專利名稱：兔眼藍莓組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及兔眼藍莓的植物組織培養(yǎng)方法。
二研究背景兔眼藍莓是果樹中的珍品，風(fēng)味獨特，可鮮食，也可加工各種兔眼藍莓系列食品，還可以用作提取花色素的原料。其果實中的花色素為一種水溶性生物黃酮，具有預(yù)防近視、增強心臟功能、抗癌、抗心血管疾病作用。國際糧農(nóng)組織已將其列為人類五大保健食品之一。傳統(tǒng)扦插繁殖方法存在著生根難、繁殖系數(shù)低的缺限。目前，國內(nèi)外關(guān)于兔眼藍莓組織培養(yǎng)的研究還不系統(tǒng)，高效繁育體系也很缺乏。
三

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的問題是提供一種兔眼藍莓的高效組織培養(yǎng)方法。技術(shù)方案為1.誘導(dǎo)將兔眼藍莓莖段接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。該培養(yǎng)基是在WPM常規(guī)培養(yǎng)基中添加了10毫克/升的玉米素。培養(yǎng)1個月后，待培養(yǎng)物長出新梢后，即開始下一個階段。
2.增殖將第1步中所得的新梢剪下轉(zhuǎn)移到增殖培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基是在WPM常規(guī)培養(yǎng)基中添加了5毫克/升的玉米素。培養(yǎng)1個月后，再用同樣方法繼代3次。然后進入第三步。
3.生根將第2步所得的小苗，轉(zhuǎn)移到常規(guī)生根培養(yǎng)基中。一個月后，小苗基部出現(xiàn)根系。再過15天后，進入下一步。
4.煉苗將第3步得到的生根苗栽在煉苗基質(zhì)中。該基質(zhì)組成物為草炭和石英砂，草炭和石英砂比例為1-3∶1。按照一般煉苗要求進行管理后即可獲得大量成品苗。
本發(fā)明采用了三種特殊基質(zhì)，即誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和煉苗基質(zhì)。誘導(dǎo)培養(yǎng)基添加的玉米素濃度是10毫克/升；增殖培養(yǎng)基添加的玉米素濃度是5毫克/升；煉苗基質(zhì)是1-3∶1的草炭和石英砂組合。
采用本方法，在誘導(dǎo)階段一般3天就可以看到芽子萌動，7天即有70％的芽子萌發(fā)。20天后，新梢長度可達0.8-1.2厘米，葉片數(shù)量6-8片，大小近乎田間正常葉的1/3(圖1)。同時，在莖段和葉片上會出現(xiàn)明顯的白色粉狀物，葉色黃綠，鮮嫩，莖段底部膨大。在增殖階段，4天即可看到再生苗開始生長和分化現(xiàn)象，而且分化出來的新稍也明顯粗壯，增殖率可達到12倍以上(圖2)。在煉苗階段，成活率最高可達99％，一個月后的生長量達1.2厘米以上，新增葉片2-4片(圖3)。
本發(fā)明的有益效果是1.顯著提高了外植體的萌芽率和大于1厘米的枝條數(shù)；2.使新梢增殖率達到了12倍以上；3.幼苗的成活率達到了99％。
本發(fā)明解決了兔眼藍莓傳統(tǒng)扦插方法生根難、繁殖系數(shù)低的難題，為兔眼藍莓的開發(fā)利用提供了一種工業(yè)化生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)成品苗的方法。
本發(fā)明所述兔眼藍莓可開發(fā)成兔眼藍莓果汁、兔眼藍莓果酒、兔眼藍莓果醬、兔眼藍莓保健食品，以及制備抗腫瘤、治療心血管疾病的藥物。
四


圖1誘導(dǎo)培養(yǎng)基上生長的兔眼藍莓莖段圖2增殖培養(yǎng)基上生長的兔眼藍莓新梢圖3煉苗基質(zhì)中的兔眼藍莓成活苗五具體實施方式
1.取材與消毒田間采集未木質(zhì)化的新梢，清水沖洗2h后，酒精消毒30秒，無菌水沖洗3次。再用0.1％升汞再消毒10分鐘，無菌水沖洗3次。剪去葉片大小的2/3后，將枝條剪成1-2個芽的節(jié)段。
2.誘導(dǎo)培養(yǎng)在超凈工作臺上，將剪好的莖段接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。該培養(yǎng)基組成為WPM+10毫克/升玉米素。
3.增殖培養(yǎng)30天后可以獲得長度在1厘米以上的大量新梢。將長出的新梢移接在增殖培養(yǎng)基上開始增殖。增殖培養(yǎng)基的組成為WPM+5毫克/升的玉米素。繼代3遍。
4.生根將上一步獲得的莖段取出，接種到生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)。所用配方為1/2 WPM+0.1毫克/升的吲哚乙酸。
5.煉苗提前3天打開瓶蓋。移栽時，用鑷子小心取出幼苗，洗干凈。選擇生根的幼苗并移栽到草炭與石英砂之比為1-3∶1的基質(zhì)中，在完全封閉的塑料棚中于組培室內(nèi)度過15天。其間保持棚內(nèi)濕度100％。之后移入田間，并在密封的塑料棚中保持濕度80％、透光度70％情況下度過5天，開始放風(fēng)。15天后，揭去棚膜。
權(quán)利要求
1，兔眼藍莓組織培養(yǎng)方法，其特征在于由以下三個步驟組成(1)誘導(dǎo)將兔眼藍莓莖段接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基是在WPM常規(guī)培養(yǎng)基中添加了10毫克/升的玉米素，培養(yǎng)1個月后，待培養(yǎng)物長出新梢后，即開始下一個階段；(2)增殖將第1步中所得的新梢剪下轉(zhuǎn)移到增殖培養(yǎng)基上進行增殖，該培養(yǎng)基是在WPM常規(guī)培養(yǎng)基中添加了5毫克/升的玉米素，培養(yǎng)1個月后，再將新梢繼續(xù)增殖，獲得大量新梢后進入第三步；(3)生根將第2步所得的新梢，轉(zhuǎn)移到常規(guī)生根培養(yǎng)基中，一個月后，新梢基部出現(xiàn)根系，再過15天，進行煉苗。
2，根據(jù)權(quán)利要求1培養(yǎng)方法培養(yǎng)出的生根苗的煉苗方法，其特征在于將權(quán)利要求1培養(yǎng)出的生根苗移栽在煉苗基質(zhì)中進行常規(guī)管理，該煉苗基質(zhì)的組成物為草炭和石英砂，比例為1-3∶1。
3，根據(jù)權(quán)利要求1培養(yǎng)方法培養(yǎng)的兔眼藍莓在制備兔眼藍莓果汁、兔眼藍莓果酒，兔眼藍莓果醬以及兔眼藍莓保健品中應(yīng)用。
4，根據(jù)權(quán)利要求1培養(yǎng)方法培養(yǎng)的兔眼藍莓在制備治療腫瘤、心血管疾病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種兔眼藍莓高效繁殖方法。該方法分為誘導(dǎo)、增殖、生根、煉苗四個階段。該方法解決了兔眼藍莓莖段新梢高效誘導(dǎo)、快速增殖、穩(wěn)定成活的重要技術(shù)問題，達到了高效誘導(dǎo)外植體萌芽、快速進行新梢增殖和高質(zhì)量保證幼苗成活的目的，提供了一種工業(yè)化生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)成品苗的新方法。
文檔編號A01G31/00GK101069487SQ20071002450
公開日2007年11月14日 申請日期2007年6月20日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月20日
發(fā)明者張長青, 朱土農(nóng) 申請人:金陵科技學(xué)院