專利名稱：：用于細(xì)菌感染的抗微生物療法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明關(guān)于一種用于定向誘變及異源表達(dá)的分子遺傳學(xué)方法以及細(xì)菌性發(fā)病機(jī)理的活體外和活體內(nèi)模型以闡明金黃色葡萄球菌色素是致病因子及抗微生物療法的潛在新穎目標(biāo)。
背景技術(shù)：
：Ogston(1881)杜撰了葡萄球菌屬(genusStaphylococcus)以闡述葡萄樣細(xì)菌簇(staphylo=葡萄，Gr.)并且自外科手術(shù)膿腫獲取了葡萄球菌屬。此后不久，Rosenbach(1884)在純凈培養(yǎng)物中分離出此病原體并根據(jù)其相對(duì)于經(jīng)常寄居在皮膚表面的低毒力葡萄球菌(staphylococci)的特征表面色素沉著提出了種屬名稱金黃色葡萄球菌(S.aureus(金色，拉丁文))。在進(jìn)入其七十年代后，抗微生物療法時(shí)代已大大地減少了由感染性疾病引發(fā)的發(fā)病和死亡。然而，出現(xiàn)的抗性微生物現(xiàn)在已達(dá)流行性比例并對(duì)醫(yī)學(xué)界提出了巨大的挑戰(zhàn)。突出革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌病原體金黃色葡萄球菌呈現(xiàn)特別明顯的令人擔(dān)憂的趨勢(shì)，其對(duì)第一線抗生素療法變得越來(lái)越?jīng)]有反應(yīng)。在世界上，金黃色葡萄球菌可能是危及生命的急性細(xì)菌感染的最常見(jiàn)原因，且其能夠造成各種各樣的疾病，嚴(yán)重程度自簡(jiǎn)單的燙傷或膿皰病到爆發(fā)性膿毒癥或中毒性休克綜合征。金黃色葡萄球菌是菌血癥、醫(yī)院相關(guān)(院內(nèi))感染、皮膚及軟組織感染、傷口感染、及骨骼和關(guān)節(jié)感染的單一主導(dǎo)因素。其是心內(nèi)膜炎及食物中毒的若干最常見(jiàn)病因中的一種。對(duì)24,000種以上侵潤(rùn)性細(xì)菌分離物的全國(guó)前瞻性調(diào)研顯示與疾病有關(guān)的具有甲氧西林抗性的金黃色葡萄球菌菌株(MRSA)已經(jīng)自22%(1995年)增加到57%(目前)。現(xiàn)在，MRSA經(jīng)常發(fā)現(xiàn)于社會(huì)獲得性感染以及醫(yī)院中。急需發(fā)現(xiàn)用以解除此真實(shí)公共健康危害的新穎抗生素類別。半世紀(jì)以來(lái)，人們基于<10個(gè)抗菌支架合成類似物已經(jīng)研發(fā)了>100種抗菌劑并將其投放市場(chǎng)，但除了噁唑烷酮核心之外，在過(guò)去30年里沒(méi)有出現(xiàn)用以解決出現(xiàn)的抗性問(wèn)題的新穎支架。研發(fā)靶向諸如金黃色葡萄球菌類胡蘿卜素色素等細(xì)菌致病因子的新穎類別抗生素是一種人們尚未注意到其潛在優(yōu)勢(shì)的方法。經(jīng)典抗生素方法試圖通過(guò)靶向主要細(xì)胞功能(例如，細(xì)胞壁生物合成、蛋白質(zhì)合成、DNA復(fù)制、RNA聚合酶、或代謝途徑)來(lái)殺死細(xì)菌或抑制細(xì)菌生長(zhǎng)。這些常用療法具有較高毒性風(fēng)險(xiǎn)，這是因?yàn)樵S多所述細(xì)胞功能對(duì)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞也是十分重要的并且需要在微生物目標(biāo)與宿主細(xì)胞對(duì)應(yīng)部分之間進(jìn)行精細(xì)的分子區(qū)分。第二，相同主要目標(biāo)的重復(fù)使用意味著當(dāng)細(xì)菌在治療期間對(duì)特定抗生素藥劑產(chǎn)生抗性時(shí)，即使所述細(xì)菌從未暴露于作用于所述目標(biāo)的其它藥劑，其也可能會(huì)同時(shí)對(duì)所述其它藥劑產(chǎn)生交叉抗性。第三，常用療法對(duì)細(xì)菌施加"生或死"的挑戰(zhàn)，因此，所述細(xì)菌會(huì)承受發(fā)展針對(duì)所述抗微生物藥劑抗性的強(qiáng)大選擇壓力。最后，許多通用抗生素具有廣譜活性以及會(huì)根除許多正常菌群組成的副作用，進(jìn)而產(chǎn)生不期望并發(fā)癥，例如，難辨梭狀芽孢桿菌結(jié)腸炎或續(xù)發(fā)性真菌感染(例如，念珠菌屬(Candida)感染)。在金黃色葡萄球菌感染的經(jīng)驗(yàn)療法中，出現(xiàn)的MRSA可順應(yīng)甲氧西林及相關(guān)抗生素(苯唑西林(oxacillin)、雙氯西林(dicloxacillin))及所有頭孢菌素類(cephalosporings)(例如，頭孢唑林(cefazolin)、頭孢力新(cephalexin))的臨床使用。MRSA經(jīng)常會(huì)對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類(例如，紅霉素)、(3-內(nèi)酰胺酶抑制劑組合(例如，優(yōu)立新(Unasyn)、奧格門汀(Augmentin))及氟喹諾酮類(例如，環(huán)丙沙星(ciprofloxacin))具有明顯水平的抗性且偶爾會(huì)對(duì)克林霉素(clindamycin)、甲氧芐氨嘧啶/磺胺甲基異噁唑(trimethoprim/sulfamethoxisol)(Bactrim)、及禾U福平(rifampin)產(chǎn)生抗性。在嚴(yán)重的金黃色葡萄球菌感染中，靜脈注射萬(wàn)古霉素是最后的辦法，但現(xiàn)在也有關(guān)于金黃色葡萄球菌對(duì)萬(wàn)古霉素(一種常用于治療MRSA的靜脈注射抗生素)抗性的令人感到驚慌的報(bào)告。諸如利奈唑胺(linezolid)(Zyvox)或奎奴普汀(quinupristin)/達(dá)福普汀(dalfopristin)(Synercid)(二者均以與核糖體亞單位結(jié)合的方式利用傳統(tǒng)目標(biāo)來(lái)抑制RNA合成)等新穎抗-MRSA藥劑是相當(dāng)昂貴的。對(duì)于金黃色葡萄球菌色素的后續(xù)研究已闡明可產(chǎn)生一系列類胡蘿卜素的具體生物合成途徑。在飲食水果及植物中產(chǎn)生的類似類胡蘿卜素依靠其自由基清除性質(zhì)及淬滅單態(tài)氧的異常能力而成為公認(rèn)的強(qiáng)效抗氧化劑。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明闡明類胡蘿卜素在微生物中可用作致病/抗性因子。在一個(gè)具體實(shí)施例中，本發(fā)明闡明金黃色葡萄球菌類胡蘿卜素是一種可依靠其抗氧化劑性質(zhì)削弱嗜中性粒細(xì)胞殺傷及促進(jìn)疾病發(fā)病的致病因子，及(2)表明類胡蘿卜素色素生成的藥理抑制可致使有機(jī)體對(duì)氧化劑及血液殺傷更敏感。本發(fā)明提供一種治療細(xì)菌感染的方法，其包括對(duì)遭受所述感染的受試者投與可抑制細(xì)菌中類胡蘿卜素生成及/或活性的藥劑。在一個(gè)實(shí)施例中，所述細(xì)菌感染是葡萄球菌感染。在另一實(shí)施例中，所述細(xì)菌是葡萄球菌屬。在又一實(shí)施例中，所述細(xì)菌是金黃色葡萄球菌。本發(fā)明還提供一種通過(guò)靶向類胡蘿卜素來(lái)預(yù)防、治療MRSA或改進(jìn)MRSA治療有效性的方法。一方面，所述類胡蘿卜素是葡萄球菌屬類胡蘿卜素。另一方面，所述方法包括涉及胡蘿卜素形成抑制劑的類胡蘿卜素耙向。在又一實(shí)施例中，所述胡蘿卜素形成抑制劑是多功能氧化酶抑制劑，例如，2-二乙基氨基乙基-2，2-二苯基-戊酸酯(SKF525陽(yáng)A)。本發(fā)明還提供一種篩選用于治療細(xì)菌感染的MRSA治療劑的方法，其包括使可產(chǎn)生類胡蘿卜素的細(xì)菌與懷疑可抑制類胡蘿卜素生成或活性的測(cè)試藥劑接觸，并測(cè)量所述藥劑在氧化劑存在及不存在時(shí)的效果。圖1A-E顯示金黃色葡萄球菌類胡蘿卜素色素的遺傳操控及其抗氧化劑功能。A)用于通過(guò)等位基因置換實(shí)施金黃色葡萄球菌crtM(編碼脫氫角鯊烯合酶)胡蘿卜素形成及誘變作用的生化途徑。B)金黃色葡萄球菌色素沉著在ACrtM突變體中的消除；金黃色葡萄球菌4'4'-二脫輔基鏈孢紅素色素在釀膿鏈球菌(Streptococcuspyogenes)中的異源表達(dá)。金黃色葡萄球菌ACrtM突變體對(duì)C)過(guò)氧化氫或D)單態(tài)氧殺傷的敏感性增加，在與pCrtMN互補(bǔ)時(shí)WT抗性水平恢復(fù)。E)表達(dá)4'4'-二脫輔基鏈孢紅素的釀膿鏈球菌的單態(tài)氧敏感性降低。誤差棒代表所繪變量的標(biāo)準(zhǔn)偏差；所示結(jié)果代表至少3組實(shí)驗(yàn)。圖2A-F顯示金黃色葡萄球菌類胡蘿卜素色素在嗜中性粒細(xì)胞及全血中賦予對(duì)氧化劑殺傷的抗性。WT及ACrtM金黃色葡萄球菌在A)具有分離人類嗜中性粒細(xì)胞的共培養(yǎng)物及B)鼠類全血中的存活率。在(B)中還顯示與單獨(dú)載體或pCrtMN互補(bǔ)的ACrtM的全血存活率。(C)crtMN的質(zhì)粒表達(dá)對(duì)釀膿鏈球菌在小鼠全血中存活率的影響。D)氧化猝發(fā)抑制劑DPI對(duì)WT及ACrtM突變體金黃色葡萄球菌人類嗜中性粒細(xì)胞共培養(yǎng)物存活率的影響。PhM-/-Ph。"wT及ACrtM突變體金黃色葡萄球菌在E)正常人及缺少NADPH氧化酶功能的gp47Ph°x—、患者或者F)野生型CD1和C57B1/6小鼠及gp91Ph°x—A小鼠的血液中的相對(duì)存活率。結(jié)果代表至少3組實(shí)驗(yàn)。使用CGD人類患者血液的分析實(shí)施兩次。.圖3A-C顯示金黃色葡萄球菌類胡蘿卜素在皮下膿腫模型中產(chǎn)生毒力。用接受對(duì)比的兩種菌株在小鼠的左右側(cè)進(jìn)行皮下注射。線型圖繪示由指定菌株產(chǎn)生的總累積皮膚損傷面積。散點(diǎn)圖上的點(diǎn)=自每一小鼠個(gè)體皮膚損傷回收的經(jīng)著色菌株與未經(jīng)著色菌株的cfu比例。照片圖像繪示每一治療組的代表性小鼠。A)CD1小鼠中的野生型(WT)與ACrtM突變體金黃色葡萄球菌，B)gp9lPh。"小鼠中的WT與ACrtM突變體金黃色葡萄球菌，及C)葡萄球菌4'4'-二脫輔基鏈孢紅素的釀膿鏈球菌+/-表達(dá)。圖4A-B顯示抑制金黃色葡萄球菌色素生成可增加氧化劑敏感性及提高吞噬細(xì)胞清除率。在指定濃度的SKF525-A存在或不存在時(shí)培養(yǎng)野生型及ACrtM突變體金黃色葡萄球菌。此圖繪示對(duì)A)色素沉著表現(xiàn)型、B)單態(tài)氧敏感性、及C)在鼠類全血中存活率的觀測(cè)影響。所示結(jié)果代表至少3組實(shí)驗(yàn)。圖5A-D闡明對(duì)金黃色葡萄球菌crtM基因的等位基因置換缺少多型性影響。A)活細(xì)菌在WT金黃色葡萄球菌與ACrtM突變體的固定相培養(yǎng)物中的固定相濃度的類似性及細(xì)菌在新鮮THB培養(yǎng)基中的后續(xù)生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)。WT金黃色葡萄球菌與ACrtM突變體在如下方面缺少可測(cè)量差異B)浮力密度，通過(guò)在Percoll中遷移評(píng)定C)疏水性，通過(guò)分配到正十六烷中來(lái)測(cè)量，及D)表面電荷，通過(guò)細(xì)胞色素C結(jié)合測(cè)定。