專利名稱：白靈菇的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種食用菌及其栽培方法，特別是涉及白靈菇及其栽培方法。
背景技術(shù)：
白靈菇學(xué)名白靈側(cè)耳(Pleurotus nebrodensis)，隸屬于真菌門、擔(dān)子菌亞門、層菌綱、傘菌目、側(cè)耳科、側(cè)耳屬。是一種極為珍貴的食藥用真菌，野生資源極少，專生于荒漠戈壁灘傘形科植物莖基部。其子實(shí)體肥大肉厚，潔白，肉質(zhì)細(xì)膩、滑嫩，氣味香，味道鮮美，營養(yǎng)豐富，有很高的食用、藥用價(jià)值。
野生白靈菇存在如下缺陷首先是資源有限，不能形成產(chǎn)量，栽培成本高，不能推向普通老百姓；其次，溫度適應(yīng)性差，對栽培條件要求高，不能大面積推廣。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服野生菌種(菌株)的缺陷，提供一種產(chǎn)量高、溫度適應(yīng)性強(qiáng)的白靈菇菌種(菌株)。同時(shí)，提供這種菌種(菌株)的栽培方法。
本發(fā)明的目的通過如下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)。
本發(fā)明白靈菇菌種白靈10號的原種來自新疆野生白靈菇菌種，經(jīng)過人工馴化而成。1998年4月2日已經(jīng)在中國普通微生物中心保藏，地址北京市海淀區(qū)中關(guān)村北一條13號，分類命名白靈側(cè)耳(Pleurotus nebrodensis)，保藏編號是CGMCC №0347。
本發(fā)明菌種白靈10號的特征在于1、形態(tài)特征子實(shí)體側(cè)生、平展，似手掌形。菌蓋直徑8-15厘米，初呈半球形，后逐漸伸展變平，基部平展，顏色潔白，菌蓋厚2-4厘米、邊緣漸薄，表面平滑。菌肉白色、緊實(shí)，有韌性。菌褶白色，后期呈淡黃色、密集、延生、不等長。菌柄長3-6厘米，柄粗3-5厘米，上粗下細(xì)，白色，實(shí)心、韌性強(qiáng)。單朵120-180克。擔(dān)子4小梗，孢子無色，光滑，長橢圓形，(8-14)×(4-6)微米，孢子印白色。菌絲白色，絨毛狀，氣生型。
2、生物學(xué)特性(1)營養(yǎng) 需要的主要營養(yǎng)物質(zhì)有糖類、蛋白質(zhì)、纖維素、半纖維素、維生素、礦物質(zhì)等。
(2)溫度 菌絲體培養(yǎng)溫度20-24℃。在這樣條件下，試管母種PDA培養(yǎng)基10-13天長滿。適宜出菇13-15℃溫度。出菇前，在0-5℃低溫條件下處理5-7天刺激出菇。
(3)水分 菌絲體培養(yǎng)料含水量60％左右。出菇期要求含水量52％-55％，菇房空氣相對濕度85％-90％。
(4)空氣 要求通風(fēng)良好、空氣新鮮，二氧化碳濃度低于0.1％。
(5)光線 菌絲體不需要光線，出菇期需要光線照度300-1500勒克斯。
(6)時(shí)間要求 從菌袋接種到出菇一般需要90-100天。
本發(fā)明菌種的有益效果體現(xiàn)在如下方面1、本發(fā)明菌種的產(chǎn)量明顯高于其他菌種的產(chǎn)量，從而提高了經(jīng)濟(jì)效益；2、本發(fā)明菌種的溫度適應(yīng)性較強(qiáng)，降低了栽培技術(shù)難度，減少了生產(chǎn)成本。


圖1是菌株的IGS2經(jīng)BsuR I酶切的電泳結(jié)果；圖2是菌株的IGS2經(jīng)Hin6I酶切的電泳結(jié)果；圖3是菌株的IGS2經(jīng)Rsa I酶切的電泳結(jié)果；圖4是菌株的IGS2經(jīng)Bsh1236 I酶切的電泳結(jié)果。
具體實(shí)施例方式
下面通過具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)一步說明。
