專(zhuān)利名稱：一種飼用復(fù)合酶的制備方法及其制得的飼用復(fù)合酶的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及飼用復(fù)合酶，具體的涉及一種采用分別測(cè)試分析原料及單酶特性、并根據(jù)該分析結(jié)果選配復(fù)合制劑的飼用復(fù)合酶的制備方法，及采用上述方法制備的飼用復(fù)合酶。
背景技術(shù)：
我國(guó)是一個(gè)農(nóng)業(yè)大國(guó)，養(yǎng)殖業(yè)非常發(fā)達(dá)，因此，生產(chǎn)制造復(fù)合型飼料添加劑應(yīng)用于畜軟業(yè)，對(duì)于促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)、節(jié)約糧食具有深遠(yuǎn)的意義。經(jīng)檢索在該領(lǐng)域的相關(guān)專(zhuān)利申請(qǐng)有①酶飼料添加劑以及含有這種添加劑的動(dòng)物飼料(申請(qǐng)?zhí)枮镃N9416841.6)，該發(fā)明提供了含有木聚糖酶、蛋白酶和β-葡聚糖酶的飼料添加劑；木聚糖酶從木霉屬得到；蛋白酶從枯草溶菌素得到。該申請(qǐng)所包含酶的種類(lèi)比較少，僅含有三種酶，不足以將飼料中一些物質(zhì)充分分解吸收，如纖維素、果膠類(lèi)物質(zhì)、植酸磷等；同時(shí)沒(méi)有彌補(bǔ)動(dòng)物體內(nèi)內(nèi)源酶的不足。②畜禽生物無(wú)機(jī)復(fù)合飼料添加劑的生產(chǎn)方法(申請(qǐng)?zhí)枮镃N97125739.6))該發(fā)明采用生物復(fù)合酶與微量元素、維生素、礦物質(zhì)、氛基酸等復(fù)配來(lái)生產(chǎn)畜禽飼料添加劑，使之產(chǎn)生對(duì)動(dòng)物機(jī)體互相協(xié)同及綜合平衡作用，通過(guò)生物復(fù)合酶與其他物質(zhì)的作用，提高動(dòng)物對(duì)飼料的吸收轉(zhuǎn)化率及利用率，達(dá)到促使動(dòng)物增長(zhǎng)和節(jié)約飼料的目的。該專(zhuān)利所涉及的生物酶的種類(lèi)少，不足以滿足動(dòng)物體內(nèi)充分消化的需要。③一種酶飼料添加劑和包含它的動(dòng)物飼料(申請(qǐng)?zhí)枮镃N94191216.7)，提供了一種飼料添加劑的組合物，其含有一種或多種內(nèi)葡聚糖酶，以及纖維素生物水解酶，這種基于酶的飼料添加劑可以摻入谷類(lèi)飼料中進(jìn)行飼用。④一種飼料添加劑及其制造方法(申請(qǐng)?zhí)枮镃N92106123.4)，這種飼料添加劑含有纖維素復(fù)合酶、四環(huán)素族、對(duì)苯二甲酸和膨潤(rùn)土等，該添加劑保存6個(gè)月后，酶活力下降100％，高效保持期只有一年。以上四個(gè)專(zhuān)利申請(qǐng)中普遍存在的問(wèn)題其提供的添加劑及其制備方法中，所采用的生物酶并沒(méi)有較為全面的考慮原料、動(dòng)物及單酶的特性，即缺乏針對(duì)性，仍然不足以滿足不同原料、不同動(dòng)物體內(nèi)、不同動(dòng)物的生長(zhǎng)階段對(duì)飼料消化吸收的需要。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有飼料生物酶添加劑存在的上述不足，本發(fā)明目的在于，提供了一種采用分別測(cè)試分析原料、動(dòng)物及單酶特性、并根據(jù)該分析結(jié)果有針對(duì)性地選配復(fù)合制劑的飼用復(fù)合酶的制備方法。
本發(fā)明的目的還在于，提供四種采用上述方法制備的飼用復(fù)合酶。
本發(fā)明實(shí)現(xiàn)上述目的采用的技術(shù)方案是一種飼用復(fù)合酶的制備方法，其包括如下步驟1)分別測(cè)試飼料原料特性、日糧特性、飼料加工特性及動(dòng)物特性，并分別記錄測(cè)得的數(shù)據(jù)或繪制圖表；2)根據(jù)步驟1)的數(shù)據(jù)或圖表，初步選擇、分別測(cè)定各單酶特性，并記錄測(cè)得的數(shù)據(jù)或繪制圖表；3)根據(jù)對(duì)比前述數(shù)據(jù)或圖表，固定日糧特性，并分別篩選適用于該日糧的單酶品種及其含量；4)根據(jù)步驟3)的篩選結(jié)果，實(shí)驗(yàn)確定適用于該日糧的單酶組合及其含量；5)根據(jù)步驟4)的結(jié)果，將各單酶按比例混合，制得飼用復(fù)合酶。
前述的飼用復(fù)合酶的制備方法，其特征在于，其還包括如下步驟6)測(cè)試步驟5)制得的飼用復(fù)合酶的特性，并記錄數(shù)據(jù)或繪制圖表；7)將制得的飼用復(fù)合酶取樣與原料或日糧混合后，再測(cè)試其特性，并對(duì)比步驟1)～4)的數(shù)據(jù)，調(diào)整并重新確定該復(fù)合酶中的單酶組分及含量；8)根據(jù)步驟7)所確定的復(fù)合制劑中的各單酶組分及含量，按比例混合制得飼用復(fù)合酶。
前述的飼用復(fù)合酶的制備方法，其特征在于，其還包括如下步驟步驟2)中所述單酶特性的測(cè)定，包括如下步驟1)制備單酶溶液；2)測(cè)試并記錄單酶溶液的熱穩(wěn)定性，根據(jù)測(cè)試結(jié)果繪制圖表；3)測(cè)試并記錄單酶溶液的PH穩(wěn)定性，根據(jù)測(cè)試結(jié)果繪制圖表；4)測(cè)試并記錄底物濃度對(duì)單酶活性的影響，根據(jù)測(cè)試結(jié)果繪制圖表；5)測(cè)試并記錄與該單酶溶液其它單酶制劑相互混合后對(duì)該單酶活性的影響，根據(jù)測(cè)試結(jié)果繪制圖表。
6)測(cè)試并記錄加工工藝對(duì)單酶活性的影響，根據(jù)測(cè)試結(jié)果繪制圖表。
7)將前述步驟2)～6)所得圖表，對(duì)其中任兩個(gè)或多個(gè)，采用圖表對(duì)比法選取最優(yōu)特性區(qū)間。
一種采用前述飼用復(fù)合酶制備方法的飼用復(fù)合酶，其特征在于其適用于添加在乳仔豬玉米豆粕型日糧中，其組分為淀粉酶、蛋白酶、木聚糖酶、葡聚糖酶四種單酶，添加量為0.6～1kg/噸全價(jià)飼料；其組分的酶活為淀粉酶1000u/g、蛋白酶500～600u/g、木聚糖酶4050u/g、葡聚糖酶150u/g。
一種采用前述飼用復(fù)合酶制備方法的飼用復(fù)合酶，其特征在于其適用于添加在中大豬用產(chǎn)品玉米-雜粕型日糧中，其組分為木聚糖酶單酶，添加量為200～500g/噸全價(jià)飼料；其組分的酶活為木聚糖酶6000～8000u/g。
一種采用前述飼用復(fù)合酶制備方法的飼用復(fù)合酶，其特征在于其適用于添加在禽用玉米豆粕型日糧中，其組分為淀粉酶、蛋白酶、木聚糖酶三種單酶，添加量為150～500g/噸全價(jià)飼料；其組分的酶活為淀粉酶800u/g、蛋白酶8000u/g、木聚糖酶700u/g。
一種采用前述飼用復(fù)合酶制備方法的飼用復(fù)合酶，其特征在于其適用于添加在禽用混合谷物型日糧中，其組分為淀粉酶、蛋白酶、木聚糖酶三種單酶，添加量為150～500g/噸全價(jià)飼料；其組分的酶活為淀粉酶400u/g、蛋白酶4000u/g、木聚糖酶5000u/g。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于本發(fā)明提供了一種在不同日糧中添加飼用復(fù)合酶設(shè)計(jì)與測(cè)試方法，在不同日糧配合中最佳單酶組合效果的測(cè)試方法，以使通過(guò)調(diào)整最終選擇適應(yīng)性強(qiáng)的復(fù)合酶，使其能在特定的飼料配方中能發(fā)揮出最好的效果；通過(guò)降低飼料配方能量水平、蛋白水平或提高非常規(guī)原料的使用量來(lái)研究使用復(fù)合酶的效果，初步建立復(fù)合酶的能量和蛋白的價(jià)值研究及非常規(guī)原料的使用效果，以及畜禽糞便中氮磷的排放降低水平變化。本發(fā)明所提供的方法，可充分利用現(xiàn)有的飼料原料(玉米、小麥、餅粕、糠麩)，并針對(duì)中國(guó)養(yǎng)殖業(yè)的主流畜禽品種及其不同生長(zhǎng)階段，分別測(cè)試、分析、選配復(fù)合生物酶；本發(fā)明還通過(guò)對(duì)不同原料及日糧設(shè)計(jì)特點(diǎn)的分析，有針對(duì)性地設(shè)計(jì)和篩選飼料用復(fù)合酶的組合，研制出的4個(gè)復(fù)合酶產(chǎn)品配方，其按一定比例加入飼料中，可促進(jìn)畜禽的消化、吸收，增加飼養(yǎng)效益。
本發(fā)明所提供的技術(shù)方案可達(dá)到如下有益效果1、針對(duì)飼料加工、動(dòng)物消化道特點(diǎn)、日糧特性等對(duì)單酶原料進(jìn)行專(zhuān)業(yè)篩選；2、研究在不同的動(dòng)物日糧、動(dòng)物種類(lèi)及生長(zhǎng)階段針對(duì)性的設(shè)計(jì)復(fù)合酶；3、用酶制劑來(lái)降低動(dòng)物糞便排泄，降低排泄物對(duì)環(huán)境的污染，降低抗生素的用量，提高動(dòng)物食品的安全性；4、提高非常規(guī)副產(chǎn)品原料的使用率及使用效率，降低養(yǎng)殖成本，節(jié)約糧食資源。
我國(guó)是全球最大的畜牧業(yè)養(yǎng)殖大國(guó)，豬、禽的飼養(yǎng)總量位居世界的前列。目前，在我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)和飼料業(yè)所面臨的主要關(guān)鍵問(wèn)題是，一方面飼料資源的嚴(yán)重短缺，特別是蛋白質(zhì)飼料，但是飼料利用率不高，造成飼料資源的嚴(yán)重浪費(fèi)；另一方面我國(guó)人口的增長(zhǎng)，又導(dǎo)致人畜爭(zhēng)糧的矛盾，以及養(yǎng)殖業(yè)與環(huán)境矛盾的日益加劇。而采用本發(fā)明提供的方法和產(chǎn)品，可合理利用與保護(hù)有限的飼料資源，提高飼料資源的有效利用程度，對(duì)于在養(yǎng)殖過(guò)程中，進(jìn)一步合理配置和高效利用飼料資源，提高畜產(chǎn)品的產(chǎn)量、品質(zhì)和安全，確保人類(lèi)健康、環(huán)境安全以及畜牧業(yè)、飼料業(yè)和相關(guān)產(chǎn)業(yè)的持續(xù)發(fā)展，具有直接作用；對(duì)推動(dòng)目前我國(guó)飼養(yǎng)技術(shù)和方式的改進(jìn)、減輕養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)的環(huán)境污染，也具有重要的社會(huì)意義。
下面結(jié)合實(shí)施例及附圖，對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說(shuō)明。