圖6A-F顯示關(guān)于金黃色葡萄球菌類胡蘿卜素色素抗吞噬性質(zhì)的進(jìn)一步分析。A)WT及AcrtM突變體金黃色葡萄球菌是以相當(dāng)?shù)乃俾适艿饺祟愂戎行粤＜?xì)胞吞噬。代表性研究的反巻積熒光顯微鏡檢査顯示細(xì)胞內(nèi)(綠色)及細(xì)胞外(紅色)有機(jī)體。B)WT及AcrtM突變體金黃色葡萄球菌可激起類似程度的人類嗜中性粒細(xì)胞氧化猝發(fā)，如通過(guò)氮藍(lán)四唑還原測(cè)量得。C)氧化猝發(fā)抑制劑二伸苯基碘鎗(DPI)對(duì)WT及ACrtM突變體金黃色葡萄球菌在正常小鼠血液中存活率的影響。WT及ACrtM突變體金黃色葡萄球菌菌株對(duì)由D)顆粒蛋白酶組織蛋白酶G及人類嗜中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶或E)鼠類組織蛋白酶抑制素mCRAMP引發(fā)的殺傷的敏感性。F)嗜中性粒細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)存活率在金黃色葡萄球菌WT與ACrtM突變體金黃色葡萄球菌之間的差異于用自體血清進(jìn)行預(yù)調(diào)料的實(shí)驗(yàn)(如那些不含血清者)中是類似的(例如，圖6A)。具體實(shí)施例方式除非上下文明確指出，否則本文及隨附權(quán)利要求中所用單數(shù)形式"一"、"一個(gè)"及"所述"包括復(fù)數(shù)個(gè)指示物。由此，例如，當(dāng)提及"一蛋白質(zhì)"時(shí)包括復(fù)數(shù)個(gè)所述蛋白質(zhì)且當(dāng)提及"所述細(xì)胞"時(shí)包括提及一或多個(gè)熟悉所屬技術(shù)的人員已知的細(xì)胞，坐坐寸寸°除非另有說(shuō)明，否則本文所用所有技術(shù)及科學(xué)用語(yǔ)均具有與一熟悉本發(fā)明所屬技術(shù)的普通人員通常所了解的意義相同的意義。盡管本文闡述了例示性方法、裝置及材料，但類似于或等效于那些本文所闡述者的方法及材料也可用于實(shí)踐所揭示方法及組合物。上文及本文通篇中所討論公開(kāi)案僅因?yàn)槠浣沂緝?nèi)容先于本申請(qǐng)案的申請(qǐng)日期而提供。不得將本文中任何內(nèi)容解釋為承認(rèn)本發(fā)明者無(wú)權(quán)使本發(fā)明早于先前揭示內(nèi)容。本發(fā)明提供用于治療微生物感染的方法及組合物，其中所述微生物表達(dá)類胡蘿卜素。例如，本發(fā)明提供用于治療金黃色葡萄球菌感染(包括那些由甲氧西林-及萬(wàn)古霉素-抗性菌株產(chǎn)生的感染)的方法及組合物。本發(fā)明的方法及組合物可單獨(dú)或聯(lián)合傳統(tǒng)抗微生物劑及抗生素使用以治療所述感染。另外，本文所揭示方法和組合物可用于諸如異物、導(dǎo)管等裝置或血管內(nèi)感染、慢性骨髓炎、醫(yī)院獲得性或手術(shù)后感染、復(fù)發(fā)性皮膚感染、或用于免疫妥協(xié)宿主的金黃色葡萄球菌感染。類胡蘿卜素代表一大類自然色素。在細(xì)菌、真菌、藻類、植物及動(dòng)物中已識(shí)別出600種以上不同的類胡蘿卜素(Staub,O.，In:Pfander，H.(編輯)，KeytoCarotenoids，第2版，BirkhuserVerlag,Basel)。所述類胡蘿卜素可用作光合作用的輔助色素、抗氧化劑、人類及動(dòng)物中維生素的前體以及用于光保護(hù)及菌種特異性染色的色素。類胡蘿卜素在歷史上具有重要作用，例如，用于醫(yī)藥、食品著色劑和動(dòng)物飼料及營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑。如下發(fā)現(xiàn)增強(qiáng)了人們對(duì)這些天然產(chǎn)物在醫(yī)藥應(yīng)用方面的興趣這些天然產(chǎn)物在預(yù)防癌癥及慢性疾病方面可起重要作用(主要?dú)w因于其抗氧化性)及，最近，因其與癌細(xì)胞之間的特異性相互作用而使其呈現(xiàn)顯著的腫瘤抑制活性(Bertram,J.S.，Nutr.Rev.，1999;57:182-191;Singh等人，Oncology,1998;12:1643-168;Rock,C.L.,Pharmacol,Ther.,1997;75:185-197;Edge等人，J.Photochem.Photobiol.,1997;41:189-200)。類胡蘿卜素可通過(guò)組合來(lái)自不同有機(jī)體的生物合成基因以創(chuàng)造生物合成途徑來(lái)在重組微生物中產(chǎn)生。目前，已經(jīng)自可用于制造各種各樣類胡蘿卜素的細(xì)菌、植物、藻類及真菌中分離出150個(gè)以上的用于24種胡蘿卜素形成酶(crt)的基因。已經(jīng)自許多細(xì)菌克隆出若干完整類胡蘿卜素生物合成途徑，其中生物合成酶基因在基因簇中排列(參見(jiàn)Armstrong,Ann.Rev.Microbiol"1997,51:629;Sandmann,Eur.J.Biochem.，1994，223:7)。分別用于合成玉米黃質(zhì)二糖苷及無(wú)環(huán)葉黃素球形烯(spheroidene)和球形烯酮(spheroidenone)的Erwinia及Rhodobacter途徑是自其識(shí)別出所有涉及酶的第一途徑(Arms加ng等人，Mol.&GeneralGene"1989,216:254;Lang等人，J.Bacteriol.,1995,177:2064;Lee及Liu,Mol.Microbiol"1991,5:217;Misawa等人，J.Bacteriol.,1990,172:6704)。各種技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用于克隆胡蘿卜素形成基因(Hirschberg,J.,In:Carotenoids:BiosynthesisandMetabolism,第3巻，Carotenoids,G.Britton,Ed.Basel:BirkhuserVerlag,148-194,1998)。功能顏色互補(bǔ)在自Erwinia表達(dá)胡蘿卜素形成基因的大腸桿菌中已成功地用于克隆各種微生物及植物胡蘿卜素形成基因(Verdoes等人，Biotech,andBioeng.,1999,63:750;Zhu等人，PlantandCellPhysiology,1997,38:357;Kajiwara等人，PlantMol.Biol.,1995，29:343;Pecker等人，PlantMol.Biol.，1996,30:807;關(guān)于植物類胡蘿卜素生物合成可參見(jiàn)Hirschberg等人，PureandAppliedChemistry,1997,69:2151;CunninghamandGantt,Ann.Rev.ofPlantPhysiol及PlantMol.Biol"1998，49:557)。編碼早期類胡蘿卜素生物合成酶GGDP合酶、八氫番茄紅素合酶及八氫番茄紅素去飽和酶的基因占所有克隆胡蘿卜素形成基因的一半以上?？色@得不同的八氫番茄紅素去飽和酶基因，其可將2個(gè)、3個(gè)、4個(gè)或5個(gè)雙鍵導(dǎo)入八氫番茄紅素中以分別產(chǎn)生胡蘿卜素(植物、藍(lán)色細(xì)菌、藻類)(Bartley等人，Eur.J.ofBiochem.,1999,259:396)、鏈孢紅素(紅色細(xì)菌)(Raisig等人，J.Biochem.,1996,119:559)、番茄紅素(大多數(shù)真細(xì)菌及真菌)(Verdoes等人，Biotech,andBioeng.,1999,63:750;RuizHidalgo等人，Mol.&Gen.Genetics,1997,253:734)或3,4-二脫氫番茄紅素(粗糙鏈孢霉(Neurosporacrassa))(Schmidhauser等人，Mol.andCellBiol.，1990,10:5064)。下列是已經(jīng)克隆出類胡蘿卜素生物合成基因的實(shí)例crtE:來(lái)自莢膜紅色細(xì)菌(R.capsulatus)及噬夏孢歐文氏桿菌(E.uredovora)的GGPP-合酶crtB:來(lái)自莢膜紅色細(xì)菌及噬夏孢歐文氏桿菌的八氫番茄紅素合酶crtl:來(lái)自噬夏孢歐文氏桿菌及草生歐文氏菌(E.herbicola)的八氫番琉紅素去飽和酶crtY:來(lái)自噬夏孢歐文氏桿菌及草生歐文氏菌的番茄紅素環(huán)化酶crtA:來(lái)自莢膜紅色細(xì)菌及球形紅細(xì)菌(R.spaeroides)的球形烯單氧合酶crtO:來(lái)自藍(lán)細(xì)菌(Synechocistissp)的P-C4-酮酶(氧合酶)。crtW:來(lái)自產(chǎn)堿菌(Algaligenessp.)、海洋細(xì)菌(A.aurantiacum)的卩-C4-酮酶crtD:來(lái)自莢膜紅色細(xì)菌及球形紅細(xì)菌的甲氧基鏈孢紅素去飽和酶crtX:來(lái)自噬夏孢歐文氏桿菌及草生歐文氏菌的玉米黃質(zhì)葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶crtZ:來(lái)自噬夏孢歐文氏桿菌及草生歐文氏菌的P-胡蘿卜素羥化酶crtU:來(lái)自灰色鏈霉菌(S.griseus)的p-胡蘿卜素去飽和酶crtM:來(lái)自金黃色葡萄球菌的脫氫角鯊烯合酶crtN:來(lái)自金黃色葡萄球菌的脫氫角鯊烯去飽和酶。與經(jīng)常寄居在皮膚表面上的低毒力葡萄球菌(例如，表皮葡萄球菌)相比，主要的人類病原體金黃色葡萄球菌(S.aureus)因其特征金黃色色素沉著(aureus^金色，拉丁文)得名。關(guān)于金黃色葡萄球菌色素的后續(xù)研究揭開(kāi)了產(chǎn)生一系列類胡蘿卜素的具體生物合成途徑。在飲食水果及植物中產(chǎn)生的類似類胡蘿卜素依靠其自由基清除性質(zhì)及淬滅單態(tài)氧的異常能力而成為公認(rèn)的強(qiáng)效抗氧化劑。所述金黃色葡萄球菌色素可具有類似性質(zhì)。本發(fā)明檢査了金黃色葡萄球菌是否可利用其金色類胡蘿卜素色素來(lái)抵抗宿主先天免疫系統(tǒng)的基于氧化劑的清除機(jī)制。例如，嗜中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞可通過(guò)使殺死其已吞噬細(xì)菌的反應(yīng)性分子(例如，過(guò)氧化物、漂白劑及單態(tài)氧)產(chǎn)生"氧化猝發(fā)"來(lái)殺死細(xì)菌。由類胡蘿卜素色素產(chǎn)生的金色是人類病原體金黃色葡萄球菌的齊名特征。配對(duì)誘變與異源表達(dá)的分子遺傳學(xué)分析已用于證實(shí)此標(biāo)志表現(xiàn)型實(shí)際上是一種借助其抗氧化劑性質(zhì)來(lái)保護(hù)所述細(xì)菌免受吞噬殺傷的致病因子。在本世紀(jì)中，在社會(huì)及醫(yī)院中，此重要病因的有效控制受到抗微生物劑抗性迅速發(fā)展的危害。本發(fā)明闡明抑制胡蘿卜素形成可為并發(fā)性金黃色葡萄球菌感染治療提供一種新穎治療方法，其可有效地致使所述病原體對(duì)由正常宿主先天免疫防御產(chǎn)生的清除更敏感。本發(fā)明闡明類胡蘿卜素色素生成可造成B組鏈球菌(GBS)對(duì)巨噬細(xì)胞殺傷產(chǎn)生抗性。在人類新生兒中，GBS是諸如肺炎、敗血癥及腦膜炎等侵潤(rùn)性細(xì)菌感染的主要原因。人們已識(shí)別出類胡蘿卜素色素(CylE)生成所需基因。所述色素為有機(jī)體產(chǎn)生具有在疾病發(fā)病中起重要作用的細(xì)胞損傷及促炎性質(zhì)的溶血素/細(xì)胞溶素毒素所需。