專利名稱：：一種消除抗營養(yǎng)因子作用的微生物制劑及制作方法
技術(shù)領域：
：本發(fā)明涉及一種消除抗營養(yǎng)因子作用的微生物制劑及制作方法，通過在全價飼料和飼料原料中添加，能顯著消除普通全價飼料或飼料原料中的抗營養(yǎng)因子作用，使飼料營養(yǎng)養(yǎng)分更高，更易被畜禽采食、消化、吸收。同時在發(fā)酵料中富含大量有益活菌和酶、肽、多糖及氨基酸等活性代謝產(chǎn)物，可提高動物的免疫能力，促進養(yǎng)殖動物消化吸收功能，提高動物應激性，屬于農(nóng)業(yè)生物制品
技術(shù)領域：
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背景技術(shù)：
：飼料是養(yǎng)殖動物生長的物質(zhì)基礎，現(xiàn)今配合飼料中90%以上的組成成分為植物性飼料，植物性飼料中都含有一種或多種抗營養(yǎng)因子。如在飼料原料中用量最大，功能最重要的豆類及其餅粕、高粱和某些塊根塊莖類中就存在蛋白酶抑制因子，可導致飼料中蛋白質(zhì)的消化率下降，因其能和胰蛋白酶、胃蛋白酶和糜蛋白酶結(jié)合而生成無活性的復合物，降低這些酶的活性；可引起養(yǎng)殖動物體內(nèi)蛋白質(zhì)內(nèi)源性消耗，抗營養(yǎng)因子不但影響了飼料的營養(yǎng)價值和適口性，而且給養(yǎng)殖動物的健康生長和生產(chǎn)帶來了很大的危害，我國既是人口大國又是飼料生產(chǎn)大國，詞料資源短缺，尤其是蛋白質(zhì)飼料資源缺口巨大，面對這樣嚴重的現(xiàn)實，除開發(fā)新的飼料資源外，提高現(xiàn)有飼料資源的利用率也是解決問題最有效途徑之一。由于抗營養(yǎng)因子是影響飼料營養(yǎng)價值充分發(fā)揮的主要因素，所以人們很早就對消除抗營養(yǎng)因子對飼料營養(yǎng)價值的影響做了許多的研究工作，目前消除抗營養(yǎng)因子作用的方法主要有以下幾種1、物理法，如加熱法、膨化法、機械加工法；2、化學法3、生物技術(shù)法如酶制劑法、育種法、控制用量法，除酶制劑法外，其余方法的效果并不明顯且某種程度上限制了飼料營養(yǎng)作用對飼養(yǎng)動物的生長，而由于酶制劑是專一性很強的催化劑，所以對原料眾多的抗營養(yǎng)因子難以以某幾種酶制劑添加來消除其作用，同時酶制劑作用需要嚴格的溫度、Ph等催化條件。通過在中國知識產(chǎn)權(quán)局專利檢索網(wǎng)站查詢，尚未有消除飼料中抗營養(yǎng)因子的專利公告，類似的公告的一項發(fā)明專利，申請?zhí)枮?00410099204.1，題為飼料添加劑，其主要內(nèi)容為這種詞料添加劑，由下述重量配比的原料優(yōu)化組合制成每千克飼料添加劑由谷氨酸鈉50-200g，5'-肌苷酸二鈉25-100g，5，-鳥苷酸二鈉25-100g，血根堿2-15g，其余為載體。所述載體為白碳黑，該技術(shù)為簡單的氨基酸飼料添加配方，沒有任何化學或生物反應過程發(fā)生，其工藝過程太簡單，無法保證其"提高采食量和采食速度，大幅提升消化道內(nèi)源酶的總活性，減少應激性腹瀉"的使用效果。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種生產(chǎn)成本低、周期快，添加在全價飼料或飼料原料中能顯著降低抗營養(yǎng)因子對飼料營養(yǎng)成分的影響，提高養(yǎng)殖動物采食量和飼料利用率，同時提高養(yǎng)殖動物免疫力的微生物制劑及制作方法。為實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是提供一種消除抗營養(yǎng)因子作用的微生物制劑，其特征在于，由以下重量百分比原料組成枯草芽孢桿菌28—35%、植物乳桿菌45—53%、啤酒酵母菌12—27%;一種消除抗營養(yǎng)因子作用的微生物制劑的制備方法，其特征在于，生產(chǎn)菌種通過射線誘導和生產(chǎn)性能試驗相結(jié)合，篩選產(chǎn)量高、產(chǎn)酶量大的生產(chǎn)菌種，生產(chǎn)工藝采用液體單獨培養(yǎng)和固體復合培養(yǎng)技術(shù)，培養(yǎng)基中添加產(chǎn)物促進劑，其生產(chǎn)工藝為第一步發(fā)酵菌株選育a.