專利名稱：一種復(fù)合微生物飼料添加劑及其生產(chǎn)方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種復(fù)合微生物飼料添加劑、其生產(chǎn)方法以及在作為動(dòng)物飼料添加劑中的用途。
背景技術(shù)：
微生物飼料添加劑是根據(jù)微生態(tài)平衡理論、微生態(tài)失調(diào)理論、微生態(tài)營(yíng)養(yǎng)理論和微生態(tài)防治理論選用動(dòng)物體內(nèi)正常微生物菌株及其生長(zhǎng)促進(jìn)物質(zhì)經(jīng)特殊加工工藝而制成的制劑。我國(guó)飼料添加劑分為飼料級(jí)氨基酸、酶制劑、微生物添加劑、抗氧化劑和穩(wěn)定劑等12類。
其中，微生物制劑、酶制劑由于其明顯的使用效果，并且無(wú)抗生素、激素和農(nóng)藥殘留，符合當(dāng)前食品安全概念，應(yīng)用日益廣泛。
目前，國(guó)內(nèi)外微生物飼料添加劑已有品種上市。國(guó)外產(chǎn)品有“Probios”“Biomaax40TM”“Primalac”，國(guó)內(nèi)品種有“華星寶”“促生康”等。微生物飼料添加劑從菌種存活狀態(tài)可分活菌、滅活菌制劑；從菌種構(gòu)成可分單一菌劑和多菌種復(fù)合菌劑；從劑型上分液體、固體、顆粒劑型，也有少量微囊化包埋制劑。
目前國(guó)內(nèi)在復(fù)合微生物篩選培養(yǎng)過(guò)程中，由于缺乏基本的理論指導(dǎo)以及成熟的生產(chǎn)工藝，對(duì)復(fù)合培養(yǎng)的發(fā)酵過(guò)程及其各菌群之間的相互作用及其機(jī)理普遍了解甚少，導(dǎo)致產(chǎn)品活菌總數(shù)不能保持一定水平，產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定，影響了其在使用過(guò)程中的效果。

發(fā)明內(nèi)容
(一)要解決的技術(shù)問題本發(fā)明的目的在于針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，公開了一種復(fù)合微生物飼料添加劑，用于動(dòng)物養(yǎng)殖。本發(fā)明還公開了該添加劑的生產(chǎn)方法和用途。
(二)技術(shù)方案本發(fā)明從大量已知可定植養(yǎng)殖動(dòng)物體內(nèi)有益菌群中篩選出3種不同屬、種的活性微生物菌種，它們具有較好的協(xié)同共生關(guān)系，本發(fā)明篩選出的微生物為釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)、干酪乳桿菌干酪亞種(Lactobacillus caseisubsp.casei)。
根據(jù)上述篩選結(jié)果，本發(fā)明設(shè)計(jì)了一種復(fù)合微生物飼料添加劑，包括釀酒酵母1.0×108～5.0×109cfu/mL、植物乳桿菌1.0×108～5.0×1010cfu/mL、干酪乳桿菌干酪亞種1.0×108～4.0×1010cfu/mL。
優(yōu)選地，該添加劑包括釀酒酵母3.0×108～1.0×109cfu/mL、植物乳桿菌5.0×108～5.0×109cfu/mL、干酪乳桿菌干酪亞種5.0×108～5.0×109cfu/mL。
本發(fā)明所述的復(fù)合微生物飼料添加劑的生產(chǎn)方法，包括如下步驟1).斜面培養(yǎng)將釀酒酵母、植物乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種原始菌種無(wú)菌條件下分別接種于固體培養(yǎng)基上，將釀酒酵母15～38℃條件下培養(yǎng)2～6天，植物乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種15～42℃條件下培養(yǎng)1～3天，使菌種活化；2).一級(jí)種子培養(yǎng)將步驟1)培養(yǎng)的菌種無(wú)菌條件下分別接種于液體培養(yǎng)基，釀酒酵母15～38℃條件下，100～200r/min搖床培養(yǎng)2～6天，植物乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種15～42℃條件下靜止培養(yǎng)1～3天，單菌種液體培養(yǎng)OD600值3.0-4.0之間時(shí)停止培養(yǎng)，制得一級(jí)種子；3).