與侵潤(rùn)性感染相關(guān)的其它細(xì)菌及真菌人類病原體(例如，煙曲菌(Aspergillusfumigatus)、洋蔥伯克霍爾德氏菌(Burkholderiacepacia)、粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratiamarcesens"可產(chǎn)生具有抗氧化劑性質(zhì)的類胡蘿卜素或黑色素樣色素，表明常見(jiàn)致病主因并揭露針對(duì)吞噬細(xì)胞清除機(jī)制的潛在色素生成選擇性優(yōu)點(diǎn)。因此，可將用于抗微生物療法的靶向色素生成方法推廣至產(chǎn)生色素(例如，類胡蘿卜素色素或其它可賦予氧化保護(hù)的色素)的有機(jī)體。確切地說(shuō)，曲霉菌屬(Aspergillussp.)是導(dǎo)致免疫妥協(xié)受試者(例如，接受癌癥化學(xué)治療者)死亡的重要原因且洋蔥伯克霍爾德氏菌是造成纖維性囊腫患者死亡的重要原因。曲霉菌及伯克霍爾德氏菌二者經(jīng)常具有多種藥物抗性并對(duì)現(xiàn)存抗生素療法具有頑抗性。本發(fā)明闡明通過(guò)使用耙向基因刪除分子遺傳學(xué)方法(以創(chuàng)造未經(jīng)著色金黃色葡萄球菌突變體)及克隆技術(shù)(以在其它細(xì)菌中表達(dá)所述金黃色葡萄球菌色素)以創(chuàng)造"活性劑(livingreagent)"來(lái)確定所述色素在金黃色葡萄球菌疾病發(fā)病中的真實(shí)重要性。金黃色葡萄球菌類胡蘿卜素色素的確可保護(hù)細(xì)菌免受過(guò)氧化物及單態(tài)氧的損害并使其在小鼠及人類血液中對(duì)殺傷更具抗性及對(duì)由純化人類嗜中性粒細(xì)胞引起的殺傷更具抗性。借助形成金黃色葡萄球菌膿腫的小鼠模型，表明類胡蘿卜素色素在活體內(nèi)可提升細(xì)菌存活率及加速疾病進(jìn)展。使用在嗜中性粒細(xì)胞氧化劑生成中受傷的小鼠的對(duì)照實(shí)驗(yàn)證實(shí)生成的類胡蘿卜素色素可依靠其抗氧化劑性質(zhì)來(lái)產(chǎn)生金黃色葡萄球菌毒力。本發(fā)明闡明在藥理學(xué)上抑制金黃色葡萄球菌色素生成可導(dǎo)致所述細(xì)菌對(duì)氧化劑更敏感并會(huì)降低血液存活率。通過(guò)吞噬細(xì)胞清除病原體的一個(gè)重要機(jī)制是通過(guò)釋放由NADPH氧化酶產(chǎn)生的反應(yīng)性氧物質(zhì)。本發(fā)明闡明諸如那些由金黃色葡萄球菌表達(dá)者等類胡蘿卜素起針對(duì)這些防御分子的保護(hù)作用。例如，與WT金黃色葡萄球菌菌株相比，ACrtM突變體可以lO倍至100倍更有效的方式受到過(guò)氧化氫殺傷且其可以100倍至1，000倍更有效的方式受到單態(tài)氧殺傷。類似地，葡萄球菌色素在釀膿鏈球菌中的異源表達(dá)與單態(tài)氧致死率降低100倍至1,000倍有關(guān)。本發(fā)明提供用于治療微生物感染及促進(jìn)抗微生物活性的抑制胡蘿卜素形成的方法及藥劑。例如，一方面，多功能氧化酶抑制劑2-二乙基氨基乙基-2,2-二苯基-戊酸酯(SKF525-A,Calbiochem)顯示在金黃色葡萄球菌中抑制色素形成，且在所述藥劑存在下生長(zhǎng)的金黃色葡萄球菌WT菌株中表現(xiàn)出類胡蘿卜素生成的劑量依賴性降低。阻斷金黃色葡萄球菌色素形成導(dǎo)致有機(jī)體對(duì)單態(tài)氧殺傷的敏感性出現(xiàn)相稱的劑量依賴性增加及其存活于人類全血中的能力降低。作為對(duì)照，使ACrtM突變體在平行實(shí)驗(yàn)中暴露于SKF525-A，對(duì)氧化劑敏感性或血液存活率無(wú)明顯影響。本發(fā)明提供用于通過(guò)抑制類胡蘿卜素生成及/或活性來(lái)治療細(xì)菌感染的方法和組合物。更具體來(lái)說(shuō)，本發(fā)明提供治療具有細(xì)菌感染(例如，葡萄球菌屬細(xì)菌感染)的受試者的方法，其包括使受試者與可抑制葡萄球菌屬的類胡蘿卜素活性及/或生成的藥劑接觸。一方面，所述藥劑是小分子、聚核苷酸(例如，核酶或反義分子)、多肽(例如，抗體)或擬肽物質(zhì)。在本發(fā)明的一個(gè)方面中，所述藥劑是一種可抑制胡蘿卜素形成的藥理劑。例如，所述藥劑可為多功能氧化酶抑制劑，例如2-二乙基氨基乙基-2,2-二苯基-戊酸酯(SKF525-A,Calbiochem)、2,4-二氯-6-苯基苯氧基乙基胺、2,4-二氯-6-苯基苯氧基乙基二乙基胺及胡椒基丁醚。另一方面，所述胡蘿卜素形成抑制劑包括寡核苷酸或聚核苷酸(例如，反義核苷酸、核酶或siRNA)。例如，反義技術(shù)是一種下調(diào)其中目標(biāo)基因序列已知的基因的方法。在包含葡萄球菌屬基因的技術(shù)中己知諸多類胡蘿卜素基因。在此方面中，己經(jīng)克隆出來(lái)自期望基因(例如，crtM及/或crtN)的核酸片段并將其以可操作方式連接到啟動(dòng)子以便于RNA的反義鏈會(huì)受到轉(zhuǎn)錄。隨后將此構(gòu)建體導(dǎo)入目標(biāo)細(xì)胞中并產(chǎn)生RNA的反義鏈。反義RNA可通過(guò)阻止編碼相關(guān)蛋白質(zhì)的mRNA累積來(lái)抑制基因表達(dá)。因此，針對(duì)crtM及/或crtN的反義分子可減少病原微生物的類胡蘿卜素合成，藉此致使所述微生物對(duì)由吞噬細(xì)胞引起的氧化損傷敏感。熟悉所屬技術(shù)的人員可知應(yīng)考慮某些與反義技術(shù)使用相關(guān)的因素以減少特定基因表達(dá)。例如，反義基因的適當(dāng)表達(dá)可能會(huì)需要借助熟悉所屬技術(shù)人員己知的不同調(diào)節(jié)因子來(lái)使用不同嵌合基因。在本發(fā)明的上下文中，顯然，通過(guò)使用抑制性核酸來(lái)調(diào)控細(xì)菌類胡蘿卜素生物合成途徑的表達(dá)可提供一種有用的治療方法。例如，本發(fā)明已識(shí)別出編碼類胡蘿卜素生物合成途徑中酶的基因，包括crtM和crtN?；蛘?或另外)，可能需要剔除導(dǎo)致C3o類胡蘿卜素合成的crtM/crtN基因。常用分子生物技術(shù)可用于產(chǎn)生抑制性核酸分子，例如，可與野生型細(xì)菌(例如，葡萄球菌屬)產(chǎn)生的crtN及/或M核酸相互作用的反義分子。本文所用分離核酸實(shí)質(zhì)上不含蛋白質(zhì)、脂質(zhì)及與體內(nèi)生成核酸自然締合的其它核酸。通常，所述核酸的純度為至少70重量％、80重量％、90重量％或以上，且用于在活體外合成核酸的常用方法可用于代替活體內(nèi)方法。本文所用"核酸"或"聚核苷酸"或"寡核苷酸"是指脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸的聚合物，其呈獨(dú)立片段形式或作為較大遺傳構(gòu)建體的組成(例如，通過(guò)以可操作方式將啟動(dòng)子連接到編碼(例如)反義分子的核酸)。在所屬技術(shù)中已知許多遺傳構(gòu)建體(例如，質(zhì)粒及其它表達(dá)載體)且其可用于在不含細(xì)胞的系統(tǒng)或原核細(xì)胞或真核(例如，酵母菌、昆蟲(chóng)、或哺乳動(dòng)物)細(xì)胞中產(chǎn)生本發(fā)明的期望核酸。本發(fā)明的核酸可容易地用于常用分子生物技術(shù)以產(chǎn)生本發(fā)明的肽。可將包含反義核酸、核酶或siRNA的聚核苷酸插入"表達(dá)載體"中。術(shù)語(yǔ)"表達(dá)載體"是指一種遺傳構(gòu)建體，例如質(zhì)粒、病毒或其它可經(jīng)改造以含有(例如)反義分子的所屬技術(shù)已知的介體。所述表達(dá)載體通常含有復(fù)制源及啟動(dòng)子以及方便轉(zhuǎn)化細(xì)胞表型選擇的基因。各種啟動(dòng)子(包括誘導(dǎo)型及組成型啟動(dòng)子)均可用于本發(fā)明。通常，所述表達(dá)載體含有源自與宿主/目標(biāo)細(xì)胞兼容的物種的控制序列及復(fù)制子位點(diǎn)?？墒褂檬煜に鶎偌夹g(shù)的人員己知的常用技術(shù)對(duì)具有本發(fā)明聚核苷酸的宿主/目標(biāo)細(xì)胞實(shí)施轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染。例如，當(dāng)所述宿主細(xì)胞是大腸桿菌時(shí)，可使用所屬技術(shù)中已知的CaCl2、MgCl2或RbCl方法來(lái)制備能夠吸收DNA的感受態(tài)細(xì)胞。或者，可使用諸如電穿孔或顯微注射等物理方法。電穿孔可通過(guò)高壓電脈沖將聚核苷酸轉(zhuǎn)移到細(xì)胞中。另外，可通過(guò)原生質(zhì)體融合使用所屬技術(shù)中熟知的方法將聚核苷酸導(dǎo)入宿主細(xì)胞中。人們還知道用于轉(zhuǎn)化真核細(xì)胞的適宜方法，例如，電穿孔及脂轉(zhuǎn)染。本發(fā)明所涵蓋的宿主細(xì)胞或目標(biāo)細(xì)胞是任何其中本發(fā)明的聚核苷酸可用于表達(dá)抑制性核酸分子的細(xì)胞。所述術(shù)語(yǔ)還包括宿主/目標(biāo)細(xì)胞的任何子代。有用的宿主/目標(biāo)細(xì)胞包括細(xì)菌細(xì)胞、真菌細(xì)胞(例如，酵母菌細(xì)胞)、植物細(xì)胞及動(dòng)物細(xì)胞。例如，宿主細(xì)胞可為高等真核生物細(xì)胞(例如，哺乳動(dòng)物細(xì)胞)、低等真核生物細(xì)胞(例如，酵母菌細(xì)胞)，或者所述宿主細(xì)胞可為原核動(dòng)物細(xì)胞(例如，細(xì)菌細(xì)胞)。可通過(guò)磷酸鈣轉(zhuǎn)染、DEAE-Dextran介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染或電穿孔來(lái)實(shí)現(xiàn)所述構(gòu)建體至所述宿主細(xì)胞的導(dǎo)入(Davis，L.,Dibner，M.,Battey,L,BasicMethodsinMolecularBiology(1986))。作為適當(dāng)宿主的代表性實(shí)例，可提及真菌細(xì)胞，例如，酵母菌；昆蟲(chóng)細(xì)胞，例如，Dros叩hilaS2及Spod叩teraSf9;動(dòng)物細(xì)胞，例如，CHO、COS或Bowes黑素瘤；植物細(xì)胞，及諸如此類。適當(dāng)宿主的選擇被視為屬于熟悉所屬技術(shù)人員根據(jù)本文教示內(nèi)容可知的范圍。宿主細(xì)胞可為真核生物宿主細(xì)胞(例如，哺乳動(dòng)物細(xì)胞)。一方面，所述宿主細(xì)胞是適合在細(xì)胞培養(yǎng)物中生長(zhǎng)的哺乳動(dòng)物產(chǎn)生細(xì)胞。常用于工業(yè)的所述細(xì)胞的實(shí)例為CHO、VERO、BHK、HeLa、CV1(包括Cos;Cos-7)、MDCK、293、3T3、C127、骨髓瘤細(xì)胞系(尤其為鼠類骨髓瘤細(xì)胞系)、PC12及W138細(xì)胞。中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞廣泛地用于產(chǎn)生若干復(fù)雜的重組蛋白質(zhì)，例如，細(xì)胞因子、凝血因子及抗體(Brasel等人，Blood88:2004-2012,1996;Kaufman等人，J.BiolChem263:6352-6362,1988;McKinnon等人，JMolEndocrinol6:231-239,1991;Wood等人，J.Immunol145:3011-3016,1990)。