菌株傳代采用農(nóng)業(yè)部菌種保存中心提供的枯草芽孢桿菌菌株、植物乳桿菌和啤酒酵母菌，通過營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)，選育生長速度快、菌落特征明顯的菌種，在0'C—4'C溫度下保存菌種；b.將枯草芽孢桿菌菌株、植物乳桿菌和啤酒酵母菌分別在紫外線的照射下進行誘導，將保存的菌種制作菌懸液，稀釋至10—7，在30cm處用功率為15W的紫外燈，波長為260nm，處理15s—20s，處理后的菌懸液在營養(yǎng)瓊脂平板中溫度為3(TC—40'C，倒置培養(yǎng)45小時一50小時，選出生長速度快的菌落進行搖瓶實驗，觀察菌種生長速度快，活菌總數(shù)大于30億/ml,植物乳桿菌菌落直徑大于3ml，啤酒酵母菌大于7ml，枯草芽孢桿菌大于5ml的菌株在0'C—4'C溫度加以保存；C.生產(chǎn)性能試驗將三種菌種接種分別在液體營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為35°C_40°C，在轉(zhuǎn)速為220轉(zhuǎn)/分一250轉(zhuǎn)/分的恒溫搖床中進行恒溫培養(yǎng)，24小時一28小時后取樣，利用平板計數(shù)法進行菌落總數(shù)測定，菌落總數(shù)大于30億/ml的菌種可用于生產(chǎn)制種；d.生產(chǎn)菌種的制作將篩選出的枯草芽孢桿菌、植物乳桿菌、啤酒酵母菌分別轉(zhuǎn)接入裝有營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的茄子瓶中，在35'C—4(TC溫度下培養(yǎng)45小時一50小時，待茄子瓶表面菌苔布滿，并白中帶黃時即可取出，然后放入2—6'C的冰箱中保存；第二步復合菌種的液體高速培養(yǎng)a.按權(quán)利要求1的重量百分比稱取各菌種；b.乳酸菌和啤酒酵母菌的液體培養(yǎng)將按步驟a的比例稱取的植物乳桿菌和啤酒酵母菌，混合后在一起進行復合培養(yǎng)將混合菌苔按l:20—25的比例接種于120—128°C、30—45min高溫滅菌的液體培養(yǎng)基中，在發(fā)酵罐中攪拌25min—35min，其轉(zhuǎn)速為200—220r/min，攪拌均勻后放入消毒后的塑料桶中靜置5—7天，靜置過程中每天測定Ph值并釋放產(chǎn)出的氣體；發(fā)酵過程中抽樣3次，顯微鏡下檢測菌體生長情況和測定Ph值，當活菌總數(shù)達到40億/ml濃度和Ph值達到3.0-4.0時停止發(fā)酵；c.枯草芽孢桿菌的液體培養(yǎng)將枯草芽孢桿菌按1:20—25的比伊j接種于12(TC—128。C、30min—45min高溫滅菌的液體培養(yǎng)基中，發(fā)酵時通氣量維持在l:1,0-1.2，發(fā)酵時間24—35小時；第三步菌種的固體擴大培養(yǎng)a.將步驟2復合培養(yǎng)的菌液混合后按1:20—25的比例接入12(TC—128。C、30min—45min高溫滅菌的固體擴大培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)基中添加0.08%_0.1%的植酸質(zhì)作產(chǎn)物促進劑，攪拌30—45min至均勻，倒入消毒雙層飼料袋中密封發(fā)酵，溫度32—35'C，時間8—IO天；b、發(fā)酵過程中取樣三次，測定水分和Ph值，發(fā)酵結(jié)束后取樣，測定水分為35%-40%、Ph值為4.5—5.5;第四步干燥粉碎a.干燥:將步驟3發(fā)酵完全的產(chǎn)品按時間先后放入培養(yǎng)箱干燥，溫度控制在4(TC一45'C，時間14小時一16小時，干燥完成的物料水份控制在《12%;b.