圖1是本發(fā)明實(shí)施例1提供的飼用復(fù)合酶的制備方法的流程示意圖。
圖2是仔豬出生后消化酶的變化動(dòng)態(tài)示意圖；圖3是家禽對(duì)淀粉的消化能力示意圖；圖4是溫度對(duì)木聚糖酶活性的影響圖。
圖5pH對(duì)木聚糖酶活性影響圖；圖6底物濃度對(duì)木聚糖酶活性的影響；圖7是經(jīng)不同溫度處理后木聚糖酶活性存留情況圖；圖8是木聚糖酶貯存期間酶活存留情況圖；圖9是木聚糖酶在不同加工階段酶活變化情況圖；圖10是溫度對(duì)蛋白酶活性的影響圖；圖11是pH對(duì)中性蛋白酶活性的影響圖；圖12是底物濃度對(duì)中性蛋白酶活性的影響圖；圖13是中性蛋白酶經(jīng)不同溫度處理后酶活變化圖；圖14是中性蛋白酶貯存期間酶活存留情況圖；圖15是加工工藝對(duì)中性蛋白酶活性的影響圖；
圖16是乳仔豬復(fù)合酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖；圖17是中大豬復(fù)合酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖；圖18是肉仔雞復(fù)合酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖；圖19是肉鴨復(fù)合酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例參見(jiàn)圖1～圖19，提供一種飼用復(fù)合酶的制備方法及飼用復(fù)合酶。本發(fā)明實(shí)施例是一個(gè)科研與實(shí)際應(yīng)用相結(jié)合的項(xiàng)目，在研究方法上考慮了動(dòng)物消化道的溫度/酸堿度以及底物的選擇、底物濃度的特點(diǎn)，同時(shí)還考慮了飼料加工過(guò)程中對(duì)酶的破壞、利用，最重要的是底物的選擇要與飼料原料的特性要接近。因此，設(shè)計(jì)并完善了測(cè)定酶活性的實(shí)驗(yàn)室分析方法與分析方案，對(duì)單酶的特性進(jìn)行全方位的分析研究。另外，通過(guò)固定動(dòng)物日糧，選擇不同的單酶及組合進(jìn)行針對(duì)性的試驗(yàn)，以篩選、優(yōu)化復(fù)合酶的組配設(shè)計(jì)。通過(guò)對(duì)復(fù)合酶組配的篩選、效果對(duì)比，最終確定合適的制備方法與有針對(duì)性的配方。
參見(jiàn)圖1，一種飼用復(fù)合酶的制備方法的流程，包括如下步驟1)分別測(cè)試飼料原料特性、日糧特性、飼料加工特性及動(dòng)物特性，并分別記錄測(cè)得的數(shù)據(jù)或繪制圖表；2)根據(jù)步驟1)的數(shù)據(jù)或圖表，初步選擇、分別測(cè)定各單酶特性，并記錄測(cè)得的數(shù)據(jù)或繪制圖表；3)根據(jù)對(duì)比前述數(shù)據(jù)或圖表，固定日糧特性，并分別篩選適用于該日糧的單酶品種及其含量；4)根據(jù)步驟3)的篩選結(jié)果，實(shí)驗(yàn)確定適用于該日糧的單酶組合及其含量；5)根據(jù)步驟4)的結(jié)果，將各單酶按比例混合，制得飼用復(fù)合酶。
前述的飼用復(fù)合酶的制備方法，其特征在于，其還包括如下步驟6)測(cè)試步驟5)制得的飼用復(fù)合酶的特性，并記錄數(shù)據(jù)或繪制圖表；7)將制得的飼用復(fù)合酶取樣與原料或日糧混合后，再測(cè)試其特性，并對(duì)比步驟1)～4)的數(shù)據(jù)，調(diào)整并重新確定該復(fù)合酶中的單酶組分及含量；8)根據(jù)步驟7)所確定的復(fù)合制劑中的各單酶組分及含量，按比例混合制得飼用復(fù)合酶。
前述的飼用復(fù)合酶的制備方法，其特征在于，其還包括如下步驟步驟2)中所述單酶特性的測(cè)定，包括如下步驟1)制備單酶溶液；2)測(cè)試并記錄單酶溶液的熱穩(wěn)定性，根據(jù)測(cè)試結(jié)果繪制圖表；3)測(cè)試并記錄單酶溶液的PH穩(wěn)定性，根據(jù)測(cè)試結(jié)果繪制圖表；4)測(cè)試并記錄底物濃度對(duì)單酶活性的影響，根據(jù)測(cè)試結(jié)果繪制圖表；5)測(cè)試并記錄與該單酶溶液其它單酶制劑相互混合后對(duì)該單酶活性的影響，根據(jù)測(cè)試結(jié)果繪制圖表。
6)測(cè)試并記錄加工工藝對(duì)單酶活性的影響，根據(jù)測(cè)試結(jié)果繪制圖表。
7)將前述步驟2)～6)所得圖表，對(duì)其中任兩個(gè)或多個(gè)，采用圖表對(duì)比法選取最優(yōu)特性區(qū)間。
具體的，經(jīng)過(guò)優(yōu)選的實(shí)施例如下1.2原料及日糧特性分析1.2.1玉米的特性。在谷物能量原料中，玉米在我國(guó)是主要的能量飼料原料。長(zhǎng)期以來(lái)，玉米都被認(rèn)為是一種高效穩(wěn)定的能量原料，最近的研究表明，玉米的消化率并沒(méi)有以前想象的那么高(認(rèn)為表觀消化率高達(dá)95％)，另外，玉米營(yíng)養(yǎng)成分的變異最近也引起了人們的關(guān)注，尤其是玉米的能值，因?yàn)橛衩壮四苤低獾钠渌B(yǎng)分基本就是可以在試驗(yàn)室測(cè)定的。玉米的能值受產(chǎn)地、收獲季節(jié)、品種、干燥方式等不同變化較大，最高時(shí)不同玉米間能值差異可達(dá)到300～500kcal/kg。
提高玉米可利用能值的方式有兩種一是通過(guò)育種培育高能值玉米；二是提高玉米能值的消化率。因此，要解決玉米的主要問(wèn)題是提高玉米淀粉的消化率，因此選擇的酶制劑應(yīng)以淀粉酶為主。不同品牌的復(fù)合酶中，淀粉酶的來(lái)源不同，不是所有的淀粉酶在動(dòng)物消化道內(nèi)具有相同的消化淀粉的能力。同時(shí)，還應(yīng)補(bǔ)充一些蛋白酶，證據(jù)①表明部分淀粉顆粒被一層蛋白膜包裹，只有打破了蛋白膜才能使淀粉更好的被消化。
1.2.2豆粕的特性。動(dòng)物飼料中最主要的蛋白來(lái)源就是豆粕。針對(duì)豆粕最主要的問(wèn)題就是如何提高豆粕貯存蛋白利用率以及破壞豆粕中抗?fàn)I養(yǎng)因子的負(fù)作用，其中首選的主要的酶制劑是蛋白酶。參見(jiàn)表1，大豆中存在的抗?fàn)I養(yǎng)因子，雖然在大豆加工過(guò)程中會(huì)破壞一部分，但由于大豆品種、加工工藝等方面的不同，其對(duì)抗?fàn)I養(yǎng)因子破壞的程度差異很大。減少豆粕中抗?fàn)I養(yǎng)因子的危害有多種方法，如大豆品種改良、大豆熱處理加工、飼料的粉碎制粒工藝及添加酶制劑等。在豆粕中，危害最大的抗?fàn)I養(yǎng)因子主要是蛋白質(zhì)類(lèi)的胰蛋白酶抑制因子、植物凝集素、抗性蛋白等抗?fàn)I養(yǎng)因子，這些蛋白質(zhì)類(lèi)的抗?fàn)I養(yǎng)因子在經(jīng)過(guò)加工過(guò)程中的被部分破壞后，可以通過(guò)在飼料中添加蛋白酶來(lái)進(jìn)一步在動(dòng)物體內(nèi)對(duì)其進(jìn)行破壞，以降低其對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的抑制作用。
表1 豆粕中抗?fàn)I養(yǎng)因子的種類(lèi)及危害

