專利名稱：：病原體誘導(dǎo)合成啟動子的制作方法病原體誘導(dǎo)合成啟動子本發(fā)明涉及適于調(diào)節(jié)核酸轉(zhuǎn)錄并包括最小啟動子的病原體-誘導(dǎo)合成啟動子。此外，本發(fā)明還涉及轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞以及轉(zhuǎn)基因植物。本發(fā)明還涉及產(chǎn)生病原體抗性植物的方法。已知用于產(chǎn)生針對病原體例如真菌、病毒、細(xì)菌和線蟲的具有抗性的植物的不同方法。這些方法中的一種使用植物的過敏反應(yīng)(HR)，其中壞死出現(xiàn)在病原體和植物的直接接觸部位。作為HR的結(jié)果，廣譜的病原體防御機(jī)制在相鄰細(xì)胞中被觸發(fā)，這預(yù)防病原體在植物組織中的進(jìn)一步繁殖。所述HR可以在效應(yīng)基因表達(dá)例如病原體的無毒性基因以及與相應(yīng)抗性基因(R-基因)產(chǎn)物的相互作用后發(fā)生。本文中R-基因可以已經(jīng)存在于植物中或者視情況而定可以利用基因技術(shù)方法被導(dǎo)入各自的植物基因組中(Stuiver等1998，Keller等，1999,Belbahri等，2001)。除此以外，R-基因的過表達(dá)或者自體活化(Autoaktivierung)可以觸發(fā)HR(Tao等，2000,Tang等，1999,Bendahmane等，2002，Howies等，2005)。通過R-基因的過表達(dá)，閾值被超過，這導(dǎo)致信號級聯(lián)的起始，而所述信號級聯(lián)通常只有在病原體或者視情況而定無毒性基因產(chǎn)物存在時才被起始。通過觸發(fā)或者激活這種級聯(lián)，可以獲得廣泛有效的病原體抗性(Oldroyd和Staskawicz，1998,Tang等，1999,Tao等，2000,Howies等，2005)。那些R-基因的特征在于是自體活化的R-基因，所述R-基因被修飾到這樣的程度以致病原體/無毒性基因產(chǎn)物的存在對于信號級聯(lián)的起始不是必需的，并且同時，與非修飾形式相比降低水平的表達(dá)足以實(shí)現(xiàn)信號級聯(lián)的起始。Stuiver等(1998)示出了用來自致植物病真菌黃枝孢霉(C/acfo^on'wm/w/wm)的avr9基因在來自馬鈴薯的病原體誘導(dǎo)Gstl-啟動子的控制下轉(zhuǎn)化帶有相應(yīng)Cf9-基因的番茄植物產(chǎn)生了廣泛有效的真菌抗性。在用來自隱地疫霉(Pc7Ptogea)的激發(fā)子cryptogen或者來自致植物病細(xì)菌青枯病菌(ia/stom'(3so/awacear謂)的細(xì)菌激發(fā)子popA轉(zhuǎn)化煙草(Mcof/a"ato6ac畫)后能夠在煙草中實(shí)現(xiàn)抗煙草黑脛病菌CP/^o//zf/zoraparas衍cavw"/co"a"ae)的抗性。兩種基因均在來自煙草的病原體誘導(dǎo)啟動子hsr203J的控制下(Keller等，1999，Belbahri等，2001)。HR觸發(fā)系統(tǒng)需要對感染部位的效應(yīng)基因表達(dá)的嚴(yán)格控制。在表達(dá)不受控制的情況下，所述效應(yīng)基因的表達(dá)對植物生長進(jìn)而對園藝作物的收成造成負(fù)面影響(Stuiver和Custers,2001)。但是通過選擇合適的病原體誘導(dǎo)啟動子可以實(shí)現(xiàn)受控表達(dá)。但是，這些應(yīng)該是在非感染條件下沒有表達(dá)或者只有很少的表達(dá)，但在感染情況下造成感染部位顯著更高的表達(dá)。在用來自亞麻(丄/肪/ww'to他Wmww)的L6銹菌抗性基因的兩種不同自體活化形式轉(zhuǎn)化受天然Fisl啟動子(由來自亞麻的銹菌誘導(dǎo))控制的亞麻后，可以觀察到兩種表型。一方面，正常生長的植物未顯示提高的抗病原體抗性，另一方面，矮生植物具有廣泛的病原體抗性(Howles等,2005)。這些結(jié)果顯示，根據(jù)使用的自體活化R-基因的形式，結(jié)果可以是已經(jīng)超過信號級聯(lián)誘導(dǎo)閾值的啟動子活性，而在表型不顯著的植物中Fisl-啟動子的誘導(dǎo)不足以達(dá)到這個閾值。因此天然Fisl-啟動子的特異性不足以實(shí)現(xiàn)廣泛有效的病原體抗性并且對植物生長無負(fù)面影響。