專利名稱：：保質(zhì)期延長及增強(qiáng)種子穩(wěn)定性的液體細(xì)菌接種劑的制作方法繼而參照圖3，再以注塑成型的方式，制造外框108，使外框108包覆基座104的側(cè)邊。如圖所示，纏繞部122則介于基座104及外框108間。同上述，外框108的材料亦可為聚碳酸酯類透明材料。在圖4中，則將接收器110焊接于導(dǎo)線102的連結(jié)部118上，以作為聽筒之用。然后如圖5所示，分別在接收器110的上下兩側(cè)，設(shè)置上蓋112及底蓋114,除作為裝飾外，更用以保護(hù)接收器IIO。上蓋112及底蓋114系利用塑料材料制成，例如可濺鍍的PC或可電鍍的ABS。而上蓋112及底蓋114可以使用卡勾嵌合、超音波焊接等方式，將其固定于接收器110上。最后，再如圖6所示，在基座104的凸出部124外，附加翻蓋固定件116,以與行動裝置主體連接。由于本發(fā)明的透明行動裝置翻蓋，僅基座104、導(dǎo)線102及外框108需經(jīng)過注塑成型的步驟來組裝，而上蓋112、底蓋114及接收器110,則是在注塑成型后，再與基座組裝。不同于傳統(tǒng)制程中，所有組件皆需經(jīng)過多次的注塑成型才能組裝在一起，故材料的選擇，將不再囿限于耐高溫金屬，可大幅使用非金屬材料(例如塑料)。不再受限于材質(zhì)曲面的平緩性，提供更多的外觀造型。此外，本發(fā)明的行動裝置翻蓋除了能達(dá)到市面上的透明效果外，由于制作方式降低了組件及基座間注塑成型的次數(shù)，故可提高量產(chǎn)良率，并降低生產(chǎn)要求以及后續(xù)的維修成本和難度。雖然本發(fā)明已以實(shí)施例揭露如上，然其并非用以限定本發(fā)明，任何熟悉此技藝者，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，當(dāng)可作各種的變動與潤飾，因此本發(fā)明的保護(hù)范圍當(dāng)視所附的申請專利范圍所界定為準(zhǔn)?？赡茌^低。為提高接種劑中微生物活性，目前的通行做法是，將接種劑加到種子內(nèi)或播種時(shí)，往接種劑內(nèi)添加糖或聚合物等補(bǔ)充劑。由于這些補(bǔ)充劑是在接種劑裝到容器之后才添加的，所以它們對裝在容器內(nèi)的接種劑的存活狀態(tài)和穩(wěn)定性并不產(chǎn)生效果。另外，往種子內(nèi)加入接種劑或播種時(shí)添加補(bǔ)充劑不僅勞神費(fèi)事，而且通常還得該接種劑的終端用戶(如農(nóng)民)在無法操控的環(huán)境下(如谷倉或農(nóng)田)親力親為。所以在使用補(bǔ)充劑時(shí)往往會操作不當(dāng)。為克服在接種劑制備好之后添加補(bǔ)充劑所引起的種種問題，還有一種做法就是，在制備液體接種劑的發(fā)酵階段之前將補(bǔ)充劑加到營養(yǎng)培養(yǎng)基中。但是，在發(fā)酵前按最適宜接種劑在種上(onseed)存活的量加入補(bǔ)充劑時(shí)，微生物的生長卻受到抑制。所以，需要發(fā)明一種方法來提高儲存期間液體接種劑中微生物(如細(xì)菌)的存活率和穩(wěn)定性，以及液體接種劑施到種子上之后微生物的種上存活率和穩(wěn)定性。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例是關(guān)于制備含干燥劑的液體接種劑產(chǎn)品的方法。該方法包括提供細(xì)菌生長已達(dá)到近穩(wěn)定期(substantiallystationaryphase)的液體接種齊U。將含有干燥劑的干燥處理劑加到液體接種劑中制得半干燥接種劑(partiallydesiccatedinoculant)產(chǎn)品。本發(fā)明的另一實(shí)施例中，將半干燥接種劑包裝后儲存。本發(fā)明的再一實(shí)施例中，將半干燥接種劑施到種子上。