二級(jí)種子培養(yǎng)按液體培養(yǎng)基的體積比為5～20％的接種量，將一級(jí)種子分別接種于發(fā)酵罐中，釀酒酵母15～38℃條件下，攪拌速度為100～200r/min，通氣量為1∶0.5～1.5，培養(yǎng)2～6天，植物乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種15～42℃條件下培養(yǎng)1～3天，制得二級(jí)種子；4).混合發(fā)酵培養(yǎng)按液體培養(yǎng)基的體積比為5～20％的接種量，將二級(jí)種子接種于發(fā)酵罐中，進(jìn)行高密度發(fā)酵培養(yǎng)，獲得添加劑。
其中，步驟1)、2)、3)中釀酒酵母所用的培養(yǎng)基是PDA培養(yǎng)基，植物乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種所用的培養(yǎng)基是MRS培養(yǎng)基。固態(tài)培養(yǎng)基與液態(tài)培養(yǎng)基的區(qū)別在于固態(tài)培養(yǎng)基在制備過(guò)程中添加了適量的瓊脂。
其中，步驟4)所用的培養(yǎng)基的配方按質(zhì)量百分比為糖蜜1～30％、硫酸銨0.5～10％、蛋白胨0.5～5％、碳酸鈣0.5-3％，余量為水；所述的高密度發(fā)酵培養(yǎng)可以采用補(bǔ)料分批培養(yǎng)(FBC)方式，其中補(bǔ)料碳源為葡萄糖、甘油、蔗糖、糖蜜其中任一種或其混合物；氮源為硫酸銨、牛肉膏、蛋白胨其中任一種或其混合物。
并且，培養(yǎng)過(guò)程分階段調(diào)控發(fā)酵pH、溶解氧、攪拌轉(zhuǎn)速和溫度等條件。具體地說(shuō)發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程包括a、有氧培養(yǎng)階段起始0～24小時(shí)內(nèi)，間隔通氣，保持在有氧條件發(fā)酵，通氣量1∶1～1.5，調(diào)控發(fā)酵溶解氧5～15％，攪拌轉(zhuǎn)速150～200r/min，攪拌間隔時(shí)間1～3小時(shí)，攪拌1～3分鐘，溫度25～35℃；b、微溶氧和厭氧培養(yǎng)階段24～96小時(shí)，保持發(fā)酵液上層微溶氧狀態(tài)，靜止培養(yǎng)，間隔攪拌，攪拌間隔時(shí)間3～5小時(shí)，攪拌3～5分鐘，使用碳酸鈣調(diào)節(jié)pH保持穩(wěn)定在3.8～4.5之間，溫度25～35℃。
本發(fā)明所述復(fù)合微生物飼料添加劑可作為飼料添加劑用于動(dòng)物的飼養(yǎng)。
(三)有益效果本發(fā)明能有效提高飼料利用率和養(yǎng)殖動(dòng)物機(jī)體免疫能力，減少患病幾率，并能改善養(yǎng)殖動(dòng)物肉、蛋、奶的品質(zhì)，降低動(dòng)物飼養(yǎng)成本。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明所要保護(hù)的范圍。
實(shí)施例1 復(fù)合微生物飼料添加劑的構(gòu)成總菌數(shù)為 3.9×109cfu/mL釀酒酵母 8.0×108cfu/mL植物乳桿菌 1.0×109cfu/mL干酪乳桿菌干酪亞種 2.1×109cfu/mL實(shí)施例2 復(fù)合微生物飼料添加劑的構(gòu)成總菌數(shù)為 2.0×109cfu/mL釀酒酵母 1.0×109cfu/mL植物乳桿菌 5.0×108cfu/mL干酪乳桿菌干酪亞種 5.0×108cfu/mL實(shí)施例3 復(fù)合微生物飼料添加劑的構(gòu)成總菌數(shù)為 2.0×1010cfu/mL釀酒酵母 3.0×108cfu/mL植物乳桿菌 5.0×109cfu/mL