另外，作為動(dòng)物飼料中主要的蛋白來(lái)源，豆粕的品質(zhì)變異也是影響豆粕有效利用的一個(gè)重要因素。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，豆粕的品質(zhì)隨大豆的產(chǎn)地不同、品種不同及加工工藝的不同而變化較大。在實(shí)際設(shè)計(jì)動(dòng)物日糧時(shí)，若要考慮豆粕品質(zhì)間的差異，則必須提高日糧中粗蛋白質(zhì)的含量，以保證產(chǎn)品質(zhì)量，若不考慮這種品質(zhì)變化，則不僅給產(chǎn)品質(zhì)量帶來(lái)不穩(wěn)定因素，而且會(huì)給動(dòng)物生長(zhǎng)的均一性帶來(lái)很大影響，尤其對(duì)適時(shí)出欄的肉雞影響最大。用酶制劑處理的方法不僅可以破壞豆粕中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，而且可以提高大豆貯藏蛋白的消化率，從而降低豆粕品質(zhì)間的差異，在一定程度上降低配方制作時(shí)的安全量以降低配方成本。
1.2.3小麥的特性。在中國(guó)，小麥作為原料使用受玉米市場(chǎng)價(jià)格的影響，究其本質(zhì)的原因則是其能值的利用比玉米低，導(dǎo)致小麥作為飼料原料的價(jià)值降低。在小麥方面要解決的首要問(wèn)題是小麥中可溶性阿拉伯木聚糖在腸道中引起的粘性的抗?fàn)I養(yǎng)作用。首選的酶制劑是阿拉伯木聚糖酶，阿拉伯木聚糖酶的作用主要是將小麥中的阿拉伯木聚糖分解成小分子的木寡糖，降解其在動(dòng)物消化道中引起食糜粘性增加的負(fù)作用。眾多專(zhuān)家經(jīng)過(guò)多年對(duì)小麥日糧的研究發(fā)現(xiàn)，限制小麥能量利用的關(guān)鍵因素是小麥中含有較高水平的非淀粉多糖，尤其是阿拉伯木聚糖(Choct and Annison，1992a)。阿拉伯木聚糖的負(fù)作用表現(xiàn)在以下幾方面1.2.3.1阿拉伯木聚糖在動(dòng)物腸道中吸水后變得粘稠，增加了腸道食糜的粘性。食糜粘性的增加不僅阻止了消化酶擴(kuò)散與養(yǎng)分的接觸，降低了養(yǎng)分的消化率，而且也減緩了可吸收養(yǎng)分向腸壁的擴(kuò)散，抑制了吸收。
1.2.3.2消化吸收的反饋調(diào)節(jié)可使分泌腺增生，消化器官變大，消化液分泌增加，消化酶的分泌增加，增加腸道的代謝消耗。
1.2.3.3未被消化的養(yǎng)分流向后腸道，增加了后腸道微生物的繁殖，不僅增強(qiáng)了微生物與動(dòng)物之間的養(yǎng)分競(jìng)爭(zhēng)、腸壁細(xì)胞的周轉(zhuǎn)加快，而且還會(huì)造成動(dòng)物水樣糞便。這些都不僅增加養(yǎng)分的消耗，而且影響了動(dòng)物的健康，降低了動(dòng)物的生產(chǎn)性能。
另外，小麥作為飼料時(shí)，其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的變異也遠(yuǎn)遠(yuǎn)大過(guò)玉米。小麥的主要用途是食用而非飼用，只有玉米價(jià)格較高的情況下小麥才有司能用到飼料中，因此在使用過(guò)程中，不僅會(huì)碰到小麥貯存時(shí)間的差開(kāi)尤其是陳化糧，還會(huì)發(fā)現(xiàn)小麥的產(chǎn)地、品種、種植時(shí)間等一般是不可知的，因此更難判斷小麥的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值及其變異。
1.2.4谷物副產(chǎn)品的特性。主要包括次粉、麩皮、米糠、DDGS等，這些原料在我國(guó)的動(dòng)物日糧配方中應(yīng)用較普遍。影響這些原料利用的一個(gè)主要因素是非淀粉多糖，如纖維素、木聚糖、葡聚糖等，具體原料中各抗?fàn)I養(yǎng)因子的含量見(jiàn)下表。非淀粉多糖會(huì)引起以下幾種抗?fàn)I養(yǎng)作用1.2.4.1可溶性的木聚糖與葡聚糖增加腸道食糜粘性，粘性的增加不僅阻礙了消化酶與底物的接觸，同時(shí)也影響了養(yǎng)分的吸收。另外由于食糜通過(guò)腸道速度下降，會(huì)引起腸道微生物的過(guò)度發(fā)酵，不僅消耗養(yǎng)分而且會(huì)損害腸道的健康，從而增加腸道營(yíng)養(yǎng)的維持需要等。同時(shí)，由于排泄物水分過(guò)高，還會(huì)對(duì)動(dòng)物的生長(zhǎng)環(huán)境造成不利影響。
1.2.4.2由非淀粉多糖組成的細(xì)胞壁對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的包裹，這道屏障阻礙了消化酶與底物的接觸。只有充分打破這種屏障才能釋放出更多的可利用養(yǎng)分。由于動(dòng)物自身不分泌消化細(xì)胞壁的酶制劑，外添加酶制劑是一種有效地解決方法。
因此，參見(jiàn)表2，在谷物副產(chǎn)品含量較高的日糧配方中，改善原料利用特性的幾種酶制劑主要是木聚糖酶和葡聚糖酶。
表2 谷物副產(chǎn)品中抗?fàn)I養(yǎng)因子分析(％干物質(zhì))

1.2.5雜粕的特性。其主要包括棉、菜粕和葵粕等。限制雜粕利用的因素除了自身特有的有毒有害成份外，共有的抗?fàn)I養(yǎng)因子與豆粕相近，具體的抗?fàn)I養(yǎng)因子見(jiàn)表3。棉粕與菜粕在動(dòng)物生長(zhǎng)前期的日糧中的用量相對(duì)較小，在生長(zhǎng)中后期畜禽日糧中用量相對(duì)較大。解決雜粕中主要的非淀粉多糖類(lèi)抗?fàn)I養(yǎng)因子的酶應(yīng)以木聚糖酶與葡聚糖酶為主。
表3雜粕原料中抗?fàn)I養(yǎng)因子分析(％干物質(zhì))

1.3動(dòng)物特性分析動(dòng)物消化的生理特點(diǎn)1.3.1豬的特性。參見(jiàn)圖2，在自然生長(zhǎng)過(guò)程中，豬出生后，消化道的酶系統(tǒng)隨著采食食物的不同逐漸發(fā)生相應(yīng)的變化。但在高規(guī)模化集約化的養(yǎng)殖方式下，一般在3～4周時(shí)會(huì)人工斷奶，采食的方式和內(nèi)容都發(fā)生了較大變化，人為造成了仔豬體內(nèi)的消化酶有一個(gè)突然下降，至少需要3～4周的時(shí)間才能恢復(fù)到正常水平。在斷奶后的一個(gè)月的時(shí)間內(nèi)，由于內(nèi)源消化酶分泌的突然下降，會(huì)導(dǎo)致仔豬的消化發(fā)生紊亂，嚴(yán)重時(shí)會(huì)影響仔豬后期的生長(zhǎng)。在此階段有必要補(bǔ)充適合的內(nèi)源酶以幫助仔豬度過(guò)斷奶后一個(gè)月的應(yīng)激期。在中大豬階段，動(dòng)物體內(nèi)的內(nèi)源性消化酶的分泌基本已滿足自身需要，但由于此時(shí)動(dòng)物日糧中的谷物副產(chǎn)品和雜粕的用量會(huì)越來(lái)越高，這些原料中非淀粉多糖的含量較高，而豬自身不分泌非淀粉多糖酶，此時(shí)重點(diǎn)補(bǔ)充的酶制劑應(yīng)是木聚糖酶和葡聚糖酶等非淀粉多糖酶。
1.3.2家禽的特性。家禽的腸道較短，一方面是解決家禽的粘性問(wèn)題，另一方面要適當(dāng)補(bǔ)充內(nèi)源酶以幫助家禽對(duì)能量與蛋白的消化。參見(jiàn)圖3，研究表明，家禽對(duì)淀粉的消化率并沒(méi)有隨著日齡的增長(zhǎng)而增長(zhǎng)，對(duì)淀粉的消化率平均保持在85％，要想提高家禽對(duì)淀粉的消化率，在家禽日糧中補(bǔ)充一定量的淀粉酶是很有必要的。
1.4動(dòng)物特性與飼料加工特點(diǎn)參見(jiàn)表4，豬與雞是恒溫動(dòng)物，體溫保持在38～40℃范圍內(nèi)，但飼料加工的溫度(乳仔料65～70℃，中大豬料75～80℃，禽料85～90℃)卻遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)動(dòng)物的體溫，因此在選擇單酶時(shí)，不僅要考慮酶制劑在動(dòng)物體溫下的催化效率，還要考慮酶是否能夠經(jīng)受飼料加工時(shí)惡劣條件的破壞。另外，由于消化道內(nèi)的酸堿度變化范圍較大，因此選擇的酶制劑一定要有較強(qiáng)的耐受性，在整個(gè)消化道的環(huán)境中都能表現(xiàn)出較好的催化效果。
表4動(dòng)物消化道內(nèi)溫度與pH變化

1.5單酶特性分析本實(shí)施例所使用的內(nèi)切阿拉伯木聚糖酶(EC 3.2.1.8)和內(nèi)切中性蛋白酶(EC 3.4.21.62)是與東莞市泛亞太公司與原美國(guó)GenencorInternational公司聯(lián)合研制開(kāi)發(fā)，分別由Trichoderma longibrachiatum和Bacillus subtilis經(jīng)液體深層發(fā)酵，分離、提純、濃縮、干燥后制成的飼料專(zhuān)用單酶制品，其具有活性高，抗逆性強(qiáng)，底物專(zhuān)一性等特點(diǎn)。為了更進(jìn)一步的了解上述單酶制品的酶學(xué)特性，有針對(duì)性的做了如下測(cè)試和研究。
1.5.1木聚糖酶酶學(xué)性質(zhì)的測(cè)試為了更有效地應(yīng)用木聚糖酶，現(xiàn)對(duì)其pH穩(wěn)定性、熱穩(wěn)定性、底物濃度等酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行測(cè)試和研究。
1.5.1.1溫度對(duì)木聚糖酶活性的影響溫度對(duì)酶反應(yīng)速度有很大的影響，并且每種酶都有自己的最適溫度。因此，在不同溫度(20℃、30℃、40℃、50℃、55℃、60℃、70℃、80℃和90℃)其它條件相同的情況下(pH5.3、底物濃度1％)，測(cè)定木聚糖酶的活性，其結(jié)果見(jiàn)圖4。
由圖4可以看到木聚糖酶在不同的反應(yīng)溫度下測(cè)定的酶活，其活性變化較大，40℃時(shí)酶活大于82％，在30℃時(shí)酶活仍然大于55％，反應(yīng)溫度在高于60℃后，酶活急劇下降，在60℃到70℃之間酶活從94％下降到60％，這說(shuō)明，木聚糖酶的活性對(duì)反應(yīng)溫度的變化有些敏感。此產(chǎn)品提供的酶活的最適范圍溫度在40～60℃間，最佳反應(yīng)溫度為55℃，本試驗(yàn)的測(cè)定結(jié)果基本反應(yīng)了此產(chǎn)品的的酶活隨溫度變化的特性。
在實(shí)際應(yīng)用中，由于動(dòng)物胃腸道內(nèi)的溫度在38～40℃間，從結(jié)果來(lái)看，此時(shí)木聚糖酶活性在80％左右。一方面，雖然動(dòng)物胃腸道內(nèi)酶的作用效果可因酶的作用時(shí)間較長(zhǎng)從而可彌補(bǔ)酶活低的不足，另一方面，可以通過(guò)適當(dāng)提高木聚糖酶在飼料中的添加量來(lái)解決這一問(wèn)題。
1.5.1.2 pH對(duì)木聚糖酶活性的影響pH也對(duì)酶反應(yīng)速度有很大影響。分別將底物和對(duì)應(yīng)的緩沖稀釋液的pH調(diào)整到3.0、4.0、5.0、5.3、6.0、6.5、7.0、8.0和9.0，然后在其它條件相同的情況下(溫度55℃、底物濃度1％)分別測(cè)其酶活，結(jié)果如圖5所示。
由圖5可以看出，木聚糖酶在pH＝4～6之間保持較高的活性，平均90％以上，在之外的范圍酶活急劇下降，pH＝4的時(shí)候，酶活接近80％，但pH＝3時(shí)酶活僅為15％，在pH＝6.5時(shí)，酶活為55％，在pH＝7時(shí)，酶活為23％左右，當(dāng)pH＝9時(shí)，基本上檢不出酶的活性。
此酶的酶活最適的pH范圍在4～6之間，最佳反應(yīng)pH的為5.3，本試驗(yàn)的測(cè)定結(jié)果反應(yīng)了此酶的酶活隨pH變化的特性，說(shuō)明此酶在偏酸性的條件下有較好的表現(xiàn)。在實(shí)際應(yīng)用中，由于動(dòng)物胃腸道內(nèi)的pH偏酸性，所以此木聚糖酶在動(dòng)物胃腸道內(nèi)的條件下能夠發(fā)揮較好的作用。
1.5.1.3底物濃度對(duì)木聚糖酶活性的影響將木聚糖底物分別制備成0.2％、0.4％、0.6％、0.8％和1.0％五個(gè)濃度，在保證底物過(guò)飽和其它條件相同的情況下(溫度55℃、pH5.3)，加入相應(yīng)量的酶稀釋液測(cè)定酶活，其結(jié)果如圖6所示。由圖6可以看出，木聚糖酶的活性隨底物濃度的提高活性逐漸增強(qiáng)，在底物濃度達(dá)到0.6％(相當(dāng)于最高活性時(shí)底物濃度的60％)時(shí)，木聚糖酶的活性基本穩(wěn)定，并接近了酶活的最高值。這說(shuō)明，木聚糖酶實(shí)際應(yīng)用中，底物濃度較低時(shí)就有可能發(fā)揮出最高的活性。
1.5.1.4經(jīng)不同溫度處理后酶活存留情況將固體木聚糖酶在從55℃～100℃(水分含量≤8％)，每間隔5℃的條件下分別處理5分鐘，然后測(cè)定(pH5.3、溫度55℃、底物濃度1％)其酶活，其結(jié)果如圖7所示。由圖7可以看到，木聚糖酶在干燥的狀態(tài)下經(jīng)過(guò)累積溫度處理后，在不同溫度下的酶活表現(xiàn)是先升高后下降，在70℃以前木聚糖酶的活性基本沒(méi)有損失，70℃以后酶活開(kāi)始損失，到85℃時(shí)酶活存留大于88％，100℃時(shí)酶活存留在75％左右。酶活在60-70℃間有升高的現(xiàn)象待進(jìn)一步驗(yàn)證。
1.5.1.5其它酶制劑相互混合后對(duì)木聚糖酶的影響將木聚糖酶(X1222)分別與蛋白酶(P1222)和淀粉酶(A1222)按表5體積比混合后，常溫下放置一個(gè)月后測(cè)定(pH5.3、溫度55℃、底物濃度1％)其中木聚糖酶活性，結(jié)果表明蛋白酶和淀粉酶對(duì)木聚糖酶的活性并無(wú)影響。
1.5.1.6木聚糖酶在貯存期間酶活存留情況將固體木聚糖酶產(chǎn)品(水分含量≤8％)常溫下保存，然后每隔兩個(gè)月取樣測(cè)定(pH5.3、溫度55℃、底物濃度1％)其酶活，結(jié)果如圖8。
由圖8可看出，木聚糖酶在一年內(nèi)酶活下降不到15％，尤其在前4個(gè)月內(nèi)，酶活下降緩慢不到7.0％，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，酶活會(huì)逐漸下降，但速度較平緩，前6個(gè)月的酶活平均下降率為1.63％。
表5其它酶制劑與木聚糖酶混合后木聚糖酶活性表