過篩將干燥后的物料通過60—80目的震動篩進行震動，過篩；C.包裝將過篩后的物料裝入帶有內(nèi)袋的桶或袋中，扎緊袋口，系好標識牌，轉(zhuǎn)入成品庫有序堆放；取樣檢測，主要參數(shù)水份《12%、活菌數(shù)^50億/g、總蛋白量》25%;物理性狀深黃色粉末狀固體。所述的步驟2中乳酸菌和啤酒酵母菌的液體培養(yǎng)基組成及重量百分比為糖蜜12_15%、酵母粉0.2-0.4%、硫酸鎂0.2_0.5%、硫酸銨O.5-0.7%、磷酸氫二鈉O.2-0.5%、尿素0.8-1%、無菌水81.9-86.1%。所述的步驟2中枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基組成及重量百分比可溶性淀粉2%、豆粕粉1.2%、玉米粉3%、磷酸二氫鉀0.4%、磷酸二氫鈉1.6%、硫酸鎂0.6%、尿素1.5%、消泡劑0.5%、.無菌水89.2%。所述的步驟3中的固體擴大培養(yǎng)基為無菌水再加清糠、大豆粉、糖蜜、玉米粉、磷酸二氫鉀、磷酸二氫鈉、硫酸鎂、尿素、植酸質(zhì)中的至少四種混合物組成，其重量百分配比為清糠18—20%、大豆粉25—30%、糖蜜8—12%、玉米粉8一10%、磷酸二氫鉀0.5—1%、磷酸二氫鈉1_2%、硫酸鎂0.4—1%、尿素1_2%、0.08—0.1%的植酸質(zhì)、無菌水21.9—38.02%。本發(fā)明利用多個具有消除抗營養(yǎng)因子作用的菌種發(fā)酵專用培養(yǎng)基，采用液體高速培養(yǎng)和固體擴大培養(yǎng)技術(shù)，發(fā)酵過程中產(chǎn)生并積累大量營養(yǎng)富的菌體，即乳酸桿菌、芽孢桿菌、酵母和有用的代謝產(chǎn)物，如抗生素、維生素、有機酸、激素及賴氨酸等，本發(fā)明技術(shù)兼有酶制劑法和發(fā)酵法的優(yōu)點，能顯著消除飼料原料中的抗營養(yǎng)因子作用，提高養(yǎng)殖動物采食量和飼料利用率，同時提高養(yǎng)殖動物的免疫力。發(fā)酵法是一種安全有效的使抗營養(yǎng)因子鈍化和毒素脫毒的方法，它具有以下幾個特點(l)能較有效地達到去毒的目的；(2)能對多種抗營養(yǎng)因子或毒素產(chǎn)生解毒效果；(3)可以大量處理加工，要求的條件、設備和工藝簡單；(4)對某些難消化的詞料可以部分提高消化率，同時改善適口性提高采食量。近年來，我國對非常規(guī)飼料原料的餅粕類飼料進行了許多探討，李延云等(1995)篩選出脫毒率達91.5%的菌種，使棉籽粕的飼用價值提高。黃玉德等(1994)利用微生物發(fā)酵技術(shù)，使棉籽中的棉酚含量下降至可飼用水平(300毫克/千克)。本發(fā)明提供的一種利用發(fā)酵工藝消除抗營養(yǎng)因子的微生物制劑，是采用在畜牧業(yè)生產(chǎn)中以促進養(yǎng)殖動物建立健康的微生態(tài)腸道環(huán)境、促進消化酶分泌和提高飼料利用率的乳酸菌類、產(chǎn)生抗氧化物和免疫功能的芽孢桿菌類以及能提供豐富單細胞蛋白的酵母菌類的三類菌種，利用射線誘導的方法提高其產(chǎn)酶量、抗生量，利用單獨的液體高速培養(yǎng)和固體擴大培養(yǎng)技術(shù)，使產(chǎn)品中含有50億/克的有益活菌，粗蛋白含量大于25%，同時富含各種消化代謝酶、多肽、多糖、抗生素、氨基酸等活性代謝物質(zhì)，添加在全價飼料和飼料原料中后，能在養(yǎng)殖動物體內(nèi)形成穩(wěn)定的酸性腸道環(huán)境，同時大量的活性酶能迅速分解原料中難以分解的大分子營養(yǎng)成分，起到消除抗營養(yǎng)因子的作用，這種養(yǎng)殖動物自身的調(diào)節(jié)功能來自于內(nèi)源，不同于外源性酶或者簡單的物理和化學方法，能讓詞料營養(yǎng)成分得到充分的吸收，大大提高了飼料利用率，節(jié)約了飼料成本。