專利名稱：一株枯草芽孢桿菌菌株及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株新篩選的枯草芽孢桿菌，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心CCTCC，保藏名Bacillus-subtilis M22BH3，保藏號M206028。該菌株分離自甘肅省蘭州市范家坪百合地的土壤中，它對可引起植物病害的病原真菌具有顯著的抑制生長作用，而且對人畜無毒，對生態(tài)環(huán)境友好，可制備成生物農(nóng)藥產(chǎn)品。
背景技術(shù)：
1921年，Hartely利用拮抗真菌防治棉苗猝倒病(Pythium debaryanum)是人們利用拮抗微生物防治植物病害的開端[1]。隨后，世界各國都對這一新興領(lǐng)域進行了廣泛研究，試圖篩選出拮抗微生物用于植物病害的防治。上世紀50年代以后，大量廣泛使用化學農(nóng)藥造成病原菌對化學農(nóng)藥產(chǎn)生抗性，高殘留引起環(huán)境污染，以及化學農(nóng)藥對人畜產(chǎn)生毒害等加速了人們尋求新的、安全有效的植物病害防治途徑。生防微生物具有不易使病原菌產(chǎn)生耐藥性、對環(huán)境安全、生產(chǎn)工藝較簡單以及不少微生物同時具有促進作物生長的特點而引起人們的關(guān)注和重視[2]。
1973年澳大利亞植物病理學家Kerr利用放射土壤桿菌(Agrobacterium radiobacterK84)成功地防治植物根癌病，并迅速形成商品化制劑，在美、澳、日等國迅速地推廣應(yīng)用，極大地促進了人們對植物病害生物防治的興趣[1]。目前廣泛應(yīng)用于植物生防的細菌制劑約有20多種，主要為Agrobacterium、Pseudomonas、Bacillus等屬的菌株[3]。植物病害每年給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來重大損失，在防治植物病害的各種措施中，生物防治具有對環(huán)境、生態(tài)和人類健康較為安全的優(yōu)點，因此，世界各國十分的重視生防研究的開展和利用，它將在病害防治中發(fā)揮越來越重要的作用。
芽孢桿菌屬細菌是一類好氧和兼性厭氧、產(chǎn)生芽孢的G+桿狀細菌，其生理特征豐富多樣，分布及其廣泛，是土壤和植物體表根際的重要微生物種群。芽孢桿菌突出的特征是能產(chǎn)生對熱、紫外線、電離輻射和某些化學藥品有很強抗逆性的芽孢，可忍受各種不良的環(huán)境，這有利于生防菌劑的生產(chǎn)、劑型加工及在環(huán)境中存活、定殖與繁殖[3，4]。它能產(chǎn)生多種抑制植物病原真菌的抗菌物質(zhì)，包括大分子量的抗菌蛋白和低分子量的抗菌肽，同時它又是自然界廣泛存在的非致病細菌，對人畜無害，對環(huán)境無污染，因而在生物防治植物病害中起著重要的作用。田間應(yīng)用研究已經(jīng)證實芽孢桿菌生防菌劑在穩(wěn)定性、與化學農(nóng)藥的相容性和在不同植物不同年份防效的一致性等方面，明顯優(yōu)于非芽孢桿菌和真菌生防菌劑[5]。目前芽孢桿菌屬細菌用于防治植物病害的主要有，枯草芽孢桿菌(B.subtilis)、蠟樣芽孢桿菌(B.cereus)、短小芽孢桿菌(B.pumillus)、多粘芽孢桿菌(B.polymyxa)等。
真菌病害一直是危害植物生長、影響作物產(chǎn)量的主要病害[6]，在植物病害中數(shù)量最多，達80％以上，分布極廣，是植物病害中最重要的一類[7]，植物真菌病害一直給我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來嚴重危害。如侯憲鵬指出隴東地區(qū)無公害蔬菜生產(chǎn)中就以真菌病害種類最多、發(fā)生面積最大，危害最嚴重[8]。張俐清通過調(diào)查天水市保護地主要蔬菜病害，鑒定確認其中真菌病害就多達37種，而細菌病害和病毒病分別只有3種和5種[9]。目前國內(nèi)和國際上有很多關(guān)于利用枯草芽孢桿菌防治植物真菌病害的文獻報道和專利，但從整體上看主要存在防治譜窄的問題，通常其防治的病原真菌只有1～2株。