注1、表中X1222為固體木聚糖酶，P1222為固體蛋白酶，A1222為固體淀粉酶。
2、水分含量小于8％。
1.5.1.7加工工藝對(duì)木聚糖酶活性的影響按照設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)將1.0公斤活性為25,000U/g的木聚糖酶按1kg/噸的添加量加入小豬飼料后制粒，制粒的條件及溫度(75℃左右)與商業(yè)飼料廠一致，在不同生產(chǎn)階段(混合后、調(diào)制后、制粒后及打包口)分別取樣并測(cè)定(pH5.3、溫度55℃、底物濃度1％)木聚糖酶的活性，其結(jié)果見(jiàn)圖9。
此木聚糖酶與飼料原料混合后其活性與設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)相比有明顯的下降，只有45％的活性保留下來(lái)，但此時(shí)并沒(méi)有經(jīng)過(guò)高溫及壓力的處理，說(shuō)明此木聚糖酶與飼料混合后有55％的活性是在實(shí)驗(yàn)室的條件下不能檢出的。經(jīng)過(guò)高溫(75℃左右)調(diào)制后，與設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)相比，此木聚糖酶在飼料中的活性保留率只有37％左右，下降幅度較大，但與混合后相比，此木聚糖酶的活性保留率為82％(45.2對(duì)37.2％)，下降幅度僅為18％左右，說(shuō)明高溫(75℃左右)調(diào)制對(duì)此木聚糖酶的影響不大。制粒過(guò)程是高溫及壓力的結(jié)合，此過(guò)程對(duì)一般的木聚糖酶的活性影響巨大，但此木聚糖酶經(jīng)過(guò)高溫及高壓的制粒過(guò)程后，與調(diào)制后相比，酶活的保留率僅下降了12％左右(37.2對(duì)32.8％)，與混合后相比，酶活在飼料中的保留率也只下降了27％左右(45.2對(duì)32.8％)。打包口的酶活保留率與制粒后的保留率基本一致(32.8對(duì)33.5％)。
本實(shí)驗(yàn)說(shuō)明飼料加工過(guò)程中的高溫及高壓的制粒過(guò)程對(duì)該木聚糖酶的影響是有限的，整個(gè)調(diào)制、制粒過(guò)程對(duì)此木聚糖酶酶活保留率的影響不大于26％(45.2對(duì)33.5％)，但此木聚糖酶與飼料原料混合的過(guò)程會(huì)影響在實(shí)驗(yàn)室用現(xiàn)有的方法測(cè)定酶活保留率(100對(duì)45.2％)，影響酶活測(cè)定的原因有諸多，如金屬離子的干擾、酶與底物的作用、測(cè)定方法的靈敏度等因素。
1.5.2中性蛋白酶酶學(xué)性質(zhì)的測(cè)試和研究1.5.2.1溫度對(duì)中性蛋白酶活性的影響分別在30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、60℃、70℃和80℃，而其它條件相同(pH7.5、底物濃度1％)的情況下測(cè)中性蛋白酶的酶活，結(jié)果作圖如圖10所示。
由圖10看出，中性蛋白酶的隨反應(yīng)溫度的變化其酶活變化較大，反應(yīng)溫度在40℃左右時(shí)，酶活表現(xiàn)最好，反應(yīng)溫度在35～45℃之間酶活表現(xiàn)達(dá)到了90％左右，反應(yīng)溫度超過(guò)50℃后，其酶活呈現(xiàn)直線下降趨勢(shì)，且下降幅度較大。這說(shuō)明，此中性蛋白酶的最適反應(yīng)溫度在35～45℃之間，且反應(yīng)活性對(duì)反應(yīng)溫度的變化較為敏感。
1.5.2.2 pH對(duì)中性蛋白酶活性的影響分別制備pH3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、7.5、8.0和9.0的底物及相應(yīng)的緩沖液，在其它條件相同(溫度40℃、底物濃度1％)的情況下分別測(cè)定中性蛋白酶的活性，其結(jié)果如圖11所示。由圖11看出，中性蛋白酶的活性在pH＝5～8間較好，pH＝6～7.5間最好。pH≤4時(shí)，中性蛋白酶活下降較快，pH≤3時(shí)已檢測(cè)不出酶的活性。因此，此中性蛋白酶的最適pH為6～7.5。
1.5.2.3底物濃度對(duì)蛋白酶活性的影響將底物酪素分別制備成0.2％、0.4％、0.6％、0.8％和1.0％五個(gè)濃度，在保證底物過(guò)飽和并且其它條件相同的情況下(pH7.5、溫度40℃)，加入酶稀釋液測(cè)定酶活，其結(jié)果如圖12所示。由圖12看出，蛋白酶的活性隨著底物濃度的升高逐漸增強(qiáng)，在底物濃度為0.4％時(shí)活性就已達(dá)到了最高活性的80％，0.6％時(shí)就基本接近了最高活性，這說(shuō)明蛋白酶對(duì)底物的濃度比較敏感，在較低的濃度下就可以表現(xiàn)現(xiàn)較高的活性。
1.5.2.4經(jīng)不同溫度處理后中性蛋白酶活存留情況將固體蛋白酶(水分含量≤8％)從55℃～100℃，每間隔5℃的條件下分別處理5分鐘后，測(cè)定(pH7.5、溫度40℃、底物濃度1％)其酶活，結(jié)果如圖13所示。由圖13可以看到，中性蛋白酶分別經(jīng)過(guò)55℃到90℃處理后，酶活均處于較穩(wěn)定狀態(tài)，平均酶活在90％以上，90℃以后才急劇下降，酶活降到20％左右。
1.5.2.5中性蛋白酶在貯存期間酶活存留情況將固體中性蛋白酶產(chǎn)品(水分含量≤8％)常溫下保存，然后每隔兩個(gè)月取樣測(cè)定(pH7.5、溫度40℃、底物濃度1％)其酶活，結(jié)果如圖14所示，中性蛋白酶產(chǎn)品在貯存的前6個(gè)月內(nèi)酶活下降非常少，不到5％；隨著時(shí)間延長(zhǎng)酶活會(huì)逐漸降低，一年左右酶活下降約10％。說(shuō)明此中性蛋白酶在常溫下非常穩(wěn)定。
1.5.2.6加工工藝對(duì)中性蛋白酶活性的影響按照設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)，將2.5千克活性為40,000U/g的中性蛋白酶按2.5kg/噸的添加量加入小豬飼料后制粒，制粒的條件及溫度(75℃左右)與商業(yè)飼料廠一致，在不同生產(chǎn)階段(混合后、調(diào)制后、制粒后及打包口)分別取樣并測(cè)定(pH7.5、溫度40℃、底物濃度1％)中性蛋白酶的活性，其結(jié)果見(jiàn)圖15。
與上述木聚糖酶有相似的結(jié)果，此中性蛋白酶與飼料原料混合后其活性與設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)相比有明顯的下降(100對(duì)65％)，在實(shí)驗(yàn)室的條件下，此中性蛋白酶只有65％的活性能測(cè)定，即在沒(méi)有經(jīng)過(guò)高溫及壓力處理的情況下，45％的酶活已測(cè)不到，說(shuō)明混合過(guò)程會(huì)影響酶活的測(cè)定，影響酶活測(cè)定的原因有很多，未來(lái)應(yīng)注重這方面的研究。經(jīng)過(guò)高溫調(diào)制后，與設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)相比，此中性蛋白酶在飼料中的活性保留率只有47％左右，下降幅度較大，但與混合后相比，此中性蛋白酶的活性保留率為68％(65對(duì)47％)，下降幅度為30％左右，說(shuō)明高溫調(diào)制對(duì)此中性蛋白酶的一定的影響，但不大。此中性蛋白酶經(jīng)過(guò)高溫及高壓的制粒過(guò)程后，與調(diào)制后相比，酶活的保留率僅下降了19％左右(47對(duì)38％)，與混合后相比，酶活在飼料中的保留率也只下降了41％左右(65對(duì)38％)。打包口的酶活保留率與制粒后的保留率都為38％。
本實(shí)驗(yàn)說(shuō)明飼料加工過(guò)程中的高溫及高壓的制粒過(guò)程對(duì)該中性蛋白酶的影響是有限的，整個(gè)調(diào)制、制粒過(guò)程對(duì)此中性蛋白酶活保留率的影響在40％左右，但此中性蛋白酶與飼料原料混合的過(guò)程會(huì)影響酶活保留率。
1.5.3阿拉伯木聚糖酶和中性蛋白酶綜合酶學(xué)特性的總結(jié)1.5.3.1本實(shí)施例使用的內(nèi)切阿拉伯木聚糖酶(EC 3.2.1.8)的酶學(xué)特性具有以下特點(diǎn)(1)酶活反應(yīng)的最適溫度在40～60℃間，最佳溫度為55℃，在實(shí)際應(yīng)用中，由于動(dòng)物胃腸道內(nèi)的溫度在38～40℃間，從結(jié)果來(lái)看，此時(shí)木聚糖酶活性在80％左右；(2)pH在4～6之間，酶活平均在90％以上，最佳反應(yīng)pH為5.3，在實(shí)際應(yīng)用中，由于動(dòng)物胃腸道內(nèi)的pH偏酸性，所以此酶在動(dòng)物胃腸道內(nèi)能夠發(fā)揮較好的作用；(3)酶的活性在底物濃度達(dá)到0.6％時(shí)活性已基本穩(wěn)定，并接近最高值，說(shuō)明此酶在底物濃度較低時(shí)就可能發(fā)揮出最高的活性；(4)此酶在干燥的狀態(tài)下經(jīng)過(guò)累積溫度處理后，在70℃以前活性沒(méi)有損失，到85℃時(shí)酶活存留大于88％，100℃時(shí)酶活存留在75％左右；(5)此木聚糖酶與蛋白酶和淀粉酶按比例混合后儲(chǔ)存，測(cè)其樣品中的木聚糖酶活性，結(jié)果表明蛋白酶和淀粉酶對(duì)木聚糖酶的活性沒(méi)有影響；(6)在室溫條件下儲(chǔ)存半年，其酶活比較穩(wěn)定，但隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，酶活會(huì)逐漸下降，酶活平均月下降率為7.3％；(7)此木聚糖酶與飼料原料混合后其活性有明顯的下降(100對(duì)45.2％)，但飼料加工過(guò)程中的制粒過(guò)程對(duì)該酶酶活的影響有限(45.2對(duì)33.5％)，說(shuō)明此木聚糖酶具有耐高溫抗高壓，并能在體溫下良好發(fā)揮作用等特點(diǎn)。影響酶活測(cè)定的原因有諸多，如金屬離子的干擾、酶與底物的作用、測(cè)定方法的靈敏度等因素。
1.5.3.2本實(shí)施例使用的內(nèi)切中性蛋白酶(EC 3.4.21.62)的酶學(xué)特性具有以下特點(diǎn)(1)此酶酶活隨反應(yīng)溫度的變化而變化，在40℃時(shí)，酶活表現(xiàn)最好，在35-45℃間酶活表現(xiàn)可達(dá)90％左右，說(shuō)明此酶在動(dòng)物胃腸道內(nèi)的溫度下能表現(xiàn)良好；(2)中性蛋白酶的活性在pH＝5～8間較好，pH＝6～7.5間最好。pH≤4時(shí)，中性蛋白酶活下降較快，此酶在偏酸性由于動(dòng)物胃腸道內(nèi)能夠發(fā)揮較好的作用；(3)此酶在底物濃度為0.4％時(shí)即可達(dá)到最高活性的80％，0.6％時(shí)接近最高活性，說(shuō)明此酶對(duì)底物的濃度比較敏感，在較低的濃度下可以表現(xiàn)較高的活性；(4)中性蛋白酶在干燥的狀態(tài)下分別經(jīng)過(guò)55℃到90℃處理后，平均酶活在90％以上，90℃以后急劇下降，90℃時(shí)酶活降底到20％左右；(5)中性蛋白酶在常溫下貯存非常穩(wěn)定，前3個(gè)月酶活下降不到5％；半年后酶活的保存率仍大于65％；(6)與木聚糖酶的結(jié)果相似，此酶與飼料混合后其活性有明顯的下降(100對(duì)65％)，即在沒(méi)有經(jīng)過(guò)高溫及壓力處理的情況下，35％的酶活已測(cè)不到，說(shuō)明混合過(guò)程會(huì)影響酶活的測(cè)定。經(jīng)過(guò)高溫調(diào)制后，與混合后相比，此酶的活性保留率為72％(65對(duì)47％)，經(jīng)過(guò)高溫高壓制粒后，酶活在飼料中的保留率在60％左右(65對(duì)38％)。高溫高壓的制粒加工過(guò)程對(duì)該酶酶活的影響有限，說(shuō)明此酶具有耐高溫抗高壓，并能在體溫下良好發(fā)揮作用等特點(diǎn)。
1.5.3.3綜上所述，本實(shí)施例使用的內(nèi)切阿拉伯木聚糖酶和內(nèi)切中性蛋白酶具有活性高，抗逆性強(qiáng)，底物專(zhuān)一性等特點(diǎn)，是符合飼料專(zhuān)用單酶要求的制品。
1.6不同日糧中復(fù)合酶組合的選擇1.6.1乳仔豬玉米豆粕型日糧復(fù)合酶的篩選在乳仔豬玉米豆粕型日糧中，本實(shí)施例設(shè)計(jì)了一種比較純的玉米豆粕型日糧為試驗(yàn)日糧，在此基礎(chǔ)上外添加不同組合的酶制劑。參見(jiàn)表6，酶制劑組合中選擇了淀粉酶、蛋白酶、木聚糖酶、葡聚糖酶四種單酶，根據(jù)大量的單酶的試驗(yàn)數(shù)據(jù)，固定了三種酶的濃度，設(shè)計(jì)了四個(gè)梯度的蛋白酶活來(lái)選擇一個(gè)較好的酶活配伍，酶制劑添加量1kg/噸全價(jià)料。
表6酶活梯度如下酶活單位u/g