圖l是表示本發(fā)明的幾個(gè)實(shí)施例中，液體肉湯中慢生大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjapoicum)的存活情況與時(shí)間、溫度之間的函數(shù)關(guān)系圖。圖2是表示本發(fā)明的幾個(gè)實(shí)施例中，液體肉湯中慢生大豆根瘤菌的存活情況與時(shí)間、溫度之間的函數(shù)關(guān)系圖。圖3是表示本發(fā)明的幾個(gè)實(shí)施例中，慢生大豆根瘤菌的種上存活情況與時(shí)間、溫度之間的函數(shù)關(guān)系圖。圖4是表示本發(fā)明的幾個(gè)實(shí)施例中，液體肉湯中慢生大豆根瘤菌的存活情況與干燥劑類型和用量之間的函數(shù)關(guān)系圖。圖5是表示本發(fā)明的幾個(gè)實(shí)施例中，液體肉湯中慢生大豆根瘤菌的存活情況與干燥劑類型和用量之間的函數(shù)關(guān)系圖。圖6是表示本發(fā)明的幾個(gè)實(shí)施例中，慢生大豆根瘤菌的種上存活情況與干燥劑類型和用量之間的函數(shù)關(guān)系圖。圖7是表示本發(fā)明的幾個(gè)實(shí)施例中，液體肉湯中熒光假單胞菌(Peseudomonasfluorescens)的存活情況與干燥劑類型和用量之間的函數(shù)關(guān)系圖。圖8是表示本發(fā)明的幾個(gè)實(shí)施例中，液體肉湯中Sproteomaculans的存活情況與干燥劑類型和用量之間的函數(shù)關(guān)系圖。具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供一種制備液體接種劑的方法。該方法包括在細(xì)菌生長達(dá)到近穩(wěn)定期后向液體接種劑中加入干燥劑的步驟。將干燥劑加到液體接種劑中制得半干燥接種劑。通過這種方法制成的半干燥接種劑無論在包裝容器內(nèi)，還是施到種子上之后，其細(xì)菌穩(wěn)定性均得到增強(qiáng)。而穩(wěn)定性增強(qiáng)使包裝容器內(nèi)和種子上的細(xì)菌存活率相應(yīng)提高。將細(xì)菌接種到液體培養(yǎng)基中獲得細(xì)菌培養(yǎng)物。可將各種微生物接種到液體營養(yǎng)培養(yǎng)基中，具體包括但不限于根瘤菌(包括慢生根瘤菌屬)、假單胞菌屬、沙雷氏菌屬、桿菌屬(包括類芽胞桿菌屬)、巴斯德氏菌屬、固氮菌屬、腸桿菌屬、固氮螺菌、甲基桿菌屬、藍(lán)細(xì)菌(藍(lán)綠藻)等細(xì)菌。其他微生物(如菌根真菌)也可以接種到液體營養(yǎng)培養(yǎng)基內(nèi)獲得細(xì)菌培養(yǎng)物。根瘤菌屬和慢生根瘤菌屬中，優(yōu)選菌株包括慢生大豆根瘤菌(乂ap,.c鵬)、苜猜根瘤菌(朋izoZu'鵬meh'i。^z')、豌豆根瘤菌三葉草生物型(朋ho力i〃/ff7<^/孤70532-鵬Zj.。rarz^rj'/b_/j'i)、豌豆根瘤菌香豆生物型(^yzo/u-ifflJe^zz/w'/osan/fflZu'。rarF7'ceae)禾口豌豆根瘤菌菜豆生物型(朋izc^i咖ie《"啦'"05^咖/i。rarpA^7"。這些細(xì)菌能在豆科植物根部形成根瘤。雖然以下內(nèi)容主要涉及根瘤菌屬接種劑組合物，但應(yīng)當(dāng)理解，其他微生物亦同樣適用。細(xì)菌接種用的培養(yǎng)基可以是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的適合所選用細(xì)菌的任何液體營養(yǎng)培養(yǎng)基。例如，YMB是根瘤菌屬常用的培養(yǎng)基。YMB組分列于下表1。表lYMB配方<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>將細(xì)菌加到液體營養(yǎng)培養(yǎng)基中，然后培養(yǎng)(或發(fā)酵)至細(xì)菌生長到"近穩(wěn)定期"。"近穩(wěn)定期"是指從"對數(shù)期"晚期到"穩(wěn)定期"之間的一段培養(yǎng)時(shí)期。"