專利名稱：：新型豬用生長調(diào)節(jié)劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種畜禽伺養(yǎng)飼料添加劑的生產(chǎn)方法，特別是一種專用于食用豬生長調(diào)節(jié)劑的制備方法。二
背景技術(shù)：
：目前，我國養(yǎng)豬生產(chǎn)、尤其是地方品種豬生產(chǎn)中普遍存在生長速度慢、胴體背膘過厚、瘦肉率低等問題，嚴(yán)重制約我國養(yǎng)豬業(yè)的高效發(fā)展。因此，提高地方品種豬的生長速度、減少脂肪過度沉積、提高胴體品質(zhì)是養(yǎng)豬生產(chǎn)中亟待解決的重大問題。近年來，多種藥物添加劑、激素類生長物質(zhì)的過度和不規(guī)范使用，雖然在一定程度上提高了養(yǎng)豬生產(chǎn)的經(jīng)濟(jì)效益，但其在豬肉產(chǎn)品中的殘留已嚴(yán)重威脅著人類的健康，因此生豬的健康養(yǎng)殖和安全優(yōu)質(zhì)豬肉產(chǎn)品的生產(chǎn)是目前養(yǎng)豬業(yè)努力實(shí)現(xiàn)的目標(biāo)。環(huán)腺苷一磷酸(adenosine-3，，5，-monophosphate,cAMP)是動(dòng)物體內(nèi)天然存在的、對生長和代謝具有重要調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞因子，由于其只能在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用，因而難以在生產(chǎn)中應(yīng)用。二
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種新型豬用生長調(diào)節(jié)劑的制備方法，利用研究發(fā)現(xiàn)的DBC(N6-2'-O-dibutyryladenosine-3'，5，-monophosphate)屬cAMP的衍生物，具有親脂性，可通過細(xì)胞膜在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用，與cAMP具有相同的生理作用和作用機(jī)制。外源的DBC在體內(nèi)發(fā)揮作用后，多余的可被磷酸二酯酶降解，不會在動(dòng)物體內(nèi)殘留，與其他化學(xué)藥物添加劑相比具有重高的安全性。通過制備DBC制劑與輔劑配合研制成可經(jīng)飼料添加或皮下注射的制劑，并經(jīng)動(dòng)物試驗(yàn)驗(yàn)證具有穩(wěn)定性好、安全性高、效果明顯的新型豬用生長調(diào)節(jié)劑。一種新型豬用生長調(diào)節(jié)劑的制備方法，制備步驟如下(1)制備cAMP以ATP為原料，加入Ba(0H)2，溶于蒸餾水中，于96。C回餾加熱40min，然后迅速冷卻至室溫，離心后取上清液即為cAMP樣品；(2)cAMP成鹽cAMP、0.4mol/L三乙胺和無水吡啶按1:7.2:5.3(w/v/v)比例加入，冰凍下在cAMP溶液中加入0.4mol/L三乙胺溶液，室溫減壓抽去過剩的三乙胺至無臭味為止，在55。C溫度下，繼續(xù)減壓濃縮成黃色油狀物，加入無水吡啶，振搖脫水，在55。C下繼續(xù)減壓抽去吡啶，再用無水吡啶重復(fù)脫水1次，于55"C減壓抽干至成海綿狀物，干燥后即得cAMP三乙胺鹽；(3)?