專利名稱：一種蒲葵種子的保藏育苗方法
技術領域：
本發(fā)明屬于植物種質資源保藏技術領域，具體涉及一種蒲葵種子的保藏育苗方法。
背景技術：
蒲葵是棕櫚科植物，原產于我國華南。蒲葵全身都是寶，其樹干可做手杖、傘柄，葉片可用來制造葵扇、蓑衣、笠帽、提藍，葵骨(中葉脈)可以制造掃帚、牙簽等。蒲葵又是優(yōu)良的纖維植物，可制繩索，葉柄外皮可以編織成葵花席。蒲葵的嫩芽可食用，果、葉和根皆可入藥(據《中國高等植物圖鑒》第五冊科學出版社1976年)。又因樹形優(yōu)美，廣泛用于園林造景、庭院觀賞及用作行道樹，是最受歡迎的室內外棕櫚科扇形觀賞樹種。
目前，蒲葵的繁殖主要依靠采種育苗。蒲葵種子是典型的頑拗性種子，種子在母株上脫落時已經啟動萌發(fā)，種子壽命短，其保藏歷來是植物種質長期保藏的難點和研究重點。常規(guī)的保藏技術都因在保藏過程中種子生命力過快喪失而導致種子發(fā)芽率降低，失去使用價值。普遍認為，超低溫貯藏可能是頑拗性種子長期保藏最有希望的途徑，但現有技術中尚未見有成功的報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的技術問題在于針對現有技術的不足，提供一種蒲葵種子長期保藏和育苗的方法，解決在保藏過程中蒲葵種子活力過快喪失的問題，使保藏后的蒲葵種子能夠恢復生長，發(fā)育成正常幼苗，從而實現蒲葵種質資源的長期保藏。
本發(fā)明的目的通過以下技術方案予以實現。
本發(fā)明提供了一種蒲葵種子的保藏育苗方法，該方法由以下步驟組成①保藏種子的采收選擇花后120～180天的果序，除去外果皮，收集種子并裝入聚乙烯袋，在10℃～20℃條件下貯存?zhèn)溆?；②種子的滅菌取備用的種子，先用70％～80％酒精浸泡1～3分鐘，然后在0.05％～0.15％的升汞溶液中浸泡10～30分鐘，再用無菌水漂洗4～6次，每次5～8分鐘；③胚的剝取用枝剪從胚的兩側各剪一刀，再用解剖刀分離胚；④脫水處理按每15～25個胚90g～110g活化硅膠的比例，把蒲葵胚放入有蓋的小盒內用硅膠脫水5～9小時，將胚的含水量降至10～15％，然后立即把胚裝入無菌的低溫凍存管，每管裝15～20個胚；⑤保藏將裝有胚的低溫凍存管置于液氮生物容器中，使低溫凍存管完全浸泡在液氮中快速降溫，經常檢查液氮生物容器中的液氨存量，及時補充喪失的液氮；⑥當需要蒲葵幼苗時，將裝有胚的低溫凍存管從液氮容器中取出，投入30～35℃的溫水中1～2分鐘，將溫度恢復到室溫；⑦育苗以MS培養(yǎng)基為基鹽，每升添加160～180mg磷酸二氫鈉，25～35g蔗糖，0.1～0.2mg萘乙酸和0.1～0.3mg 6-芐基腺嘌呤和8～12g瓊脂固定，在培養(yǎng)皿內裝10～15ml培養(yǎng)基，對胚進行培養(yǎng)；設定溫度30～35℃，保證每天16小時光照、8小時黑暗條件下進行培養(yǎng)，2～3個月可以成苗。
其中步驟②、③和④均在超凈工作臺上進行。
步驟1中備用的種子應在1～3周內進行步驟2所述的滅菌處理。
與現有技術相比，本發(fā)明所述的保藏育苗方法可以使蒲葵種子得以長期保存，保藏后的種子存活率接近100％，成苗率在95％以上，其操作簡便，成本低廉，具有良好的應用前景。同時，本發(fā)明的方法對其他頑拗性種子保藏技術的完善也具有積極的促進作用。
具體實施例方式
通過下面給出的具體實施例，可以進一步清楚地了解本發(fā)明。但它們不是對本發(fā)明的限定。
實施例1選擇花后160天的果序，此時內果皮已發(fā)育完全，外果皮綠色，種子達到生理成熟期，脫水耐性和超低溫耐性最高，超低溫保存容易成功。除去外果皮，收集種子后裝入聚乙烯袋，在15℃條件下貯存?zhèn)溆?，?周內取備用的種子在超凈工作臺上進行滅菌處理，先用75％酒精浸泡2分鐘，然后用0.1％的升汞溶液浸泡20分鐘，再用無菌水漂洗5次，每次6分鐘。用枝剪從胚的兩側各剪一刀，再用解剖刀分離胚。按每20個胚100g活化硅膠的比例，把蒲葵胚放入有蓋的小鋁盒內用硅膠脫水7小時，將胚的含水量降至12％，然后立即把胚裝入無菌的低溫凍存管，每管裝20個胚；將裝有胚的低溫凍存管置于液氮生物容器中快速降溫，經常檢查液氮生物容器中的液氮存量，及時補充喪失的液氮。