對數(shù)生長期"是指發(fā)酵起始階段的延遲期之后的一段時(shí)期，該時(shí)期營養(yǎng)供應(yīng)充分，細(xì)菌一般呈指數(shù)生長。"穩(wěn)定期"是指對數(shù)生長期之后的一段時(shí)期，這個(gè)時(shí)期細(xì)菌生長基本上停止。穩(wěn)定期一般在液體營養(yǎng)培養(yǎng)基中營養(yǎng)基本耗盡之后達(dá)到。本文將含有生長到近穩(wěn)定期的細(xì)菌的物質(zhì)稱為"液體接種劑"。細(xì)菌培養(yǎng)期一般為1-15天，確切點(diǎn)說是2-7天。培養(yǎng)期間可以利用振蕩培養(yǎng)箱、發(fā)酵反應(yīng)器或其他類似裝置使液體營養(yǎng)培養(yǎng)基和細(xì)菌通氣并維持在適宜生長的溫度。具體培養(yǎng)條件依所用的菌種和液體營養(yǎng)培養(yǎng)基種類而定。例如，慢生大豆根瘤菌接入營養(yǎng)培養(yǎng)基后，可在振蕩培養(yǎng)箱上培養(yǎng)大約1-10天，溫度約為20-35"C。最好是培養(yǎng)大約2-7天，溫度約為28。C。近穩(wěn)定期的細(xì)菌數(shù)依菌種而異。例如，對根瘤菌屬細(xì)菌來說，液體接種劑的細(xì)菌數(shù)預(yù)計(jì)約為1X109-1X10"/ml，尤其約為1X107ml。這些數(shù)量只是舉例說明，本發(fā)明還涵蓋像這樣的其他數(shù)達(dá)到近穩(wěn)定期后(即細(xì)菌生長到對數(shù)生長率之后)，往液體接種劑加入含有干燥劑的干燥處理劑，獲得半干燥接種劑。"干燥處理劑"是指干燥劑和稀釋物(一般為水)的混合物。"干燥劑"是指加到水中可降低水分活度(物體表面水蒸汽分壓與飽和壓的比值)的物質(zhì)。水分活度降到0.995以下應(yīng)能增加半干燥接種劑包裝容器內(nèi)細(xì)菌的存活率。水分活度降到0.990以下，最好降到約0.980以下，應(yīng)能增加半干燥接種劑中細(xì)菌的種子存活數(shù)。本文中，"干燥劑"可包括千燥劑一類的任何化合物或其混合物，而不論所使用的該化合物或其混合物濃度是否真正對液體接種劑有干燥效果。適宜用的干燥劑例如包括海藻糖、蔗糖、甘油和三乙撐乙二醇(triethyleneglycol)中的一種或多種。其他適合的干燥劑包括但不限于非還原糖和糖醇(例如甘露醇)。液體接種劑中所加入的干燥劑一般約占半干燥接種劑的5-50%(重量/體積)。如果使用的干燥劑是海藻糖，則其使用量約占半干燥接種劑的10-40%(重量/體積)比較理想，約20-30%(重量/體積)則最佳。干燥處理劑可以包括一種以上干燥劑的混合物。事實(shí)上，該混合物可以是本文所限定的任意兩種或兩種以上干燥劑的組合。例如，干燥處理劑可以包括海藻糖和甘油、海藻糖和蔗糖，或者蔗糖和三乙撐乙二醇的混合物。海藻糖和甘油的混合物中，海藻糖約占半干燥接種劑的5-40%(重量/體積)，甘油約占半干燥接種劑的1-10%(重量/體積)。海藻糖和甘油分別約占半干燥接種劑的20%和5%(重量/體積)是最理想的。可以在培養(yǎng)期間(例如發(fā)酵反應(yīng)器或振蕩培養(yǎng)箱)向裝在培養(yǎng)容器內(nèi)的液體接種劑中加入干燥劑，也可在液體接種劑進(jìn)行包裝期間加入干燥劑。在一個(gè)實(shí)施例中，加入足量干燥劑使半干燥接種劑中的細(xì)菌至少部分干燥，從而(1)提高分裝和儲存等后續(xù)步驟中細(xì)菌的穩(wěn)定性和存活率，(2)而且提高例如將半干燥接種劑施到種子上等后續(xù)步驟中細(xì)菌的穩(wěn)定性和存活率。半干燥接種劑然后可以包裝起來并儲存。包裝容器可以是工業(yè)上己知的任何標(biāo)準(zhǔn)容器，例如可以用聚乙烯囊包裝半干燥接種劑。將半干燥接種劑包裝完后予以儲存。儲存條件可以包括溫度在環(huán)境溫度與冷藏溫度之間，相對濕度在低到中等濕度之間，理想條件包括溫度約低于35。C，相對濕度約低于80%。