專利名稱：：一種防治線蟲、土傳病害的混合農(nóng)藥膠囊制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及利用化合物1,3-二氯丙稀(通用名為1,3-dicWoropropene,化學式C3KUCl2)防治蔬菜、草莓、花舟、瓜類、蘆夢、芹菜、胡蘿卜、甘薯、大豆、果園、葡萄園、中草藥等保護地等作物上的根結(jié)線蟲及其它土壤線蟲，該化合物對土傳病原菌鐮刀菌(Fwar&mspp)有很好的抑制作用；對腐霉(P;^&wspp)、疫霉(尸/y^少/^oraspp)屬真菌也有一定的防治效果。三氯硝基甲烷能有效控制喙擔子菌屬、刺盤孢屬、柱果霉屬、鐮刀菌屬、疫霉屬、須殼孢屬、腐霉屬、絲核菌屬、輪技菌屬真菌，對土壤桿菌屬細菌也有效，對地下害蟲和土壤線蟲也有一定的效果。1,3-二氯丙稀防治土傳病害的效果相對較弱，而三氯硝基甲烷防治根結(jié)線蟲效果較差，所以將三氯硝基甲烷與1,3-二氯丙烯混用提高對土壤線蟲的防治效果。具體做法是將兩種化合物按照比例混合后加工制成膠囊劑型，用于田間使用。
背景技術(shù)：
：土傳病害是由土壤中存活的病原物侵染，所引起的一類植物病害。在蔬菜、瓜果、觀賞類植物、林木上發(fā)生嚴重，尤其在保護地作物上危害嚴重。近年來，隨著農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和農(nóng)村經(jīng)濟的發(fā)展，溫室保護地作物種植面積逐年擴大，如保護地蔬菜面積200萬公頃。而保護地栽培作為一項增加農(nóng)民收入、由傳統(tǒng)農(nóng)業(yè)向現(xiàn)代農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)變的一項重要農(nóng)業(yè)措施，在未來將繼續(xù)快速發(fā)展，栽培的作物也將由當前的蔬菜、草莓向花丼、瓜果、苗圃、中草藥等方向發(fā)展。溫室大棚的發(fā)展也為土傳病害的發(fā)生、發(fā)展提供了適宜的環(huán)境，通常栽培3-5年后，作物的產(chǎn)量和品質(zhì)受到嚴重的影響，一般造成減產(chǎn)20%-40%,嚴重的減產(chǎn)60%以上甚至絕收。隨著溫室大棚栽培繼續(xù)擴大和高附加值作物的連年栽培，土傳病害的問題越來越突出。3傳統(tǒng)的防治土傳病害的方法有抗病育種、嫁接、實行輪作、深翻、換土、化學農(nóng)藥灌根等。但由于土地有限和實行集約化種植，輪作很難實施。抗多種土傳病害的品種和玷木很難培育。深翻和換土在經(jīng)濟上不可行。化學農(nóng)藥灌根效果有..限，并且需要大量的藥劑，易造成農(nóng)藥殘留超標和地下水污染。當前最有效的方法是用溴甲烷(methylbrcmMe)土壤熏蒸消毒，該技術(shù)能很好地消滅土壤中的線蟲、真菌、害蟲、雜草等，作物增產(chǎn)顯著，生產(chǎn)中深受農(nóng)民歡迎。但是由于甲基溴破壞臭氧層物質(zhì)，被《蒙特利爾議定書》列為受控物質(zhì)，在2015年將禁止使用。所以盡快研究尋找甲基溴土壤熏蒸消毒替代技術(shù)，便成為環(huán)境保護和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中一項很有意義的工作，本研究正是在此背景下展開的。經(jīng)過室內(nèi)生測實驗得出1,3-二氯丙稀對土壤中線蟲有很好的防治效果，但是對土傳病害的防治效果有一定的局限性。但是三氯硝基甲烷對土壤中病原菌則有較好的防治效果，但是對土壤中線蟲的防治效果一般。1,3-二氯丙稀、三氯硝基甲烷的傳統(tǒng)制劑為液體制劑，施用不方便，同時由于這兩種化合物揮發(fā)性極強，施用時對環(huán)境污染大，尤其是三氯硝基甲烷對施用人員造成的傷害很大。所以本實驗在研究的基礎(chǔ)上尋求兩種農(nóng)藥的最佳配比，制成膠囊制劑以便于農(nóng)民安全、科學的使用，并減少對環(huán)境的污染。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明釆用的技術(shù)方案是一種防治線蟲、土傳病害的混合化合物的膠囊制劑加工技術(shù)，其特征在于(a)有效成份A為1,3-二氯丙稀(通用名為1，3-dicWoropropene,化學式C3H4C12);(b)有效成份B為三氯硝基甲烷(通用名為chloropicrin,別名氯化苦)；(c)有效成分A與有效成分B的總含量為SO%-95%;(d)膠囊包衣材料為三聚氰胺甲醛樹脂、脲醛樹脂、明膠、阿拉伯膠中某一個或某幾個的混合物，重量百分含量為1%-20%;(e)膠囊的形狀為圓形、橄欖形、橢圓形，其大小為0.5-2cm3,單個膠囊重量為0.2-5g。