干酪乳桿菌干酪亞種 5.0×109cfu/mL實(shí)施例4 復(fù)合微生物飼料添加劑的構(gòu)成總菌數(shù)為 5.0×1010cfu/mL釀酒酵母 1.0×108cfu/mL植物乳桿菌 5.0×1010cfu/mL干酪乳桿菌干酪亞種 1.0×108cfu/mL實(shí)施例5 復(fù)合微生物飼料添加劑的構(gòu)成總菌數(shù)為 4.5×1010cfu/mL釀酒酵母 5.0×109cfu/mL植物乳桿菌 1.0×108cfu/mL干酪乳桿菌干酪亞種 4.0×1010cfu/mL實(shí)施例6 復(fù)合微生物飼料添加劑的生產(chǎn)方法1).斜面培養(yǎng)將釀酒酵母、植物乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種原始菌種無(wú)菌條件下分別接種于固體培養(yǎng)基上，將釀酒酵母30℃條件下培養(yǎng)3天，植物乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種37℃條件下培養(yǎng)2天；2).一級(jí)種子培養(yǎng)將步驟1)培養(yǎng)的菌種無(wú)菌條件下分別接種于液體培養(yǎng)基，釀酒酵母30℃條件下，150r/min搖床培養(yǎng)3天，植物乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種37℃條件下靜止培養(yǎng)2天，制得一級(jí)種子，結(jié)束培養(yǎng)時(shí)各菌懸液光密度OD600值均達(dá)到4.0；3).二級(jí)種子培養(yǎng)按液體培養(yǎng)基的體積比為10％的接種量，將一級(jí)種子分別接種到100L的發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐內(nèi)培養(yǎng)液的總體積為60L，釀酒酵母30℃條件下，攪拌速度為150r/min，通氣量為1∶1，培養(yǎng)3天，植物乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種37℃條件下培養(yǎng)2天，制得二級(jí)種子；4).混合發(fā)酵培養(yǎng)按液體培養(yǎng)基的體積比為15％的接種量，將二級(jí)種子接種到1噸的發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐內(nèi)的培養(yǎng)基總體積為700L，進(jìn)行高密度發(fā)酵培養(yǎng)，獲得添加劑，其中，步驟1)、2)、3)中釀酒酵母所用的培養(yǎng)基是PDA培養(yǎng)基，植物乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種所用的培養(yǎng)基是MRS培養(yǎng)基。
其中，步驟4)所用的培養(yǎng)基的配方按質(zhì)量百分比為糖蜜15％、硫酸銨5％、蛋白胨2.5％、碳酸鈣2％，余量為水；高密度發(fā)酵培養(yǎng)采用補(bǔ)料分批培養(yǎng)方式，其中補(bǔ)料碳源為葡萄糖、甘油、蔗糖、糖蜜；氮源為硫酸銨、牛肉膏、蛋白胨。
發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程包括a、有氧培養(yǎng)階段起始0～24小時(shí)內(nèi)，間隔通氣，保持在有氧條件發(fā)酵，通氣量1∶1.2，調(diào)控發(fā)酵溶解氧10％，攪拌轉(zhuǎn)速180r/min，攪拌間隔時(shí)間2小時(shí)，攪拌2分鐘，溫度30℃；b、微溶氧和厭氧培養(yǎng)階段60小時(shí)，保持發(fā)酵液上層微溶氧狀態(tài)，靜止培養(yǎng)，間隔攪拌，攪拌間隔時(shí)間4小時(shí)，攪拌4分鐘，使用碳酸鈣調(diào)節(jié)穩(wěn)定pH4.0，溫度30℃。
實(shí)施例7 復(fù)合微生物飼料添加劑的生產(chǎn)方法1).斜面培養(yǎng)將釀酒酵母、植物乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種原始菌種無(wú)菌條件下分別接種于固體培養(yǎng)基上，將釀酒酵母15℃條件下培養(yǎng)6天，植物乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種42℃條件下培養(yǎng)1天；2).