天然病原體誘導(dǎo)啟動子經(jīng)常顯示非特異活性，并被多種刺激激活，因此它們用于上述效應(yīng)基因表達(dá)的用途是不現(xiàn)實(shí)的，因?yàn)樵诜歉腥緱l件下也可能存在HR-觸發(fā)。啟動子的這種"泄漏(Undichtigkeit)"導(dǎo)致植物生長的損害，從而導(dǎo)致園藝作物收成的降低。因此開發(fā)了合成啟動子，它含有來自與病原體誘導(dǎo)相關(guān)的天然病原體誘導(dǎo)啟動子的序列基序(順式調(diào)控元件)。相反，去除針對其他剌激的序列基序。順式調(diào)控元件被克隆到最小啟動子的上游，從而產(chǎn)生功能性啟動子，所述功能性啟動子與天然啟動子相比顯示提高的特異性，所述天然啟動子分離自相應(yīng)的順式調(diào)控元件(Rushton等，2002)。作為雙子葉植物的最小啟動子，使用花椰菜花葉病毒35S-基因的-46到+8區(qū)域。除此之外，來自天然啟動子(從中克隆出相應(yīng)的順式調(diào)控元件)的最小啟動子的用途是已知的(Perl-Treves等，2004)。對于單子葉植物，描述了來自稻Actl基因的最小啟動子的用途(Lii等，2000)。盡管描述的合成啟動子比天然啟動子有改進(jìn)，但是這些合成啟動子甚至在非感染條件下也顯示本底活性。這些本底活性在不同植物類型之間各不相同。因此，迄今為止所有被檢查的植物類型中都可以檢測到病原體可誘導(dǎo)性，但是啟動子的誘導(dǎo)強(qiáng)度和絕對活性各不相同。在未感染組織存在過強(qiáng)本底活性的情況下，只檢測到很低的病原體可誘導(dǎo)性，所述病原體可誘導(dǎo)性表示為感染組織中的啟動子活性除以未感染組織中的啟動子活性得到的商。迄今為止，只有使用的順式調(diào)控元件被認(rèn)為造成合成啟動子的本底活性水平。這些對啟動子的強(qiáng)度有很大影響(Rushton等，2002)。迄今為止幾乎沒有對最小啟動子的影響進(jìn)行研究。根據(jù)文獻(xiàn)記載，最小啟動子對于啟動子活性的調(diào)節(jié)只有非常小的影響(Singh,1998)。但是Bhuliar等(2003)檢測到當(dāng)最小啟動子(-46至U+1)與異源植物最小啟動子交換時，35S-啟動子的啟動子活性明顯降低。這些差異歸因于TATA盒的不同序列，但是按照他們的觀點(diǎn)，最小啟動子TATA盒的側(cè)翼區(qū)與啟動子活性無關(guān)。因此本發(fā)明的任務(wù)是提供具有低本底活性的病原體誘導(dǎo)合成啟動子。根據(jù)本發(fā)明，所述任務(wù)的解決方案通過具有最小啟動子的病原體誘導(dǎo)合成啟動子來實(shí)現(xiàn)，其中最小啟動子包括序列基序a)dbrmwa或者b)twcccmt其位于TATA區(qū)的下游并在最小啟動子的轉(zhuǎn)錄點(diǎn)前，待調(diào)控的核酸的轉(zhuǎn)錄在所述轉(zhuǎn)錄點(diǎn)開始。其中序列基序dbrmwa主要適于雙子葉植物，而序列基序twcccmt主要適于單子葉植物。本文中使用的序列基序的符號具有下列含義d=核苷酸a或者g或者t/ub=核苷酸c或者g或者t/ur=核苷酸g或者am=核苷酸a或者cw=核苷酸a或者t/ua=核苷酸at=核苷酸t(yī)c=核苷酸c就本發(fā)明來說，"最小啟動子"是啟動子功能必需的啟動子的DNA序列。常規(guī)轉(zhuǎn)錄因子例如TFII-D、TFII-A、TFII-B、TFII-E和TFII-F能夠結(jié)合該DNA序列，并形成用于RNA-聚合酶11/TFII-F復(fù)合物結(jié)合的平臺。因?yàn)镈NA向mRNA的轉(zhuǎn)錄在該區(qū)域開始，轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)(TS)位于最小啟動子內(nèi)并被標(biāo)為位置+1。所述最小啟動子包括TS，并且可以延伸例如從位置-50到位置+15。所謂的TATA盒經(jīng)常在位置-30，但它不是在所有的啟動子中均存在。TATA盒是胸腺嘧啶和腺嘌呤堿基序列區(qū)域。TATA盒是TATA盒結(jié)合蛋白(TBP)的結(jié)合部位。表征為"合成啟動子"的是那些在自然界不存在的啟動子，由多個元件組裝并包含最小啟動子以及最小啟動子的上游，至少一種順式調(diào)控元件，其作為特定轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合部位。合成啟動子根據(jù)要求進(jìn)行設(shè)計，并被不同的因子誘導(dǎo)或者抑制。