缺乏二氫葉酸還原酶(DHFR)的突變體細(xì)胞系(Urlaub等人，ProcNatlAcadSciUSA77:4216-4220，1980)是常用的CHO宿主細(xì)胞系，這是因?yàn)橛行У腄HFR可選擇及可擴(kuò)增基因表達(dá)系統(tǒng)有利于在這些細(xì)胞中高水平地表達(dá)重組蛋白質(zhì)(Kaufman,MethEnzymol185:527-566,1990)。另外，這些細(xì)胞易于作為貼壁或懸浮培養(yǎng)物操作并呈現(xiàn)相當(dāng)好的遺傳穩(wěn)定性。已經(jīng)對(duì)CHO細(xì)胞及在其中表達(dá)的重組蛋白質(zhì)進(jìn)行了詳盡地表征且所述CHO細(xì)胞及重組蛋白質(zhì)已由管理機(jī)構(gòu)獲準(zhǔn)用于臨床生成?？墒褂弥T如本文所述分析(活體外和活體內(nèi)分析)等熟悉所屬技術(shù)的人員已知的常用方法來(lái)測(cè)定這些抑制藥劑(例如，小分子(2-二乙基氨基乙基-2,2-二苯基-戊酸酯)及抑制性核酸)的活性。本發(fā)明還提供一種用于通過(guò)使細(xì)菌與抑制有效量的類胡蘿卜素生物合成抑制劑(即，胡蘿卜素形成抑制劑)接觸來(lái)抑制所述細(xì)菌生長(zhǎng)的方法。術(shù)語(yǔ)"接觸"是指使微生物(例如，細(xì)菌)暴露于藥劑以便于所述藥劑能夠抑制、殺死或裂解微生物或致使其對(duì)氧化性破壞敏感。有機(jī)體與可抑制類胡蘿卜素生物合成的藥劑的接觸可通過(guò)(例如)將所述藥劑添加到細(xì)菌培養(yǎng)物中或使沾染有細(xì)菌的表面與所述藥劑接觸來(lái)在活體外發(fā)生?；蛘?，接觸可通過(guò)(例如)將所述藥劑投與遭受細(xì)菌感染或易受到感染的受試者來(lái)在活體內(nèi)發(fā)生?；铙w內(nèi)接觸包括非經(jīng)腸以及局部接觸。"抑制"或"抑制有效量"是指足以產(chǎn)生(例如)抑菌或殺菌作用、減少特定細(xì)菌細(xì)胞類別著色、或減少由所述細(xì)菌產(chǎn)生的特定類胡蘿卜素?cái)?shù)量的藥劑量?？墒艿筋惡}卜素抑制劑使用影響的細(xì)菌包括革蘭氏陰性菌及革蘭氏陽(yáng)性菌。例如，可受到影響的細(xì)菌包括金黃色葡萄球菌、釀膿鏈球菌(A組)、鏈球菌屬(草綠色群組(viridansgroup))、無(wú)乳鏈球菌(Streptococcusagalactiae)(B組)、豬鏈球菌(S.bovis)、鏈球菌(厭氧型菌種)、肺炎鏈球菌(Streptococcuspneumoniae)、及腸球菌屬(Enterococcussp.);革蘭氏陰性球菌(Gram-negativecocci)，例如，奈瑟氏淋病雙球菌(Neisseriagonorrhoeae)、腦膜炎雙球菌(Neisseriameningitidis)、及卡他布蘭漢氏菌(Branhamellacatarrhalis);革蘭氏陽(yáng)性桿菌(Gram-positivebacilli),例如，炭疽桿菌(Bacillusanthracis)、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、痤疫丙酸桿菌(P.acne)、白喉棒狀桿菌(Corynebacteriumdiphtheriae)及是類白喉菌的棒狀桿菌屬(Corynebacteriumspecies)(需氧型及厭氧型)、單核細(xì)胞增生李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)、破傷風(fēng)桿菌(Clostridiumtetani)、難辨梭狀芽孢桿菌(Clostridiumdifficile)、大腸桿菌(Escherichiacoli)、腸桿菌屬(Enterobacterspecies)、奇異變形桿菌(Proteusmirablis)及其它菌屬、綠膿假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、月巿炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae)、沙門氏菌(Salmonella)、志賀氏桿菌(Shigella),粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratia)、及空腸彎曲桿菌(Campylobacterjejuni)。確切地說(shuō)，本發(fā)明的方法和組合物可用于抵抗任何可合成賦予抵抗反應(yīng)性氧物質(zhì)(例如，由NADPH氧化酶產(chǎn)生的物質(zhì))保護(hù)的類胡蘿卜素的病原體。受到一種或多種這些細(xì)菌感染可能會(huì)引發(fā)諸如下述等疾病菌血癥、肺炎、腦膜炎、骨髓炎、心內(nèi)膜炎、鼻竇炎、關(guān)節(jié)炎、泌尿道感染、破傷風(fēng)、壞疽、結(jié)腸炎、急性胃腸炎、膿皰病、痤瘡、酒渣鼻痤瘡(acneposacue)、傷口感染、出生感染、筋膜炎、支氣管炎、及各種膿腫、院內(nèi)感染、及伺機(jī)性感染。用于抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的方法還可包括使所述細(xì)菌與肽和一種或多種抗生素的組合物接觸。真菌有機(jī)體(例如，犬小孢子菌(Microsporumcanis)及其它小孢子菌屬(Microsporumsp.);及毛癬菌屬(Trichophytonsp.)，例如紅色毛蘚菌(T.rubrum)及須發(fā)蘚菌(T.mentagrophytes))、酵母菌(例如，白色念珠菌(Candidaalbicans)、熱帶念珠菌(C.Tropicalis)、或其它念珠菌屬)、釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、光滑球擬酵母(Torulopsisglabrata)、絮狀表皮癬菌(Epidermophytonfloccosum)、糠秕馬拉色菌(Malasseziafurfur〕(圓形糠秕孢子菌(Pityropsporonorbiculare)、或卵圓糠秕孢子菌(P.ovale))、新型隱球菌(Cryptococcusneoformans)、煙曲菌(Aspergillusfumigatus)、構(gòu)巢曲酶(Aspergillusnidulans)、及其它曲霉屬、接合菌(Zygomycetes)(例如，根霉菌(Rhizopus)、毛霉菌(Mucor))、巴西副球孢子菌(Paracoccidioidesbrasiliensis)、皮炎芽生菌(Blastomycesdermatitides)、夾膜組織胞漿菌(Histoplasmacapsulatum)、粗球孢子菌(Coccidioidesimmitis)、及申克孢子絲菌(Sporothrixschenckii)也可受到類胡蘿卜素抑制劑的影響?？蓪⒖捎行У匾种祁惡}卜素(賦予(例如)氧化侵襲抗性)生成之量的類胡蘿卜素生物合成抑制劑投與任何宿主，包括人類或非人類動(dòng)物。一方面，所述投藥可抑制細(xì)菌、病毒、及/或真菌的生長(zhǎng)。因此，所述方法及組合物可用作抗微生物劑、抗病毒劑及/或抗真菌劑。各種業(yè)內(nèi)已知方法中的任何一種均可用于單獨(dú)或聯(lián)合其它抗生素藥劑投與類胡蘿卜素抑制劑。例如，可以非經(jīng)腸方式通過(guò)注射或通過(guò)經(jīng)過(guò)一段時(shí)間逐漸輸注實(shí)施投藥。所述藥劑可經(jīng)靜脈內(nèi)、腹膜腔內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、腔內(nèi)、吸入、或經(jīng)皮投與。另一方面，可單獨(dú)或聯(lián)合其它用于局部投藥的抗生素/抗真菌劑調(diào)配類胡蘿卜素生物合成抑制劑(例如，乳液、乳霜、噴霧劑、凝膠或軟膏)。這些局部調(diào)配物可用于治療或抑制存于眼睛、皮膚及粘膜(例如，口、陰道及諸如此類)上的或感染這些組織的微生物、真菌、及/或病毒。市售調(diào)配物的實(shí)例包括局部用乳液、乳霜、肥皂、擦及諸如此類。其可調(diào)配成脂質(zhì)體以降低毒性或增加生物利用度。用于遞送藥物的其它方法包括需要將所述調(diào)配物囊封于微球體或類蛋白中的口服方法、氣溶膠遞送(例如，給肺)、或經(jīng)皮遞送(例如，通過(guò)離子導(dǎo)入法或經(jīng)皮電穿孔)。其它投藥方法為熟悉所屬技術(shù)的人員所知。適于以非經(jīng)腸方式投與包含類胡蘿卜素抑制劑的組合物的制劑包括無(wú)菌水性或非水性溶液、懸浮液、及乳液。非水性溶劑的實(shí)例為丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如，橄欖油)、及可注射有機(jī)酯(例如，油酸乙酯)。水性載劑的實(shí)例包括水、鹽水、及經(jīng)緩沖的介質(zhì)、醇性/水性溶液、及乳液或懸浮液。非經(jīng)腸媒劑的實(shí)例包括氯化鈉溶液、林格氏葡聚糖(Ringer'sdextrose)、葡聚糖及氯化鈉、乳酸林格氏液、及固定油。靜脈注射媒劑包括流體及營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑、電解質(zhì)補(bǔ)充劑(例如，那些基于林格氏葡聚糖者)及諸如此類。還可包含防腐劑及其它添加劑，例如，其它抗微生物劑、抗氧化劑、螯合劑、惰性氣體及諸如此類。本發(fā)明提供一種用于通過(guò)對(duì)具有細(xì)菌、病毒及/或真菌相關(guān)性病況或處于患所述病況風(fēng)險(xiǎn)下的受試者單獨(dú)或聯(lián)合其它抗微生物劑投與治療有效量的類胡蘿卜素生物合成抑制劑(例如，crtM及/或crtN抑制劑)或者使所述受試者與所述藥劑接觸來(lái)抑制所述病況的方法。術(shù)語(yǔ)"抑制"意指預(yù)防或改善病況的病征或癥狀(例如，皮疹、潰瘍及諸如此類)?？傻玫礁纳频募膊〔≌鞯膶?shí)例包括受試者的TNF血液水平增加、發(fā)燒、低血壓、嗜中性白血球減少癥、白血球減少、血小板減少癥、彌漫性血管內(nèi)凝血、成人呼吸窘迫綜合征、休克、及器官衰竭?？筛鶕?jù)本發(fā)明治療的受試者實(shí)例包括那些處于患毒血癥(例如，由革蘭氏陰性細(xì)菌感染引起的內(nèi)毒素血癥)、毒物中毒或肝衰竭的風(fēng)險(xiǎn)下或正遭受所述疾病折磨的受試者。其它實(shí)例包括具有皮炎的受試者以及那些具有皮膚感染或由革蘭氏陽(yáng)性或革蘭氏陰性細(xì)菌、病毒或真菌引起損傷的受試者。候選受試者的實(shí)例包括那些正遭受大腸桿菌、腦膜炎雙球菌、葡萄球菌或肺炎球菌感染者。其它受試者包括那些正遭受槍彈傷、腎或肝衰竭、創(chuàng)傷、燒傷、免疫妥協(xié)感染(例如，HIV感染)、造血系統(tǒng)腫瘤、多發(fā)性骨髓瘤、卡斯?fàn)柭喜?Castleman'sdisease)或心臟粘液瘤折磨的受試者。熟悉醫(yī)學(xué)技術(shù)的人員能夠容易地采用常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)識(shí)別適合根據(jù)本發(fā)明治療的受試者。治療有效量可通過(guò)測(cè)量皮膚潰瘍的嚴(yán)重性程度作為足以減少受試者皮疹或皮炎癥狀的量加以測(cè)量。通常，用足以減少疾病或病況癥狀至少50%、90%或100%之量的本發(fā)明治療組合物來(lái)治療受試者。一般來(lái)說(shuō)，最佳劑量將取決于所述病況及諸如下述等因素受試者體重、細(xì)菌、病毒或真菌感染類型、體重、性別及癥狀嚴(yán)重程度。然而，適宜劑量可由一熟悉所屬技術(shù)的人員容易地確定。通常，適宜劑量為0.5至40毫克/公斤體重，例如，l至8毫克/公斤體重。如上文所述，本發(fā)明的組合物和方法可包括額外(例如，除類胡蘿卜素生物合成抑制劑之外)治療劑(例如，TNF抑制劑、抗生素及諸如此類)的使用。