半干燥接種劑可施用于各類種子。例如，可將半干燥接種劑施用于豆科植物的種子。豆科植物是重要經(jīng)濟(jì)作物中的一大家族，如大豆、紫花苜蓿(紫苜蓿)、花生、豌豆類、豆類等。半干燥接種劑中的細(xì)菌可聚集在植物根圍，和/或感染植物根，例如侵入根毛，并聚集在根部，產(chǎn)生根瘤。依靠這種共生關(guān)系，植物通過固氮作用將氣態(tài)氮轉(zhuǎn)化為氮的有機(jī)化合物，并利用這些有機(jī)化合物生長。半干燥接種劑施用到種子上時(shí)，種上細(xì)菌數(shù)會發(fā)生改變。半干燥接種劑施用后10周，種上細(xì)菌數(shù)還在變化，但其數(shù)量應(yīng)該與原始數(shù)量懸殊不大。換句話說，種上細(xì)菌數(shù)應(yīng)該不會隨時(shí)間而急劇減少。例如，如果半干燥接種劑施到種子上時(shí)，種上細(xì)菌數(shù)至少為6X105，大約10周后種上細(xì)菌數(shù)至少為1乂105則比較理想。要提高半干燥接種劑裝在容器內(nèi)和施于種子時(shí)其細(xì)菌的穩(wěn)定性和存活量，可以考慮在向種子施用半干燥接種劑之前，將聚合物加到半干燥接種劑中，也可以在包裝之前或儲存之后加入該聚合物。聚合物可以包括聚乙烯基吡咯烷酮、垸基化乙烯基吡咯烷酮聚合物、乙烯基吡咯烷酮和醋酸乙烯酯共聚物、乙烯基吡咯烷酮和苯乙烯共聚物、聚乙烯醇聚合物和其他類似聚合物。聚合物約占半干燥接種劑的1-25%(重量/體積)。在細(xì)菌達(dá)到近穩(wěn)定期之后向液體接種劑加入干燥劑得到半干燥接種劑即可提高細(xì)菌的穩(wěn)定性，這樣播種時(shí)則不必再添加補(bǔ)充劑，但這并不排除不能使用補(bǔ)充劑。事實(shí)上，將半干燥接種劑施用于種子之后，再往種子內(nèi)添加補(bǔ)充劑亦屬本發(fā)明的范圍。補(bǔ)充劑可在播種時(shí)加入，也可在向種子施用半干燥接種劑之后加入。補(bǔ)充劑可以包括糖、膠漿，羧甲基纖維素和聚合物等任何常用的補(bǔ)充劑。半干燥接種劑可加到泥炭、粘土和/或其他類似干燥載體中形成干燥、可流動的接種劑?？山柚鷩婌F器或其他已知裝置使用該半干燥接種劑。下面用非限制性實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行說明。實(shí)施例l:海藻糖和甘油/海藻糖混合物對慢生大豆根瘤菌穩(wěn)定性的影響將慢生大豆根瘤菌接種到裝有營養(yǎng)培養(yǎng)基的搖瓶中，置于振蕩培養(yǎng)箱內(nèi)、28"C培養(yǎng)7天，獲得為期7天的成熟發(fā)酵肉湯。制備四種處理劑分別置于250ml搖瓶內(nèi)(見表2)。每種處理劑制備兩份，則共有8個(gè)250ml搖瓶。取50ml上述成熟發(fā)酵肉湯加到各搖瓶內(nèi)。然后將所有搖瓶置于振蕩培養(yǎng)箱內(nèi)28'C再培養(yǎng)7天，使搖瓶中內(nèi)容物達(dá)到平衡。之后，將每種含處理劑搖瓶中的一個(gè)搖瓶轉(zhuǎn)到28'C靜止培養(yǎng)，另一個(gè)燒瓶轉(zhuǎn)到35'C靜止培養(yǎng)。表2處理劑一海藻糖和甘油對慢生大豆根瘤菌穩(wěn)定性的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>定期從搖瓶中取樣，利用總活板計(jì)數(shù)法進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。用平板計(jì)數(shù)時(shí)，先混合樣品，然后用移液器(calibratedpipette)和無菌槍頭取lml樣品，加到裝有9ml反滲透(RO)水的試管內(nèi)，得到10—'稀釋液。然后用IOOOulRainin移液器(校準(zhǔn)并調(diào)到IOOOn1)和無菌槍頭從10—i稀釋試管中取出1000yL稀釋液，加到裝有9ml反滲透水的另一試管內(nèi)，得到10—2稀釋液。