啟動子的"衍生物"是該啟動子的縮短或者延長或者部分相同的形式，或者是具有相同、修飾或者單獨(dú)特性的同系物。本文的表述"同源性"表示基于DNA的至少70%的同源性，這可以通過已知的方法例如電腦支持的序列比對來確定(Altschul，S.F.等，1990)。在瞬時生物轉(zhuǎn)化后，本發(fā)明的病原體誘導(dǎo)合成啟動子導(dǎo)致相應(yīng)植物的葉組織中基底活性相對于通常使用的啟動子降低，所述啟動子具有最小啟動子例如雙子葉植物中的35S-最小啟動子和單子葉植物中的玉米-ubil-最小啟動子。除此之外發(fā)現(xiàn)在本發(fā)明病原體誘導(dǎo)合成啟動子中誘導(dǎo)率更高。本發(fā)明的病原體誘導(dǎo)合成啟動子因此可用于產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因植物，所述轉(zhuǎn)基因植物具有廣泛抗多種病原體例如真菌、卵菌、細(xì)菌、病毒、昆蟲和線蟲的抗性。序列基序dbrmwa和twcccmt按照正義方向位于TATA盒和轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)之間的編碼鏈上，并且可能存在兩次或者更多次。最小啟動子的優(yōu)選序列如SEQIDNOS:1到9所示。用于產(chǎn)生病原體誘導(dǎo)合成啟動子的順式調(diào)控元件主要是那些存在于天然病原體誘導(dǎo)啟動子中并且引起病原體誘導(dǎo)的元件。Rushton等(2002)描述了它們的鑒定。利用本發(fā)明最小啟動子產(chǎn)生合成啟動子的優(yōu)選順式調(diào)控元件在WOOO/29592中也有描述。根據(jù)WOOO/29592提及的順式調(diào)控元件，D盒(SEQIDNO:IO)是尤其合適的，特別是在組合2xS/2xD(SEQIDNO:ll)以及Gstl-元件中，優(yōu)選在組合4xGstl(SEQIDNO:12)中。優(yōu)選的順式元件組合一般包括D盒(SEQIDNO:10)與S盒或者視情況而定Gstl-元件的組合。除了上面提及的組合2xS/2xD(SEQIDNO:11)，尤其優(yōu)選的是組合2xS/4xD(SEQIDNO:13);4xS/2xD(SEQIDNO:14)和2xGstl/2xD(SEQIDNO:15)。在用致病疫霉(尸/^o//^ora/"/^to"s)感染后的轉(zhuǎn)基因馬鈴薯中，2xS/4xD元件(SEQIDNO:13)與SEQIDNO:2所示最小啟動子的組合與非感染對照相比顯示報告基因活性平均提高253,000倍。如果元件4xS/2xD(SEQIDNO:14)被克隆到最小啟動子(SEQIDNO:2)前，可以檢測到報告基因活性平均增加2,892倍。利用元件2xGstl/2xD(SEQIDNO:15)，與對照相比平均增加2,967倍。利用本發(fā)明的啟動子可以產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞，其可以再生成具有對病原體具有改良防御特性的完整植物。本發(fā)明的啟動子同樣也可以被包含在這類轉(zhuǎn)基因植物的種子中。本發(fā)明不限于特定的植物類型。本發(fā)明因此涉及產(chǎn)生具有抗病原體抗性的植物的方法，其中適于產(chǎn)生病原體抗性的基因被導(dǎo)入植物細(xì)胞，所述基因在病原體誘導(dǎo)合成啟動子的控制下，隨后該植物細(xì)胞再生成植物，所述方法特征在于所述病原體誘導(dǎo)合成啟動子是如上所述的病原體誘導(dǎo)合成啟動子。實(shí)施例圖1顯示具有保守的TATA區(qū)和dbrmwa-基序以及用于克隆到質(zhì)粒pMS231uc+的切割位點(diǎn)Pstl和Xhol的雙子葉植物優(yōu)選最小啟動子(SEQIDNO:1到7)之間的序列比較。圖2顯示優(yōu)選用于單子葉植物的最小啟動子(SEQIDNO:8和9)之間的序列比較，所述最小啟動子用于小麥葉子的瞬時轉(zhuǎn)化。除TATA區(qū)之外，序列基序twcccmt也被證明是保守區(qū)?？梢允境鲎钚幼覵tGst(SEQIDNO:6)，NtTGAA(SEQIDNO:5),StPSBR(SEQIDNO:7)，NpCABE(SEQIDNO:2),NtRBS(SEQIDNO:3)，NpATP2(SEQIDNO:l)和Nt5EAS(SEQIDNO:4)顯示比35S-最小啟動子明顯降低的活性(<70%)。圖5顯示未感染轉(zhuǎn)基因馬鈴薯植物平均報告基因活性的概述，所述馬鈴薯植物具有克隆到作為報告基因的北美螢火蟲(P/^/m^/^ra叫熒光素酶基因前的包含4xGstl元件(SEQIDNO:12)和指定最小啟動子組成的合成啟動子(RLl^相對光單位)。