本發(fā)明的具體制備方法是首先把兩種化合物混合后，再裝入制粒機，然后用準備好的包衣材料按照設(shè)計好的膠囊重量制粒，接著干燥固化、質(zhì)檢、成品。具體實施方式為了更好地說明本發(fā)明，下面通過實施例予以進一步說明。但本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，本申請并不僅僅限定在下述實施例的范圍。實施例子98%農(nóng)藥原藥A75.41克，90%農(nóng)藥原藥B46.91克，脲醛樹脂、明膠、阿拉伯膠單一或混合物14.5g。按圖1生產(chǎn)工藝流程可加工成96。/。AB微膠囊劑。1，3-二氯丙稀與三氯硝基甲烷混用對土壤線蟲和病原菌毒力測定結(jié)果1、供試藥劑93.6%1，3-二氯丙烯(美國陶氏化學有限公司)；99%三氯硝基甲烷原藥(大連染料化工有限公司)。2、供試材料根結(jié)線蟲(Me/ozY/ogy"espp.);鐮刀菌(Fw^zrz'wms/y.);本實驗室提供疫霉菌(P/^top/^oras，.)；本實驗室提供河北固安溫室大棚根結(jié)線蟲發(fā)病較重的土樣。3、生測方法3.1線蟲的分離取100g土壤，溶于1000ml量杯中，攪動土壤，使土壤充分分散，靜置3-5min,依次過40目和400目篩，將400目篩里的泥漿(內(nèi)含線蟲)洗入離心管(50ml)中，稱重平衡，2000卬m離心3min;去上清夜，加入蔗糖液(50%),2000rpm離心；收集上清液，加水稀釋，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中，顯微鏡下觀察、計數(shù)問。3.2病原菌的分離3.2.1鐮刀屬真菌的分離試驗釆用Komada方法(Komada,1975)。取15g土樣加到100ml已經(jīng)滅菌的0.1%瓊脂水中，在搖床上搖動30min，配制成土壤懸浮液。在培養(yǎng)基A成分47.5ml中加入2.5ml的B成分，搖勻，加入lml土壤懸浮液搖勻，倒入3只培養(yǎng)皿中，24-25"培養(yǎng)5-6天后檢查鐮刀菌菌落數(shù)目[7]。培養(yǎng)基的組成如下6表1A成分成分名稱用量K2HP042gKC1lgMgS04lgL-Asparagina4gDgalattosio40gAgar-Agar30g表2B成分成分名稱用量Fe-NaEDTA0.02gNa2B4O7*10H2O2gOxgalllgStreptomicinasolfatolg>CNB1.5g3.2.2、疫霉屬真菌的分離試驗釆用Massago方法。取5g土樣加到100ml已經(jīng)滅菌的0.1%瓊脂水中，在搖床上搖動30min,配制成土壤懸浮液。在培養(yǎng)基A成分47.5ml中加入2.5ml的B成分，搖勻，加入1ml土壤懸浮液搖勻，倒入3只培養(yǎng)皿中，24-25。C培養(yǎng)5-6天后檢查腐霉、疫霉菌落數(shù)目[8]。培養(yǎng)基的組成如下表3A成分成分名稱用量Cornmealagar34gGlucose40g表4B成分成分名稱用量PCNB0.15gAmpicillina0.03gRifampicina0.02g2.3數(shù)據(jù)處理試驗數(shù)據(jù)采用EXCEL電子表格軟件對數(shù)據(jù)進行處理，建立數(shù)據(jù)庫，用DPS數(shù)據(jù)軟件進行回歸方程及LD50的求解等統(tǒng)計分析。真菌抑制率%=對照菌，:=菌落數(shù)><100%對照菌落數(shù)線蟲存活率^總"f蟲數(shù)x酵/0總蟲數(shù)校正死亡率％(抑制率％)J寸照組存活率-處理組存活率4、測定結(jié)果1)線蟲結(jié)果表5不同配比處理對土壤線蟲防治效果酉己t匕濃度(ul/kg)活蟲數(shù)個/100g土才羊總蟲數(shù)個畫土樣存活率％校正死亡率％18.7203400.00100.00單劑9.367968411.6088.351,3-二氯丙4.684297143.3454.15蜂2.34530103751.1246.481.17688105365.3432.5848.00546847.9493.06單劑24.008151715.7484.48三氯硝基甲12.0042484050.5046.48烷6.0055190361.0034.563.0052194655.0430.94復配27.0003910.00100.001,3-二氯13.50576049.4987.62丙蜂二三氯6.75590124547.4349.33硝基甲烷3.3842375456.0841.32(3:1)1.69782113069.2328.08復配27.00246723.5796.681,3-二氯13.5011281713.6786.49丙烯三氯6.75555110450.3048.20硝基曱烷3.3S57492661.9737.15(2:1)1.6972595176.2419.88復配27.00