重復(fù)上述步驟，直到獲得10一7稀釋液。要注意每次轉(zhuǎn)移前要將裝有稀釋液的試管振蕩混勻。再用100p1Rainin移液器(校準(zhǔn)并調(diào)到30ul)和無菌槍頭，從10—'稀釋試管中取出30"1，在營養(yǎng)瓊脂平板上滴3滴，每滴IOpI，用作污染檢測平板。該營養(yǎng)瓊脂為Oxoid培養(yǎng)基。按上述步驟制備其他稀釋液，但10—5、10—6和10—7稀釋液除外。將樣品加到剛果紅酵母甘露醇瓊脂標(biāo)準(zhǔn)平板上("CRYMA"，見表3)。表3CRYMA平板組分<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>待平板干燥后，將平板倒置于28'C培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)5天。之后在低倍顯微鏡下進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。根據(jù)平均值X稀釋倍數(shù)X100，算出總菌數(shù)。經(jīng)四種處理劑處理的慢生大豆根瘤菌在液體肉湯中28°C培養(yǎng)后的存活結(jié)果如圖l所示。經(jīng)四種處理劑處理的慢生大豆根瘤菌在液體肉湯中35。C培養(yǎng)后的存活結(jié)果如圖2所示。實(shí)驗(yàn)期間含5%甘油的處理劑被污染，所以未包括在圖2中。圖1的結(jié)果表明經(jīng)20%海藻糖和20%海藻糖/5%甘油處理的細(xì)菌在28"C、液體肉湯中存活情況良好。對照中的細(xì)菌數(shù)從實(shí)驗(yàn)開始后大約12-16周之間某個(gè)時(shí)段開始減少。而分別經(jīng)20%海藻糖和20%海藻糖/5%甘油處理后的細(xì)菌數(shù)在同一時(shí)段內(nèi)、甚至在該時(shí)段之后仍保持在較穩(wěn)定的水平。圖2的結(jié)果表明經(jīng)20。/。海藻糖處理的細(xì)菌在35。C、液體肉湯中存活情況良好。經(jīng)其他處理的細(xì)菌數(shù)，包括對照處理，在實(shí)驗(yàn)初期顯著減少，而經(jīng)20%海藻糖處理的細(xì)菌數(shù)在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間均保持相對穩(wěn)定。IO周后，分別從對照和20%海藻糖處理劑取樣，施到大豆種子上。將種子置于22t:培育。定期取樣，測定慢生大豆根瘤菌的活菌數(shù)。測定種上活菌數(shù)的方法如下。稱取500g大豆種子，放到作了標(biāo)記、可重新封口的干凈塑料袋中。用2ml注射器或無菌的2ml移液器，取l.38ml處理劑均勻加到種子表面。將環(huán)境空氣充到己接種的塑料袋中，然后立即將塑料袋封口，搖晃塑料袋直到處理劑將種子均勻覆蓋住為止(大約30秒)。打開塑料袋，置于環(huán)境實(shí)驗(yàn)室條件(2rc)中避免陽光直射，讓種子干燥(約10分鐘)。取一支匙形刮鏟，用酒精整個(gè)擦拭一遍，待干燥后從塑料袋中隨機(jī)挑出100個(gè)完整的種子。將種子置于裝有預(yù)先制備的100ml稀釋液瓶中。將稀釋液瓶封口后立即用力搖晃約l分鐘。使用無菌技術(shù)，按如下方法將已制備的100ml稀釋液進(jìn)行系列稀釋(1)在搖晃100ml稀釋液瓶之后立即取lml懸浮細(xì)菌和稀釋液無菌轉(zhuǎn)移到第一個(gè)裝有9ml反滲透水的稀釋管內(nèi)，得到10—'稀釋液。(2)將1(T稀釋液旋轉(zhuǎn)混合15秒，(3)旋轉(zhuǎn)混合之后立即從10—i稀釋液中取lml轉(zhuǎn)到另一個(gè)裝有9ml反滲透水的稀釋管內(nèi)得到10—2稀釋液，(4)然后將10—2稀釋液旋轉(zhuǎn)混合；(5)重復(fù)步驟(3)和(4)，得到10—3和10—4稀釋液。然后在菌落計(jì)數(shù)用瓊脂平板上詳細(xì)標(biāo)明所使用的稀釋管、處理劑和鋪板日期。