具有最小啟動子(其具有序列基序dbrmwa)的穩(wěn)定轉(zhuǎn)基因株與35S-最小啟動子相比顯示在受控條件下報告基因的表達(dá)明顯降低。利用NpATP2基因(SEQIDN0:l)的最小啟動子獲得最低的平均活性。在這些植物中，只測量到35S-最小啟動子平均活性的9.7。/。。利用最小啟動子StPSBR(SEQIDNO:7)、NtTGAA(SEQIDNO:5)或者StGst(SEQIDNO:6)測量到35S-最小啟動子活性的18%，利用NtRBS-最小啟動子(SEQIDNO:3)是26°/。，利用NpCABE-最小啟動子(SEQIDNO:2)是39%和利用Nt5EAS-最小啟動子(SEQIDNO:4)是41%。對于普通技術(shù)人員來說，用本發(fā)明啟動子制備轉(zhuǎn)化植物的合適構(gòu)建體是毫無問題的。因此例如可以產(chǎn)生雙元載體p4xGstl-luc-kan(圖8)，它被用于馬鈴薯植物品種"Baltica"的穩(wěn)定轉(zhuǎn)化。該載體是雙元載體pGPTV的衍生物(Becker等，1992)。雙元載體p4xGstlluc-kan載有在合成啟動子4xGstl:35S最小啟動子控制下的北美螢火蟲熒光素酶基因(Rushton等，2002)。f吏用根癌農(nóng)桿菌(y4gro6ac/e廠/w附/w/w咖cz.^w)nopalinsynthase基因的終止子作為質(zhì)粒的終止序列。上述表達(dá)盒與用作選擇標(biāo)記的新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因(nptll)的功能表達(dá)盒均位于T-DNA上。新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶賦予轉(zhuǎn)基因植物抗卡那霉素或者巴龍霉素的抗性。為了將35S-最小啟動子與上:述最小啟動子交換，利用XhoI/SalI消化雙元載體p4xGstlluc-kan，從而去:除35S-最小啟動子，但是Gstl元件的四聚體仍保持完整。借助Klenow聚合酶和dNTP填充Sail切割位點(diǎn)以獲得平端。克隆入質(zhì)粒pMS231uc+的最小啟動子利用Pdil/Xho1消化切割并連接入所述雙元載體，隨后轉(zhuǎn)化大腸桿菌(Eco//)。具有所述新序列的雙元載體被轉(zhuǎn)化入農(nóng)桿菌(Jgra&c^/wm)型GV3101::pMP90(Koncz和Schell，1986)(An,1987)，并利用抗生素卡那霉素(50mg/l)進(jìn)行選擇。使用轉(zhuǎn)基因農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化"Baltica"型馬鈴薯(Dietze等，1995)。圖4顯示具有包含4xGstl元件(SEQIDNO:12)和指定最小啟動子的合成啟動子的穩(wěn)定轉(zhuǎn)基因馬鈴薯植物體外感染后各種誘導(dǎo)概述。在體外用致病疫霉的游動孢子懸液感染植物。在接種后的不同時間取出體外植物的葉樣品，測定樣品重量并添加10倍體積的lxCCLR緩沖液(Promega,Mannheim)。借助于RIA/90勻漿器(IKALabortechnik，Staufen)將所述材料在冰上于緩沖液中勻漿。通過〉10，000xg離心10分鐘澄清所述勻漿，在光度計管中用50pl底物L(fēng)AR(Promega,Mannheim)懸浮lOpl上清，并在光度計(Sirius，BertholdDetectionSystemGmbH，Pforzheim)上測定光發(fā)射，表示為熒光素酶活性值。為了對照或者比較，在相同條件下培養(yǎng)的體外植物代替游動孢子使用水進(jìn)行假處理。在5個獨(dú)立株中被感染株的熒光素酶活性除以假處理變體的商的平均值指示感染誘導(dǎo)合成啟動子。由圖7可以看出，使用35S-最小啟動子，在感染72小時后熒光素酶活性的最大誘導(dǎo)只有10倍。相反所有新的最小啟動子顯示明顯提高的誘導(dǎo)。利用StPSBR最小啟動子(SEQIDNO:7)感染72小時后達(dá)到395倍的感染后最強(qiáng)誘導(dǎo)。通常，與35S-最小啟動子相比，在誘導(dǎo)后72小時通過使用具有StGst最小啟動子(SEQIDNO:6)的新的最小啟動子的誘導(dǎo)可以提高3.5倍，具用StPSBR最小啟動子(SEQIDNO:7)的是39.5倍。