；退鈉AMP三乙胺鹽、重蒸丁酐、無水吡啶和蒸餾水按1:7.5:15:6.9(w/w/v/v)比例加入，在cAMP三乙胺鹽中加入無水吡啶和重蒸丁酐，振搖，置35-4(TC恒溫室密閉避光反應(yīng)一周，反應(yīng)完全后取出反應(yīng)液，冷卻至l(TC以下，緩慢加入蒸餾水，并使水解時(shí)溫度保持在l(TC以下，結(jié)束后將水解液置冰浴中放置使反應(yīng)完全，然后在5(TC以下減壓濃縮，加約2倍量乙醚混勻，于2(TC下用約3倍量蒸餾水分7次抽提，去乙醚層，合并水層，在40。C以下減壓濃縮使成黃色糖漿狀物，再用乙醚提取2次，室溫抽去剩余乙醚，用無水乙醇溶解，即得DBC。(4)制備DBC鈉鹽DBC、氯化鈉、無水乙醚和無水乙醇按1:0.265:9.5:0.1(w/v/v/v)比例加入，在DBC中加入氯化鈉溶液，充分混勻后室溫減壓濃縮至干，加l/5無水乙醚濕潤，抽干后干燥過夜，次日用無水乙醇溶解，在冰浴中加入另4/5的無水乙醚，置冷室l小時(shí)后過濾，濾餅用無水乙醚洗滌，減壓干燥后即得DBC鈉鹽。(5)DBC結(jié)構(gòu)的鑒定經(jīng)質(zhì)譜掃描分析鑒定，產(chǎn)品的分子式為C18H23N508PNa，分子量為490.0。(6)DBC的性質(zhì)DBC鈉鹽為白色結(jié)晶狀粉末，可溶于水和乙醇，不溶于乙醚；對熱和酸堿較穩(wěn)定，加熱至50-85。C其含量不受影響，加熱至90。C以上開始受到破壞，加熱至IO(TC其含量仍保留75%，加熱至ll(TC以上時(shí)明顯受到破壞，含量降到20%以下；在pH3-IO范圍內(nèi)比較穩(wěn)定，在pH3-5范圍內(nèi)表現(xiàn)出最高的活性。本發(fā)明將DBC鈉鹽與不同輔劑按不同比例混合后可經(jīng)詞料添加和皮下注射的DBC生長調(diào)節(jié)劑。經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明飼料添加和皮下注射DBC調(diào)節(jié)劑可被動(dòng)物有效吸收，穩(wěn)定性好，顯著提高豬的生長性能、改善胴體品質(zhì)，并且不會在動(dòng)物體內(nèi)殘留，與其他化學(xué)藥物添加劑相比具有重高的安全性。三具體實(shí)施例方式一種新型豬用生長調(diào)節(jié)劑的制備方法，其步驟如下(1)制備cAMP以ATP為原料，加入Ba(0H)2，溶于蒸餾水中，于96。C回餾加熱40min，然后迅速冷卻至室溫，離心后取上清液即為cAMP樣品；(2)cAMP成鹽cAMP、0.4mol/L三乙胺和無水吡啶按1:7.2:5.3(w/v/v)比例加入，冰凍下在cAMP溶液中加入0.4mol/L三乙胺溶液，室溫減壓抽去過剩的三乙胺至無臭味為止，在55"溫度下，繼續(xù)減壓濃縮成黃色油狀物，加入無水吡啶，振搖脫水，在55。C下繼續(xù)減壓抽去吡啶，再用無水吡啶重復(fù)脫水1次，于55"減壓抽干至成海綿狀物，干燥后即得CAMP三乙胺鹽；(3)酰化和水解cAMP三乙胺鹽、重蒸丁酐、無水吡啶和蒸餾水按1:7.5:15:6.9(w/w/v/v)比例加入，在cAMP三乙胺鹽中加入無水吡啶和重蒸丁酐，振搖，置35-40。C恒溫室密閉避光反應(yīng)一周，反應(yīng)完全后取出反應(yīng)液，冷卻至l(TC以下，緩慢加入蒸餾水，并使水解時(shí)溫度保持在l(TC以下，結(jié)束后將水解液置冰浴中放置使反應(yīng)完全，然后在50。C以下減壓濃縮，加約2倍量乙醚混勻，于20。C下用約3倍量蒸餾水分7次抽提，去乙醚層，合并水層，在4(TC以下減壓濃縮使成黃色糖漿狀物，再用乙醚提取2次，室溫抽去剩余乙醚，用無水乙醇溶解，即得DBC。