實(shí)施例1野生菌種的獲得野生菌種采自我國新疆伊犁郊外荒漠中阿魏莖基部的白靈菇子實(shí)體。經(jīng)過中國科學(xué)院微生物研究所卯曉嵐研究員鑒定，為一個(gè)野生手掌形白靈菇。形態(tài)特征如下子實(shí)體側(cè)生，表面平整潔白，似手掌形，菌蓋平滑，直徑8cm，厚2cm，菌肉白色，緊實(shí)，有韌性，菌褶白色，密集、延生、不等長。菌柄長5厘米，柄粗2厘米，上粗下細(xì)，白色，實(shí)心、韌性強(qiáng)。單朵85克。孢子印白色。
采用組織分離的方法，用PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)，得到該野生白靈菇菌種。菌絲較弱，生長較慢，對溫度比較敏感，導(dǎo)致經(jīng)常培養(yǎng)失敗。培養(yǎng)一定時(shí)間后容易出現(xiàn)雜菌污染，污染率達(dá)70-80％，菇體小，產(chǎn)量低，生物學(xué)效率僅達(dá)15％-20％。
實(shí)施例2野生菌種的馴化通過兩次栽培試驗(yàn)，掌握了該野生菌種的生長條件和栽培特點(diǎn)，根據(jù)本地野生白靈菇的生態(tài)環(huán)境，馴化的條件是1、培養(yǎng)料配方棉仔殼90％、玉米粉6％、石灰2％、石膏1％、過磷酸鈣1％。
2、溫度菌絲培養(yǎng)溫度20-22℃。在這樣條件下，試管母種PDA培養(yǎng)基13-15天長滿。出菇溫度8-15℃。出菇前，在-5-0℃低溫條件下處理7-10天刺激出菇。
3、水分菌絲體培養(yǎng)料含水量63％左右。出菇期要求含水量50％-55％，菇房空氣相對濕度80％-85％。
4、空氣要求空氣新鮮，二氧化碳濃度低于0.1％。
5、光線菌絲體生長階段不需要光線，出菇期需要光線照度800-1500勒克斯。
6、周期從菌袋接種到出菇一般需要100-120天。
在上述馴化條件下，第一次馴化后生物學(xué)效率達(dá)到25％。第二次馴化試驗(yàn)后，生物學(xué)效率達(dá)到30％。由此獲得母種。1998年4月2日已經(jīng)在中國普通微生物中心保藏，保藏編號是CGMCC №0347。子實(shí)體側(cè)生、平展，似手掌形。菌蓋直徑8-15厘米，初呈半球形，后逐漸伸展變平，基部平展，顏色潔白，菌蓋厚2-4厘米、邊緣漸薄，表面平滑。菌肉白色、緊實(shí)，有韌性。菌褶白色，后期呈淡黃色、密集、延生、不等長。菌柄長3-6厘米，柄粗3-5厘米，上粗下細(xì)，白色，實(shí)心、韌性強(qiáng)。單朵120-180克。擔(dān)子4小梗，孢子無色，光滑，長橢圓形，(8-14)×(4-6)微米，孢子印白色。菌絲白色，絨毛狀，氣生型。
10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃下菌絲生長速度見下表。
從結(jié)果可以看出，本發(fā)明菌種(菌株)對溫度的適應(yīng)性較野生菌種有了很大的改進(jìn)，菌絲生長速度也有了較大提高。

委托中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院對其DNA指紋進(jìn)行檢測。
實(shí)驗(yàn)方法1、DNA提取按常規(guī)方法進(jìn)行。
2、IGS2的擴(kuò)增擴(kuò)增體系為dNTP(2.5mM each)4μL，引物InvSR1R(5’-ACT GGC AGA ATC AAC CAG GTA-3’)和5SRNAR(5’-ACC GCATCC CGT CTG AT-3’)各2.5μL，Ex Taq TM DNA polymerase 1.25U，1×PCR buffer，Template 25ng，用ddH20補(bǔ)齊至50μL。IGS2擴(kuò)增反應(yīng)條件為94℃變性1min，60℃復(fù)性1min，72℃延伸3min；共35個(gè)循環(huán)，72℃補(bǔ)平7min。
3、IGS2的限制性內(nèi)切酶酶切限制性內(nèi)切酶應(yīng)用BsuR I、Hin6I、Rsa I、Bsh1236 I(上海生工產(chǎn)品)。酶切體系中限制性內(nèi)切酶(10U/μL)1μL，PCR產(chǎn)物6μL，10×buffer 1μL，用ddH20補(bǔ)齊至10μL。置于37℃下對IGS2擴(kuò)增產(chǎn)物酶切4小時(shí)。2.0％瓊脂糖凝膠電泳2小時(shí)，使用Gel Doc EQ Gel Documentation System記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