另外，生防菌發(fā)揮生防作用還涉及其在不同土壤環(huán)境中的定殖，但至今還未見任何一種枯草芽孢桿菌生防菌能適用于多種土壤類型，而且也未見其無細胞培養(yǎng)液及其提取物能夠防治10株以上病原真菌的報道，通常其防治的病原真菌只有1～2株。本發(fā)明中所涉及的枯草芽孢桿菌M22BH3，不但該菌株本身具有廣譜生防潛力，而且M22BH3的無細胞培養(yǎng)液也具有廣譜生防潛力，它們對不少于16株的病原真菌有較高的防效。同領(lǐng)域的研究人員由此還可以預見M22BH3菌株的發(fā)酵液以及從M22BH3菌株、M22BH3發(fā)酵液、M22BH3發(fā)酵液的無細胞培養(yǎng)液中提取的單體或者混合物也同樣會具有廣譜生防潛力，并且對不少于16株的病原真菌有較高的防效。特別需要指出的是這株枯草芽孢桿菌菌株、其發(fā)酵液及其提取液等在西北干旱、半干旱的不同土壤類型、氣候條件、強紫外線條件下仍表現(xiàn)較高的活性，可用于防治對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)危害嚴重的真菌病害，減少化學農(nóng)藥的用量，保護西北地區(qū)的生態(tài)環(huán)境。由于本發(fā)明所涉及的病原真菌廣泛存在，顯而易見，本發(fā)明的枯草芽孢桿菌菌株、其發(fā)酵液及從其無細胞培養(yǎng)液中提取的單體或者混合物，尤其是無細胞培養(yǎng)液中提取的單體或者混合物，不僅僅限于在上述地域中應(yīng)用。
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9.張俐清.天水市保護地主要蔬菜病害名錄[J].甘肅農(nóng)業(yè)科技，2005(1)40-42.

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一株新的枯草芽孢桿菌菌株，它對多種病原真菌的生長都具有明顯的抑制作用。該菌株在NA固體培養(yǎng)基和NA液體培養(yǎng)基中的培養(yǎng)溫度為28～30℃，培養(yǎng)時間24～48h，NA種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)的最佳種齡為24h(接種量1∶100)，再按接種量1∶20接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵液的pH7.0，轉(zhuǎn)速120rpm/min，溫度30℃，發(fā)酵時間72h。在以上條件下，該菌株的鑒定特征為為桿狀細菌，G+性；鞭毛側(cè)生，每個菌體上著生有8～20根鞭毛，其長度約為菌體的2～3倍；有莢膜；形成芽孢，中生，芽孢囊膨大；可在45℃以上的溫度條件下正常生長，為高溫微生物；可在12％的鹽濃度下生長，但不屬于嗜鹽細菌；生長最適pH在7～8之間，而且在堿性環(huán)境中的生長狀況要明顯好于酸性環(huán)境；經(jīng)VITEK 32全自動微生物鑒定系統(tǒng)鑒定為鑒定為Bacillus-subtilis(枯草芽孢桿菌)；所測得的16S rRNA序列比對結(jié)果顯示與已知的枯草芽孢桿菌的16SrRNA序列的同源性＞96％；(G+C)mol％測定結(jié)果顯示M22BH3的(G+C)mol％為46.33％，與枯草芽孢桿菌的(G+C)mol％一般值(42～43％)差別在4～5％，可認為是同種內(nèi)不同菌株。
本發(fā)明的枯草芽孢桿菌菌株M22BH3、M22BH3的發(fā)酵液、M22BH3發(fā)酵液的無細胞培養(yǎng)液及其從M22BH3菌株、M22BH3發(fā)酵液、M22BH3發(fā)酵液的無細胞培養(yǎng)液中提取的單體或者混合物對植物病原真菌有強烈的抑制活性，可制備成生物農(nóng)藥應(yīng)用。
具體實施例方式
實施例1菌株的分離純化從甘肅省蘭州市范家坪百合地的土壤中，選擇適當?shù)牡攸c，于5～20mm處采取土樣，用稀釋平板法從中分離細菌(1)制備土壤稀釋液稱取土樣10g，放入100ml無菌水中，搖床上振蕩30min。靜置使澄清。無菌操作吸取上清液100μl加入900μl無菌水中，用無菌水稀釋為10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8共八個濃度梯度。