可同時(shí)投與但也可相繼投與類胡蘿卜素生物合成抑制劑、其它治療劑及/或抗生素。適宜抗生素包括氨基糖甙類(例如，慶大霉素(gentamicin))、卩-內(nèi)酰胺(例如，青霉素類及頭孢菌素類)、喹諾酮類(例如，環(huán)丙沙星)及新生霉素。通常，會(huì)投與殺菌、抗病毒及/或抗真菌量的抗生素。利用類胡蘿卜素生物合成抑制劑的本發(fā)明方法和組合物可用作適用于解決抗生素抗性細(xì)菌菌株生長(zhǎng)問(wèn)題的光譜抗微生物劑及用于治療及/或預(yù)防感染性疾病(包括由諸如炭疽、鼠疫、霍亂、胃腸炎、多藥物抗性結(jié)核病(MDRTB)等生物恐怖因素引起的疾病)爆發(fā)。根據(jù)本發(fā)明，包含胡蘿卜素形成抑制劑的醫(yī)藥組合物可呈適用于借助載劑、賦形劑、及添加劑或輔助劑投與受試者的形式。經(jīng)常使用的載劑或輔助劑包括碳酸鎂、二氧化鈦、乳糖、甘露醇及其它糖類、滑石粉、乳蛋白、明膠、淀粉、維生素、纖維素及其衍生物、動(dòng)物油及植物油、聚乙二醇及溶劑(例如，無(wú)菌水、醇、甘油、及多元醇)。靜脈注射用媒劑包括流體及營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑。防腐劑包括抗微生物劑、抗氧化劑、螯合劑及惰性氣體。其它藥學(xué)上可接受的載劑包括水性溶液、無(wú)毒性賦形劑(包括鹽)、防腐劑、緩沖劑及諸如此類，如在(例如)Remington'sPharmaceuticalSciences,第15版，Eastern:MackPublishingCo.,1405-1412，1461-1487(1975)及TheNationalFormularyXIV,，第14版，Washington:AmericanPharmaceuticalAssociation(1975)中所述，所述文獻(xiàn)的內(nèi)容均以引用方式并入本文中。可按照所屬技術(shù)中常規(guī)技術(shù)來(lái)調(diào)節(jié)所述醫(yī)藥組合物的pH及各組份的確切濃度。參見(jiàn)GoodmanandGilman's，ThePharmacologicalBasisforTherapeutics(第7版)?？梢跃植炕蛉矸绞酵杜c本發(fā)明的醫(yī)藥組合物。"治療有效劑量"是預(yù)防、治愈、或至少部分地減少細(xì)菌感染癥狀所需本發(fā)明藥劑的數(shù)量。當(dāng)然，對(duì)此用途有效的數(shù)量應(yīng)取決于所述疾病的嚴(yán)重性及受試者的重量和總體情況。通常，于活體外所用劑量可在用于就地投與所述醫(yī)藥組合物的數(shù)量方面提供有用的指導(dǎo)，且動(dòng)物模型可用于確定用于治療感染的有效劑量。各種考慮因素闡述于(例如)Langer,Science,249:1527,(1990);Gilman等人(編輯)(1990)中，所述文獻(xiàn)各自以引用方式并入本文中。如本文所用"投與治療有效量"意欲包括對(duì)可實(shí)施醫(yī)藥組合物的預(yù)期治療功能的受試者給予或施用本發(fā)明醫(yī)藥組合物的方法。治療有效量可視諸如下述等因素而有所變化受試者受感染的程度、個(gè)體的年齡、性別和體重。可對(duì)劑量方案加以調(diào)整以得到最佳治療反應(yīng)。例如，每日可投與若干分開(kāi)劑量或者所述劑量可根據(jù)治療情形的緊急程度所示按比例減少。所述醫(yī)藥組合物可以常用方式投與，例如，通過(guò)注射(皮下、靜脈等)、經(jīng)口投與、吸入、透皮施用或經(jīng)直腸投與。視投藥途徑而定，所述醫(yī)藥組合物可用一材料涂布以保護(hù)所述醫(yī)藥組合物免受酶、酸及其它可能會(huì)使所述醫(yī)藥組合物失效的自然條件的作用。所述醫(yī)藥組合物也可以非經(jīng)常方式或經(jīng)腹膜腔內(nèi)投與。分散液也可在甘油、液體聚乙二醇、及其混合物中及在油中制備。在一般儲(chǔ)存及使用條件下，這些制劑包含一防腐劑以防止微生物生長(zhǎng)。適用于可注射用途的醫(yī)藥組合物包括無(wú)菌水溶液(可溶于水的情況下)或分散液和用于當(dāng)場(chǎng)制備無(wú)菌可注射溶液或分散液的無(wú)菌粉劑。在各種情況下，所述組合物均應(yīng)為無(wú)菌并應(yīng)為可易于注射的流體狀態(tài)。所述載劑可以是溶劑或分散液介質(zhì)，其包含(例如)水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液體聚乙二醇，及類似物質(zhì))、其適宜混合物及植物油。通過(guò)使用(例如)一諸如卵磷脂的包覆層、通過(guò)保持所需的粒徑(對(duì)于分散劑而言)以及通過(guò)使用表面活性劑可保持適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)性。通過(guò)各種抗細(xì)菌劑和抗真菌劑(例如，對(duì)氧苯甲酸、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸、乙基汞硫代水楊酸鈉以及諸如此類)可達(dá)成防止微生物的作用。在許多情況下，所述組合物中通常可包括等滲劑，例如，糖類、多元醇類(例如甘露醇、山梨醇)或氯化鈉。通過(guò)向組合物中加入可延遲吸收的藥劑(例如，單硬脂酸鋁和明膠)可以使可注射組合物的吸收延長(zhǎng)。無(wú)菌可注射溶液可通過(guò)下述來(lái)制備將所需量的醫(yī)藥組合物納入含有上述一種成份或多種成份之組合(視需要而定)的適宜溶劑中，隨后進(jìn)行無(wú)菌過(guò)濾。一般來(lái)說(shuō)，分散液通過(guò)將所述醫(yī)藥組合物納入一含有基本分散介質(zhì)和所需其它成份(來(lái)自那些上文所列舉者)的無(wú)菌媒劑中來(lái)制備。所述醫(yī)藥組合物可經(jīng)口投與，例如，借助惰性稀釋劑或可吸收的食用載劑。還可將所述醫(yī)藥組合物及其它成份封裝入硬殼或軟殼明膠膠囊中、壓縮成片劑或直接納入個(gè)體的飲食中。對(duì)于口服治療投藥而言，可將所述醫(yī)藥組合物與賦形劑一起納入并以可吸收片劑、口含片、含片、膠囊、酏劑、懸浮劑、糖漿、糯米紙囊劑及類似劑型等形式使用。所述組合物及制劑應(yīng)含有至少0.1重量％的活性化合物。當(dāng)然，所述組合物及制劑的百分比可有所變化且可方便地介于約5重量％至約80重量％之間(以劑量單元計(jì))。所述片劑、含片、丸劑、膠囊及類似劑型還可包含下述粘合劑，例如，黃蓍膠、阿拉伯膠、玉米淀粉、或明膠；賦形劑，例如，磷酸氫鈣；崩解劑，例如，玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、海藻酸及類似物質(zhì)；潤(rùn)滑劑，例如，硬脂酸鎂；及甜味劑，例如，蔗糖、乳糖或糖精；或矯味劑，例如，薄荷、冬青油、或櫻桃調(diào)味料。當(dāng)劑量單元形式為膠囊時(shí)，其除含有上述類型物質(zhì)外還可包含一液體載劑。多種其它材料可作為包衣存在或其存在可另外改進(jìn)劑量單元的物理形式。例如，片劑、丸劑、或膠囊可用蟲(chóng)膠、糖或二者涂布。糖漿或酏劑可包括所述藥劑、蔗糖(作為增甜劑)、對(duì)羥基苯甲酸甲酯和對(duì)羥基苯甲酸丙酯(作為保存劑)、染料及調(diào)味料(例如，櫻桃或橙調(diào)味品)。當(dāng)然，在制備任何劑量單元形式中所使用的任何材料均應(yīng)具藥用純度且在所用量上是實(shí)質(zhì)上無(wú)毒/生物可兼容的。此外，可將所述醫(yī)藥組合物納入緩釋制劑及調(diào)配物中。因此，"藥學(xué)上可接受的載劑"意欲包括溶劑、分散介質(zhì)、涂布劑、抗細(xì)菌劑及抗真菌劑、等滲劑及吸收延遲劑及類似物質(zhì)。所述介質(zhì)和藥劑在藥學(xué)上具活性的物質(zhì)中的使用在所屬技術(shù)中已為人所熟知。除任何常用介質(zhì)或藥劑與所述醫(yī)藥組合物不相容的情況以外，本發(fā)明涵蓋所述介質(zhì)和藥劑在治療組合物及治療方法中的用途。也可將輔助活性化合物納入所述組合物中。以劑量單元形式來(lái)調(diào)配非經(jīng)腸組合物特別有利于方便地投藥及達(dá)成劑量一致性。本文所用"劑量單元形式"是指適于作為單位劑量供擬受治療個(gè)體使用的物理分散單元；需計(jì)算包含預(yù)定量醫(yī)藥組合物的每一單元以與所需醫(yī)藥載劑一起產(chǎn)生期望的治療效果。關(guān)于本發(fā)明劑量單元形式的說(shuō)明與所述醫(yī)藥組合物的特征及欲達(dá)成特定治療效果有關(guān)。對(duì)主要醫(yī)藥組合物加以調(diào)配以方便有效地以有效量及可接受劑量單元形式與適宜藥學(xué)上可接受的載劑一起投與。在含有補(bǔ)充活性成份的組合物中，可參照所述成份的慣用劑量及投與方式來(lái)確定給藥。用于抑制細(xì)菌有機(jī)體(例如，葡萄球菌屬)中胡蘿卜素形成的藥劑可與常用抗生素及/或抗微生物劑組合使用。因此，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可包含胡蘿卜素形成抑制劑及一種或多種額外抗微生物劑或抗生素。本發(fā)明闡述下列實(shí)例但不應(yīng)理解將其以任何方式解釋為限制本發(fā)明。實(shí)例金黃色葡萄球菌類胡蘿卜素的生物合成途徑涉及分別編碼脫氫角鯊烯合酶及脫氫角鯊烯去飽和酶的基因crtM及crtN的主要功能。為了探測(cè)金黃色葡萄球菌色素的生物活性，通過(guò)對(duì)crtM實(shí)施等位基因置換產(chǎn)生金色人類臨床分離物的同基因突變體。所述ACrtM突變體是無(wú)色素的并缺少野生型類胡蘿卜素的特征三重峰光譜(在440、462及491nM波長(zhǎng)下)。觀測(cè)到WT與ACrtM金黃色葡萄球菌在生長(zhǎng)速率、固定相密度、表面電荷、浮力或疏水性方面不存在差異。金黃色葡萄球菌crtM及crtN—起足以產(chǎn)生4,4'-二脫輔基鏈孢紅素(4,4'-diaponeurosporene)。為了方便地實(shí)現(xiàn)功能分析，使兩基因在無(wú)色素釀膿鏈球菌(與金黃色葡萄球菌具有類似疾病譜的人類病原體)中表達(dá)。當(dāng)用pCrtMN質(zhì)粒轉(zhuǎn)化時(shí)，釀膿鏈球菌獲得具有類胡蘿卜素光譜特征的黃色色素沉著。金黃色葡萄球菌ACrtM突變體與所述pCrtMN載體的互補(bǔ)也會(huì)部分地恢復(fù)色素沉著。細(xì)菌、小鼠、人類CGD患者及化學(xué)試劑野生型金黃色葡萄球菌菌株(Pigl)，自患特應(yīng)性皮炎的兒童的皮膚分離得。釀膿鏈球菌菌株5448是一種經(jīng)充分定性的M1T1血清型臨床分離物18。GDI及C57Bl/6小鼠是自CharlesRiver購(gòu)得。gp9lPh。"小鼠是在Veteran'sAdministrationMedicalCenter,SanDiego飼喂并維持甲氧節(jié)氨嘧啶/磺胺甲基異噁唑預(yù)防直至實(shí)驗(yàn)前3天。使金黃色葡萄球菌及釀膿鏈球菌在Todd-Hewitt肉湯(THB)中或在THB瓊脂(Difco,Detroit,MI)上繁殖。除非另有說(shuō)明，否則所有實(shí)驗(yàn)均用源自金黃色葡萄球36-48小時(shí)固定相培養(yǎng)物或釀膿鏈球菌24小時(shí)固定相培養(yǎng)物(此時(shí)色素沉著表現(xiàn)型清晰可見(jiàn))的細(xì)菌實(shí)施。人類CGD患者患者為具有g(shù)p47Ph。x缺陷(外顯子2中存在純合AGT缺失)的18周歲女性。