利用枯草芽孢桿菌發(fā)酵大豆在日本有較早的應用，在日本風靡一時的營養(yǎng)保健食品——納豆，就是利用枯草芽孢桿菌發(fā)酵而來，不過由于菌種未經(jīng)過專門的誘導，其酶解效果差，對大豆蛋白利用較低。本發(fā)明利用紫外線誘導，能使得到高產(chǎn)酶能力的優(yōu)秀菌株的得率大大提高，與化學誘導、營養(yǎng)缺陷型選育相比，微波及射線誘導具有設備簡單、操作方便、誘變周期短的特點，可以在有限的時間內(nèi)選育更多的優(yōu)秀菌株。在本發(fā)明產(chǎn)品的發(fā)酵過程中，采用了添加產(chǎn)物促進劑的辦法，本產(chǎn)品中的營養(yǎng)多肽主要由產(chǎn)品菌種產(chǎn)生大量的酸性蛋白酶、中性蛋白酶、纖維素酶、淀粉酶分解培養(yǎng)基而來，所以，加入產(chǎn)物促進劑是提高產(chǎn)物產(chǎn)量的一個有效方法，我們在10多種產(chǎn)酶促進劑中進行了篩選，分別確定了一種液體培養(yǎng)基、一種固體培養(yǎng)基的產(chǎn)物促進劑，與未添加者相比，其產(chǎn)物中酶活分別增加12倍和4倍。由于枯草桿菌是產(chǎn)芽孢菌，后期發(fā)酵液體呈堿性，而兩種乳酸菌是典型的酸性培養(yǎng)細菌，直接復合培養(yǎng)有很大的難度，所以本發(fā)明產(chǎn)品采用了液體單獨培養(yǎng)，再進行固體馴化復合培養(yǎng)的辦法，既保證了菌種活菌數(shù)量，又將代謝產(chǎn)物的保留最大化，保證了產(chǎn)品的應用效果。同時在最終產(chǎn)品中添加載體，保證了菌種在運輸和保存過程中的存活時間。和現(xiàn)階段的其他消除抗營養(yǎng)因子的方法相比，本發(fā)明的優(yōu)點為-1.菌種選育過程中采用紫外誘導和生產(chǎn)性能試驗相結(jié)合的技術(shù)，操作設備簡單，誘導周期短，場地要求低。2.采用創(chuàng)新的益生菌共生配伍設計和多級復合發(fā)酵技術(shù)，每級發(fā)酵均有各自不同的目標產(chǎn)物，使產(chǎn)品中富含大量有益活菌和酶、肽、多糖及氨基酸等活性代謝產(chǎn)物，具有高穩(wěn)定性。3.在固體培養(yǎng)中添加產(chǎn)物促進劑，大大提高發(fā)酵過程中酶活和產(chǎn)物的數(shù)量；4.通過產(chǎn)生大量內(nèi)源性活性酶、抗氧化劑和抗生素，改善飼料適口性，提高采食量，增強養(yǎng)殖動物的抗應激及免疫力，提高群體整齊度，并改善生長速度和飼料利用率，降低養(yǎng)殖成本；5.枯草芽孢桿菌和乳酸菌發(fā)酵營養(yǎng)豐富的固體培養(yǎng)基，在產(chǎn)生多肽的同時，產(chǎn)生大量的纖維素酶、半纖維素酶、低聚肽、短肽混合物、抗生素、微量元素及其它代謝產(chǎn)物，為養(yǎng)殖動物提供最佳的營養(yǎng)生長條件；6.采用糧食作物和常用飼料載體作為主要培養(yǎng)基原料，降低了生產(chǎn)成本，同時使用常用的發(fā)酵及生產(chǎn)設備，易于在動物養(yǎng)殖中推廣；7.本發(fā)明的產(chǎn)品采用農(nóng)業(yè)部658公告允許添加的微生物菌種，在養(yǎng)殖動物體內(nèi)無有害殘留，同時減少了抗生素在養(yǎng)殖中的使用量，是一種安全、綠色的微生物產(chǎn)品。具體實施例方式以下結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步說明。實施例1一種消除抗營養(yǎng)因子作用的微生物制劑的制備方法為本發(fā)明采用菌種及編號為丄acto6flc/〃w;y/7/awton/w(ATCC8014)植物乳桿菌、Sacc/wramycesc"ev&/ae(IFO0203)、啤酒酵母菌、Sw7/zwJw6rt7/s(1.398)枯草芽孢桿菌，菌種由農(nóng)業(yè)部菌種保存中心提供。