(2)培養(yǎng)各稀釋濃度加入冷至55～60℃的滅菌的NA(牛肉膏3g、蛋白胨5g、葡萄糖10g、酵母浸膏1g、瓊脂15g、蒸餾水1000ml、pH7.0)瓊脂培養(yǎng)基，制成平板。倒置恒溫箱內(nèi)30℃培養(yǎng)。
(3)挑取單菌落3～4天后，待平板上長出菌落后，根據(jù)形態(tài)挑取單菌落于20ml滅菌的NA液體培養(yǎng)基中，搖床上30℃恒溫振蕩培養(yǎng)。
(4)純化采用平板劃線分離法純化。涂平板檢驗直至獲得純培養(yǎng)，命名為M22BH3。
(5)保藏純化的M22BH3采用甘油保藏法，在菌種管中，加入1ml 30％的甘油，滅菌后加入1ml細菌培養(yǎng)液，使甘油終濃度為15％，-20℃凍存。
該培養(yǎng)物在NA固體培養(yǎng)基上正面呈淡黃色，菌落背面呈淺棕色，產(chǎn)生褐色素，菌落周圍培養(yǎng)基呈褐色，菌落形狀不規(guī)則，中央有微小環(huán)狀隆起，中央濕潤易挑取，周圍粗糙不易挑取。
實施例2菌株的鑒定特征1.菌體形態(tài)觀察和染色反應(yīng)將M22BH3接種于NA液體培養(yǎng)基中恒溫振蕩培養(yǎng)適合時間后染色鏡檢。包括革蘭氏染色(結(jié)晶紫草酸胺染色法)、鞭毛染色(硝酸銀染色法)、莢膜染色(濕墨水法)、芽孢染色(改良的Schaeffer-Fulton氏染色法)。
染色結(jié)果M22BH3為桿狀細菌，G+性；鞭毛側(cè)生，每個菌體上著生有8～20根鞭毛，其長度約為菌體的2～3倍；有莢膜形成芽孢，中生，芽孢囊膨大。
2.環(huán)境因素對菌株M22BH3的影響2.1 O2對菌株M22BH3的影響采用深層瓊脂法來測定O2對M22BH3生長的影響，在裝有葡萄糖牛肉膏蛋白胨瓊脂深層培養(yǎng)基(pH7.0)的試管中接入M22BH3，28℃恒溫箱內(nèi)靜置保溫48h后開始連續(xù)觀察其生長狀況，直至10d后結(jié)果清晰為止。根據(jù)其在試管中的生長部位，判斷各自對O2的需求及耐受能力。
結(jié)果顯示M22BH3只在試管表面生長，為好氧菌。
2.2溫度對菌株M22BH3的影響制備NA瓊脂平板，使凝固后的培養(yǎng)基厚度為一般培養(yǎng)基的1.5～2倍。將M22BH3涂平板，各取兩套平板倒置于4℃、10℃、30℃、45℃、50℃、55℃、60℃及65℃條件下保溫48h，觀察其生長狀況。
表1 溫度對M22BH3生長的影響

“-”表示不生長，“+”表示生長較差，“++”表示生長一般，“+++”表示生長良好。
由上表看出，M22BH3可在45℃以上的溫度條件下正常生長，為高溫微生物。
2.3滲透壓對菌株M22BH3的影響制各含0.85％、5％、10％、12％、15％、20％及25％NaCl的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基平板。將M22BH3涂平板，各兩套，28℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)。7d后觀察并記錄含不同濃度NaCl平板上M22BH3的生長情況。
表2 滲透壓對M22BH3生長的影響

“-”表示不生長，“+”表示生長較差，“++”表示生長一般，“+++”表示生長良好。
由上表看出，M22BH3可在12％的鹽濃度下生長，但不屬于嗜鹽細菌。
2.4 pH對菌株M22BH3的影響制備pH3，4，5，6，7，8，9，10，11，12的NA液體培養(yǎng)基。無菌操作接種等量的M22BH3幼齡菌液，保證各培養(yǎng)瓶中接入的菌液濃度一致。120rpm/min，30℃下振蕩培養(yǎng)24h后，測定培養(yǎng)物的OD600值。
表3 pH對菌株M22BH3生長的影響

由上表看出，M22BH3的生長最適pH在7～8之間，而且它在堿性環(huán)境中的生長狀況要明顯好于酸性環(huán)境。
3.M22BH3的生理生化反應(yīng)以全自動微生物鑒定系統(tǒng)VITEK 32及配套需氧芽孢桿菌鑒定卡(BAC卡)進行生化特性鑒定，共檢測31項生化指標。
表4 M22BH3的生化鑒定結(jié)果

注生化指標縮寫全稱參考VITEK需氧芽孢桿菌鑒定卡(BAC卡)使用說明。
補做H2O2反應(yīng)，呈陽性。M22BH3鑒定為Bacillus subti1is(枯草芽孢桿菌)。