在研究時(shí)，她的健康狀況良好且通過(guò)皮下注射每周三次僅對(duì)她投與藥物干擾素-Y(50mcg/m2)。缺乏類胡蘿卜素的金黃色葡萄球菌突變體，ACrtM的產(chǎn)生。借助如對(duì)釀膿鏈球菌"或無(wú)乳鏈球菌^所述基于PCR的方法(其中有少許變動(dòng))用氯霉素乙酰基轉(zhuǎn)移酶(cat)彈夾對(duì)金黃色葡萄球菌crtM基因?qū)嵤┚_的框內(nèi)等位基因置換。根據(jù)公開(kāi)的金黃色葡萄球菌crtMN序列6交叉參照基因組金黃色葡萄球菌菌株N31521設(shè)計(jì)引物。使用PCR借助引物crtMupF5'-TTAGGAAGTGCATATACTTCAC-3'(SEQIDNO:l)及crtMstartR(SEQIDNO:2)在crtM上游擴(kuò)增~500bp以及借助引物crtMendF(SEQIDNO:3)及ertMdownR5'-GGCACCGTTATACGATCATCGT-3'(SEQIDNO:4)恰在crtM下游擴(kuò)增約500bp序列。使用分別對(duì)應(yīng)于cat基因的5'及3'末端的25bp5'突出端構(gòu)建crtMstartR及crtMendF引物。隨后使上游及下游PCR產(chǎn)物與來(lái)自pACYC184的完全cat基因的650bp擴(kuò)增子(在使用引物crtMupF及crtMdownR的第二輪PCR中作為模板)組合。將所得PCR擴(kuò)增子(涉及用cat對(duì)crtM實(shí)施框內(nèi)替換)亞克隆到溫度敏感性載體pHY304中以創(chuàng)造基因剔除質(zhì)粒。首先將這個(gè)載體轉(zhuǎn)化成受納金黃色葡萄球菌菌株RN4220(由Dr.PaulSullam提供)且隨后通過(guò)電穿孔轉(zhuǎn)化成金黃色葡萄球菌菌株P(guān)igl。使轉(zhuǎn)化體在3(TC下生長(zhǎng)，轉(zhuǎn)換到不準(zhǔn)許質(zhì)粒復(fù)制的溫度(4(TC)，并借助示差抗生素選擇及色素表現(xiàn)型來(lái)識(shí)別候選突變體。通過(guò)證明自最終突變體ACrtM分離的染色體DNA中已定位插入cat且不存在crtM的PCR反應(yīng)明確地證實(shí)其中crtM等位基因的等位基因置換?；パa(bǔ)及異源表達(dá)研究.使用引物CrtF5'-CAGTCTAGAAATGGCATTTCAATATAGGAG-3'(SEQIDNO:5)及CrtR5'-ATCGAGATCTCTCACATCTTTCTCTTAGAC-3'(SEQIDNO:6)來(lái)擴(kuò)增來(lái)自WT金黃色葡萄球菌菌株P(guān)igl染色體的鄰接CrtM及CrtN基因。將所述片段定向克隆到往復(fù)表達(dá)載體pDCerm19中并使用重組質(zhì)粒(pCrtMN)通過(guò)電穿孔轉(zhuǎn)化金黃色葡萄球菌ACrtM突變體及釀膿鏈球菌菌株5448。金黃色葡萄球菌類胡蘿卜素的光譜特性.對(duì)WT金黃色葡萄球菌Pigl及其同基因△CrtM突變體的固定相(48h)培養(yǎng)物實(shí)施甲醇萃取。使用MBA2000光譜儀(PerkinElmer)測(cè)量萃取物的吸收率特性。氧化劑敏感性分析.在PBS(金黃色葡萄球菌)或THB(釀膿鏈球菌)中實(shí)施對(duì)氧化劑敏感性的測(cè)試。添加過(guò)氧化氫(11202)達(dá)1.5%最終濃度，將2X109個(gè)細(xì)菌在37'C下培育1小時(shí)，隨后向驟冷殘留11202中添加1,000U/毫升過(guò)氧化氫酶(Sigma)。將稀釋液置于THA上以供計(jì)數(shù)存活cfu。對(duì)于單態(tài)氧分析而言，將108個(gè)金黃色葡萄球菌或4X1()S個(gè)釀膿鏈球菌于37r下在24-孔培養(yǎng)板的各孔中于l-6^ig/ml亞甲基藍(lán)存在或不存在時(shí)并在距離100-watt光源恰好10cm處培育。通過(guò)將稀釋液涂覆于THA上在1-3h后評(píng)定細(xì)菌生存率。以等同方式處理對(duì)照平板但將其包裹于鋁箔中或在亞甲基藍(lán)不存在時(shí)暴露于光，并未顯示明顯的細(xì)菌殺傷。全血?dú)治?將細(xì)菌在PBS中洗滌兩次，在25^PBS中稀釋至104cfu接種量并在肝素化試管中與75^d新鮮抽取人類或小鼠血液混合。邊攪動(dòng)邊將所述試管在37。C下培育4h，此時(shí)將稀釋液涂覆于THA上以供計(jì)數(shù)存活cfo。嗜中性粒細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)存活率分析.使用Hist叩aque梯度劑(Sigma)按照生產(chǎn)商說(shuō)明自健康人類志愿者純化嗜中性粒細(xì)胞。按照下述實(shí)施細(xì)胞內(nèi)存活率分析。將細(xì)菌培養(yǎng)物在PBS中洗滌兩次，在100^RPMI+10%FCS中稀釋達(dá)4.5x106cfu濃度并在相同介質(zhì)中與3><105個(gè)嗜中性粒細(xì)胞混合(多次重復(fù)感染，MOI=15:l)，在700xg下離心，隨后于37。C下在5MC02培養(yǎng)箱中培育。在10分鐘后，添加慶大霉素(Gibco)(最終濃度，對(duì)于金黃色葡萄球菌為400pg/ml且對(duì)于釀膿鏈球菌為100^g/ml)以殺死細(xì)胞外細(xì)菌。在特定時(shí)間點(diǎn)，取出試樣孔的內(nèi)容物，離心以使嗜中性粒細(xì)胞呈球狀并洗滌以去除抗生素介質(zhì)。隨后在0.02%triton-X中裂解嗜中性粒細(xì)胞并通過(guò)涂覆于THA上來(lái)計(jì)算cfu。借助增加一個(gè)涉及下述的步驟重復(fù)實(shí)施若干分析用10%自體人類血清在冰上將細(xì)菌接種物預(yù)培育15分鐘。皮下感染鼠類模型.用細(xì)菌測(cè)試菌株在10周至16周大CD-1或gp91Ph°x—M、鼠的一側(cè)(隨機(jī)選擇)實(shí)施皮下注射且同時(shí)用不同的菌株在對(duì)側(cè)進(jìn)行注射以供直接對(duì)比。按照產(chǎn)生局部金黃色葡萄球菌和釀膿鏈球菌皮下感染的確立實(shí)驗(yàn)方案，洗滌、稀釋細(xì)菌培養(yǎng)物并將其重新懸浮于PBS中，以指定接種量以1:1與無(wú)菌Cytodex珠(Amersham)混合。每日記錄損傷面積，如通過(guò)顯現(xiàn)出的潰瘍的最大長(zhǎng)度x寬度評(píng)定。累積損傷面積是每個(gè)治療組中所有動(dòng)物在某一天的損傷面積總和。在第8天(金黃色葡萄球菌)或在第5天(釀膿鏈球菌)，對(duì)動(dòng)物實(shí)施安樂(lè)死，切除皮膚損傷部分，在PBS中勻質(zhì)化并置于THA上以供定量培養(yǎng)。統(tǒng)計(jì)學(xué).采用非配對(duì)Studentst檢驗(yàn)評(píng)估在氧化劑敏感性、血液殺傷和嗜中性粒細(xì)胞存活率方面的實(shí)驗(yàn)差異顯著性。釆用配對(duì)Student'st檢驗(yàn)評(píng)估小鼠活體內(nèi)激發(fā)研究的結(jié)果。保證.所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均由動(dòng)物使用及管理UCSD委員會(huì)獲準(zhǔn)并使用公認(rèn)的獸醫(yī)標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施。使用人類血液的實(shí)驗(yàn)由雙軌UCSD人類研究保護(hù)程序(DualTrackedUCSDHumanResearchProtectionProgram)/CHSDIRB獲準(zhǔn)。自人類受試者獲得先前知情同思。用于浮力、表面電荷及疏水性的分析.為了測(cè)量浮力，在數(shù)個(gè)5ml玻璃試管中制備連續(xù)重疊梯度的1mlPercoll(各自為70%、60%及50%)。將1ml過(guò)夜細(xì)菌培養(yǎng)物置于Percoll層的頂部，在轉(zhuǎn)動(dòng)斗式離心機(jī)中于500xg下將所述試管離心8min并記錄細(xì)菌至各Percoll中間相的遷移。為了測(cè)量表面電荷，通過(guò)離心收集細(xì)菌并在嗎啉丙磺酸(MOPS)緩沖液(20mM,pH=7.0)中洗滌。將1ml培養(yǎng)物重新懸浮于0.5mlMOPS中并測(cè)量OD600。在室溫下用細(xì)胞色素C(Sigma,St.Louis,MO)以0.5mg/ml的最終濃度將細(xì)菌細(xì)胞培育15分鐘。對(duì)試樣進(jìn)行離心('13,000xg，5min)并在530nm下定量測(cè)定殘留于上清液中的細(xì)胞色素C的數(shù)量。調(diào)整細(xì)胞色素C數(shù)值以反映結(jié)合/培養(yǎng)物OD600=1.0。為了測(cè)量疏水性，洗滌0.5ml金黃色葡萄球菌培養(yǎng)物并將其重新懸浮于1.0mlPBS中，將300pl正十六垸層鋪于所述細(xì)胞懸浮液頂部，并將試管渦旋60秒。將試樣在RT下培育30min以便于相分離。去除水相，并測(cè)定水相的OD畫與存于PBS中培養(yǎng)物的OD6oo的比率。蛋白酶及組織蛋白酶抑制素(cathelicidin)敏感性分析.自Calbiochem購(gòu)得人類嗜中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶及組織蛋白酶G。用LouisianaStateUniversityProteinFacility(MarthaJuban,Director)合成抗微生物肽mCRAMP。在10mM磷酸緩沖液(pH7.2)+0.5%LB中將金黃色葡萄球菌培養(yǎng)物稀釋(1:2,000)達(dá)1X106CFU/ml。將90^此細(xì)菌懸浮液添加到96-孔板中的復(fù)制孔中。在10mM磷酸緩沖液中制備組織蛋白酶G(20及100mU/ml)、人類嗜中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(12.5及50嗎/ml)及鼠類CRAMP(0.4-3pM)的稀釋液并將其以10pl體積添加到孔中；單獨(dú)的10mM磷酸緩沖液用作陰性對(duì)照。在37。C下培育2h后，在PBS中連續(xù)地稀釋每孔的25pl等份并置于THB上。以一式兩份的方式實(shí)施每個(gè)實(shí)驗(yàn)并重復(fù)之。吞噬吸收分析.在RT下按照生產(chǎn)商指導(dǎo)用SYTOR9(BacLightTM套組(lnvitrogen,Carlsbad,CA)的一種組份)標(biāo)記金黃色葡萄球菌，15min。將經(jīng)標(biāo)記細(xì)菌洗滌3次以去除過(guò)量染劑，隨后在10%自體人類血清中用冰進(jìn)行預(yù)調(diào)理10min。在MOI-15時(shí)，向3><106純化人類嗜中性粒細(xì)胞中添加細(xì)菌，在37"C下培育5min,隨后在500^g下離心6min以使嗜中性粒細(xì)胞沉降。棄置上清液并將細(xì)胞小丸重新懸浮于15ml溴化乙錠(0.1mg/ml)存于PBS的混合物中以熄滅細(xì)胞外細(xì)菌發(fā)出的熒光。通過(guò)在熒光顯微鏡下直接顯像來(lái)列舉具有細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌的嗜中性粒細(xì)胞的百分比。以一式兩份方式實(shí)施實(shí)驗(yàn)并重復(fù)之。借助位于UCSDDigitalImagingCoreFacilty中的DeltaVisionDeconvolutionMicroscopeSystem(NikonTE-200Microscope)來(lái)捕獲代表性影像。