一級(jí)種子培養(yǎng)將步驟1)培養(yǎng)的菌種無(wú)菌條件下分別接種于液體培養(yǎng)基，釀酒酵母15℃條件下，200r/min搖床培養(yǎng)6天，植物乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種15℃條件下靜止培養(yǎng)3天，制得一級(jí)種子，結(jié)束培養(yǎng)時(shí)各菌懸液光密度OD600值均達(dá)到3.0；3).二級(jí)種子培養(yǎng)按液體培養(yǎng)基的體積比為5％的接種量，將一級(jí)種子分別接種到100L的發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐內(nèi)培養(yǎng)液的總體積為60L，釀酒酵母15℃條件下，攪拌速度為200r/min，通氣量為1∶0.5，培養(yǎng)6天，植物乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種42℃條件下培養(yǎng)1天，制得二級(jí)種子。
4).混合發(fā)酵培養(yǎng)按液體培養(yǎng)基的體積比為20％的接種量，將二級(jí)種子接種到1噸的發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐內(nèi)的培養(yǎng)基總體積為700L，進(jìn)行高密度發(fā)酵培養(yǎng)，獲得添加劑。
其中，步驟1)、2)、3)中釀酒酵母所用的培養(yǎng)基是PDA培養(yǎng)基，植物乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種所用的培養(yǎng)基是MRS培養(yǎng)基。
其中，步驟4)所用的培養(yǎng)基的配方按質(zhì)量百分比為糖蜜30％、硫酸銨0.5％、蛋白胨0.5％、碳酸鈣3％，余量為水；高密度發(fā)酵培養(yǎng)采用補(bǔ)料分批培養(yǎng)方式，其中補(bǔ)料碳源為葡萄糖、甘油；氮源為牛肉膏、蛋白胨。
發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程包括a、有氧培養(yǎng)階段起始0～24小時(shí)內(nèi)，間隔通氣，保持在有氧條件發(fā)酵，通氣量1∶1，調(diào)控發(fā)酵溶解氧5％，攪拌轉(zhuǎn)速200r/min，攪拌間隔時(shí)間3小時(shí)，攪拌3分鐘，溫度35℃；b、微溶氧和厭氧培養(yǎng)階段96小時(shí)，保持發(fā)酵液上層微溶氧狀態(tài)，靜止培養(yǎng)，間隔攪拌，攪拌間隔時(shí)間3小時(shí)，攪拌3分鐘，使用碳酸鈣調(diào)節(jié)穩(wěn)定pH4.5，溫度35℃。
實(shí)施例8 復(fù)合微生物飼料添加劑的生產(chǎn)方法1).斜面培養(yǎng)將釀酒酵母、植物乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種原始菌種無(wú)菌條件下分別接種于固體培養(yǎng)基上，將釀酒酵母38℃條件下培養(yǎng)2天，植物乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種15℃條件下培養(yǎng)3天；2).一級(jí)種子培養(yǎng)將步驟1)培養(yǎng)的菌種無(wú)菌條件下分別接種于液體培養(yǎng)基，釀酒酵母38℃條件下，100r/min搖床培養(yǎng)2天，植物乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種42℃條件下靜止培養(yǎng)1天，制得一級(jí)種子，結(jié)束培養(yǎng)時(shí)各菌懸液光密度OD600值均達(dá)到3.0；3).二級(jí)種子培養(yǎng)按液體培養(yǎng)基的體積比為20％的接種量，將一級(jí)種子分別接種到100L的發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐內(nèi)培養(yǎng)液的總體積為60L，釀酒酵母38℃條件下，攪拌速度為100r/min，通氣量為1∶1.5，培養(yǎng)2天，植物乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種15℃條件下培養(yǎng)3天，制得二級(jí)種子。
