專利名稱：篩選耐鹽堿楊樹突變體的組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種篩選耐鹽堿楊樹突變體的組織培養(yǎng)方法，尤其是一種將胚性細胞經(jīng)低鹽-高鹽-低鹽條件繼代篩選從而得到耐鹽堿突變體的組織培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)：
楊樹是世界上分布最廣、適應(yīng)性最強的樹種，具有速生、優(yōu)質(zhì)、適應(yīng)性強等特點。但隨著地球人口的不斷增長，對資源的需求也日益增大，由于一些不合理開墾，致使土壤逐漸鹽堿化、沙化、貧瘠化。利用組織培養(yǎng)方法篩選耐鹽突變體研究技術(shù)具有便于操作控制，成本低，周期短等優(yōu)點，因此該方法已受到國內(nèi)外學(xué)者的廣泛重視。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明篩選耐鹽堿楊樹突變體的組織培養(yǎng)方法的目的在于提供一種獲得耐鹽堿楊樹突變體的方法。
為達上述目的，本發(fā)明提供一種篩選耐鹽堿楊樹突變體的組織培養(yǎng)方法，將楊樹胚性細胞在含鹽培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)，包括鹽性分化培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)和生根培養(yǎng)，其中，含鹽量(按質(zhì)量體積比計)為2～10‰，含鹽量≤6‰定義為低鹽條件，反之為高鹽條件，繼代培養(yǎng)包括高鹽繼代、低鹽繼代。
所述的鹽性分化培養(yǎng)是指胚性細胞置于含NaCl 2～5‰的Y-2培養(yǎng)基上，在溫度25℃±2℃，光照時間為每天14h的條件下培養(yǎng)25～45天，使其充分分化。
所述的Y-2培養(yǎng)基為MS+6-BA 0-0.4mg/L+KT 0.05-0.4mg/L+IAA0.05-0.2mg/L+蔗糖20-30g/L+瓊脂4-8g/L。
所述的高鹽繼代是將鹽性分化好的幼芽轉(zhuǎn)入含高鹽的Y-2培養(yǎng)基上繼代2～3次，周期為14～21天。
所述的低鹽繼代是將高鹽繼代好的幼芽轉(zhuǎn)入低鹽培養(yǎng)基M4上繼代2～3次，周期為20～40天。
所述M4培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.05-0.3mg/L+蔗糖20-30g/L+瓊脂3-8g/L。
所述的生根培養(yǎng)是將低鹽繼代好的幼芽轉(zhuǎn)入含NaCl 2～6‰、pH值8.0～9.5的M5培養(yǎng)基上生根，培養(yǎng)天數(shù)為20～50天。
所述的M5培養(yǎng)基為1/2MS+IBA 0.1-1.0mg/L+蔗糖20-30g/L+瓊脂3-8g/L。
本發(fā)明的優(yōu)點是 便于操作和控制，且成本低，周期短，獲得耐鹽堿性良好的楊樹突變體。

具體實施例方式 一種篩選耐鹽堿楊樹突變體的組織培養(yǎng)方法，將歐美楊(黑楊派)胚性細胞在含鹽培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)，包括鹽性分化培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)和生根培養(yǎng)，其中，含鹽量(按質(zhì)量體積比計)為2～10‰，含鹽量≤6‰定義為低鹽條件，反之為高鹽條件，繼代培養(yǎng)包括高鹽繼代、低鹽繼代。
第一步將胚性細胞置于含NaCl 3‰的Y-2培養(yǎng)基上鹽性分化培養(yǎng)，溫度25℃±2℃，光照時間為每天14h的條件下培養(yǎng)30天，使其充分分化。
所述的Y-2培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.2mg/L+KT 0.2mg/L+IAA0.05mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂5g/L。
第二步將鹽性分化好的幼芽轉(zhuǎn)入含NaCl 7‰的Y-2培養(yǎng)基上高鹽繼代，繼代2次，周期為21天。
第三步將高鹽繼代好的幼芽轉(zhuǎn)入含NaCl 4‰，pH值為8.0的低鹽培養(yǎng)基M4上低鹽繼代，繼代2次，周期為30天。
所述M4培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂3.5g/L。
第四步將低鹽繼代好的幼芽轉(zhuǎn)入含NaCl 4‰、pH值為8.0的M5培養(yǎng)基上生根培養(yǎng)，培養(yǎng)天數(shù)為35天。