(4)制備DBC鈉鹽DBC、氯化鈉、無水乙醚和無水乙醇按1:0.265:9.5:0.1(w/v/v/v)比例加入，在DBC中加入氯化鈉溶液，充分混勻后室溫減壓濃縮至干，加l/5無水乙醚濕潤，抽干后干燥過夜，次日用無水乙醇溶解，在冰浴中加入另4/5的無水乙醚，置冷室l小時(shí)后過濾，濾餅用無水乙醚洗滌，減壓干燥后即得DBC鈉鹽。(5)根據(jù)詞料添加和皮下注射兩種不同的使用方法，選擇不同的輔劑按比例與DBC混合，制成不同的制劑。飼料添加DBC調(diào)節(jié)劑DBC鈉鹽(固體)輔劑1=1:5(w/w)，混勻后添加于詞料中使用，為白色粉狀制劑。皮下注射DBC調(diào)節(jié)劑DBC鄰鹽(液體)輔劑2=l:2(v/v)，混勻后分裝滅菌，皮下注射使用，為無色透明液體。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)1、DBC的吸收特性選擇斷奶仔豬12頭，公母各一半，隨機(jī)分為2組，每組6頭。第一組在基礎(chǔ)日糧中添加DBC制劑20ppm，第二組皮下注射DBC制劑1.Omg/kg體重。分別于采食和注射后0.5h、1.Oh、3.Oh、5.Oh、8.Oh、12.Oh、17.Oh、24.Oh、34.Oh、48.Oh、67,Oh、72.Oh、96.Oh前腔靜脈采血5ml，測定血漿中DBC的含量。結(jié)果表明，飼料添加后3小時(shí)血液中DBC達(dá)到最大濃度，為84.75pmol/ml;皮下注射后2小時(shí)血液中DBC達(dá)到最大濃度，為92.96pmol/ml;之后血液中DBC的濃度逐漸下降，在96h達(dá)到最低水平。證明飼料添加和皮下注射DBC可被動(dòng)物有效吸收。2、DBC對豬生長性能的調(diào)控選擇30kg體重的斷奶仔豬42頭，隨機(jī)分為7組，每組6頭。I、II和III組分別皮下注射DBC制劑0.5、1.0和1.5mg/kg體重；IV、V和V工組分別飼料添加DBCIO、20和30ppm，VH為對照組，飼喂基礎(chǔ)日糧。試驗(yàn)至90kg體重時(shí)結(jié)束。DBC對豬生長性能的調(diào)節(jié)見表1。表lDBC豬生長性能的調(diào)節(jié)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注同行肩標(biāo)小寫字母不同者差異顯著(p<0.05)。從表中結(jié)果可見，n、m組和v、vi組比vn組日增重分別提高ii.83%、i3.12%(P<0.05)和11.21%、12.24%(P<0.05)，II、III組比I組日增重分別提高8.71%和9.92%(P<0.05)，V、Vl組比IV組日增重分別提高5.04y。和5.43%(P<0.05)。n、III組和V、VI組比VII組料重比分別降低18.73%、14.83呢(P〈0.05)和19.62%、18.73%(P<0.05)。證明飼料添加和皮下注射DBC制劑可顯著提高豬的生長性能，且以皮下注射l.Omg/kg體重和詞料添加20ppm作用效果最好，兩種使用方法對豬生長性能的調(diào)節(jié)無顯著差異。3、DBC對豬胴體組成的影響試驗(yàn)至90kg體重結(jié)束時(shí)屠宰，通過屠宰試驗(yàn)測定豬的胴體組成。DBC對豬胴體組成的影響見表2。表2DBC對豬胴體組成的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注同行肩注小寫字母不同者差異顯著(p<0.05)。