每份稀釋液鋪2個(gè)平板。每次從稀釋管取樣鋪板前，都要將稀釋液旋轉(zhuǎn)混勻。然后，用標(biāo)準(zhǔn)的無菌移液技術(shù)從每份稀釋液中取100ul樣品，加到各瓊脂平板中央。用無菌涂布棒將樣品均勻涂布在整個(gè)平板表面。然后將平板置于28X:培養(yǎng)7天。之后數(shù)各平板的菌落形成單位(CFU)數(shù)并記錄。然后用以下公式算出各平板的CFU:[平均菌落數(shù)X{標(biāo)記的稀釋倍數(shù)X10(a)X100(b)}/100(c)]，其中(a)是O.lml稀釋液/板的校正值，(b)是對原始稀釋液瓶中100ml稀釋液的校正值，(c)是原始樣品中種子數(shù)的校正值。10周后慢生大豆根瘤菌的種上存活結(jié)果如圖3所示。結(jié)果顯示對照處理后的細(xì)菌數(shù)超過lX107種子的時(shí)長小于1周，而20%海藻糖處理后的時(shí)長在10周以上。這些結(jié)果表明20%海藻糖處理使種上細(xì)菌存活情況良好。實(shí)施例2:使慢生大豆根瘤菌穩(wěn)定所需的最佳海藻糖/蔗糖使用搖瓶制備步驟同實(shí)施例l。該實(shí)施例中的處理情況見表4表4處理劑一海藻糖和蔗糖對慢生大豆根瘤菌穩(wěn)定性的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>經(jīng)處理劑處理的慢生大豆根瘤菌在28"C、液體肉湯中培養(yǎng)后的存活結(jié)果如圖4所示。經(jīng)處理劑處理的慢生大豆根瘤菌在28°C、液體肉湯中培養(yǎng)后的存活結(jié)果如圖5所示。圖4的結(jié)果表明，28°C、海藻糖濃度為10-30%(重量/體積)最適宜細(xì)菌在液體肉湯中的存活。圖4還表明經(jīng)濃度為5-10%(重量/體積)的蔗糖處理也有利于細(xì)菌液體肉湯中的存活，但達(dá)不到與海藻糖處理同樣的效果。圖4還表明細(xì)菌經(jīng)40%海藻糖處理后仍能存活，說明細(xì)菌在抑制微生物生長的制劑中仍具有存活能力。圖5的結(jié)果表明，35°C、海藻糖濃度為10-30%(重量/體積)最適宜細(xì)菌在液體肉湯中的存活。圖5還表明經(jīng)濃度為5%(重量/體積)的蔗糖處理也有利于液體肉湯中細(xì)菌的存活，但達(dá)不到與海藻糖處理同樣的效果。IO周后，分別從表4所列的處理劑中取樣，施用到大豆種子上。將種子置于22。C培育。分別從起始、種上6天后、種上2周后和種上4周后取樣。測定這些樣品中慢生大豆根瘤菌的活菌數(shù)。種上活菌數(shù)測定方法如實(shí)施例l所述，結(jié)果如圖6所示。圖6的結(jié)果表明，22°C、海藻糖濃度為20-30%(重量/體積)最適宜細(xì)菌在種上存活。實(shí)施例3:對6krra"a尸z""eoi03c^a/^和熒光假單胞菌在液體肉湯中穩(wěn)定性的評價(jià)在22°C、標(biāo)準(zhǔn)微生物培養(yǎng)基中培養(yǎng)5em"'a/7r"eo/zz3c"7朋s(含量減半的胰蛋白酶大豆肉湯一"TSB")24小時(shí)，得到細(xì)菌肉湯。準(zhǔn)備一組搖瓶，每個(gè)搖瓶相當(dāng)于表5中列出的一種處理劑。將50ml細(xì)菌肉湯加到各搖瓶中。所有搖瓶在振蕩培養(yǎng)箱內(nèi)22t:再培養(yǎng)3天，使其平衡。然后將搖瓶轉(zhuǎn)移到28'C靜止培養(yǎng)。定期取樣，制備系列稀釋液，鋪到含量減半的胰蛋白酶大豆瓊脂("TSA")上測定細(xì)菌數(shù)。重復(fù)上述步驟對熒光假單胞菌進(jìn)行試驗(yàn)。表5處理劑一海藻糖、蔗糖和甘油對5"/^"e，acW朋s和熒光假單胞菌的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>經(jīng)處理劑處理的熒光假單胞菌在28-C、液體肉湯中培養(yǎng)后的存活結(jié)果如圖7所示。