第一步發(fā)酵菌株選育1、菌株傳代采用農(nóng)業(yè)部菌種保存中心提供的枯草芽孢桿菌菌株和植物乳桿菌、啤酒酵母菌，通過營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)，選育生長速度快、菌落特征明顯的菌種，在3'C溫度下保存菌種；營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaC15g、瓊脂15—20g、水1000ml、pH7,0-7.2。12rC滅菌20min。2、將以上三種菌種在紫外線的照射下進行誘導將保存的菌種制作菌懸液，稀釋至l(T7，在30cm處用功率為15W的紫外燈，波長為260nm處理15s，處理后的菌懸液在營養(yǎng)瓊脂平板中，在35'C溫度下倒置培養(yǎng)48小時，選出生長速度快的菌落進行搖瓶實驗，觀察菌種生長速度；3、生產(chǎn)性能試驗將三種菌種接種在液體營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(LB培養(yǎng)基)中，37°C，200轉(zhuǎn)/分進行恒溫培養(yǎng)，26小時后取樣，利用平板計數(shù)法進行菌落總數(shù)測定，菌落總數(shù)大于30億/ml的菌種可用于生產(chǎn)制種；液體營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基為牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaC15g、水1000ml、pH7.0-7.2。12rC滅菌20min。4、生產(chǎn)菌種的制作將篩選出的枯草芽孢桿菌、植物乳桿菌、啤酒酵母菌分別轉(zhuǎn)接入裝有營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的茄子瓶中，在38'C溫度下培養(yǎng)45小時，待茄子瓶表面菌苔布滿，并白中帶黃時即可取出，然后放入5'C的冰箱中保存；第二步復合菌種的液體高速培養(yǎng)a.按以下重量百分比稱取各菌種枯草芽孢桿菌28%、植物乳桿菌45%、啤酒酵母菌27%;b.乳酸菌和啤酒酵母菌的液體培養(yǎng)將按步驟a的比例稱取的植物乳桿菌和啤酒酵母菌，混合后在一起進行復合培養(yǎng)將混合菌苔按l:20的比例接種于12rC高溫滅菌的液體培養(yǎng)基中，在發(fā)酵罐中攪拌30min，其轉(zhuǎn)速為200—220r/min,攪拌均勻后放入消毒后的塑料桶中靜置5—7天，靜置過程中每天測定Ph值并釋放產(chǎn)出的氣體；發(fā)酵過程中抽樣3次，顯微鏡下檢測菌體生長情況和測定Ph值，當活菌總數(shù)達到40億/ml濃度和Ph值達到3.0-4.0時停止發(fā)酵；C.枯草芽孢桿菌的液體培養(yǎng)將稱去的枯草芽孢桿菌按l:20的比例接種于121°C、30min高溫滅菌的液體培養(yǎng)基中，發(fā)酵時通氣量維持在1:1.0，發(fā)酵時間24—35小時。上述步驟b中乳酸菌和啤酒酵母菌的液體培養(yǎng)基組成及重量百分比為糖蜜12%、酵母粉0.2%、硫酸鎂0.2%、硫酸銨0.5%、磷酸氫二鈉0.2%、尿素0.8%、無菌水86.1%.上述步驟c中枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基組成及重量百分比可溶性淀粉2%、豆粕粉1.2%、玉米粉3%、磷酸二氫鉀0.4%、磷酸二氫鈉1.6%、硫酸鎂0.6%、尿素1.5%、消泡劑0.5%、.無菌水89.2%。第三步菌種的固體擴大培養(yǎng)a.將步驟2復合培養(yǎng)的菌液混合后按1:20的比例接入121°C、30min高溫滅菌的固體擴大培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)基中添加0.08%的植酸質(zhì)作產(chǎn)物促進劑。攪拌30—45min至均勻，倒入消毒雙層飼料袋中密封發(fā)酵，溫度32一35。