實(shí)驗(yàn)條件試豬體重8公斤，10次試驗(yàn)，共960頭數(shù)；試驗(yàn)時(shí)間2004.05-2005.03，試驗(yàn)地點(diǎn)佛山高明興業(yè)豬場(chǎng)；實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖16所示。
從試驗(yàn)的結(jié)果圖16來(lái)看，蛋白酶在300～600之間動(dòng)物的生長(zhǎng)速度都表現(xiàn)出了增高的趨勢(shì)，但增長(zhǎng)的速度下降，腹瀉率都表現(xiàn)出了下降的趨勢(shì)。但從經(jīng)濟(jì)效益來(lái)看，蛋白酶在500～600之間比較好，動(dòng)物的腹瀉率較低，生長(zhǎng)速度較高，飼料轉(zhuǎn)化率也較好。
1.6.2中大豬混合型日糧中復(fù)合酶的選擇中大豬混合型日糧主要以谷物副產(chǎn)品，如粉糠以及麩皮，雜粕主要以菜粕和棉粕為主。在中大豬階段，動(dòng)物體內(nèi)的消化酶如蛋白酶，淀粉酶等的分泌已成熟，并能滿足動(dòng)物自身需要，因此在選擇單酶時(shí)，這些消化酶不是選擇的重點(diǎn)。隨著豬的日齡增長(zhǎng)，日糧中非淀粉多糖的含量越來(lái)越高，非淀粉多糖酶豬體內(nèi)自身不能分泌，必需外添加。因此，在這種日糧中主要選擇了木聚糖酶，篩選不同的梯度(見(jiàn)表7)進(jìn)行試驗(yàn)。整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程，固定一種基礎(chǔ)日糧。酶制劑添加量500克/噸全價(jià)料。
參見(jiàn)試驗(yàn)的結(jié)果圖17(實(shí)驗(yàn)條件試豬體重20公斤，10次試驗(yàn)，共960頭數(shù)；試驗(yàn)時(shí)間2004.05-2005.03，試驗(yàn)地點(diǎn)佛山高明興業(yè)豬場(chǎng))木聚糖酶在4000～6000u/g之間動(dòng)物的采食量和生長(zhǎng)速度較緩，6000～8000u/g之間有一個(gè)較快的增高，之后又表現(xiàn)平穩(wěn)，但從經(jīng)濟(jì)效益來(lái)看，8000u/g酶活設(shè)計(jì)是比較經(jīng)濟(jì)實(shí)用。
表7 2327酶活梯度如下酶活單位u/g

1.6.3肉雞玉米豆粕型日糧中復(fù)合酶的選擇肉雞日糧，尤其是在一條龍經(jīng)營(yíng)方式的企業(yè)，主要是以玉米豆粕型為主，肉雞日糧中不僅要考慮食糜粘性的抗?fàn)I養(yǎng)作用，還主要考慮淀粉與蛋白的消化率問(wèn)題。在復(fù)合酶的設(shè)計(jì)中，主要選擇了淀粉酶、蛋白酶，適當(dāng)補(bǔ)充了木聚糖酶。此次篩選主要以淀粉酶為主，固定了其它兩種酶(酶活梯度見(jiàn)表8)。肉雞的品種以AA雞為主，添加量500克/噸全價(jià)料。參見(jiàn)圖18所示的試驗(yàn)結(jié)果，(實(shí)驗(yàn)條件AA肉雞，5次試驗(yàn)，20000只，試驗(yàn)時(shí)間2004.05-2005.08，試驗(yàn)地點(diǎn)山東諸城外貿(mào)雞場(chǎng))，其表明400～600u/g單位的酶活添加500g/噸飼料是有效果的，隨著酶活添加量的增大，肉雞的生長(zhǎng)性能都表現(xiàn)出了增長(zhǎng)的趨勢(shì)，其中以800u/g單位的酶活添加500g的生長(zhǎng)效果和經(jīng)濟(jì)效益最好。
1.6.4肉禽混合谷物型日糧復(fù)合酶的篩選肉禽混合谷物型日糧中雜粕及谷物副產(chǎn)品的用量較大，尤其是肉鴨日糧中的用量更大。雜粕及谷物副產(chǎn)品中富含非淀粉多糖，其中水溶性的非淀粉多糖容易引起腸道中食糜的粘性，抑制消化酶與底物之間的接觸與作用，是此類(lèi)日糧中最主要的抗?fàn)I養(yǎng)因子。設(shè)計(jì)復(fù)合酶時(shí)，重點(diǎn)加強(qiáng)了木聚糖酶，同時(shí)添加了一定量的淀粉酶與蛋白酶。試驗(yàn)過(guò)程中，固定了蛋白酶與淀粉酶，重點(diǎn)評(píng)價(jià)了木聚糖酶的作用。復(fù)合酶的添加量500g/噸全價(jià)料，酶活梯度設(shè)計(jì)見(jiàn)表9，其試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖19(實(shí)驗(yàn)條件英桃谷，5次試驗(yàn)，20000只，試驗(yàn)時(shí)間2004.05-2005.03，試驗(yàn)地點(diǎn)山東昌邑新昌鴨場(chǎng))。其結(jié)果表明，外添加木聚糖酶在肉禽混合谷物日糧中能顯著地改善動(dòng)物的生長(zhǎng)性能及飼料轉(zhuǎn)化率，0～5000u/g添加500克的生長(zhǎng)效果都有顯著的改善，5000u/g以上動(dòng)物的生長(zhǎng)效果沒(méi)有顯著改善。同時(shí)，5000u/g添加500克的經(jīng)濟(jì)效果是最好。
表8 5021酶活梯度如下酶活單位μ/g