結(jié)果表明在28r經(jīng)甘油、海藻糖和蔗糖處理均能提高熒光假單胞菌的存活率。經(jīng)處理劑處理的6"pr"eo鵬ci/7朋s在28。C、液體肉湯中培養(yǎng)后的存活結(jié)果如圖8所示。結(jié)果顯示到第4周，分別經(jīng)30%海藻糖、10%蔗糖和30%蔗糖處理后的細(xì)菌存活數(shù)大于對照。數(shù)據(jù)表明這些處理劑均能提高61proz^^sc〃Ja/^的存活率。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)清楚，本發(fā)明可以根據(jù)情況以各種形式和方式予以實(shí)施。以上對實(shí)施例的詳細(xì)說明只是為了理解起來更清楚，而非對本發(fā)明的限制。權(quán)利要求1.一種制備半干燥接種劑的方法，該方法包括提供細(xì)菌生長已達(dá)到近穩(wěn)定期的液體接種劑；以及將含有干燥劑的干燥處理劑加到上述液體接種劑中制得半干燥接種劑。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述細(xì)菌是選自根瘤菌、假單胞菌屬、沙雷氏菌屬、桿菌屬、巴斯德氏菌屬、固氮菌屬、腸桿菌屬、固氮螺菌屬、甲基桿菌屬和藍(lán)細(xì)菌中的一種或多種細(xì)菌。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述半干燥接種劑的水分活度約低于0.990。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述半干燥接種劑的水分活度約低于0.980。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述液體接種劑按如下步驟制備將細(xì)菌接種到液體營養(yǎng)培養(yǎng)基中，獲得細(xì)菌培養(yǎng)物；以及對細(xì)菌培養(yǎng)物進(jìn)行培養(yǎng)，讓細(xì)菌生長到近穩(wěn)定期后得到液體接種劑。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中，所述細(xì)菌培養(yǎng)物的培養(yǎng)時(shí)間為2-7天。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述干燥劑是一種或多種選自非還原糖和糖醇的物質(zhì)。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述干燥劑包括海藻糖、蔗糖、甘油、三乙撐乙二醇和甘露醇中的兩種或多種物質(zhì)的混合物。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述干燥劑是海藻糖、蔗糖、甘油、三乙撐乙二醇和甘露醇中的一種或多種物質(zhì)。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中，所述干燥劑的重量約占所述半干燥接種劑體積的5-50%。11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中，所述干燥劑包括海藻糖。12.根據(jù)權(quán)利要求ll所述的方法，其中，所述海藻糖的重量約占所述半干燥接種劑體積的10-40%。13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中，所述海藻糖的重量約占所述半干燥接種劑體積的20-30%。14.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述干燥劑包括海藻糖和甘油混合物。15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中，所述海藻^的重量約占所述半干燥接種劑體積的5-40%所述甘油的重量約占所述半干燥接種劑體積的i-io%。