有趣的是，在病原體誘導(dǎo)后的誘導(dǎo)動力學(xué)中最小啟動子之間存在明顯差異。盡管使用35S-最小啟動子在誘導(dǎo)后72小時測得最顯著的誘導(dǎo)，但這也適用于StPSBR，NtTGAA，StGst，NtRBS以及NpATP2最小啟動子。對于NpCABE和Nt5EAS啟動子比較起來在時間間隔9己經(jīng)檢測到強(qiáng)活化，并且在剩余的試驗(yàn)期間誘導(dǎo)大致保留在已獲得的水平。新的最小啟動子優(yōu)選與順式元件組合2xS/2xD融合。因此，用雙元載體p2xS/2xDluc-kan、p2xS/2xDNpCABEluc-kan和p2xS/2xDNtTGAAluc-kan穩(wěn)定轉(zhuǎn)化馬鈴薯植物。如下產(chǎn)生所述雙元載體，來自上述具有新的最小啟動子和4xGstl-元件的雙元載體的4xGstl-元件通過BcuI/Ecol471-消化被去除，然后將元件2xS/2xD(SEQIDNO:ll)作為Bcul/Eco321-片段導(dǎo)入。具有所述新序列的雙元載體被轉(zhuǎn)化入農(nóng)桿菌GV3101::pMP90(Koncz和Schdl,1986)(An，1987)，并利用抗生素卡那霉素(50mg/l)進(jìn)行選擇。使用轉(zhuǎn)基因農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化"Baltica"型馬鈴薯(Dietze等，1995)。增殖轉(zhuǎn)基因萌芽，并在體外條件下接種致病疫霉的游動孢子懸液(50,000孢子/ml)。發(fā)現(xiàn)利用順式調(diào)控元件2xS/2xD(SEQIDNO:11)，也可以用本發(fā)明的最小啟動子實(shí)現(xiàn)比35S-最小啟動子降低的本底活性(圖5)。同時在用致病疫霉接種轉(zhuǎn)基因馬鈴薯后可以觀察到合成啟動子的更強(qiáng)誘導(dǎo)(圖6)。在稍后的時間(感染后3天=3dpi)誘導(dǎo)的增加不像使用4xGstl-元件后觀察到的那么顯著。但是在感染后兩天利用新的最小啟動子可以在病原體攻擊后觀察到明顯更強(qiáng)的誘導(dǎo)。因此這些最小啟動子的使用具有提高合成啟動子動力學(xué)的作用，所以與利用35S-最小啟動子的合成啟動子相比，對病原體攻擊的反應(yīng)發(fā)生的更早。圖7顯示生物轉(zhuǎn)化"Taifim"型小麥的初生葉后，病原體誘導(dǎo)合成啟動子歸一化活性的比較，所述啟動子包含元件2xS/2xD(SEQIDNO:ll)以及最小啟動子ubil(比較啟動子)、TaPAL(SEQIDNO:9)和TaACS(SEQIDNO:8)?？梢钥闯?，與ubil-最小啟動子相比，新的最小啟動子TaPAL和TaACS在小麥中具有降低的基本活性。當(dāng)使用ubil-最小啟動子測得的歸一化活性為0.17時，使用TaPAL-最小啟動子測得的歸一化活性可以降低到0.072，使用TaACS-最小啟動子測得的歸一化活性可以降低到0.13。圖9顯示質(zhì)粒pubiTATARucll，其含有具有海腎(i^m7/a^m/om^)熒光素酶基因的cDNA，它存在于商業(yè)可獲得的質(zhì)粒pRL-Null中。所述cDNA在ubil-最小啟動子的控制下。ubil-最小啟動子包括相對于轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)范圍從-45至U+76的序列。為了提高表達(dá)強(qiáng)度，ubil-基因的第一個內(nèi)含子維持其天然狀態(tài)，位于質(zhì)粒的報告基因前。所述質(zhì)粒用于克隆順式調(diào)控元件2xS/2xD(SEQIDNO:11)，從而產(chǎn)生病原體誘導(dǎo)合成啟動子。ubil-最小啟動子與新的最小啟動子交換以便提供合成啟動子的特性。參考文獻(xiàn)An,G.(1987).BinaryTivectorsforplanttransformationandpromoteranalysis.MethodsEnzymol.153:292-305Altschul，S.F.等(1990),BasicLocalAlignmentsearchtool,J.Mol.Biol,215:403-410Becker,D.