表9 5025酶活梯度如下酶活單位u/g

1.6.5其他復(fù)合酶的篩選上述復(fù)合酶篩選的工作只是整個(gè)產(chǎn)品設(shè)計(jì)篩選工作的一部分，按照相同的方法和步驟，還可以對(duì)其他單酶及單酶組合分別進(jìn)行測(cè)試研究。本實(shí)施例中所提供了四個(gè)日糧的復(fù)合酶篩選過(guò)程，其中主要針對(duì)不同的日糧篩選了其中一種酶，采用相同或相似的方法和步驟，再結(jié)合現(xiàn)有技術(shù)，最后形成了四種復(fù)合酶產(chǎn)品，如表10所示。
表10通過(guò)篩選工作形成的四種復(fù)合酶設(shè)計(jì)

2實(shí)際推廣動(dòng)物試驗(yàn)效果2.1乳仔豬用產(chǎn)品PK100在仔豬玉米-豆粕型日糧中的應(yīng)用效果2.1.1材料與方法2.1.1.1試驗(yàn)用酶制劑試驗(yàn)用酶制劑PK100，由東莞泛亞太生物科技有限公司提供，其組分見(jiàn)表10。
2.1.1.2試驗(yàn)動(dòng)物選用120頭健康、體重一致的杜長(zhǎng)大三元雜交斷奶仔豬，按性別和體重一致的原則隨機(jī)分為兩組處理；每組處理3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20頭仔豬；仔豬平均始重為8kg左右，組間差異不顯著。
2.1.1.3試驗(yàn)日糧(1)對(duì)照組日糧對(duì)照組日糧由試驗(yàn)場(chǎng)提供；(2)試驗(yàn)組日糧試驗(yàn)組日糧由東莞泛亞太生物科技有限公司根據(jù)PK100的特性，加入PK100后對(duì)對(duì)照組配方進(jìn)行調(diào)整，由試驗(yàn)場(chǎng)依據(jù)該配方生產(chǎn)提供。
(3)所有日糧以粉料飼喂，各試驗(yàn)日糧的配方及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表11。
2.1.1.4飼養(yǎng)管理每日自由采食和飲水。免疫與飼養(yǎng)按豬場(chǎng)常規(guī)進(jìn)行。飼養(yǎng)過(guò)程中注意觀察仔豬的生長(zhǎng)發(fā)育情況。
表11 日糧的配方及營(yíng)養(yǎng)水平


注1、預(yù)混料中含有多種維生素、微量元素、石粉、磷酸氫鈣、氨基酸、香味劑、促生長(zhǎng)劑和抗氧化劑及載體。
2、PK100的主要成分為α-淀粉酶、枯草桿菌蛋白酶、阿拉伯木聚糖酶及β-葡聚糖酶。
試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束，仔豬空腹16h后于第二天上午稱取每個(gè)重復(fù)組的豬體重，并記錄試驗(yàn)期間各重復(fù)組豬日糧消耗量以及各重復(fù)組腹瀉豬的頭次。
2.1.1.5指標(biāo)(1)觀測(cè)指標(biāo)平均日增重、平均日采食量、料重比、腹瀉率；日增重(ADG)＝增重/(試驗(yàn)天數(shù)×試豬頭數(shù))；料重比(F/G)＝飼料消耗量/增重；腹瀉率＝腹瀉頭次數(shù)總和/(豬頭數(shù)×試驗(yàn)天數(shù))。
(2)觀察項(xiàng)目糞便排放量。
2.1.1.6試驗(yàn)時(shí)間及地點(diǎn)(1)試驗(yàn)時(shí)間2005年4月2～2005年5月2日，為28天；(2)試驗(yàn)地點(diǎn)廣東佛山某商業(yè)豬場(chǎng)。
2.1.2試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表122.1.3結(jié)論本試驗(yàn)結(jié)果表明，在仔豬日糧中添加PK100，能提高仔豬的日增重、改善日糧的轉(zhuǎn)化效率以及降低仔豬的腹瀉率。針對(duì)不同的地區(qū)和仔豬品種，還可以對(duì)PK100進(jìn)行調(diào)整和改進(jìn)。
2.1.3.1仔豬階段其消化機(jī)能尚未發(fā)育健全，淀粉酶、蛋白酶等分泌量不足。
表12試驗(yàn)結(jié)果

PK100是以蛋白酶、淀粉酶、木聚糖酶等為主的復(fù)合型乳仔豬用酶制劑，添加PK100，在仔豬的日糧中添加了外源淀粉酶、蛋白酶以及非淀粉多糖酶類(lèi)，補(bǔ)充仔豬體內(nèi)內(nèi)源酶的不足，并能激活內(nèi)源酶的分泌，提高了仔豬對(duì)淀粉、蛋白質(zhì)的消化和利用。通過(guò)試驗(yàn)驗(yàn)證日增重提高8.2％，飼料轉(zhuǎn)化率改善4.1％。
2.1.3.2本試驗(yàn)采用的試驗(yàn)日糧是玉米-豆粕型日糧，細(xì)胞壁中的非淀粉多糖是影響日糧養(yǎng)分消化率的一個(gè)重要因素。以往對(duì)日糧的處理是利用膨化技術(shù)破壞日糧細(xì)胞壁機(jī)構(gòu)后有利于細(xì)胞壁內(nèi)蛋白和淀粉與消化酶結(jié)合，提高其消化率。本試驗(yàn)的試驗(yàn)組配方是在對(duì)照組配方的基礎(chǔ)上進(jìn)行了調(diào)整，調(diào)低乳制品及膨化玉米用量，添加PK100。試驗(yàn)結(jié)果不僅提高了動(dòng)物的生長(zhǎng)性能，而且降低了動(dòng)物的增重成本達(dá)7％。
2.1.3.3仔豬消化系統(tǒng)發(fā)育不充分，胃酸分泌不足，消化酶活性降低，容易引起營(yíng)養(yǎng)應(yīng)激反應(yīng)，嚴(yán)重的表現(xiàn)為腹瀉；另外，病源微生物感染，特別是大腸桿菌也是仔豬斷奶后腹瀉的一個(gè)主要原因之一。添加PK100，提高仔豬對(duì)養(yǎng)分的消化利用，減少后段腸道的養(yǎng)分濃度，從而降低病源微生物菌群，特別是大腸桿菌的生長(zhǎng)，從而降低仔豬的腹瀉率。試驗(yàn)組仔豬腹瀉率顯著低于對(duì)照組，比對(duì)照組下降了47.68％；2.1.3.4通過(guò)本試驗(yàn)驗(yàn)證在乳仔料配方中降低乳制品及膨化原料或動(dòng)物蛋白的用量來(lái)添加PK100是可靠的、經(jīng)濟(jì)的。
2.1.3.5通過(guò)觀察，糞便的排放量降低約5~10％。
2.2 2327在中大豬混合谷物型日糧中的應(yīng)用效果2.2.1材料與方法2.2.1.1試驗(yàn)用酶制劑試驗(yàn)用酶制劑2327由東莞泛亞太生物科技有限公司提供。
2.2.1.2試驗(yàn)動(dòng)物選用360頭健康、體重一致的杜長(zhǎng)大三元雜交中豬。按性別和體重一致的原則隨機(jī)分為3組處理；每組處理6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20頭仔豬；豬的平均始重20.0kg，組間差異不顯著。
2.2.1.3試驗(yàn)日糧(1)對(duì)照組日糧對(duì)照組日糧由試驗(yàn)場(chǎng)提供；(2)試驗(yàn)組日糧試驗(yàn)組日糧由東莞泛亞太生物科技有限公司根據(jù)2327的特性，加入2327后對(duì)對(duì)照組配方進(jìn)行調(diào)整，由試驗(yàn)場(chǎng)依據(jù)該配方生產(chǎn)提供。
(3)所有日糧以粉料飼喂，各組日糧的配方及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表13。
2.2.1.4飼養(yǎng)管理每日自由采食和飲水。免疫與飼養(yǎng)按豬場(chǎng)常規(guī)進(jìn)行。飼養(yǎng)過(guò)程中注意觀察豬的生長(zhǎng)情況。
試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束，稱取每個(gè)重復(fù)組的豬體重，并記錄試驗(yàn)期間各重復(fù)組豬日糧消耗量。
2.2.1.5指標(biāo)(1)觀測(cè)指標(biāo)平均日增重、平均日采食量、料重比；日增重(ADG)＝增重/(試驗(yàn)天數(shù)×試豬頭數(shù))；料重比(F/G)＝飼料消耗量/增重；表13 日糧的配方及營(yíng)養(yǎng)水平


注1、預(yù)混料中含有多種維生素、微量元素、香味劑、藥物添加劑等。
2、2327的主要成分為阿拉伯木聚糖酶。
(2)觀察項(xiàng)目糞便排放量。
2.2.1.6試驗(yàn)時(shí)間及地點(diǎn)(1)試驗(yàn)時(shí)間2005年5月5日-6月8日，為34天；(2)試驗(yàn)地點(diǎn)廣東佛山某商業(yè)豬場(chǎng)。
2.2.2試驗(yàn)結(jié)果(見(jiàn)表14)表14試驗(yàn)結(jié)果

2.2.3結(jié)論2.2.3.1在中大豬日糧中添加酶制劑，可以降解飼料中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，提高纖維和半纖維的利用率，促進(jìn)飼料養(yǎng)分的吸收。2327中設(shè)計(jì)有高含量的阿拉伯木聚糖酶，在木聚糖酶的作用下，能提高基礎(chǔ)日糧和部分粗蛋白質(zhì)含量，因此在低成本混合型日糧中添加2327能夠達(dá)到與正常基礎(chǔ)日糧相同的飼養(yǎng)效果。在本試驗(yàn)中，對(duì)照組和調(diào)整日糧加2327兩組的試驗(yàn)結(jié)果，平均日增重分別為325g和337g，調(diào)整日糧加2327組比對(duì)照組高12g，料重比分別為2.2和2.08，調(diào)整日糧加2327組比對(duì)照組低0.92，差異顯著。
2.2.3.2直接添加或在調(diào)整日糧中添加2327，都可以降低養(yǎng)殖或飼料的單位增重成本。
2.2.3.3糞便排放量降低約5~10％。
根據(jù)上述性能測(cè)試及推廣實(shí)驗(yàn)結(jié)果，還可以對(duì)復(fù)合酶的組分、比例等進(jìn)行調(diào)整、修正。
2.3 5021在肉雞玉米-豆粕型日糧中的應(yīng)用效果2.3.1材料與方法2.3.1.1試驗(yàn)用酶制劑試驗(yàn)用酶制劑5021由東莞泛亞太生物科技有限公司提供。
2.3.1.2試驗(yàn)動(dòng)物選用18000只健康的、體重接近的AA肉雞，隨機(jī)分為3組處理；每組處理3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)2000只肉雞。
2.3.1.3試驗(yàn)日糧(1)標(biāo)準(zhǔn)日糧標(biāo)準(zhǔn)日糧由試驗(yàn)場(chǎng)提供；(2)試驗(yàn)組日糧試驗(yàn)組日糧A由標(biāo)準(zhǔn)日糧直接加入5021組成；試驗(yàn)組日糧B由東莞泛亞太生物科技有限公司根據(jù)5021的特性，加入5021后對(duì)標(biāo)準(zhǔn)日糧配方進(jìn)行調(diào)整，由試驗(yàn)場(chǎng)依據(jù)該配方生產(chǎn)提供。
(3)小雞階段0~21日齡喂碎料；中大雞階段22~50日齡喂粒料。
(4)各組日糧的配方及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表15。
表15 日糧的配方及營(yíng)養(yǎng)水平