4.16S rRNA寡核苷酸序列分析使用CEQXL2000，BECKENMAN-COUNLTERDNA測序儀進行M22BH3的16S rRNA序列測定。測序引物為27f 5-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3685r5-TCTACGCATTTCACCGCTAC-3705f5-GTAGCGGTGAAATGCGTAGA-31492r 5-ACGGCTACCTTGTTACGACTT-3測出該菌株16S rRNA基因的3部分序列，分別是499bp、278bp和356bp。
499bp序列AACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGCTTGTATGAACCGCATGGTTCAAACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATAAGCTAGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGAACTGAGACCCCGGCCCCAGACTCCTACGGGAAGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCCGTTCAAATAGGGCGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTGTTCCGGAATTATGGGCGTTAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTTAGTTTGTATGTGTAAAGCCCCCGGCTCTAACCGGGGAGGGTC
278bp序列GCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCTGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCTTAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATTGCTACGCGACGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGAC356bp序列CCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAGACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCCATGAAATCGGCTAGTAAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTAAGGAGCCAGCCGC將這3部分序列在www.ncbi.nlm.nih.govhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov網(wǎng)站上用BLAST工具與已登錄的部分菌株的16S rRNA基因序列進行比對，結(jié)果表明與枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的同源性均＞96％。
5.DNA堿基比例的測定使用的儀器為帶配套溫控裝置的SHIMADZU UV-1700紫外可見分光光度計，波長固定在260nm，待測M22BH3DNA樣品用0.1SSC稀釋至OD260在0.3～0.6之間。以E.coli K12做參比菌株，采用熱變性溫度法測定由于測出的E.coli-K12的Tm值為75.7(0.1SSC中)，所以由以下公式計算M22BH3的(G+C)mol％值0.1SSC(G+C)mol％＝51.2+2.08(Tm未知菌-Tm E.coli K12)所測得的M22BH3的Tm值為73.36，計算得M22BH3的(G+C)mol％為46.33％。
枯草芽孢桿菌的(G+C)mol％一般在42～43％(伯杰細菌鑒定手冊，第八版)。由于不同細菌(G+C)mol％差異在2％內(nèi)無意義，可認為是同一細菌；4～5％同種內(nèi)不同菌株；＞5％不屬同一種；10～15％同屬內(nèi)不同細菌；20～30％不同屬甚至不同科。M22BH3的(G+C)mol％為46.33％，與枯草芽孢桿菌的(G+C)mol％一般值差別在4～5％，可認為是同種內(nèi)不同菌株。