16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中，所述海藻糖的重量約占所述半干燥接種劑體積的20%所述甘油的重量約占所述半干燥接種劑體積的5%。17.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，該方法進(jìn)一步包括包裝所述半干燥接種劑。18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中，該方法進(jìn)一步包括儲存所述半干燥接種劑。19.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，該方法進(jìn)一步包括將半干燥接種劑施用到種子上。20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，所述細(xì)菌是選自根瘤菌、假單胞菌屬、沙雷氏菌屬、桿菌屬、巴斯德氏菌屬、固氮菌屬、腸桿菌屬、固氮螺菌屬和藍(lán)細(xì)菌中的一種或多種細(xì)菌。21.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，所述干燥劑是一種或多種選自非還原糖和糖醇的物質(zhì)。22.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，所述干燥劑是海藻糖、蔗糖、甘油、三乙撐乙二醇和甘露醇中的一種或多種物質(zhì)。23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中，所述干燥劑的重量約占所述半干燥接種劑體積的5-50%。24.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中，所述干燥劑包括海藻糖。25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中，所述海藻糖的重量約占所述半干燥接種劑體積的10-40%。26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中，所述海藻糖的重量約占所述半干燥接種劑體積的20-30%。27.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，所述種子包括豆科植物的種子。28.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，半干燥接種劑施用到種子上10周之后的種上細(xì)菌數(shù)約大于1X105。29.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中，該方法進(jìn)一步包括在半干燥接種劑施用之后向種子內(nèi)添加補(bǔ)充劑。30.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，將半干燥接種劑加到干燥載體中形成干燥、可流動的接種劑。31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中，該干燥載體是泥炭。全文摘要本發(fā)明包括一種制備含有干燥劑的液體接種劑的方法。該方法能提高液體接種劑中細(xì)菌在包裝容器內(nèi)和施用于種子之后的存活率和穩(wěn)定性。該方法包括提供細(xì)菌生長已達(dá)到近穩(wěn)定期的液體接種劑，以及將含有干燥劑的干燥處理劑加到上述液體接種劑中制得半干燥接種劑。該半干燥接種劑可進(jìn)行包裝和儲存。它還可施用到種子上。文檔編號A01C1/06GK101106900SQ200580044343公開日2008年1月16日申請日期2005年11月14日優(yōu)先權(quán)日2004年12月23日發(fā)明者杰里米·大衛(wèi)·皮爾斯,瑪麗安娜·卡彭特申請人:貝克安德伍德有限公司