C，時間8—IO天；b、發(fā)酵過程中取樣三次，測定水分和Ph值，發(fā)酵結(jié)束后取樣，測定水分為35-40%、Ph值為4.5—5.5;所述的步驟a的固體擴大培養(yǎng)基為清糠18X、大豆粉25%、糖蜜8%、玉米粉8%、磷酸二氫鉀0.5%、磷酸二氫鈉1%、硫酸鎂0.4%、尿素1%、0.08%的植酸質(zhì)、無菌水38.02%。第四步粉碎干燥a.干燥:將步驟3發(fā)酵完全的產(chǎn)品按時間先后放入培養(yǎng)箱干燥，溫度控制在40—45°C，時間14一16小時，干燥完成的物料水份控制在《12%;b.過篩將干燥后的物料通過60—80目的震動篩進行震動，過篩兩次。c.包裝過篩后的物料裝入帶有內(nèi)袋的桶或袋中，扎緊袋口，系好標識牌，轉(zhuǎn)入成品庫有序堆放；取樣檢測，主要參數(shù)水份《12%、活菌數(shù)^50億/g、總蛋白量》25%;物理性狀深黃色粉末狀固體。實施例2第一步發(fā)酵菌株選育1、菌株傳代同實施例一；2、將以上三種菌種在紫外線的照射下進行誘導將保存的菌種制作菌懸液,稀釋至l(T，在30cm處用功率為15W的紫外燈，波長為260nm，處理20s,處理后的菌懸液在營養(yǎng)瓊脂平板中35'C倒置培養(yǎng)48小時，選出生長速度快的菌落進行搖瓶實驗，觀察菌種生長速度，其余同實施例一；第二步復合菌種的液體高速培養(yǎng)a.按以下重量百分比稱取各菌種枯草芽孢桿菌35%、植物乳桿菌53%、啤酒酵母菌12%;b.乳酸菌和啤酒酵母菌的液體培養(yǎng)將按步驟a的比例稱取的植物乳桿菌和啤酒酵母菌，混合后在一起進行復合培養(yǎng)將混合菌苔按l:25的比例接種于121'C、45min高溫滅菌的液體培養(yǎng)基中，其余同實施例1;C.枯草芽孢桿菌的液體培養(yǎng)將稱去的枯草芽孢桿菌按1:25的比例接種于12rC、45min高溫滅菌的液體培養(yǎng)基中，發(fā)酵時通氣量維持在1:1.2，發(fā)酵時間35小時。上述步驟b中乳酸菌和啤酒酵母菌的液體培養(yǎng)基組成及重量百分比為糖蜜15%、酵母粉0.4%、硫酸鎂0.5%、硫酸銨0.7%、磷酸氫二鈉O.5%、尿素1%、無菌水81.9%.上述步驟c中枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基組成及重量百分比同實施例1;第三步菌種的固體擴大培養(yǎng)b.將步驟2復合培養(yǎng)的菌液混合后按1:25的比例接入12rC、45min高溫滅菌的固體擴大培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)基中添加0.1%的植酸質(zhì)作產(chǎn)物促進齊IJ，攪拌45min至均勻，倒入消毒雙層詞料袋中密封發(fā)酵，溫度32—35。C，時間8—10天；b、同實施例l;所述的步驟a的固體擴大培養(yǎng)基為清糠20%、大豆粉30%、糖蜜12%、玉米粉10%、磷酸二氫鉀1%、磷酸二氫鈉2%、硫酸鎂1%、尿素2%、0.1%的植酸質(zhì)、無菌水21.9%。第四步同實施例l:使用時按本制劑的10%與全價飼料90%比例充分攪拌均勻后即可飼喂。注意本品需存放于密封干燥處，避免與農(nóng)藥、強刺激物品等混合堆放，開封后三曰內(nèi)盡快使用，本產(chǎn)品在研發(fā)過程中經(jīng)2006年12月上海市農(nóng)科院畜牧研究所的對比試驗表明，使用本產(chǎn)品后提高保育仔豬日增重9.74%，改善保育仔豬飼料利用率7.77%，提高生長豬日增重22%，改善生長豬飼料利用率3.21%。2007年4月在上海交通大學農(nóng)業(yè)與生物學院養(yǎng)殖基地進行的應用試驗數(shù)據(jù)為豬35kg左右時的詞料消化率<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>豬70kg左右時飼料消化率<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>屠宰后數(shù)據(jù)為提高屠宰率1.82%、系水率7.48%、熟肉率8.52%<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>數(shù)據(jù)表明，本專利技術(shù)產(chǎn)品能顯著提高詞料利用率，降低抗營養(yǎng)因子對飼料營養(yǎng)的影響、提高動物的適口性和采食量，提高養(yǎng)殖動物的肉質(zhì)品質(zhì)。