實施例3M22BH3菌株無細胞培養(yǎng)液的制備①將M22BH3按接種量1∶100的比例接種于25ml小量NA液體培養(yǎng)基(pH7.0)中，120rpm/min，30℃，振蕩培養(yǎng)24h；②再將上述培養(yǎng)液按1∶20的比例接種于1000ml大量NA液體培養(yǎng)基(pH7.0)中，120rpm/min，30℃，振蕩培養(yǎng)72h；③將發(fā)酵液經(jīng)8000～12000r/min離心取上清，收集到的上清液經(jīng)細菌濾膜(0.22μm)過濾后得到的濃縮液，將其涂布在平板上，檢測至無活菌，即為M22BH3菌株制劑。
實施例4M22BH3菌株、M22BH3無細胞培養(yǎng)液對病原菌的抑菌效果1.M22BH3菌株對病原菌的抑菌效果將M22BH3按1∶100的比例接種于NA液體培養(yǎng)基中，120rpm/min，溫度30℃，振蕩培養(yǎng)24h后，吸取200μl菌液均勻涂布于NA瓊脂平板，恒溫箱內(nèi)30℃培養(yǎng)48h后，用打孔器打取7mm的M22BH3菌餅，接入PDA瓊脂平板中央，20mm外四周等距接入7mm的病原真菌菌餅，對照以NA瓊脂塊代替M22BH3菌餅，每處理重復3皿。恒溫箱內(nèi)28℃培養(yǎng)。待對照長滿平皿時，十字交叉法測量拮抗帶直徑，每皿測2個數(shù)據(jù)，共測6個。(D1、D2為第1皿測量數(shù)據(jù)，D3、D4為第2皿測量數(shù)據(jù)，D5、D6為第3皿測量數(shù)據(jù)，D為平均數(shù))表5 M22BH3對16種病原菌的抑菌效果

1-桃炭疽病菌2-梨黑斑病菌3-蘋果褐腐病菌4-銳頂鐮刀菌5-尖孢鐮刀菌6-半裸鐮刀菌7-辣椒黑腐病菌8-黃瓜枯萎病菌9-番茄早疫病菌 10-茄子早疫病菌 11-立枯絲核菌 12-小麥根腐病菌
13-馬鈴薯絲核菌14-馬鈴薯早疫病菌 15-馬鈴薯晚疫病菌16-西瓜霜霉病菌2.M22BH3無細胞培養(yǎng)液對病原菌的抑菌效果采用含介質(zhì)的方法將M22BH3菌株制劑稀釋10倍(1/10)、20倍(1/20)、40倍(1/40)、100倍(1/100)和400倍(1/400)，在PDA平板中央移入病原真菌菌塊；采用直接滴定法將原液及各稀釋梯度的稀釋液取200μl直接滴定在直徑為7mm的菌塊上，置28℃下培養(yǎng)，72h后測定病原菌菌塊生長直徑。對照在病原真菌菌塊上滴加無菌水。每處理設(shè)5個重復，試驗重復2次。
表6 72h后各稀釋梯度下病原菌生長直徑

表7由表6的數(shù)據(jù)計算得到抑制率＝100％×(CK直徑-病原菌直徑)/CK直徑表7 72h后各稀釋梯度對病原菌生長的抑制率

1-桃炭疽病菌 2-梨黑斑病菌 3-蘋果褐腐病菌 4-銳頂鐮刀菌5-尖孢鐮刀菌 6-半裸鐮刀菌 7-辣椒黑腐病菌 8-黃瓜枯萎病菌9-番茄早疫病菌10-茄子早疫病菌11-立枯絲核菌12-小麥根腐病菌13-馬鈴薯絲核菌 14-馬鈴薯早疫病菌 15-馬鈴薯晚疫病菌16-西瓜霜霉病菌
權(quán)利要求
1.一株枯草芽孢桿菌M22BH3，分離自甘肅省蘭州市范家坪百合地的土壤中，由中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏名Bacillus subtilis M22BH3，保藏號為M206028。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一株枯草芽孢桿菌M22BH3，其特征如下枯草芽孢桿菌M22BH3在NA固體培養(yǎng)基(牛肉浸膏3.0g，蛋白胨5.0g，葡萄糖10g，酵母浸膏1.0g，瓊脂15g，水1000ml，pH7.0)和NA液體培養(yǎng)基(牛肉浸膏3.0g，蛋白胨5.0g，葡萄糖10g，酵母浸膏1.0g，水1000ml，pH7.0)中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件溫度28～30℃，培養(yǎng)時間24～48h，該菌的鑒定特征為M22BH3為桿狀細菌，G+性；鞭毛側(cè)生，每個菌體上著生有8～20根鞭毛，其長度約為菌體的2～3倍；有莢膜；形成芽孢，中生，芽孢囊膨大；可在45℃以上的溫度條件下正常生長，為高溫微生物；可在12％的鹽濃度下生長，但不屬于嗜鹽細菌；生長最適pH在7～8之間，而且它們在堿性環(huán)境中的生長狀況要明顯好于酸性環(huán)境；經(jīng)VITEK 