等(1992).NewplantbinaryvectorswithselectablemarkerslocatedproximaltotheleftT匿DNAborder.PlantMolBiol.29:1195-1197Belbahri,L等(2001).AlocalaccumulationoftheRalstoniasolanacearumPopAproteinintransgenictobaccorendersacompatibleplant-pathogeninteractionincompatible.PlantJ.28:419-430Bendahmane，A.等(2002).Constitutivegain畫of隱fUnctionmutantsinanucleotidebindingsite-leucineriehrepeatproteinencodedattheRxlocusofpotato.PlantJ.32:195-204Bhullar,S.(2003).StrategiesforthedevelopmentofftinctionallyequivalentPromoterswithminimumsequencehomologyfortransgenicexpressioninplants:cis畫elementsinanovelDNAcontextversusdomainswapping.PlantPhysiol.132:988-998Dietze,J.等(1995).Agrobacterium-mediatedtransformationofpotato(Sola皿mtuberosum).In:GeneTransfertoPlantsXXII(Potrykus，I.andSpangenberg,G"eds.).Berlin:SpringerVerlag，pp24-29Howies,P.等(2005).AutoactiveallelesoftheflaxL6rustresistancegeneinducenon-race-speeifierustresistanceassociatedwiththehypersensitiveresponse.Mol.Plant-MicrobeInteract.18:570-582Keller,H.等(1999).Pathogen-inducedelicitinproductionintransgenictobaccogeneratesahypersensitiveresponseandnon-specificdiseaseresistance-PlantCell11.223-235Koncz，C.andSchell,J.(1986).ThepromoterofTL-DNAgene5controlsthetissuespecificexpressionofchimericgenescarriedbyanoveltypeofAgrobacteriumvector.Mol.Gen.Genet.，204:383-396Lti，H.等(2000).ConstructionofchimericinduciblePromotersbyelicitorsofricefiingalblastpathogenandtheirexpressionintransgenicrice.ChineseScienceBulletin45:242-246Oldroyd，G.E.D.andStaskawicz,BJ.(1998).Geneticallyengineeredbroadspectrumdiseaseresistanceintomato.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.95:10300-10350Maas，C.等(1991).ThecombinationofanovelstimulatoryelementinthefirstexonofthemaizeShrunken-1genewiththefollowingintronienhancesreportergeneexpressionupto1000-fold.PlantMolBiol.16:199-207Perl-Treves，R.等(2004).EarlyinductionoftheArabidopsisGSTF8PromoterbyspecificstrainsofthefiingalpathogenRhizactoniasolani,Mol.Plant-MicrobeInteract.17:70-80Rushton,PJ,等(2002).Syntheticplantpromoterscontainingdefinedregulatoryelementsprovidenovelinsightsintopathogen-andwound-inducedsignalling.PlantCell14，749-762Singh,K.B.