表2的結(jié)果表明，II、III組和V、VI組比VII組眼肌面積分別提高31.99%、35.97%(P〈0.05)和36.39%、37.15%(P<0.05)，背膘厚分別降低19.95%、21.21%(P<0.05)和20.97%、20.50%(P〈0.05)，瘦肉率分別提高12.42%、13.87%(P〈0.05)和11.94%、15.52%(P<0.05)。證明DBC制劑能顯著改善豬的胴體組成，且以皮下注射1.Omg/kg體重和飼料添加20ppm效果最好，兩種使用方法對豬胴體組成的影響無顯著差異。權(quán)利要求1、一種新型豬用生長調(diào)節(jié)劑的制備方法，其特征在于制備步驟如下(1)制備cAMP以ATP為原料，加入Ba(OH)2，溶于蒸餾水中，于96℃回餾加熱40min，然后迅速冷卻至室溫，離心后取上清液即為cAMP樣品；(2)cAMP成鹽cAMP、0.4mol/L三乙胺和無水吡啶按1∶7.2∶5.3(w/v/v)比例加入，冰凍下在cAMP溶液中加入0.4mol/L三乙胺溶液，室溫減壓抽去過剩的三乙胺至無臭味為止，在55℃溫度下，繼續(xù)減壓濃縮成黃色油狀物，加入無水吡啶，振搖脫水，在55℃下繼續(xù)減壓抽去吡啶，再用無水吡啶重復(fù)脫水1次，于55℃減壓抽干至成海綿狀物，干燥后即得cAMP三乙胺鹽；(3)?；退鈉AMP三乙胺鹽、重蒸丁酐、無水吡啶和蒸餾水按1∶7.5∶15∶6.9(w/w/v/v)比例加入，在cAMP三乙胺鹽中加入無水吡啶和重蒸丁酐，振搖，置35-40℃恒溫室密閉避光反應(yīng)一周，反應(yīng)完全后取出反應(yīng)液，冷卻至10℃以下，緩慢加入蒸餾水，并使水解時(shí)溫度保持在10℃以下，結(jié)束后將水解液置冰浴中放置使反應(yīng)完全，然后在50℃以下減壓濃縮，加約2倍量乙醚混勻，于20℃下用約3倍量蒸餾水分7次抽提，去乙醚層，合并水層，在40℃以下減壓濃縮使成黃色糖漿狀物，再用乙醚提取2次，室溫抽去剩余乙醚，用無水乙醇溶解，即得DBC。(4)制備DBC鈉鹽DBC、氯化鈉、無水乙醚和無水乙醇按1∶0.265∶9.5∶0.1(w/v/v/v)比例加入，在DBC中加入氯化鈉溶液，充分混勻后室溫減壓濃縮至干，加1/5無水乙醚濕潤，抽干后干燥過夜，次日用無水乙醇溶解，在冰浴中加入另4/5的無水乙醚，置冷室1小時(shí)后過濾，濾餅用無水乙醚洗滌，減壓干燥后即得DBC鈉鹽。全文摘要本發(fā)明公開一種新型豬用生長調(diào)節(jié)劑的制備方法中是以ATP為原料，加入Ba(OH)₂溶于蒸餾水中，于96℃回餾加熱40min，冷卻離心后得cAMP；再將cAMP、0.4mol/L三乙胺和無水吡啶按比例生成cAMP三乙胺鹽，經(jīng)?；退庵苽涑鯠BC；DBC、氯化鈉、無水乙醚和無水乙醇按比例生成DBC鈉鹽。將DBC鈉鹽與不同輔劑按比例混合制備成飼料添加和皮下注射的DBC生長調(diào)節(jié)劑。經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明飼料添加和皮下注射DBC調(diào)節(jié)劑可被動(dòng)物有效吸收，穩(wěn)定性好，顯著提高豬的生長性能、改善胴體品質(zhì)，并且不會在動(dòng)物體內(nèi)殘留，與其他化學(xué)藥物添加劑相比具有重高的安全性。文檔編號A23K1/16GK101429223SQ20071006635公開日2009年5月13日申請日期2007年11月5日優(yōu)先權(quán)日2007年11月5日發(fā)明者勇劉,曦張,程美玲,高士爭申請人:云南農(nóng)業(yè)大學(xué)