專利名稱：一種提高叢枝菌根真菌防治黃瓜土傳病害效果的接種方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生物應(yīng)用工藝，具體的涉及促進菌根真菌與植株共生關(guān)系，建立提高植株抗病性方法。
背景技術(shù)：
黃瓜是設(shè)施栽培中的主要蔬菜種類之一，它在我國蔬菜的周年供應(yīng)中占有重要地位，據(jù)不完全統(tǒng)計，黃瓜栽培中有病害50余種，常年發(fā)生并造成較嚴(yán)重?fù)p失的病害有10余種土傳病害，由病菌從幼根或傷口侵入寄生宿主植物，成為制約蔬菜生產(chǎn)發(fā)展的最重要因素，常年發(fā)病率一般為10％-30％，嚴(yán)重時甚至絕收。目前化學(xué)藥劑是土傳病害防治的主導(dǎo)途徑，但是長期使用化學(xué)藥劑所引起的病原菌抗藥性增強和對環(huán)境的污染問題使人們明確認(rèn)識到其風(fēng)險性，因地制宜地采取無公害防治策略，經(jīng)濟，安全，有效地防治黃瓜病害，確保其優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)，實現(xiàn)黃瓜的可持續(xù)栽培是十分必要的?？稍跍p少化學(xué)制品投入的同時兼顧到農(nóng)業(yè)的持續(xù)發(fā)展的無公害的生物防治措施以成為關(guān)注的熱點。
研究表明大多數(shù)蔬菜作物都可與叢枝菌根(arbuscular mycorrhiza，AM)真菌形成穩(wěn)定的共生體系，可以增加植物對礦質(zhì)營養(yǎng)的吸收，特別是對磷的吸收能力增強，同時還提高植物抗旱能力，提高植物對逆境如冷、熱、重金屬污染等的耐受力，還可以改良土壤結(jié)構(gòu)，它無污染、無毒害，是生產(chǎn)綠色食品的理想制劑。菌根技術(shù)作為一條有效可行的生物學(xué)途徑，能夠發(fā)掘生物的自身潛力，提高植物對自然資源的利用能力，從而降低能耗，減輕環(huán)境所承受的壓力，因而有著廣闊的應(yīng)用前景。同時有研究表明接種AM真菌通過植物體營養(yǎng)狀況的改善或損傷補償，寄主光合產(chǎn)物及根系有限侵染位點的競爭，根際微生物區(qū)系的改變和對植物體內(nèi)抗性機制的激活等作用，提高了蔬菜作物對病原菌(真菌病害、線蟲)的抗性，接種叢枝菌根真菌是具有較高應(yīng)用前景的生物防治措施。
叢枝菌根真菌生物技術(shù)為克服土傳病害提供一條兼顧經(jīng)濟效益與環(huán)境效益的新途徑，但是合理的按種方法，高效的接種基質(zhì)尚缺乏足夠的研究，對于如何提高AM真菌的侵染狀況，通過人為方式改善抗病效果在具體的實施方法上有待與進一步的完善。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)解決方案是提供一種提高黃瓜抗土傳病害的性能的方法，主要采用通過對其接種叢枝菌根真菌，通過技術(shù)手段調(diào)控促進菌根真菌的侵染來實現(xiàn)。
所述的增強植株抗病性能的方法，立足于植株與菌根真菌之間共生關(guān)系的建立，通過人為的調(diào)控措施改變接種方式方法，利用合理的基質(zhì)，構(gòu)建菌根化良好，健壯抗病性能強的植株以滿足生產(chǎn)的需求。
所述的增強植株抗病性能的方法所采用的接種劑自菌根真菌菌劑生產(chǎn)提供單位獲得，為含有真菌孢子和菌絲以及被侵染的根段的混合物。
所述的增強植株抗病性能的方法，基質(zhì)為草炭和蛭石(2∶1～4∶3)混和物，經(jīng)10KGy輻照滅菌或者121℃高壓蒸汽滅菌2小時，自然風(fēng)干后備用?；|(zhì)和接種劑比例為10∶1～15∶1，保證單株50-80個孢子。在育苗播種時，即將接種劑與基質(zhì)相混和?；旌头绞椒譃榕c基質(zhì)完全混勻或者僅將接種劑施用于播種部位兩種。將叢枝菌根真菌作為一種生物防治技術(shù)在育苗播種時在菌根化基質(zhì)中促進接種，充分利用設(shè)施園藝蔬菜生產(chǎn)中育苗移栽這一生產(chǎn)工藝，調(diào)節(jié)適宜的水分和光照調(diào)節(jié)，待植株生長4～5周之后，即可獲得高效共生體系的菌根化植株用于大田或者保護地栽培。


(無)具體實施方式
黃瓜為津綠3號，種子經(jīng)10％H2O2表面消毒5min，用滅菌的蒸餾水沖洗干凈后溫湯浸種2h，放于濕濾紙上28℃黑暗催芽，等胚芽近1cm時選取均一的種子播種。
草炭與蛭石以1∶1的體積比混合均勻后間歇濕熱滅菌2h備用。
營養(yǎng)缽(上口徑8.5cm，底徑6cm，高7.5cm)用3％甲醛密封1周進行表面消毒，待氣味散盡后備用。
接種劑為Glomus etunicatum(中國農(nóng)業(yè)大學(xué)分離，歐洲菌種保藏中心編號BEG168)，以含有真菌孢子和菌絲以及被侵染的根段的混合物作為接種劑。
以黃瓜枯萎病病原菌模擬土傳病害Fusarium oxysporum(F.o)，由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所提供。取病原菌F.o在馬鈴薯(Potato DextroseAgar，PDA)培養(yǎng)基上培養(yǎng)4天，然后從菌落邊緣挑取3-4mm菌塊于PDA液體培養(yǎng)基中25℃、50rpm培養(yǎng)2周，用滅菌的雙層紗布濾掉菌絲，將剩余的培養(yǎng)液4℃、9000rpm離心3次，收集孢子懸液，血球板計數(shù)，最后用10mmol/L MgSO4·7H2O調(diào)節(jié)孢子濃度至1×105枚/ml。