(1998).Transcriptionalregulationinplants:theimportanceofcombinatorialcontrol.PlantPhysiol.118:1111-1120Stuiver,M.H.andGlisters,J.H.H.V.(2001).Engineeringdiseaseresistanceinplants.Nature411:865-868Stuiver,M.H.等(1998).Infection-inducedexpressionoftheavirulencegeneavr9intransgenicCf9tomatoplantsconfersresistancetofUngalpathogenattack.7thInternationalcongressofplantpathology,9-16August,Edinburgh,ScotlandTang,X.等(1999).OverexpressionofPtoactivatesdefenseresponsesandconfersbroadresistance.PlantCell11:15-29Tao,Y.等(2000).MutationalanalysisoftheArabidopsisnucleotidebindingsite-leucine-richrepeatresistancegeneRPS2.PlantCell12:2541-255權(quán)利要求1.病原體誘導(dǎo)合成啟動子，所述啟動子適于調(diào)控核酸轉(zhuǎn)錄并包括最小啟動子，其特征在于所述最小啟動子包括序列基序a)dbrmwa或者b)twcccmt，所述序列基序位于TATA區(qū)的下游并在轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)前，所述轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)位于最小啟動子上并且待調(diào)控核酸的轉(zhuǎn)錄在該轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)開始。2.如權(quán)利要求1所述的病原體誘導(dǎo)合成啟動子，其特征在于所述序列基序在所述最小啟動子中出現(xiàn)兩次或者更多次。3.如權(quán)利要求1或者2所述的病原體誘導(dǎo)合成啟動子，其特征在于所述最小啟動子包括SEQIDNO:1-9任一的核苷酸序列或者其衍生物。4.如權(quán)利要求1-3任一項所述的病原體誘導(dǎo)合成啟動子，除了所述最小啟動子其包括至少一種順式調(diào)控元件，所述順式調(diào)控元件具有SEQIDNO:10-15之一所示的核苷酸序列。5.具有如權(quán)利要求l-4之一所述的病原體誘導(dǎo)合成啟動子的重組基因。6.植物細(xì)胞，其中權(quán)利要求1-4之一所述的病原體誘導(dǎo)合成啟動子己經(jīng)被整合入所述植物細(xì)胞的DNA。7.具有如權(quán)利要求6所述的植物細(xì)胞的轉(zhuǎn)基因植物。8.如權(quán)利要求7所述的轉(zhuǎn)基因植物的種子。9.產(chǎn)生病原體抗性植物的方法，其中在植物細(xì)胞中導(dǎo)入適合于產(chǎn)生病原體抗性的核酸，所述核酸在病原體誘導(dǎo)合成啟動子的控制下，隨后從該植物細(xì)胞再生為植物，其特征在于所述病原體誘導(dǎo)合成啟動子是如權(quán)利要求1-4之一所述的病原體誘導(dǎo)合成啟動子。全文摘要本發(fā)明涉及適于調(diào)控核酸轉(zhuǎn)錄并包括最小啟動子的病原體誘導(dǎo)合成啟動子，其特征在于所述最小啟動子包括序列基序a)dbrmwa或者b)twcccmt，所述序列基序位于TATA區(qū)的下游并在轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)前，所述轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)位于最小啟動子上并且待調(diào)控的核酸轉(zhuǎn)錄在所述轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)開始。文檔編號A01H5/00GK101426920SQ200780014280公開日2009年5月6日申請日期2007年6月16日優(yōu)先權(quán)日2006年6月22日發(fā)明者K·施密特申請人:Kws種子股份有限公司