4).混合發(fā)酵培養(yǎng)按液體培養(yǎng)基的體積比為5％的接種量，將二級(jí)種子接種到1噸的發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐內(nèi)的培養(yǎng)基總體積為700L，進(jìn)行高密度發(fā)酵培養(yǎng)，獲得添加劑。
其中，步驟1)、2)、3)中釀酒酵母所用的培養(yǎng)基是PDA培養(yǎng)基，植物乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種所用的培養(yǎng)基是MRS培養(yǎng)基。
其中，步驟4)所用的培養(yǎng)基的配方按質(zhì)量百分比為糖蜜1％、硫酸銨10％、蛋白胨5％、碳酸鈣0.5％；高密度發(fā)酵培養(yǎng)采用補(bǔ)料分批培養(yǎng)方式，其中補(bǔ)料碳源為蔗糖、糖蜜；氮源為硫酸銨、牛肉膏。
發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程包括a、有氧培養(yǎng)階段起始0～24小時(shí)內(nèi)，間隔通氣，保持在有氧條件發(fā)酵，通氣量1∶1.5，調(diào)控發(fā)酵溶解氧15％，攪拌轉(zhuǎn)速150r/min，攪拌間隔時(shí)間1小時(shí)，攪拌1分鐘，溫度25℃；b、微溶氧和厭氧培養(yǎng)階段24小時(shí)，保持發(fā)酵液上層微溶氧狀態(tài)，靜止培養(yǎng)，間隔攪拌，攪拌間隔時(shí)間5小時(shí)，攪拌5分鐘，使用碳酸鈣調(diào)節(jié)穩(wěn)定pH3.8，溫度25℃。
實(shí)施例9 禽類使用1、禽類使用量正常使用量2000只家禽每天使用0.1公斤。作為治療腹瀉與下痢等用途，2000只家禽每天使用量為0.5公斤，連續(xù)使用一周。
2、使用方法(1)飲水將本飼料添加劑菌劑0.1公斤加入糖蜜50克(紅糖、白糖都可)，用干凈水配成稀釋菌液，飲水使用。蛋雞可以采用飲一周，停一周的辦法循環(huán)使用。
(2)將本飼料添加劑菌劑0.1公斤加入糖蜜，用干凈水配成稀釋菌液直接拌入飼料。
3、結(jié)果(1)提高家禽免疫力，防治由細(xì)菌、病毒引起的疾病；(2)提高肉蛋產(chǎn)量。
在30天試驗(yàn)期間，用2％的本飼料添加劑飲水、日糧中添加4‰本飼料添加劑喂養(yǎng)種雞。添加本飼料添加劑菌劑種雞產(chǎn)蛋破蛋率1.44％不添加本添加劑種雞產(chǎn)蛋破蛋率2.52％。
肉仔雞增重情況在50天試驗(yàn)期間，試驗(yàn)組雞平均日增重為45g，對(duì)照組雞平均日增重為40g，試驗(yàn)組比對(duì)照組提高12.5％。雛雞發(fā)病率平均由26％減至5.8％。
飼喂本發(fā)明飼料添加劑對(duì)降低種蛋破損率效果、肉仔雞增重極顯著。
實(shí)施例10 豬使用1、使用量和使用方法(1)乳豬、成豬直接使用飼料1000公斤加1-2公斤本飼料添加劑菌劑，噴灑到料中喂養(yǎng)。秋冬季最好用溫水10公斤加入50克糖蜜(紅糖、白糖都可)活化2小時(shí)，飲用或拌料效果更佳。
(2)仔豬促生長(zhǎng)喂養(yǎng)時(shí)間從斷奶至上市連續(xù)使用。
使用方法進(jìn)入生長(zhǎng)圈舍0～15天，按5ml/頭(約一瓶蓋)飲水或拌料喂養(yǎng)；16～30天10ml/頭；31～60天，按飼料量的2‰添加量加到飼料中喂養(yǎng)。
(3)仔豬防治下痢使用方法母豬產(chǎn)前15天到斷奶，添加1～2‰本飼料添加劑到飼料當(dāng)中喂養(yǎng)。仔豬斷奶后，進(jìn)入生長(zhǎng)圈舍飼喂方法同(2)。
作為治療下痢用使用量飼料100公斤加1公斤本添加劑，連續(xù)使用一周或直接灌服30ml/頭連續(xù)使用一周。
2、效果可顯著提高豬日增重、提高飼料報(bào)酬。經(jīng)30天仔豬(36頭)喂養(yǎng)，飼料中添加本飼料添加劑菌劑與不添加相比，平均每頭仔豬增重0.53公斤?？刂谱胸i下痢情況與大劑量抗生素的添加相同。同對(duì)照組相比，下痢率減少20％。