用于金黃色葡萄球菌類胡蘿卜素6的生物合成途徑涉及分別編碼脫氫角鯊烯合酶及脫氫角鯊烯去飽和酶的基因crtM及crtN的主要功能(圖la)。為了探測(cè)金黃色葡萄球菌色素的生物活性，通過(guò)對(duì)crtM實(shí)施等位基因置換產(chǎn)生金色人類臨床分離物的同基因突變體(圖la)。與先前報(bào)導(dǎo)一致，野生型(WT)菌株的色素沉著在早期生長(zhǎng)固定相中變得明顯并在36-48h時(shí)達(dá)穩(wěn)定之前繼續(xù)加強(qiáng)(圖lb)。所述ACrtM突變體是無(wú)色素的并缺少野生型類胡蘿卜素的特征三重峰光譜(在440、462及491nM波長(zhǎng)下)(圖lb)。觀測(cè)到WT與ACrtM金黃色葡萄球菌在生長(zhǎng)速率、固定相密度、表面電荷、浮力或疏水性方面不存在差異。(圖5a-d)。金黃色葡萄球菌crtM及crtN—起足以產(chǎn)生4,4'-二脫輔基鏈孢紅素3。為了方便地實(shí)現(xiàn)功能分析，使兩基因在無(wú)色素釀膿鏈球菌(一種與金黃色葡萄球菌具有類似疾病譜的人類病原體)中表達(dá)。當(dāng)用pCrtMN質(zhì)粒轉(zhuǎn)化時(shí)，釀膿鏈球菌獲得具有類胡蘿卜素光譜特征的黃色色素沉著(圖lb)。金黃色葡萄球菌△CrtM突變體與所述pCrtMN載體的互補(bǔ)也會(huì)完全地恢復(fù)色素沉著(圖lb)。吞噬細(xì)胞清除病原體的一個(gè)重要作用機(jī)制是通過(guò)釋放由NADPH氧化酶產(chǎn)生的反應(yīng)性氧物質(zhì)7。已經(jīng)有人提出諸如那些由金黃色葡萄球菌表達(dá)者等細(xì)菌類胡蘿卜素可起針對(duì)這些防御分子的保護(hù)作用8'9'1Q。為了以實(shí)驗(yàn)方式測(cè)試此保護(hù)作用，在活體外對(duì)比WT與ACrtM金黃色葡萄球菌對(duì)氧化劑的敏感性。如圖lc及l(fā)d中所示，與WT金黃色葡萄球菌菌株相比，ACrtM突變體可更有效地受到過(guò)氧化氫及單態(tài)氧殺傷。與pCrtMN的互補(bǔ)恢復(fù)了ACrtM突變體抵抗單態(tài)氧殺傷的能力(圖ld)。類似地，葡萄球菌色素在釀膿鏈球菌中的異源表達(dá)導(dǎo)致單態(tài)氧敏感性明顯降低(圖le)。隨后借助2個(gè)體內(nèi)分析系統(tǒng)-人類或小鼠全血存活率及與純化人類嗜中性粒細(xì)胞的共培養(yǎng)物來(lái)測(cè)定所觀測(cè)的金黃色葡萄球菌類胡蘿卜素抗氧化劑活性是否轉(zhuǎn)變?yōu)榧?xì)菌對(duì)先天性免疫清除的抗性增強(qiáng)。與位于人類嗜中性粒細(xì)胞(圖2a，圖6f)及正常小鼠或人類供者之全血(圖2b,e)中的細(xì)胞內(nèi)無(wú)色素ACrtM相比，WT金黃色葡萄球菌在存活率方面明顯更佳。由于WT金黃色葡萄球菌與ACrtM突變體的攝取是相當(dāng)?shù)模虼饲耙环N效應(yīng)不能通過(guò)吞噬速率的差別來(lái)解釋(圖6a)。而且由于攝取的WT及突變體菌株在氮藍(lán)四唑鐵(NBT)還原分析中產(chǎn)生了類似結(jié)果，因此所述效應(yīng)也不能通過(guò)造成嗜中性粒細(xì)胞氧化猝發(fā)程度變化的差異來(lái)解釋(圖6b)。金黃色葡萄球菌ACrtM突變體與pCrtMN的互補(bǔ)作用恢復(fù)了對(duì)小鼠全血?dú)目剐?圖2b)。同樣地，表達(dá)葡萄球菌類胡蘿卜素的經(jīng)染色釀膿鏈球菌在人類嗜中性粒細(xì)胞較在親株中顯示升高存活率(圖2c)。為了驗(yàn)證金黃色葡萄球菌類胡蘿卜素表達(dá)與增強(qiáng)吞噬細(xì)胞抗性之間的關(guān)系是否是其抗氧化劑性質(zhì)的直接結(jié)果，于氧化猝發(fā)抑制劑二亞苯基碘鎗(DPI)存在下重復(fù)進(jìn)行分析。當(dāng)借助DPI抑制氧化猝發(fā)時(shí)，WT與ACrtM金黃色葡萄球菌在人類嗜中性粒細(xì)胞(圖2d)與小鼠血液(圖6d)中的存活率是相同的。Gp47Ph。"是一種經(jīng)常發(fā)現(xiàn)于慢性肉芽腫病(CGD)患者中的遺傳性吞噬細(xì)胞氧化猝發(fā)功能缺陷，且gp9lPh。"小鼠代表一種人類X-鏈接CGD的模型11。WT優(yōu)于無(wú)色素ACrtM金黃色葡萄球菌的存活率優(yōu)勢(shì)僅在正常人類及小鼠(CD1或C57Bl/6)的血液中表現(xiàn)出而在缺少NADPH氧化酶活性的人類gp47Ph。"患者或gp9lPh"小鼠的血液中沒(méi)有表現(xiàn)出(圖2e,f)。近來(lái)，據(jù)報(bào)道由反應(yīng)性氧物質(zhì)產(chǎn)生的明顯的病原體嗜中性粒細(xì)胞殺傷可在很大程度上反映通過(guò)鉀離子流變化調(diào)節(jié)的顆粒蛋白酶的活化。WT與ACrtM金黃色葡萄球菌在對(duì)組織蛋白酶G抗微生物作用的敏感性方面無(wú)差別，且兩種菌株均如先前對(duì)金黃色葡萄球菌所觀測(cè)得情況一般對(duì)人類嗜中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶具有抗性13(圖6d)。對(duì)先天性免疫防御十分重要的哺乳動(dòng)物嗜中性粒細(xì)胞的其它效應(yīng)分子屬于抗微生物肽的組織蛋白酶抑制素家族14。當(dāng)與WT菌株相比時(shí)，缺少類胡蘿卜素的金黃色葡萄球菌突變體同樣對(duì)鼠類組織蛋白酶抑制素mCRAMP殺傷敏感(圖6e)。這些結(jié)果表明金黃色葡萄球菌類胡蘿卜素的自由基清除抗氧化劑性質(zhì)在抵抗嗜中性粒細(xì)胞介導(dǎo)的殺傷中的主要作用。體外及體內(nèi)結(jié)果均表明金黃色葡萄球菌類胡蘿卜素是必需的且足以促進(jìn)氧化劑抗性及提高吞噬細(xì)胞存活率。為了評(píng)估這些觀測(cè)結(jié)果對(duì)疾病發(fā)病的重大意義，己研發(fā)出適于皮下激發(fā)的鼠類模型。在這些研究中，用WT金黃色葡萄球菌菌株在一側(cè)及用ACrtM突變體在對(duì)側(cè)同時(shí)對(duì)各動(dòng)物進(jìn)行注射。在WT注射(106cfu)位點(diǎn)，小鼠出現(xiàn)相當(dāng)大的膿腫損傷，在第4天時(shí)累積面積達(dá)80mm2.,同等接種量的缺乏類胡蘿卜素的突變體在對(duì)側(cè)的注射沒(méi)有產(chǎn)生可見(jiàn)的損傷(圖3a)。以兩種不同激發(fā)劑量(10、fu至107cfu)注射時(shí)，來(lái)自皮膚損傷的定量培養(yǎng)物一致地表明在各小鼠中存活WT金黃色葡萄球菌較ACrtM突變體明顯更多(圖3a)。Ph°x-A為了確證抗氧化劑作用是金黃色葡萄球菌類胡蘿卜素在活體內(nèi)提供保護(hù)機(jī)制的關(guān)鍵，對(duì)gp9lPh。"小鼠重復(fù)實(shí)施皮下感染實(shí)驗(yàn)。于不存在宿主NADPH氧化酶功能時(shí)，WT及ACrtM突變體金黃色葡萄球菌產(chǎn)生類似累積損傷面積并借助定量膿腫培養(yǎng)物檢測(cè)到?jīng)]有存活率優(yōu)勢(shì)(圖3b)。隨后通過(guò)對(duì)比由表達(dá)CrtMN的釀膿鏈球菌產(chǎn)生的感染過(guò)程與僅經(jīng)載體轉(zhuǎn)化的對(duì)照來(lái)確定金黃色葡萄球菌類胡蘿卜素足以增進(jìn)細(xì)菌毒力。在圖3c中，由表達(dá)類胡蘿卜素的菌株產(chǎn)生的損傷較那些由WT菌株產(chǎn)生的損傷明顯更大并含有更多的存活細(xì)菌。于表l中提供來(lái)自活體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的原始數(shù)據(jù)。表1:活體內(nèi)小鼠激發(fā)研究的損傷面積及細(xì)菌培養(yǎng)物計(jì)數(shù)<table>complextableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table><table>complextableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>倘若金黃色色素供給細(xì)菌以保護(hù)作用，則抑制胡蘿卜素形成的藥理劑可能會(huì)致使金黃色葡萄球菌對(duì)免疫清除更敏感。多功能氧化酶抑制劑2-二乙基氨基乙基-2,2-二苯基-戊酸酯(SKF525-A,Calbiochem)先前已經(jīng)顯示可抑制金黃色葡萄球菌中的色素形成，但在那些實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意S類胡蘿卜素中間體的適當(dāng)殘余累積。如圖4a中所示，在于此試劑存在下生長(zhǎng)的金黃色葡萄球菌WT菌株中獲得色素生成的劑量依賴性降低。阻斷金黃色葡萄球菌色素形成導(dǎo)致有機(jī)體對(duì)單態(tài)氧殺傷敏感性出現(xiàn)劑量依賴性增加(圖4b)且其使WT金黃色葡萄球菌存活于人類全血中的能力降低(圖4c)。作為對(duì)照，在平行實(shí)驗(yàn)中使ACrtM突變體暴露于SKF525-A，對(duì)氧化劑敏感性或血液存活率沒(méi)有明顯作用(圖4b,c)。類胡蘿卜素色素賦予的金色是人類病原體金黃色葡萄球菌的齊名特征。實(shí)施配對(duì)誘變作用與異源表達(dá)的分子遺傳學(xué)分析以顯示此標(biāo)志表現(xiàn)型實(shí)際上是一種通過(guò)其抗氧化劑性質(zhì)來(lái)用以保護(hù)細(xì)菌免受吞噬細(xì)胞殺傷的致病因子。在本世紀(jì)中，在社會(huì)及醫(yī)院中，此重要病因的有效控制受到抗微生物劑抗性迅速發(fā)展的危害。原則上，抑制胡蘿卜素形成可為并發(fā)性金黃色葡萄球菌感染治療提供一種新穎治療方法，其可有效地致使所述病原體對(duì)由正常宿主先天免疫防御產(chǎn)生的清除更敏感。另外，WT金黃色葡萄球菌較無(wú)色素ACrtM在人類供者全血或正常小鼠中及在人類嗜中性粒細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)以明顯更佳的方式存活。由于WT金黃色葡萄球菌與ACrtM突變體的攝取是相當(dāng)?shù)?，因此后一種效應(yīng)不能通過(guò)吞噬速率的差別來(lái)解釋。而且由于攝取的WT及突變體菌株在氮藍(lán)四唑鑰(NBT)還原分析中產(chǎn)生了類似結(jié)果，因此所述效應(yīng)也不能通過(guò)造成嗜中性粒細(xì)胞氧化猝發(fā)程度變化的差異來(lái)解釋。金黃色葡萄球菌ACrtM突變體與pCrtMN之間的互補(bǔ)恢復(fù)了對(duì)小鼠全血或人類嗜中性粒細(xì)胞殺傷的抗性。同樣地，表達(dá)葡萄球菌類胡蘿卜素的經(jīng)染色釀膿鏈球菌在人類嗜中性粒細(xì)胞較在親株中顯示更高存活率。為了驗(yàn)證金黃色葡萄球菌類胡蘿卜素表達(dá)與增強(qiáng)吞噬細(xì)胞抗性之間的關(guān)系是否是其抗氧化劑性質(zhì)的直接結(jié)果，于氧化猝發(fā)抑制劑二亞苯基碘鐵(DPI)存在下重復(fù)進(jìn)行分析。當(dāng)借助DPI抑制氧化猝發(fā)時(shí)，WT與ACrtM金黃色葡萄球菌在人類嗜中性粒細(xì)胞與小鼠血液中的存活率是相同的。Ph。x一gp9lPh。"-小鼠代表一種人類X-鏈接慢性肉芽腫病(一種遺傳性吞噬細(xì)胞氧化猝發(fā)功能缺陷)的模型。Ph。