數(shù)據(jù)處理采用Quantity One分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析。
首先對菌株的IGS2進(jìn)行擴(kuò)增，然后采用BsuR I、Hin6 I、RsaI、Bsh1236 I四種限制性內(nèi)切酶對IGS2產(chǎn)物進(jìn)行酶切，可以將菌株的IGS2產(chǎn)物切成片斷大小和數(shù)量不同的片斷，電泳后可以直觀的將菌株與其它白靈菇菌種進(jìn)行區(qū)別。各種酶切的結(jié)果見下菌株的IGS2經(jīng)BsuR I酶切，生成大小為1121bp、611bp、439bp、264bp、221bp和189bp共6個(gè)片斷；菌株的IGS2經(jīng)Hin6 I酶切，生成大小為2311bp、380bp和230bp共3個(gè)片斷；菌株的IGS2經(jīng)Rsa I酶切，生成大小為1688bp和687bp共2個(gè)片斷；菌株的IGS2經(jīng)Bsh1236 I酶切，生成大小為2264bp和719bp共2個(gè)片斷。
電泳結(jié)果可參見圖1、圖2、圖3、圖4，其中，圖中J代表菌株，M代表λDNA/Hind III+EcoR I。
實(shí)施例3母種的制備培養(yǎng)基采用PDA綜合培養(yǎng)基。
在無菌室內(nèi)，取白靈菇菌種約黃豆大小接入試管斜面培養(yǎng)基上，放25-28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)期間常檢查，去除污染試管，培養(yǎng)7-9天，白靈菇菌絲布滿試管斜面培養(yǎng)基。菌絲濃白，粗壯，絨毛狀，氣生型。
實(shí)施例4原種的制備培養(yǎng)基配方玉米粒99％，石膏1％。
制作方法將玉米過濾，去除霉粒、破粒和雜物，放入清水中浸泡，使其吸足水分，溫度在10-20℃時(shí)，浸泡12-18小時(shí)；溫度在20℃以上時(shí)，浸泡8-12小時(shí)。浸泡后放沸水中溫火煮至無白心為準(zhǔn)，冷卻至30℃以下；按比例稱好石膏，再加玉米粒，混合均勻。分別裝入500毫升或750毫升菌種瓶，15磅壓力滅菌2小時(shí)。冷至30℃以下時(shí)接入試管斜面菌種，每支試管斜面菌種分接4-5瓶，放25-28℃恒溫培養(yǎng)，培養(yǎng)25-30天菌絲體布滿培養(yǎng)斜面，菌絲體濃白，健壯。由此制得原種。
實(shí)施例5栽培種的制備栽培種培養(yǎng)基配方棉籽殼62％，玉米粒30％，麥麩5％，石膏1％，石灰2％，含水量70％。
制作方法是玉米粒的處理方法與制作原種時(shí)相同。按照配方比例混合均勻，裝入15×25cm的菌種袋內(nèi)，12磅壓力鍋滅菌2小時(shí)。冷卻到30℃以下接入菌種。每瓶原種接種15袋栽培種，在22-25℃環(huán)境中培養(yǎng)，培養(yǎng)30-35天，菌絲體布滿培養(yǎng)基，菌絲體濃白、健壯，制得栽培種。
實(shí)施例6栽培種生產(chǎn)栽培袋配方棉籽殼73％，木屑10％，玉米粉7％，麥麩7％，石膏1％，石灰2％。
培養(yǎng)料按照實(shí)施例5方法發(fā)酵后，裝栽培袋。裝袋要求壓實(shí)培養(yǎng)料，每袋重400-500克(干料)，封口采用兩端折疊，線繩扎活口，有利于防止雜菌污染。栽培袋入常壓滅菌鍋，要求按口字形堆碼，以利于蒸汽流通，滅菌徹底，滅菌時(shí)間以設(shè)在最下一層培養(yǎng)袋下四周同一水平的排氣孔同時(shí)出氣，保持10小時(shí)。若低于10小時(shí)，則底部菌袋滅菌不徹底，不利于白靈菇發(fā)菌，或造成雜菌污染。