162706.0494.971,3-二氯13.5012886014.9286.02丙烯三氯6.75546109050.0847.63硝基曱烷3.3851688458.4140.55Cl:"1.6964993669.3427.38復配27.00384348.6893.051,3-二氯13.50438101143.3455.87丙蹄三氣6.75577108853.0243.21硝基曱烷3.38750107269.9828.42(1:2)1.69824103879.3616.50復配27.004437111.9487.751，3-二氯13.5027385232.0953.24丙歸三氯6.75663108761.0432.28硝基甲烷3.3862883475.3019.7S(1:3)1.6968484680.8414.31各種復配比例回歸方禾呈表6不同配比處理對土壤線蟲回歸方程及增效情況<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>二對土壤病原菌結(jié)果2.1鐮刀菌結(jié)果^_表7不同配比處理對Fiwahw附印p.防治效果配比單劑1，3-二氯丙烯單劑三氯確基曱烷復配1，3-二氯丙烯三氯硝基曱烷(3:1)復配1,3-二氯丙烯三氯硝基曱烷(2:1)復配1，3-二氯丙烯三氯硝基甲烷(1:"復配1，3-二氯丙烯三氯硝基曱烷(1:2)復配1,3-二氯丙烯三氯硝基曱烷(1:3)濃度(ul/kg)菌落數(shù)個/g土沖羊抑制率％18.7286776.779.3694775.194.68107368.182.34128251.361.17132249.3548.0020794.6624.0026792.7812.00118064.946.00152450.073.00246419.4327,00146756.2213.50145853.756.75157847.723.38168747.611.69164747.5127.00133159.2913.50137858.416.75139157.093.38144254.201.69156248.9927.0093374.7313.50142059.386.75152255.223.38165652.421.69166248.6727.0052986.2713.50168772.126.75152952.453.38156450.661.69190243.4427.0033890.8313,50104065.316.75128456.603.38158745.651.69158443.00各種復配比例回歸方程_表8不同配比處理對.的回歸方程及增效情況<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>2.2疫霉菌結(jié)果表9不同配比處理對尸/^to/^/zoras/y.防治,支果酉己t匕濃度(ul/kg)菌落數(shù)個/g土樣抑制率％單劑18.72132083.461,3-二氯丙埽9.36251167.324.68302060.742.34456040.89U7537330.39單劑48.0056093.33三氯硝基甲烷24.0088089.5712.00288463.106.00418245.663.00618219.59復配27.00400947.331,3-二氯13.50433344.06丙烯三氯硝基曱烷6.75431843.17(3:1)3.38454240.921.69551628.82復配27.00208071.711，3-二氯13.50381849.91丙烯三氯硝基甲烷6.75553628.39(2:1)3.38560426.831.69570025.57復配27.00299160.881，3-二氯13.50345854.82丙烯三氯硝基曱烷6.75498935.16(1:1)3.38593323.051.69610720.36復配27.0077189.851,3-二氯13.50379650.93丙烯三氯硝基甲烷6.75427646.54(1:2)3.38579625.161.69638717.22復配27.0020997.401,3-二氯13.50328755.74丙烯三氯竭基曱烷6.75360453.15(1:3)3.38505834.201.69561327.1513各種復配比例回歸方程表10不同配比處理對戶/^op/^ora的回歸方程及增效情況農(nóng)藥Y=a+bxLDS0(mg/L)95%置信限增效情況1，3隱二氯Y==4.3824+1.1987x3.27532.2883-5.6037丙稀三氯硝基Y=:3.1943+2.0837x7.35532.1336-12.1159曱烷31Y==4.4841+0.3411x32.5669不增效21Y==3.7948+1.1078x12.24663.4342-92869.14不增效11Y==3.8098+1.9290x13.39755.9520-76.4186不增效12Y==3.4326+1.0561x8.39422.5269-96358.47不增效13Y==3.9873+1.3339x5.74402.4180-65.5163增效14附件二1，3-二氯丙稀+三氯硝基甲烷膠囊在土壤中的擴散性實驗結(jié)果l.