所述的M5培養(yǎng)基為1/2MS+IBA 0.4mg/L+蔗糖20/L+瓊脂3.5g/L。
權(quán)利要求
1、一種篩選耐鹽堿楊樹突變體的組織培養(yǎng)方法，將楊樹胚性細胞在含鹽培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)，包括鹽性分化培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)和生根培養(yǎng)，其中，含鹽量(按質(zhì)量體積比計)為2～10‰，含鹽量≤6‰定義為低鹽條件，反之為高鹽條件，繼代培養(yǎng)包括高鹽繼代、低鹽繼代。
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的篩選耐鹽堿楊樹突變體的組織培養(yǎng)方法，其特征在于所述的鹽性分化培養(yǎng)是指胚性細胞置于含NaCl 2～5‰的Y-2培養(yǎng)基上，在溫度25℃±2℃，光照時間為每天14h的條件下培養(yǎng)25～45天，使其充分分化。
3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的篩選耐鹽堿楊樹突變體的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的Y-2培養(yǎng)基為MS+6-BA 0-0.4mg/L+KT 0.05-0.4mg/L+IAA 0.05-0.2mg/L+蔗糖20-30g/L+瓊脂4-8g/L。
4、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的篩選耐鹽堿楊樹突變體的組織培養(yǎng)方法，其特征在于所述的高鹽繼代是將鹽性分化好的幼芽轉(zhuǎn)入含高鹽的Y-2培養(yǎng)基上繼代2～3次，周期為14～21天。
5、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的篩選耐鹽堿楊樹突變體的組織培養(yǎng)方法，其特征在于所述的低鹽繼代是將高鹽繼代好的幼芽轉(zhuǎn)入低鹽培養(yǎng)基M4上繼代2～3次，周期為20～40天。
6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的篩選耐鹽堿楊樹突變體的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述M4培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.05-0.3mg/L+蔗糖20-30g/L+瓊脂3-8g/L。
7、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的篩選耐鹽堿楊樹突變體的組織培養(yǎng)方法，其特征在于所述的生根培養(yǎng)是將低鹽繼代好的幼芽轉(zhuǎn)入含NaCl2～6‰、pH值8.0～9.5的M5培養(yǎng)基上生根，培養(yǎng)天數(shù)為20～50天。
8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的篩選耐鹽堿楊樹突變體的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的M5培養(yǎng)基為1/2MS+IBA 0.1-1.0mg/L+蔗糖20-30g/L+瓊脂3-8g/L。
全文摘要
一種篩選耐鹽堿楊樹突變體的組織培養(yǎng)方法，為將胚性細胞經(jīng)低鹽—高鹽—低鹽條件繼代篩選的組織培養(yǎng)方法，將楊樹胚性細胞在含鹽培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)，包括鹽性分化培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)和生根培養(yǎng)，其中，含鹽量(按質(zhì)量體積比計)為2～10‰，含鹽量≤6‰定義為低鹽條件，反之為高鹽條件，繼代培養(yǎng)包括高鹽繼代、低鹽繼代。本發(fā)明的優(yōu)點是便于操作和控制，且成本低，周期短，獲得耐鹽堿性良好的楊樹突變體。
文檔編號A01H3/00GK1961647SQ20061011868
公開日2007年5月16日 申請日期2006年11月23日 優(yōu)先權(quán)日2006年11月23日
發(fā)明者蘇敏, 宋學(xué)孟, 董舉文, 張艷, 龐瑞華, 許雄山, 章振華, 王凌健, 張承妹 申請人:上海光兆植物速生技術(shù)有限公司