每盆裝入經(jīng)充分混勻的180g育苗基質(zhì)和15gAM菌劑，不接種的對照則加入等量的滅菌菌劑和經(jīng)雙層濾紙過濾的菌種濾液10ml，以保證其它微生物種類的一致性。每盆播種2粒，出苗定苗一株。
病原菌接種植株生長28d后，采用灌根法接種病原菌F.o孢子懸液10ml/盆。對照處理以等量滅菌水代替。
在播種時接種叢枝菌根真菌，并在植株生長28d后進行接種病原菌處理。試驗設(shè)空白，單接種AM真菌，單接種病原菌，AM真菌和病原菌雙接種等4個處理。每個處理重復(fù)16次，完全隨機排列。
播種后生長第28天，菌根侵染率即可達(dá)40％，與植株形成了良好的共生系統(tǒng)，土傳病害模擬生長14天之后，不接種病原菌處理植株無發(fā)病趨勢，單接種病原菌的處理已出現(xiàn)黃化和萎蔫，發(fā)病情況不斷上升，菌根化植株處理無發(fā)病狀況，有效的降低了發(fā)病率和病情指數(shù)，降低了黃瓜枯萎病的危害。
植株的生長狀況指標(biāo)如葉面積和干重等，菌根化植株均較對照有顯著差異，結(jié)果表明接種叢枝菌根真菌提高了有效光合作用面積，促進植株的生長發(fā)育，增加了干物質(zhì)的積累，同時研究還表明接種叢枝菌根真菌能有效的促進植株對磷，銅等營養(yǎng)元素的吸收和利用，從而提高了植株的抗病性能。
權(quán)利要求
1.一種提高叢枝菌根真菌防治黃瓜土傳病害效果的接種方法，該方法包括使對黃瓜接種叢枝菌根真菌，并人為方式誘導(dǎo)促進菌根侵染，提高植株抗病性能等特征。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高叢枝菌根真菌防治黃瓜土傳病害效果的接種方法，其特征在于，所述接種劑為含有叢枝菌根真菌孢子、菌絲體的菌土，有積極接種效果的菌種為Glomus etunicatum(中國農(nóng)業(yè)大學(xué)分離，歐洲菌種保藏中心編號BEG168)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高叢枝菌根真菌防治黃瓜土傳病害效果的接種方法，其特征在于，人為方式促進菌根侵染，提高植株抗病性能包括選擇(1)基質(zhì)搭配，(2)接種量，(3)按種時間，(4)接種方式。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的提高叢枝菌根真菌防治黃瓜土傳病害效果的接種方法，其特征在于，所述(1)基質(zhì)搭配，是在接種菌根真菌所采用的草炭和蛭石(2∶1～4∶3)混和，經(jīng)10KGy輻照滅菌或者121℃高壓蒸汽滅菌2小時。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的提高叢枝菌根真菌防治黃瓜土傳病害效果的接種方法，其特征在于，所述(2)接種量，指基質(zhì)和接種劑比例為10∶1～15∶1，保證單株50-80個孢子。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的提高叢枝菌根真菌防治黃瓜土傳病害效果的接種方法，其特征在于，所述(3)接種時間，為播種時即混入基質(zhì)中。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的提高叢枝菌根真菌防治黃瓜土傳病害效果的接種方法，其特征在于，所述(4)接種方式，包括與基質(zhì)完全混勻或者僅將接種劑施用于播種部位。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高叢枝菌根真菌防治黃瓜土傳病害效果的接種方法，在培養(yǎng)室或溫室中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中維持水分含量18～20％經(jīng)過4～5周，即可獲得備移栽用苗。
全文摘要
本發(fā)明屬于微生物應(yīng)用工藝，涉及提高植株抗病性微生物叢枝菌根真菌的接種方法。本發(fā)明通過人為的調(diào)控措施改變接種方式方法，經(jīng)10KGy輻照滅菌或者121℃高壓蒸汽滅菌2小時的草炭和蛭石(2∶1～4∶3)混和物為基質(zhì)?；|(zhì)和接種劑比例為10∶1～15∶1，保證單株50－80個孢子。在育苗播種時，卻將接種劑與基質(zhì)相混和。混和方式分為與基質(zhì)完全混勻或者僅將接種劑施用于播種部位兩種。本發(fā)明可以促進菌根對于植株共生關(guān)系的建立，提高菌根真菌的侵染狀況，從而提高植株對土傳病害的抗病性能。
文檔編號A01G1/00GK1709023SQ20051008385
公開日2005年12月21日 申請日期2005年7月14日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月14日
發(fā)明者李曉林, 郝志鵬, 馮固, 張俊伶 申請人:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)