實(shí)施例11 牛使用1、使用量飼養(yǎng)場(chǎng)全價(jià)飼料喂養(yǎng)的用量為1000公斤全價(jià)飼料加本飼料添加菌劑1.5L；飼養(yǎng)場(chǎng)自己配料時(shí)1000公斤飼料加3L飼料添加劑菌劑；飲水喂養(yǎng)時(shí)每天每頭牛25ml(相當(dāng)25g，約合半兩)；作為治療用使用量1000公斤飼料加7L本飼料添加劑菌劑，連續(xù)使用一周。
2、使用方法(1)直接添加按照使用量加入，用干凈水10倍量稀釋，拌入飼料中混勻即可。
(2)飲水喂養(yǎng)將本飼料添加劑菌劑拌入水中喂養(yǎng)(冬天最好用25-30℃溫水)。
每天每頭牛25ml(相當(dāng)25g，約合半兩)本飼料添加劑菌劑加適量水飲用。
冬天最好用25-30℃溫水加入50克糖蜜(紅糖、白糖都可)活化2小時(shí)。
3、效果顯著提高肉、奶產(chǎn)量和品質(zhì)，飼料報(bào)酬高。經(jīng)60天喂養(yǎng)，飼料中添加本飼料添加劑菌劑與不添加相比，平均每頭奶牛產(chǎn)奶日增0.7公斤。
權(quán)利要求
1.一種復(fù)合微生物飼料添加劑，其特征在于該添加劑包括釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)1.0×108～5.0×109cfu/mL、植物乳桿菌(lactobacillus plantarum)1.0×108～5.0×1010cfu/mL、干酪乳桿菌干酪亞種(Lactobacillus casei subsp.casei)1.0×108～4.0×1010cfu/mL。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合微生物飼料添加劑，其特征在于該添加劑包括釀酒酵母3.0×108～1.0×109cfu/mL、植物乳桿菌5.0×108～5.0×109cfu/mL、干酪乳桿菌干酪亞種5.0×108～5.0×109cfu/mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合微生物菌劑，其特征在于該添加劑包括釀酒酵母8.0×108cfu/mL、植物乳桿菌1.0×109cfu/mL、干酪乳桿菌干酪亞種2.1×109cfu/mL。
4.一種如權(quán)利要求1～3任一項(xiàng)所述的復(fù)合微生物飼料添加劑的生產(chǎn)方法，其特征是包含如下步驟1).斜面培養(yǎng)將釀酒酵母、植物乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種原始菌種在無(wú)菌條件下分別接種于固體培養(yǎng)基上，將釀酒酵母15～38℃條件下培養(yǎng)2～6天，植物乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種15～42℃條件下培養(yǎng)1～3天；2).一級(jí)種子培養(yǎng)將步驟1)培養(yǎng)的菌種在無(wú)菌條件下分別接種于液體培養(yǎng)基，釀酒酵母15～38℃條件下，100～200r/min搖床培養(yǎng)2～6天，植物乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種15～42℃條件下靜止培養(yǎng)1～3天，單菌種液體培養(yǎng)OD600值3.0-4.0之間時(shí)停止培養(yǎng)，制得一級(jí)種子；3).二級(jí)種子培養(yǎng)按液體培養(yǎng)基的體積比為5～20％的接種量，將一級(jí)種子分別接種于發(fā)酵罐中，釀酒酵母15～38℃條件下，攪拌速度為100～200r/min，通氣量為1∶0.5～1.5，培養(yǎng)2～6天，植物乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種15～42℃條件下培養(yǎng)1～3天，制得二級(jí)種子；4).混合發(fā)酵培養(yǎng)按液體培養(yǎng)基的體積比為5～20％的接種量，將二級(jí)種子接種于發(fā)酵罐中，進(jìn)行高密度發(fā)酵培養(yǎng)，獲得添加劑，其中，所述的高密度發(fā)酵培養(yǎng)采用補(bǔ)料分批培養(yǎng)方式，其中補(bǔ)料碳源為葡萄糖、甘油、蔗糖、糖蜜其中任一種或其混合物；氮源為硫酸銨、牛肉膏、蛋白胨其中任一種或其混合物。