蟲草生長不同階段的常規(guī)培養(yǎng)方法對其濕、光、濕度進(jìn)行調(diào)控。
五、一種提高人工培養(yǎng)北冬蟲夏草中草素含量培養(yǎng)基配方的功效試驗試驗方法由江蘇省農(nóng)科院食用菌研究開發(fā)中心提供北蟲草生產(chǎn)栽培種CM-4。采用對比配方(目前現(xiàn)有的配方)為葡萄糖2％、蛋白胨2％、硫酸鎂0.2％、磷酸二氫鉀0.1％、檸檬酸三氨0.2％、維生素B1微量、秈米93％、蠶蛹粉1g、水1∶1.5，制備方法同上。每種培養(yǎng)基質(zhì)各小試生產(chǎn)1000瓶。按照人工北蟲草的生產(chǎn)工藝，培養(yǎng)基經(jīng)接種、發(fā)菌、出草。采收得到北蟲草子實體進(jìn)鼓風(fēng)干燥箱低溫烘干至恒重。計算每瓶得產(chǎn)量平均值。
試驗結(jié)果實驗組1000瓶有污染50瓶。對照組污染120瓶。
經(jīng)過計算實驗組平均每瓶烘干子實體重量為2.75g，對照組每瓶平均產(chǎn)量為2.51g..實驗組比對照組產(chǎn)量平均每瓶增加0.24g，產(chǎn)量提高10％左右。
蟲草素的測定采用HPLC法測定。隨機(jī)取樣0.5g。樣品用50％乙醇超聲提取。測定條件為以AgilentODS(4.6mm×250mm，5μl)為色譜柱，檢測波長260nm，流速1ml/min，柱溫25℃條件，乙腈-水進(jìn)行洗脫。對照品購于中國藥品生物制品檢定所。
經(jīng)HPLC法測定蟲草素含量。每組測三個平行，結(jié)果取平均值。實驗組蟲草素含量為1.342％，對照組蟲草素含量為0.122％.蟲草素含量提高了約10％。
推廣驗證本發(fā)明在江蘇省農(nóng)科院食用菌研究開發(fā)中心示范應(yīng)用了3批次共5萬瓶北蟲草。其蟲草產(chǎn)量和品質(zhì)都比原來有很大的提高，其中蟲草素的含量提高10％，其子實體的產(chǎn)量提高13％。符合功效試驗結(jié)果。
一種提高人工培養(yǎng)北冬蟲夏草中蟲草菌素含量培養(yǎng)基配方功效總結(jié)經(jīng)過試驗和示范應(yīng)用的結(jié)果，證明本發(fā)明的配方能提高人工栽培北蟲草子實體中的主要功能成分的含量，蟲草素的含量可提高10％左右。同時也能提高其子實體的產(chǎn)量10％左右。
權(quán)利要求
1.一種北冬蟲夏草的固體培養(yǎng)方法，其特征在于
1000ML蟲草培養(yǎng)營養(yǎng)液中含葡萄糖15-25g、蛋白胨15-25g、硫酸鎂1.5-2.5g、磷酸二氫鉀0.5-1.5g、檸檬酸三氨1.5-2.5g、維生素B1200-250mg；每栽培瓶固體培養(yǎng)基中秈米30-40g、蠶蟲粉0.5-1.5g。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種北冬蟲夏草的固體培養(yǎng)方法，其特征在于葡萄糖、蛋白胨、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、檸檬酸三氨、維生素B1均為分析純。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述一種北冬蟲夏草的固體培養(yǎng)方法，其特征在于蠶蟲粉為四齡蠶蟲在40℃以下低溫烘干后粉碎并過60目篩備用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述一種北冬蟲夏草的固體培養(yǎng)方法，其特征在于營養(yǎng)液配置方法為先將葡萄糖、蛋白胨、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、檸檬酸三氨、維生素B1、水按比例在自來水中溶解，再添加蠶蟲粉、秈米，然后混合均勻，高壓滅菌1.0小時后即可。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述一種北冬蟲夏草的固體培養(yǎng)方法，其特征在于營養(yǎng)液配置方法為先將葡萄糖、蛋白胨、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、檸檬酸三氨、維生素B1、水按比例在自來水中溶解，再添加蠶蟲粉、秈米，然后混合均勻，高壓滅菌1.0小時后即可。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種北冬蟲夏草的固體培養(yǎng)方法，屬于北冬蟲夏草的人工栽培的技術(shù)領(lǐng)域。目前還未見相同的培養(yǎng)基報道。含葡萄糖、蛋白胨、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、檸檬酸三氨、維生素B
文檔編號A01G1/04GK1650686SQ20051003762
公開日2005年8月10日 申請日期2005年1月6日 優(yōu)先權(quán)日2005年1月6日
發(fā)明者張平, 蔣寧 申請人:江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院