當需要蒲葵幼苗時，將凍存的胚從液氮容器中取出，投入30℃～35℃的溫水中1～2分鐘，快速將溫度恢復到15℃。以MS培養(yǎng)基為基鹽，每升添加170mg磷酸二氫鈉，30g蔗糖，0.1mg萘乙酸和0.2mg 6-芐基腺嘌呤和10g瓊脂固定，在直徑5cm的培養(yǎng)皿內裝12ml培養(yǎng)基，對胚進行培養(yǎng)；溫度保持在30～35℃，每天16h光照、8h黑暗條件下進行培養(yǎng)，約兩個月可以成苗。
實施例2重復實施例1，有以下不同點把蒲葵胚放入有蓋的小盒內用硅膠脫水9小時，將胚的含水量降至10％。
實施例3重復實施例1，有以下不同點把蒲葵胚放入有蓋的小盒內用硅膠脫水5小時，將胚的含水量降至15％。
實施例4重復實施例1，有以下不同點將凍存的胚從液氮容器中取出，投入溫水中將溫度恢復到20℃。
實施例5重復實施例1，有以下不同點將凍存的胚從液氮容器中取出，投入溫水中將溫度恢復到25℃。
實施例6重復實施例1，有以下不同點將凍存的胚從液氮容器中取出，投入溫水中將溫度恢復到30℃。
實施例7重復實施例1，有以下不同點選擇花后120天的果序進行處理。
實施例8重復實施例1，有以下不同點選擇花后140天的果序進行處理。
實施例9重復實施例1，有以下不同點選擇花后180天的果序進行處理。
權利要求
1.一種蒲葵種子的保藏育苗方法，該方法由以下步驟組成①保藏種子的采收選擇花后120～180天的果序，除去外果皮，收集種子并裝入聚乙烯袋，在10℃～20℃條件下貯存?zhèn)溆?；②種子的滅菌取備用的種子，先用70％～80％酒精浸泡1～3分鐘，然后在0.05％～0.15％的升汞溶液中浸泡10～30分鐘，再用無菌水漂洗4～6次，每次5～8分鐘；③胚的剝取用枝剪從胚的兩側各剪一刀，再用解剖刀分離胚；④脫水處理按每15～25個胚90g～110g活化硅膠的比例，把蒲葵胚放入有蓋的小盒內用硅膠脫水5～9小時，將胚的含水量降至10～15％，然后立即把胚裝入無菌的低溫凍存管，每管裝15～20個胚；⑤保藏將裝有胚的低溫凍存管置于液氮生物容器中，使低溫凍存管完全浸泡在液氮中快速降溫，經常檢查液氮生物容器中的液氮存量，及時補充喪失的液氮；⑥當需要蒲葵幼苗時，將裝有胚的低溫凍存管從液氮容器中取出，投入30～35℃的溫水中1～2分鐘，將溫度恢復到室溫；⑦育苗以MS培養(yǎng)基為基鹽，每升添加160～180mg磷酸二氫鈉，25～35g蔗糖，0.1～0.2mg萘乙酸和0.1～0.3mg 6-芐基腺嘌呤和8～12g瓊脂固定，在培養(yǎng)皿內裝10～15ml培養(yǎng)基，對胚進行培養(yǎng)；設定溫度30～35℃，保證每天16小時光照、8小時黑暗條件下進行培養(yǎng)，2～3個月可以成苗。
2.根據權利要求1所述的保藏育苗方法，其特征在于其中步驟②、③和④均在超凈工作臺上進行。
3.根據權利要求1所述的保藏育苗方法，其特征在于步驟①中所述的備用種子應在1～3周內進行步驟②所述的滅菌處理。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種蒲葵種子的保藏育苗方法，先對種子進行滅菌、胚分離和脫水，然后將胚裝入無菌的低溫凍存管并置于液氮生物容器中，使低溫凍存管快速降溫。當需要幼苗時，將低溫凍存管從液氮中取出，投入30～35℃的溫水中，將溫度恢復到室溫。最后在培養(yǎng)皿內對胚進行培養(yǎng)，2～3個月即可成苗。本發(fā)明使蒲葵種子得以長期保存，其操作簡便，成本低廉，種子存活率接近100％，成苗率在95％以上，具有良好的應用前景。同時，本發(fā)明的方法對其他頑拗性種子保藏技術的完善也具有積極的促進作用。
文檔編號A01C1/00GK1799339SQ200510048699
公開日2006年7月12日 申請日期2005年12月17日 優(yōu)先權日2005年12月17日
發(fā)明者文彬, 宋松泉 申請人:中國科學院西雙版納植物熱帶園