權(quán)利要求1.一種消除抗營養(yǎng)因子作用的微生物制劑，其特征在于，由以下重量百分比原料組成枯草芽孢桿菌28—35％、植物乳桿菌45—53％、啤酒酵母菌12—27％2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種消除抗營養(yǎng)因子作用的微生物制劑的制備方法，其特征在于，生產(chǎn)菌種通過射線誘導和生產(chǎn)性能試驗相結(jié)合，篩選產(chǎn)量高、產(chǎn)酶量大的生產(chǎn)菌種，生產(chǎn)工藝采用液體單獨培養(yǎng)和固體復合培養(yǎng)技術(shù)，培養(yǎng)基中添加產(chǎn)物促進劑，其生產(chǎn)工藝為第一步發(fā)酵菌株選育a.菌株傳代采用農(nóng)業(yè)部菌種保存中心提供的枯草芽孢桿菌菌株、植物乳桿菌和啤酒酵母菌，通過營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)，選育生長速度快、菌落特征明顯的菌種，在0'C—4'C溫度下保存菌種；b.將枯草芽孢桿菌菌株、植物乳桿菌和啤酒酵母菌分別在紫外線的照射下進行誘導，將保存的菌種制作菌懸液，稀釋至10—7，在30cm處用功率為15W的紫外燈，波長為260nm，處理15s—20s，處理后的菌懸液在營養(yǎng)瓊脂平板中溫度為3(TC—4(TC，倒置培養(yǎng)45小時一50小時，選出生長速度快的菌落進行搖瓶實驗，觀察菌種生長速度，活菌總數(shù)大于30億/ml，植物乳桿菌菌落直徑大于3ml，啤酒酵母菌直徑大于7ml，枯草芽孢桿菌直徑大于5mi的菌株在ot:—4t:溫度加以保存；c.生產(chǎn)性能試驗將三種菌種接種分別在液體營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為35。C一4(TC，在轉(zhuǎn)速為220轉(zhuǎn)/分一250轉(zhuǎn)/分的恒溫中進行恒溫培養(yǎng)，24小時一28小時后取樣，利用平板計數(shù)法進行菌落總數(shù)測定，菌落總數(shù)大于30億/ml的菌種可用于生產(chǎn)制種；d.生產(chǎn)菌種的制作將篩選出的枯草芽孢桿菌、植物乳桿菌、啤酒酵母菌分別轉(zhuǎn)接入裝有營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的茄子瓶中，在35'C—40'C溫度下培養(yǎng)45小時一50小時，待茄子瓶表面菌苔布滿，并白中帶黃時即可取出，然后放入2—6'C的冰箱中保存；第二步復合菌種的液體高速培養(yǎng)a.按權(quán)利要求1的重量百分比稱取各菌種；b.乳酸菌和啤酒酵母菌的液體培養(yǎng)將按步驟a的比例稱取的植物乳桿菌和啤酒酵母菌，混合后在一起進行復合培養(yǎng)將混合菌苔按l:20—25的比例接種于120—128'C、30min—45min高溫滅菌的液體培養(yǎng)基中，在發(fā)酵罐中攪拌25min—35min，其轉(zhuǎn)速為200—220r/min，攪拌均勻后放入消毒后的塑料桶中靜置5—7天，靜置過程中每天測定Ph值并釋放產(chǎn)出的氣體；發(fā)酵過程中抽樣3次，顯微鏡下檢測菌體生長情況和測定Ph值，當活菌總數(shù)達到40億/ml濃度和Ph值達到3.0-4.0時停止發(fā)酵；c.枯草芽孢桿菌的液體培養(yǎng)將枯草芽孢桿菌按1:20_25的比例接種于120°C_128°C、30min—45min高溫滅菌的液體培養(yǎng)基中，發(fā)酵時通氣量維持在l:1.0-1.2，發(fā)酵時間24—35小時；第三步菌種的固體擴大培養(yǎng)a.