注1、預(yù)混料中含有多種維生素、微量元素、氨基酸、氯化膽堿、藥物添加劑等。
2、5021的主要成分為α-淀粉酶、枯草桿菌蛋白酶、阿拉伯木聚糖酶。
2.3.1.4飼養(yǎng)管理每日自由采食和飲水。免疫與飼養(yǎng)按飼養(yǎng)場(chǎng)常規(guī)進(jìn)行。
2.3.1.5指標(biāo)(1)觀測(cè)指標(biāo)每周對(duì)每個(gè)處理進(jìn)行5％的隨機(jī)抽查，測(cè)定成活率、體重、采食量及料重比；50日齡時(shí)全部屠宰計(jì)算經(jīng)濟(jì)效益。
(2)觀察項(xiàng)目糞便排放量。
2.3.1.6試驗(yàn)時(shí)間及地點(diǎn)(1)試驗(yàn)時(shí)間2005年3月20日～2005年5月8日，為50天；(2)試驗(yàn)地點(diǎn)山東某商業(yè)雞場(chǎng)。
2.3.2試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表16
表16試驗(yàn)結(jié)果

2.3.3結(jié)論2.3.3.1添加酶制劑可以補(bǔ)充內(nèi)源酶的分泌，提高各種營(yíng)養(yǎng)素的消化率，從而提高肉雞的生產(chǎn)性能。5021以蛋白酶、淀粉酶為主，輔助以木聚糖酶，主要針對(duì)肉禽玉米-豆粕型日糧。本試驗(yàn)中，在標(biāo)準(zhǔn)日糧添加5021后動(dòng)物的生長(zhǎng)都得到了改善。本試驗(yàn)在小雞階段改善效果相對(duì)較小，在42天時(shí)體重有非常強(qiáng)的明顯效果。
2.3.3.2酶制劑可以破壞植物細(xì)胞壁，使存在于細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、淀粉等大分子營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)釋放出來(lái)，被動(dòng)物消化吸收。直接添加5021的標(biāo)準(zhǔn)日糧的飼料轉(zhuǎn)化率提高接近顯著，低標(biāo)準(zhǔn)日糧的飼料轉(zhuǎn)化率提高顯著。調(diào)低營(yíng)養(yǎng)水平后添加5021可達(dá)到不加酶的標(biāo)準(zhǔn)日糧地生產(chǎn)水平。
2.3.3.3與對(duì)照組相比較，不僅能明顯地提高雞只成活率，同時(shí)還能明顯地提高飼料的轉(zhuǎn)化率，這得益于在對(duì)中國(guó)飼料市場(chǎng)的理解基礎(chǔ)上對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的改造與加強(qiáng)。
2.3.3.4與對(duì)照組產(chǎn)品相比能明顯提高雞只的經(jīng)濟(jì)效益，這表明添加能夠取得更好的經(jīng)濟(jì)效益。
2.3.3.5在玉米-豆粕型日糧中，調(diào)低日糧營(yíng)養(yǎng)水平2-3％的表觀低謝能和粗蛋白后添加5021是可行的。
2.3.3.6通過(guò)觀察，糞便排放量降低約5~10％。
2.4 5025在肉雞混合谷物型日糧中的應(yīng)用效果
2.4.1材料與方法2.4.1.1試驗(yàn)用酶制劑試驗(yàn)用酶制劑5025由東莞泛亞太生物科技有限公司提供。
2.4.1.2試驗(yàn)動(dòng)物選用7200只健康的、體重接近的AA肉雞，隨機(jī)分為4組處理；每組處理3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)600只肉雞。
2.4.1.3試驗(yàn)日糧(1)標(biāo)準(zhǔn)日糧標(biāo)準(zhǔn)日糧由試驗(yàn)場(chǎng)提供；(2)試驗(yàn)組日糧試驗(yàn)組日糧A由標(biāo)準(zhǔn)日糧直接加入5025組成；試驗(yàn)組日糧B由東莞泛亞太生物科技有限公司根據(jù)5025的特性，加入5025后對(duì)標(biāo)準(zhǔn)日糧配方進(jìn)行調(diào)整，由試驗(yàn)場(chǎng)依據(jù)該配方生產(chǎn)提供。
(3)各組日糧的配方及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表17。
(4)小雞階段0~28日齡喂碎料；中大雞階段29~42日齡喂粒料。
表17 日糧的配方及營(yíng)養(yǎng)水平


注1、預(yù)混料中含有多種維生素、微量元素、石粉、磷酸氫鈣、氨基酸、氯化膽堿、桿菌肽鋅、黏桿菌素及載體。
2、5025的主要成分為α-淀粉酶、枯草桿菌蛋白酶、阿拉伯木聚糖酶。
2.4.1.4飼養(yǎng)管理每日自由采食和飲水。免疫與飼養(yǎng)按飼養(yǎng)場(chǎng)常規(guī)進(jìn)行。
2.4.1.5指標(biāo)(1)觀測(cè)指標(biāo)分別在28、42日齡測(cè)定體重、采食量及料重比。
(2)觀察項(xiàng)目糞便排放量。
2.4.1.6試驗(yàn)時(shí)間及地點(diǎn)(1)試驗(yàn)時(shí)間2005年6月10日～2005年7月30日，為52天；(2)試驗(yàn)地點(diǎn)山東某商業(yè)雞場(chǎng)。
2.4.2試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表18
表18試驗(yàn)結(jié)果