實驗步驟1)施藥在實驗過程中我們選取l粒l,3-二氯丙烯+三氯硝基甲烷膠囊(約L29g)放置在裝有從河北固安帶回的帶病原菌和線蟲的土樣的45cmx40cmx30cm的整理箱中，膠囊放置的位置在土表以下5cm處。本實驗中土壤濕度為18.71%:土壤容重為0.86:,土壤的質(zhì)地為砂粒81.824%,粉粒16.221%,粘粒1.955%。熏蒸時間為15d，熏蒸時的土溫為20°C-34°C。2)取樣實驗結(jié)東后我們在土表測量整理箱對角線交叉中心點開始取樣，然后依次5cm間隔向外取樣。編號為5-5-，5-10，5-15，5-20,5-25,5-30。縱向范圍為每隔5cm深度取樣，每5cm為一層。編號為10-5,15-5，20-5，25-5,30-5.即編號的第一個數(shù)字表示從土表開始縱向的深度取樣距離，低二個數(shù)字表示橫向的取樣距離。取樣后依次對土壤線蟲的防治效果的測定釆用離心法(劉維志，2000)分離；對土傳病原真菌鐮刀菌的防治效果的測定采用Komada法(Komada，1975);對土傳病原真菌疫霉菌的防治效果的測定采用M法(Komada，1975)。線蟲分離測定時稱取100g樣品；病原菌測定時稱取15g樣品。2，實驗結(jié)果1)對線蟲活性測定結(jié)果表l1，3-二氣丙稀+三氣硝基甲烷膠囊對土壤中線蟲防效測定結(jié)果號總蟲數(shù)活蟲數(shù)死蟲數(shù)活蟲率％死亡率％校正死亡率％S陽51200012000.00100.00100.005-10300252758.3391.6790.55S-1S37510027526.6773.3369.755-203257525023.0876.9273.825-252505020020.0080.0077.315-302257515033.3366.6762.1810-547510037521.0578.9576.1210-1030010020033.3366.6762.1810-1537520017553.3346.6739.4910-201751255071.4328.5718.9610-2550037512575.0025.0014.9110-3045032512572.2227.7818.0615-54255037511.7688.2486.6515-10125507540.0060.0054.621S-152501757570.0030.0020.581S-202501757570.0030.0020.S815-252001505075.0025.0014.9115-302001257562.5037.5029.0920-562527535044.0056.0050.0820-1047530017563.1636.8428.3520-1527517510063.6436.3627.8020-201501005066.6733.3324.3720-252001505075.0025,0014.9120-303252755084.6215.384.0025-532520012561.5438.4630.182S-102251507566.6733.3324.3725-153753007580.0020.009.2425-201751502585.7114.292.7625-253503005085.7114.292.7625-305255002595.244.760.0030-527517510063.6436.3627.8030-1034024010070.5929.4119.9230-152401608066.6733.3324.3730-204203804090.489.520.0030-2S4404004090.919.090.0030-306806206091.188.820.00CK7406608089.1910.81CK6205408087.1012.90注活蟲數(shù)個/100g土和死蟲數(shù)個/100g土分別為每100g測定土壤中線蟲的數(shù)量。校正死亡率％=(l-處理活蟲率％/對照活蟲率％)xl00"編號前面數(shù)字"表示縱向距離施藥中心擴散距離；"編號后面數(shù)字"表示橫向距離施藥中心擴散距離."編號第一個數(shù)字5"為膠囊安放處。16由表l可以看出在本次實驗土樣中，l粒l,3-二氯丙稀+三氯硝基甲烷復配膠囊對線蟲的縱向有效防治范圍在25cm的地方仍然有接近30%的防治效果，在橫向范圍內(nèi)在距離施藥點25cm的地方具有高達60%的防效?？梢娫摲N混合藥劑膠囊對土壤中的線蟲具有很好的防治作用。