培養(yǎng)袋滅菌后，將其搬入消過毒的冷室內(nèi)冷卻，當(dāng)袋內(nèi)溫度降至30℃以下時(shí)，搬入接菌室內(nèi)，接種前4小時(shí)，氣霧滅菌，開紫外燈滅菌40分鐘。接種操作人員須用酒精棉球擦手，菌種瓶用0.1％高錳酸鉀液清洗消毒，接種工具鑷子按常規(guī)方法滅菌。接種時(shí)一人解開培養(yǎng)袋口，一人用鑷子把菌種夾入培養(yǎng)袋內(nèi)。每接完一瓶菌種，鑷子重新消毒一次，接種過程中，鑷子不能與菌種以外的任何物件接觸，以避免污染，封口用常規(guī)方法，接種為栽培袋兩端接種。
栽培袋接種后，將栽培袋放入已消毒的培養(yǎng)室內(nèi)墻式碼放。根據(jù)不同季節(jié)，行距在5-30厘米之間，發(fā)菌時(shí)培養(yǎng)室要通風(fēng)避光，溫度保持在23-27℃，25℃為最適宜溫度。當(dāng)菌絲從接種處生長到培養(yǎng)袋三分之一時(shí)翻動(dòng)栽培袋，上面的栽培袋放下層，下層栽培袋放上層。注意培養(yǎng)室的通風(fēng)，利于菌絲生長，30-40天菌絲長滿培養(yǎng)袋，對栽培袋定期檢查，發(fā)現(xiàn)污染菌袋，檢出處理。
當(dāng)菌絲長滿培養(yǎng)袋后，轉(zhuǎn)入出菇棚進(jìn)入出菇管理。出菇棚地面和墻壁要用PH值為13的石灰水上清液噴灑消毒，然后進(jìn)行墻式碼放，碼放八層，行距60厘米，棚內(nèi)相對濕度80-90％，溫度控制在7-18℃。并保證每天15-18℃的時(shí)間不少于10小時(shí)，光照在400-1800LUX散射光的條件保持8-10小時(shí)。保持出菇棚有良好的通風(fēng)換氣條件，特別在氣溫較低的季節(jié)，每天上午、下午需要通風(fēng)換氣一次。當(dāng)子實(shí)體原基形成米粒大小時(shí)，及時(shí)解開栽培袋口。當(dāng)子實(shí)體長到豌豆大小時(shí)要挽口放菇，掌握好放菇時(shí)間是保證菇形的關(guān)鍵，約15-20天，子實(shí)體長大可采收。
權(quán)利要求
1.一種白靈菇菌種，其特征在于通過對新疆野外的野生白靈菇菌種經(jīng)過人工馴化而成，在中國普通微生物中心保藏，保藏編號是CGMCC №0347。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白靈菇菌種，其特征在于其IGS2經(jīng)BsuR I酶切，生成大小為1121bp、611bp、439bp、264bp、221bp和189bp共6個(gè)片斷；經(jīng)Hin6I酶切，生成大小為2311bp、380bp和230bp共3個(gè)片斷；經(jīng)RsaI酶切，生成大小為1688bp和687bp共2個(gè)片斷；經(jīng)Bsh1236 I酶切，生成大小為2264bp和719bp共2個(gè)片斷。
3.權(quán)利要求1所述的白靈菇菌種的栽培方法，其特征在于包括如下步驟(1)母種的制備培養(yǎng)基采用PDA綜合培養(yǎng)基；(2)原種的制備培養(yǎng)基配方玉米99％，石膏1％；(3)栽培種的制備栽培種培養(yǎng)基配方棉籽殼62％，玉米粒30％，麩皮5％，石膏1％，石灰2％，含水量70％；(4)栽培種生產(chǎn)栽培袋配方棉籽殼73％，木屑10％，玉米粉7％，麥麩7％，石膏1％，石灰2％。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種白靈菇菌種，通過對新疆野外的野生白靈菇菌種經(jīng)過人工馴化而成，在中國普通微生物中心保藏，保藏編號是CGMCC №0347。栽培方法包括原種的制備和栽培種的生產(chǎn)。產(chǎn)量較其他菌種高，溫度適應(yīng)性較強(qiáng)。
文檔編號A01G1/04GK1800343SQ20051008421
公開日2006年7月12日 申請日期2005年7月18日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月9日
發(fā)明者孔傳廣, 卯曉嵐, 陳文良, 劉宇, 何玉寧 申請人:北京金信食用菌有限公司, 北京市農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)環(huán)境保護(hù)研究所