2.4.3結(jié)論2.4.3.1添加酶制劑可以補(bǔ)充內(nèi)源酶的分泌，提高各種營(yíng)養(yǎng)素的消化率。
5025以木聚糖酶、蛋白酶、淀粉酶為主，主要針對(duì)肉禽混合谷物型日糧(谷物副產(chǎn)品10％-30％)。本試驗(yàn)中，在標(biāo)準(zhǔn)日糧和低標(biāo)準(zhǔn)日糧中添加5025后動(dòng)物的生長(zhǎng)都得到了改善。本試驗(yàn)在小雞階段改善效果相對(duì)較小，在42天時(shí)體重有非常強(qiáng)的明顯效果。
2.4.3.2酶制劑可以破壞植物細(xì)胞壁，使存在于細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、淀粉等大分子營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)釋放出來(lái)，被動(dòng)物消化吸收。直接添加5025的標(biāo)準(zhǔn)日糧的飼料轉(zhuǎn)化率提高接近顯著，低標(biāo)準(zhǔn)日糧的飼料轉(zhuǎn)化率提高顯著。調(diào)低營(yíng)養(yǎng)水平后添加5025可達(dá)到不加酶的標(biāo)準(zhǔn)日糧地生產(chǎn)水平。
2.4.3.3在混合谷物型日糧中，調(diào)低日糧營(yíng)養(yǎng)水平2-3％的表觀低謝能和粗蛋白后添加5025是可行的。
2.4.3.4通過(guò)觀察，糞便排放量降低約5~10％。
根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)確定的復(fù)合酶組分及加工方法，可批量生產(chǎn)上述組分的復(fù)合酶。
2.5酶制劑產(chǎn)品中試驗(yàn)證試驗(yàn)總結(jié)為了進(jìn)一步驗(yàn)證酶制劑在豬和肉雞的不同生長(zhǎng)階段、不同日糧中的應(yīng)用和在大規(guī)模生產(chǎn)中應(yīng)用的可行性，共采用了杜長(zhǎng)大仔豬120頭和中大豬360頭、AA肉雞25200只，分別在廣東省佛山和山東省諸城的商業(yè)養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果總結(jié)如下。
2.5.1用更經(jīng)濟(jì)的谷物副產(chǎn)品及雜粕替代優(yōu)質(zhì)原料，充分利用飼料資源在動(dòng)物日糧中，通過(guò)添加產(chǎn)品，利用谷物副產(chǎn)品、雜粕等替代玉米、豆粕、魚(yú)粉等原料，降低日糧中2~3％的能量和粗蛋白質(zhì)的含量，動(dòng)物的生產(chǎn)水平均比用原日糧的有提高。平均日增重提高了3.7~8.2％，平均提高了5.3％；料重比降低了3.96~5.7％，平均降低了4.2％。在仔豬驗(yàn)證試驗(yàn)中，調(diào)整日糧加PK100組與對(duì)照組的試驗(yàn)證明，平均日增重增加25g，為8.2％，料重比降低0.07，為4.1％；在中大豬驗(yàn)證試驗(yàn)中，調(diào)整日糧加2327組與對(duì)照組的試驗(yàn)證明，平均日增重增加12g，為3.7％，料重比降低0.12，為5.4％；在混合谷物日糧肉雞的驗(yàn)證試驗(yàn)中，調(diào)整日糧加5025組與對(duì)照組的試驗(yàn)證明，料重比降低0.02，為5.7％；在玉米-豆粕日糧肉雞的驗(yàn)證試驗(yàn)中，調(diào)整日糧加5021組與對(duì)照組的試驗(yàn)證明，平均日增重增加2.23g，為4.8％，料重比降低0.04，為3.96％。
2.5.2減少氮、磷等元素的排泄，保護(hù)環(huán)境生態(tài)在動(dòng)物日糧中，通過(guò)添加產(chǎn)品，可提高養(yǎng)分的利用率，減少糞便的排泄量，改善了動(dòng)物舍內(nèi)的環(huán)境，也減輕對(duì)大氣環(huán)境的污染。通過(guò)試驗(yàn)與觀察，在動(dòng)物日糧中添加產(chǎn)品，可以減少糞便的排泄量5~10％。
2.5.3提高生產(chǎn)水平，降低飼養(yǎng)成本在動(dòng)物日糧中，通過(guò)添加產(chǎn)品，提高了養(yǎng)分的利用率，降低了日糧中的營(yíng)養(yǎng)水平，從而降低了飼料成本。幾個(gè)驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明，添加了產(chǎn)品后，提高了動(dòng)物的生產(chǎn)水平，降低了單位增重成本2~7％。
2.5.4在動(dòng)物日糧中，通過(guò)添加產(chǎn)品，補(bǔ)充了仔豬階段淀粉酶、蛋白酶等分泌量不足，減少了后段腸道的養(yǎng)分濃度，減少了病源微生物菌群，降低了仔豬的腹瀉率。調(diào)整日糧加PK100組仔豬腹瀉率顯著低于對(duì)照組，比對(duì)照組下降了47.68％。在肉雞的驗(yàn)證試驗(yàn)中，通過(guò)添加產(chǎn)品，消除了非淀粉多糖抗?fàn)I養(yǎng)作用，提高了飼料中的營(yíng)養(yǎng)素的消化率和動(dòng)物的生產(chǎn)性能以及免疫力，從而提高了肉雞的成活率。調(diào)整日糧加產(chǎn)品組的肉雞成活率顯著高于對(duì)照組，提高了4.05％。
綜合上述驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果，在動(dòng)物日糧中添加酶制劑產(chǎn)品，可獲得良好的生產(chǎn)性能和經(jīng)濟(jì)效益，并可以減少動(dòng)物糞便的排放量，生態(tài)效益顯著?？梢?jiàn)該產(chǎn)品技術(shù)成熟，已可在飼養(yǎng)業(yè)和飼料大規(guī)模生產(chǎn)中推廣應(yīng)用。
2.6酶制劑產(chǎn)品的推廣應(yīng)用作為飼用復(fù)合酶制劑系列產(chǎn)品的研發(fā)，根據(jù)養(yǎng)殖業(yè)、飼料工業(yè)和環(huán)境保護(hù)的需要，采取邊研發(fā)、邊推廣的方式，研制出一系列飼用復(fù)合酶產(chǎn)品供飼料加工企業(yè)使用，取得了良好的效果。
自該項(xiàng)目開(kāi)始推廣以來(lái)，先后聯(lián)合東莞興業(yè)生物科技有限公司、深圳安佑公司、大北農(nóng)集團(tuán)、湖南正虹科技發(fā)展股份有限公司、岳泰集團(tuán)等10多個(gè)單位30多人參加了項(xiàng)目的研究與推廣工作。共生產(chǎn)應(yīng)用飼用復(fù)合酶制劑的各類(lèi)飼料150萬(wàn)噸，其中豬用飼料98萬(wàn)噸，占65.21％；禽用飼料49萬(wàn)噸，占32.96％；其它動(dòng)物飼料飼料2.7萬(wàn)噸，占1.83％(部分匯總見(jiàn)表19)。的產(chǎn)品已推廣到湖南、廣東、上海、北京、天津、福建、安徽、湖北、河南、河北、山東、遼寧、吉林、黑龍江、江西、河北、廣西、海南、等全國(guó)大部分省市的飼料廠和養(yǎng)殖場(chǎng)。
在該產(chǎn)品的應(yīng)用過(guò)程中，各地飼料廠也對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行了對(duì)比試驗(yàn)，均取得了預(yù)期的效果，達(dá)到了預(yù)期的目的。在福建海新集團(tuán)進(jìn)行的5021在肉雞飼養(yǎng)的試驗(yàn)中，日增重提高了2.56％，飼料轉(zhuǎn)化率提高了3.7％，成活率提高了0.5％；在沈陽(yáng)眾友飼料有限公司對(duì)PK100進(jìn)行了仔豬的飼養(yǎng)試驗(yàn)。其試驗(yàn)結(jié)果為，調(diào)整日糧(與標(biāo)準(zhǔn)日糧比較，粗蛋白質(zhì)含量降低1.12％；消化能降低45千卡/千克)與對(duì)照組比較，平均日增重提高0.8％，飼料轉(zhuǎn)化率提高1.25％，腹瀉率下降33％，每公斤增重成本降低2.6％。在新鄭銀發(fā)飼料有限公司的試驗(yàn)中，肉雞的日增重提高了4.9％，飼料轉(zhuǎn)化率提高了5.4％，生長(zhǎng)肥育豬的日增重提高了10.8％，飼料轉(zhuǎn)化率提高了6.78％。從幾個(gè)試驗(yàn)的平均結(jié)果畜禽的日增重提高了4.76％，飼料轉(zhuǎn)化率提高了4.28％。各地飼料廠普遍反應(yīng)，在飼料中添加產(chǎn)品，可以提高畜禽的日增重，提高飼料的轉(zhuǎn)化率，減少了畜禽糞便的排泄量。
通過(guò)推廣試驗(yàn)和各飼料廠的生產(chǎn)試驗(yàn)證明，在飼料中添加本產(chǎn)品，在保持原料成本不變得情況下，可使日增重平均提高5.3％，飼料轉(zhuǎn)化率提高4.2％，降低單位增重成本約3.4％。按每頭豬出欄時(shí)為100kg，售價(jià)為4.5元/kg計(jì)算，每頭豬可節(jié)約養(yǎng)殖成本15.3元。以2004年我國(guó)生豬出欄量計(jì)算，全國(guó)生豬出欄量約為53840萬(wàn)頭，若全部應(yīng)用 酶制劑，即可降低養(yǎng)殖成本82375萬(wàn)元。同時(shí)減少了糞便的排放量5~10％，改善了生態(tài)環(huán)境。
如本發(fā)明上述實(shí)施例所述的相同或近似的方法，以及與本發(fā)明上述實(shí)施例相同或近似的豬用配合飼料生產(chǎn)方法，或采用與本發(fā)明上述實(shí)施例相同或近似的生產(chǎn)方法及配方得到的豬用配合飼料，均在本發(fā)明保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種飼用復(fù)合酶的制備方法，其特征在于，其包括如下步驟1)分別測(cè)試飼料原料特性、日糧特性、飼料加工特性及動(dòng)物特性，并分別記錄測(cè)得的數(shù)據(jù)或繪制圖表；2)根據(jù)步驟1)的數(shù)據(jù)或圖表，初步選擇、分別測(cè)定各單酶特性，并記錄測(cè)得的數(shù)據(jù)或繪制圖表；3)根據(jù)對(duì)比前述數(shù)據(jù)或圖表，固定日糧特性，并分別篩選適用于該日糧的單酶品種及其含量；4)根據(jù)步驟3)的篩選結(jié)果，實(shí)驗(yàn)確定適用于該日糧的單酶組合及其含量；5)根據(jù)步驟4)的結(jié)果，將各單酶按比例混合，制得飼用復(fù)合酶。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的飼用復(fù)合酶的制備方法，其特征在于，其還包括如下步驟6)測(cè)試步驟5)制得的飼用復(fù)合酶的特性，并記錄數(shù)據(jù)或繪制圖表；7)將制得的飼用復(fù)合酶取樣與原料或日糧混合后，再測(cè)試其特性，并對(duì)比步驟1)～4)的數(shù)據(jù)，調(diào)整并重新確定該復(fù)合酶中的單酶組分及含量；8)根據(jù)步驟7)所確定的復(fù)合制劑中的各單酶組分及含量，按比例混合制得飼用復(fù)合酶。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的飼用復(fù)合酶的制備方法，其特征在于，其還包括如下步驟步驟2)中所述單酶特性的測(cè)定，包括如下步驟1)制備單酶溶液；2)測(cè)試并記錄單酶溶液的熱穩(wěn)定性，根據(jù)測(cè)試結(jié)果繪制圖表；3)測(cè)試并記錄單酶溶液的PH穩(wěn)定性，根據(jù)測(cè)試結(jié)果繪制圖表；4)測(cè)試并記錄底物濃度對(duì)單酶活性的影響，根據(jù)測(cè)試結(jié)果繪制圖表；5)測(cè)試并記錄與該單酶溶液其它單酶制劑相互混合后對(duì)該單酶活性的影響，根據(jù)測(cè)試結(jié)果繪制圖表。6)測(cè)試并記錄加工工藝對(duì)單酶活性的影響，根據(jù)測(cè)試結(jié)果繪制圖表。7)將前述步驟2)～6)所得圖表，對(duì)其中任兩個(gè)或多個(gè)，采用圖表對(duì)比法選取最優(yōu)特性區(qū)間。
4.一種采用權(quán)利要求1所述飼用復(fù)合酶制備方法的飼用復(fù)合酶，其特征在于其適用于添加在乳仔豬玉米豆粕型日糧中，其組分為淀粉酶、蛋白酶、木聚糖酶、葡聚糖酶四種單酶，添加量為0.6～1kg/噸全價(jià)飼料；其組分的酶活為淀粉酶1000u/g、蛋白酶500～600u/g、木聚糖酶4050u/g、葡聚糖酶150u/g。
5.一種采用權(quán)利要求1所述飼用復(fù)合酶制備方法的飼用復(fù)合酶，其特征在于其適用于添加在中大豬用產(chǎn)品玉米-雜粕型日糧中，其組分為木聚糖酶單酶，添加量為200～500g/噸全價(jià)飼料；其組分的酶活為木聚糖酶6000～8000u/g。
6.一種采用權(quán)利要求1所述飼用復(fù)合酶制備方法的飼用復(fù)合酶，其特征在于其適用于添加在禽用玉米豆粕型日糧中，其組分為淀粉酶、蛋白酶、木聚糖酶三種單酶，添加量為150～500g/噸全價(jià)飼料；其組分的酶活為淀粉酶800u/g、蛋白酶8000u/g、木聚糖酶700u/g。
7.一種采用權(quán)利要求1所述飼用復(fù)合酶制備方法的飼用復(fù)合酶，其特征在于其適用于添加在禽用混合谷物型日糧中，其組分為淀粉酶、蛋白酶、木聚糖酶三種單酶，添加量為150～500g/噸全價(jià)飼料；其組分的酶活為淀粉酶400u/g、蛋白酶4000u/g、木聚糖酶5000u/g。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種飼用復(fù)合酶的制備方法，其包括如下步驟分別測(cè)試分析飼料原料特性、日糧特性、飼料加工特性及動(dòng)物特性，并分別記錄分析數(shù)據(jù)或繪制圖表；選擇、分別確定多種單酶特性分析的內(nèi)容與方法，并分別予以分析，并記錄分析數(shù)據(jù)或繪制圖表；根據(jù)前述分析數(shù)據(jù)或圖表，固定日糧特性，并分別篩選適用于該日糧的單酶品種及其含量；實(shí)驗(yàn)確定適用于該日糧的單酶組合及其含量；將各單酶按比例進(jìn)行混合，制得飼用復(fù)合酶。采用本發(fā)明提供的方法和產(chǎn)品，可合理利用與保護(hù)有限的飼料資源，提高飼料資源的有效利用程度，對(duì)于在養(yǎng)殖過(guò)程中，進(jìn)一步合理配置和高效利用飼料資源，提高畜產(chǎn)品的產(chǎn)量，對(duì)減輕養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)的環(huán)境污染，也具有重要的社會(huì)意義。
文檔編號(hào)A23K1/16GK101092610SQ20061012388
公開(kāi)日2007年12月26日 申請(qǐng)日期2006年12月1日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月1日
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