發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程包括a、有氧培養(yǎng)階段起始0～24小時(shí)內(nèi)，間隔通氣，保持在有氧條件發(fā)酵，通氣量1∶1～1.5，調(diào)控發(fā)酵溶解氧5～15％，攪拌轉(zhuǎn)速150-200r/min，攪拌間隔時(shí)間1～3小時(shí)，攪拌1～3分鐘，溫度25～35℃；b、微溶氧和厭氧培養(yǎng)階段24～96小時(shí)，保持發(fā)酵液上層微溶氧狀態(tài)，靜止培養(yǎng)，間隔攪拌，攪拌間隔時(shí)間3～5小時(shí)，攪拌3～5分鐘，使用碳酸鈣調(diào)節(jié)pH保持穩(wěn)定在3.8～4.5之間，溫度25～35℃。
5.一種如權(quán)利要求4所述的復(fù)合微生物飼料添加劑的生產(chǎn)方法，其特征在于1).斜面培養(yǎng)將釀酒酵母、植物乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種原始菌種無(wú)菌條件下分別接種于固體培養(yǎng)基上，將釀酒酵母、干酪乳桿菌干酪亞種30℃條件下培養(yǎng)3天，植物乳桿菌37℃條件下培養(yǎng)2天；2).一級(jí)種子培養(yǎng)將步驟1)培養(yǎng)的菌種無(wú)菌條件下分別接種于液體培養(yǎng)基，釀酒酵母30℃條件下，150r/min搖床培養(yǎng)3天，植物乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種37℃條件下靜止培養(yǎng)2天，單菌種液體培養(yǎng)OD600值3.0-4.0之間時(shí)停止培養(yǎng)，制得一級(jí)種子；3).二級(jí)種子培養(yǎng)按液體培養(yǎng)基的體積比為10％的接種量，將一級(jí)種子分別接種于發(fā)酵罐中，釀酒酵母30℃條件下，攪拌速度為150r/min，通氣量為1∶1，培養(yǎng)3天，植物乳桿菌、干酪乳桿菌干酪亞種37℃條件下培養(yǎng)2天，制得二級(jí)種子；4).混合發(fā)酵培養(yǎng)按液體培養(yǎng)基的體積比為15％的接種量，將二級(jí)種子接種于發(fā)酵罐中，進(jìn)行高密度發(fā)酵培養(yǎng)，獲得添加劑，其中所述的高密度發(fā)酵培養(yǎng)采用補(bǔ)料分批培養(yǎng)方式，其中補(bǔ)料碳源為糖蜜；氮源為蛋白胨，發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程包括a、有氧培養(yǎng)階段起始0～24小時(shí)內(nèi)，間隔通氣，保持在有氧條件發(fā)酵，通氣量1∶1.2，調(diào)控發(fā)酵溶解氧10％，攪拌轉(zhuǎn)速180r/min，攪拌間隔時(shí)間2小時(shí)，攪拌2分鐘，溫度30℃；b、微溶氧和厭氧培養(yǎng)階段60小時(shí)，保持發(fā)酵液上層微溶氧狀態(tài)，靜止培養(yǎng)，間隔攪拌，攪拌間隔時(shí)間4小時(shí)，攪拌4分鐘，使用碳酸鈣調(diào)節(jié)pH保持穩(wěn)定在4.0，溫度30℃。
6.一種如權(quán)利要求1～3任一項(xiàng)所述的復(fù)合微生物飼料添加劑在作為動(dòng)物飼料添加劑中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種復(fù)合微生物飼料添加劑及其生產(chǎn)方法和用途。該添加劑包括釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)、干酪乳桿菌干酪亞種(Lactobacillus caseisubsp.casei)，經(jīng)過(guò)斜面培養(yǎng)、一級(jí)種子、二級(jí)種子以及混合培養(yǎng)發(fā)酵，實(shí)現(xiàn)了復(fù)合菌生物量及其不同菌種配比的最優(yōu)化，復(fù)合添加劑有效活菌數(shù)大于2×10
文檔編號(hào)A23K1/16GK1965674SQ200610078589
公開日2007年5月23日 申請(qǐng)日期2006年5月12日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月12日
發(fā)明者康文力, 金蕊, 李季, 彭生平 申請(qǐng)人:李季