x一WT優(yōu)于無(wú)色素ACrtM金黃色葡萄球菌的存活率優(yōu)勢(shì)僅在正常小鼠(CD1或C57Bl/6)的血液中表現(xiàn)出而在缺少NADPH氧化酶活性的gp9lPh。x;小鼠的血液中沒(méi)有表現(xiàn)出。近來(lái)，據(jù)報(bào)道由反應(yīng)性氧物質(zhì)產(chǎn)生的明顯的病原體嗜中性粒細(xì)胞殺傷可在很大程度上反映通過(guò)鉀離子流變化調(diào)節(jié)的顆粒蛋白酶的活化。已確定WT與ACrtM金黃色葡萄球菌在對(duì)組織蛋白酶G抗微生物作用的敏感性方面無(wú)差別，且兩種菌株均如先前對(duì)金黃色葡萄球菌所觀測(cè)得情況一般對(duì)人類嗜中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶具有抗性。對(duì)先天性免疫防御十分重要的哺乳動(dòng)物嗜中性粒細(xì)胞的其它效應(yīng)分子屬于抗微生物肽的組織蛋白酶抑制素家族。當(dāng)與WT菌株相比時(shí)，缺乏類胡蘿卜素的金黃色葡萄球菌突變體同樣對(duì)鼠類組織蛋白酶抑制素mCRAMP殺傷敏感。這些結(jié)果表明金黃色葡萄球菌類胡蘿卜素的自由基清除抗氧化劑性質(zhì)在抵抗嗜中性粒細(xì)胞介導(dǎo)的殺傷中的主要作用。體外及體內(nèi)結(jié)果均表明金黃色葡萄球菌類胡蘿卜素是必需的且足以促進(jìn)氧化劑抗性及提高吞噬細(xì)胞存活率。為了評(píng)估這些觀測(cè)結(jié)果對(duì)疾病發(fā)病的重大意義，己研發(fā)出適于皮下激發(fā)的鼠類模型。在這些研究中，用WT金黃色葡萄球菌菌株在一側(cè)及用ACrtM突變體在對(duì)側(cè)同時(shí)對(duì)各動(dòng)物進(jìn)行注射。在WT注射位點(diǎn)，小鼠出現(xiàn)相當(dāng)大的皮下膿腫；同等接種量的缺乏類胡蘿卜素突變體在對(duì)側(cè)的注射沒(méi)有產(chǎn)生可見(jiàn)的損傷。來(lái)自皮膚損傷的定量培養(yǎng)物一致地表明在各小鼠中存活WT金黃色葡萄球菌較ACrtM突變體明顯更多。Ph。x一為了確證抗氧化劑作用是金黃色葡萄球菌類胡蘿卜素在活體內(nèi)提供保護(hù)機(jī)制的關(guān)鍵，對(duì)gp9lPh。"小鼠重復(fù)實(shí)施皮下感染實(shí)驗(yàn)。于不存在宿主NADPH氧化酶功能時(shí)，WT及ACrtM突變體金黃色葡萄球菌產(chǎn)生類似累積損傷面積且借助定量膿腫培養(yǎng)物檢測(cè)到?jīng)]有存活率優(yōu)勢(shì)。而且，當(dāng)釀膿鏈球菌感染與壞死性潰瘍而非膿腫形成相關(guān)時(shí)，由表達(dá)類胡蘿卜素的菌株產(chǎn)生的損傷較那些由WT菌株產(chǎn)生的損傷明顯更大并含有更多的存活細(xì)菌。倘若由金黃色色素供給細(xì)菌以保護(hù)作用，則對(duì)抑制胡蘿卜素形成的藥理劑進(jìn)行測(cè)試以確定所述藥劑是否會(huì)致使金黃色葡萄球菌對(duì)免疫清除更敏感。多功能氧化酶抑制劑2-二乙基氨基乙基-2,2-二苯基-戊酸酯(SKF525-A，Calbiochem)先前已經(jīng)顯示可抑制金黃色葡萄球菌中的色素形成，且在于此試劑存在下生長(zhǎng)的金黃色葡萄球菌WT菌株中表現(xiàn)出類胡蘿卜素生成的劑量依賴性色素降低。阻斷金黃色葡萄球菌色素形成導(dǎo)致有機(jī)體對(duì)單態(tài)氧殺傷敏感性出現(xiàn)相稱的劑量依賴性增加且其于人類全血中存活的能力降低。作為對(duì)照，在平行實(shí)驗(yàn)中使ACrtM突變體暴露于SKF525-A，對(duì)氧化劑敏感性或血液存活率沒(méi)有明顯作用。盡管上文已經(jīng)闡述了許多實(shí)施例及特征，但熟悉所屬技術(shù)的人員應(yīng)理解在不背離本發(fā)明的教示或由隨附權(quán)利要求書(shū)界定的本發(fā)明范圍的情況下，可對(duì)所述實(shí)施例及特征進(jìn)行若干修飾及變更。本發(fā)明的附錄供進(jìn)一步闡明而非限制本發(fā)明。權(quán)利要求1、一種治療細(xì)菌感染的方法，其包括對(duì)遭受所述感染的受試者投與可抑制所述細(xì)菌中類胡蘿卜素生成及/或活性的藥劑。2、如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述細(xì)菌感染是葡萄球菌感染。3、如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述細(xì)菌是葡萄球菌屬。4、如權(quán)利要求3所述的方法，其中所述細(xì)菌是金黃色葡萄球菌。5、一種通過(guò)靶向類胡蘿卜素來(lái)預(yù)防、治療MRSA或改進(jìn)MRSA治療有效性的方法。6、如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述類胡蘿卜素是葡萄球菌屬類胡蘿卜素。7、如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述耙向類胡蘿卜素涉及胡蘿卜素形成抑制劑。8、如權(quán)利要求7所述的方法，其中所述胡蘿卜素形成抑制劑是多功能氧化酶抑制劑。9、如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述多功能氧化酶抑制劑是選自由2-二乙基氨基乙基-2,2-二苯基-戊酸酯、2,4-二氯-6-苯基苯氧基乙基胺、2,4-二氯-6-苯基苯氧基乙基二乙基胺、及胡椒基丁醚組成的群組。10、如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述多功能氧化酶是2-二乙基氨基乙基-2,2-二苯基-戊酸酯。11、如權(quán)利要求1或5所述的方法，其中所述靶向或抑制類胡蘿卜素包括抑制類胡蘿卜素的合成、增加類胡蘿卜素的降解或去除、或抵消類胡蘿卜素的功能。12、一種抑制微生物生長(zhǎng)的方法，其包括使所述微生物與抑制有效量的胡蘿卜素形成抑制劑接觸。13、如權(quán)利要求12所述的方法，其中所述接觸是在活體外進(jìn)行。14、如權(quán)利要求13所述的方法,其中所述接觸是在懷疑具有微生物的表面上進(jìn)行.15、如權(quán)利要求12所述的方法，其中所述微生物包含類胡蘿卜素。16、如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述微生物是細(xì)菌。17、如權(quán)利要求12所述的方法，其中所述接觸是在活體內(nèi)進(jìn)行。18、如權(quán)利要求17所述的方法，其中所述活體內(nèi)接觸是通過(guò)局部投藥來(lái)進(jìn)行。19、如權(quán)利要求16所述的方法，其中所述細(xì)菌是革蘭氏陽(yáng)性菌。20、如權(quán)利要求19所述的方法,其中所述細(xì)菌是金黃色葡萄球菌或表皮葡萄球.21、如權(quán)利要求16所述的方法，其中所述細(xì)菌是革蘭氏陰性菌。22、如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述細(xì)菌是選自由大腸桿菌(E.coli)、綠膿桿菌(Raeruginosa)及鼠傷寒沙門氏菌(S.typhimurium.)組成的群組。23、如權(quán)利要求12所述的方法，其中所述胡蘿卜素形成抑制劑是與至少一種抗生素組合投與。24、如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述抗生素屬于選自由下列組成之群組的類別氨基糖甙類、青霉素類、頭孢菌素類、碳青霉烯類(carbapenems)、單環(huán)|3-內(nèi)酰胺類(monobactams)、喹諾酮類、四環(huán)素類、糖肽類、氯霉素(chloramphenicol)、克林霉素(clindamycin)、甲氧節(jié)氨嘧啶(trimethoprim)、磺胺甲基異噁唑(sulfamethoxazole)、呋喃妥因(nitrofuirantoin)、利福平(rifampin)及莫匹羅星(mupirocin)。25、如權(quán)利要求24所述的方法，其中所述抗生素是選自由下列組成的群組阿米卡星(amikacin)、慶大霉素(gentamicin)、卡那霉素(kanamycin)、奈替米星(netilmicin)、妥布霉素(tobramycin)、f連霉素(streptomycin)、阿奇霉素(azithromycin)、克拉霉素(clarithromycin)、紅霉素(erythromycin)、依托紅霉素/琥乙紅霉素/葡庚糖酸紅霉素/乳糖酸紅霉素/硬脂酸紅霉素、青霉素G、青霉素V、甲氧西林(methicillin)、萘夫西林(nafcillin)、苯唑西林(oxacillin)、氯唑西林(cloxacillin)、雙氯西林(dicloxacillin)、氨節(jié)西林(ampicillin)、阿莫西林(amoxicillin)、替卡西林(ticarcillin)、羧節(jié)西林(carbenicillin)、美洛西林(mezlocillin)、阿洛西林(azlocillin)、哌拉西林(piperacillin)、頭孢噻吩(cephalothin)、頭孢唑林(cefazolin)、頭孢克洛(cefaclor)、頭孢孟多(cefamandole)、頭孢西丁(cefoxitin),頭孢呋辛(cefuiroxime)、頭孢尼西(cefonicid)、頭孢美唑(cefmetazole)、頭孢替坦(cefotetan)、頭孢丙烯(cefprozil)、氯碳頭孢(loracarbef)、頭孢他美(cefetamet)、頭孢哌酮(cefoperazone)、頭孢噻肟(cefotaxime)、頭孢唑月虧(ceftizoxime)、頭孢曲松(ceftriaxone)、頭孢他啶(ceftazidime)、頭孢吡肟(cefepime)、頭孢克肟(cefixime)、頭孢泊肟(cefpodoxime)、頭孢磺啶(cefsulodin)、亞月安培南(imipenem)、氨曲南(aztreonam)、氟羅沙星(fleroxacin)、萘啶酸(nalidixicacid)、諾氟沙星(norfloxacin),環(huán)丙沙星(ciprofloxacin)、氧氟沙星(ofloxacin)、依諾沙星(enoxacin)、洛美沙星(lomefloxacin)、西諾沙星(cinoxacin)、多西環(huán)素(doxycycline)、米諾環(huán)素(minocycline)、四環(huán)素、萬(wàn)古霉素(vancomycin)、及替考拉寧(teicoplanin)。26、一種組合物，其包含胡蘿卜素形成抑制劑及藥學(xué)上可接受的載劑。27、如權(quán)利要求26所述的組合物，其中所述組合物是乳液、乳霜、凝膠、軟膏或噴霧劑。28、如權(quán)利要求40所述的組合物，其中所述組合物用于局部投藥。29、一種篩選用于治療細(xì)菌感染的MRSA治療劑的方法，其包括使產(chǎn)生類胡蘿卜素的細(xì)菌與懷疑可抑制類胡蘿卜素生成或活性的測(cè)試藥劑接觸，并測(cè)量所述藥劑在氧化劑存在及不存在時(shí)的效果。全文摘要本發(fā)明提供一種用于定向誘變和異源表達(dá)的分子遺傳學(xué)方法以及細(xì)菌性發(fā)病機(jī)理的活體外和活體內(nèi)模型以闡明金黃色葡萄球菌(S.aureus)色素是致病因子及抗微生物療法的潛在新穎目標(biāo)。文檔編號(hào)A01N37/12GK101198252SQ200680018200公開(kāi)日2008年6月11日申請(qǐng)日期2006年4月17日優(yōu)先權(quán)日2005年4月18日發(fā)明者喬治·Y·劉,維克托·尼澤申請(qǐng)人:加利福尼亞大學(xué)董事會(huì)