將步驟2復合培養(yǎng)的菌液混合后按1:20—25的比例接入12(TC—128。C、30min—45min高溫滅菌的固體擴大培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)基中添加0.08%_0.1%的植酸質(zhì)作產(chǎn)物促進劑,攪拌30—45min至均勻，倒入消毒雙層飼料袋中密封發(fā)酵，溫度32—35°C，時間8—10天；b、發(fā)酵過程中取樣三次，測定水分和Ph值，發(fā)酵結(jié)束后取樣，測定水分為35%-40%、Ph值為4.5—5.5;第四步干燥粉碎a.干燥:將步驟3發(fā)酵完全的產(chǎn)品按時間先后放入培養(yǎng)箱干燥，溫度控制在4(TC一45'C，時間14小時一16小時，干燥完成的物料水份控制在《12%;b.過篩將干燥后的物料通過60—80目的震動篩進行震動，過篩C.包裝將過篩后的物料裝入帶有內(nèi)袋的桶或袋中，扎緊袋口，系好標識牌，轉(zhuǎn)入成品庫有序堆放；取樣檢測，主要參數(shù)水份《12%、活菌數(shù)》50億/g、總蛋白量》25%;物理性狀深黃色粉末狀固體。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種消除抗營養(yǎng)因子作用的微生物制劑的制備方法，其特征在于，所述的步驟2中乳酸菌和啤酒酵母菌的液體培養(yǎng)基組成及重量百分比為糖蜜12—15%、酵母粉0.2-0.4%、硫酸鎂0.2—0.5%、硫酸銨0.5-0.7%、磷酸氫二鈉O.2-0.5%、尿素0.8-1%、無菌水81.9-86.1%。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種消除抗營養(yǎng)因子作用的微生物制劑的制備方法，其特征在于，所述的步驟2中枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基組成及重量百分比可溶性淀粉2%、豆粕粉1.2%、玉米粉3%、磷酸二氫鉀0.4%、磷酸二氫鈉1.6%、硫酸鎂O.6%、尿素1.5%、消泡劑O.5%、.無菌水89.2%。5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種消除抗營養(yǎng)因子作用的微生物制劑的制備方法，其特征在于，所述的步驟3中的固體擴大培養(yǎng)基為無菌水再加清糠、大豆粉、糖蜜、玉米粉、磷酸二氫鉀、磷酸二氫鈉、硫酸鎂、尿素、植酸質(zhì)中的至少四種混合物組成，其重量百分配比為清糠18—20%、大豆粉25—30%、糖蜜8—12%、玉米粉8—10%、磷酸二氫鉀0.5—1%、磷酸二氫鈉1一2%、硫酸鎂0.4—1%、尿素1一2%、0.08—0.1%的植酸質(zhì)、無菌水21.9—38.2%。全文摘要本發(fā)明涉及一種消除抗營養(yǎng)因子作用的微生物制劑，其特征在于，由以下重量百分比原料組成枯草芽孢桿菌28-35％、植物乳桿菌45-53％、啤酒酵母菌12-27％；其制備方法為生產(chǎn)菌種通過射線誘導和生產(chǎn)性能試驗相結(jié)合，篩選產(chǎn)量高、產(chǎn)酶量大的生產(chǎn)菌種，生產(chǎn)工藝采用液體單獨培養(yǎng)和固體復合培養(yǎng)技術(shù)，培養(yǎng)基中添加產(chǎn)物促進劑，使產(chǎn)品中富含大量有益活菌和酶、肽、多糖及氨基酸等活性代謝產(chǎn)物，在飼料原料和全價飼料中添加后，能顯著消除飼料中抗營養(yǎng)因子對營養(yǎng)成分的影響，改善飼料適口性，提高采食量，增強養(yǎng)殖動物的抗應激及免疫力，提高群體整齊度，并改善生長速度和飼料利用率，降低養(yǎng)殖成本。文檔編號A23K1/16GK101371682SQ20071004509公開日2009年2月25日申請日期2007年8月21日優(yōu)先權(quán)日2007年8月21日發(fā)明者瀚江申請人:上海創(chuàng)博生態(tài)工程有限公司