32全自動微生物鑒定系統(tǒng)鑒定為鑒定為Bacillus subtilis(枯草芽孢桿菌)；所測得的16S rRNA序列比對結(jié)果顯示與已知的枯草芽孢桿菌的16S rRNA序列的同源性＞96％；(G+C)mol％測定結(jié)果顯示M22BH3的(G+C)mol％為46.33％，與枯草芽孢桿菌的(G+C)mol％一般值(42～43％)差別在4～5％，可認為是同種內(nèi)不同菌株。
3.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的一株枯草芽孢桿菌M22BH3，其特征在于該菌株可作為廣譜抗真菌生防菌應(yīng)用，尤其是用于桃炭疽病菌、梨黑斑病菌、蘋果褐腐病菌、銳頂鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、半裸鐮刀菌、辣椒黑腐病菌、黃瓜枯萎病菌、番茄早疫病菌、茄子早疫病菌、立枯絲核菌、小麥根腐病菌、馬鈴薯絲核菌、馬鈴薯早疫病菌、馬鈴薯晚疫病菌、西瓜霜霉病菌等植物病原真菌的生物防治。
4.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的一株枯草芽孢桿菌M22BH3，其特征在于該菌株的無細胞培養(yǎng)液可作為廣譜抗真菌生防劑應(yīng)用，尤其是用于桃炭疽病菌、梨黑斑病菌、蘋果褐腐病菌、銳頂鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、半裸鐮刀菌、辣椒黑腐病菌、黃瓜枯萎病菌、番茄早疫病菌、茄子早疫病菌、立枯絲核菌、小麥根腐病菌、馬鈴薯絲核菌、馬鈴薯早疫病菌、馬鈴薯晚疫病菌、西瓜霜霉病菌等植物病原真菌的生物防治。
5.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的一株枯草芽孢桿菌M22BH3，其特征在于M22BH3菌株的發(fā)酵液以及從M22BH3菌株、M22BH3發(fā)酵液、M22BH3發(fā)酵液的無細胞培養(yǎng)液中提取的單體或者混合物可作為廣譜抗真菌生防劑應(yīng)用，尤其是用于桃炭疽病菌、梨黑斑病菌、蘋果褐腐病菌、銳頂鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、半裸鐮刀菌、辣椒黑腐病菌、黃瓜枯萎病菌、番茄早疫病菌、茄子早疫病菌、立枯絲核菌、小麥根腐病菌、馬鈴薯絲核菌、馬鈴薯早疫病菌、馬鈴薯晚疫病菌、西瓜霜霉病菌等植物病原真菌的生物防治。
全文摘要
一株枯草芽孢桿菌及應(yīng)用。菌株分離自甘肅省蘭州市范家坪百合地的土壤中，經(jīng)鑒定為枯草芽孢桿菌(Bacillus－subtilis)，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心CCTCC，保藏名Bacillus－subtilis M22BH3，保藏號M206028；菌株M22BH3、M22BH3發(fā)酵液、M22BH3發(fā)酵液的無細胞培養(yǎng)液及其從M22BH3菌株、M22BH3發(fā)酵液、M22BH3發(fā)酵液的無細胞培養(yǎng)液中提取的單體或者混合均可用于桃炭疽病菌、梨黑斑病菌、蘋果褐腐病菌、銳頂鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、半裸鐮刀菌、辣椒黑腐病菌、黃瓜枯萎病菌、番茄早疫病菌、茄子早疫病菌、立枯絲核菌、小麥根腐病菌、馬鈴薯絲核菌、馬鈴薯早疫病菌、馬鈴薯晚疫病菌、西瓜霜霉病菌等植物病原真菌的生物防治。本發(fā)明原料易得，易于實施，可大批量生產(chǎn)和推廣應(yīng)用。
文檔編號A01P3/00GK1952117SQ20061020036
公開日2007年4月25日 申請日期2006年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月18日
發(fā)明者李紅玉, 王亞麗, 支德娟 申請人:蘭州大學