2)對土壤中病原菌活性測定結(jié)果a對土壤中鐮刀菌測定結(jié)果17表21,3-二氣丙稀+三氣硝基甲烷膠囊對土壌中鐮刀菌屬防效測定結(jié)果始縣菌落數(shù)(個)菌落數(shù)(個)防治效果％IIIm/g土樣S墨51054097.745-105438095.485-1526363464063.825-2025464879355.155-2546384183352.895-30556272126028.7710-58131423386.8110-1019131531382.2910-158181426784.9210-2016384868061.5610-2548324684052.5110-3042554896745.3515-514101626784.9215-1037374780754.4015-1549494394046.8615-20548657131325.7515-25595687134723.8715-30545464114735.1820-524342354069.4720-10585844106739.7020-15676836114035.5520-20337570118732.9120-25828647143318.9720-30884268132025.3825-546494392047.9925-10405464105340.4525-15763454109338.192S-20785870137322.3625-25524166106040.0825-30455858107339.3230-5596350114735.1830-10484664105340.4530-15836064138021.9830-20726070134723.8730-256410012018930.0030-30104887617870.00CK689680CK104641001787CK801001041893"編號前面數(shù)字"表示縱向距離施藥中心擴散距離；"編號后面數(shù)字"表示橫向距離施藥中心擴散距離;"編號第一個數(shù)字5"為膠囊安放處。18防治效果％=對照菌=;=菌落數(shù)x100對照菌落數(shù)從表2可以看出實驗結(jié)東后，該膠囊對鐮刀菌表現(xiàn)很好的防治效果。在距離施藥點橫向和縱向20cm的距離處仍然有接近50y。的防效。b.對土壌中疫霉菌活性測定結(jié)果表31,3-二氣丙稀+三氯硝基甲烷膠囊對土壌中疫霉菌屬防效測定結(jié)果編號——^岡，S:說防治效果％"5:5—..———………————5———T——————.——.—丁———■——---5-10108616095.785-15687692157358.555-20768868154759.255-25104140124245335.365-30160li158305319.56—10-56;———.—...———^7^—^■——'—1—3'7—10-10868892177353.2810-158612896206745.5510-20142164172318716.0410-25140204152330712.8810-3018618437471.29—15:S—1^0———.——T0^——元u—55—^)]S3—15-10140152160301320.6115-1596136148253333.2615-20160140124282725.5315-2522016822841070.0015-30100164140269329.0420^〖32——麗^:oi20-10164168152322714.9920-15180172160341310.0720-2021220418039730.0020-25100160160280026.2320-30186140110290723.42—一'..55i:2t巧i'^...................................................................................五—25-10220128120312017.8025-15132140196312017.8025-20164148168320015.6925-25176156120301320.6125-3016022020038670.00—;0:5.—i;—.—BS—30-10140100100226740.2830-1523419618641070.0030-2022622024045730.0030-2522018419640000.0030-30—，，》,CK1603『函CK1401982043613CK_120256200__"編號前面數(shù)字"表示縱向距離施藥中心擴散距離；"編號后面數(shù)字"表示橫向距離施藥中心擴散距離;"編號第一個數(shù)字5"為膠囊安放處。防治效果L對照菌落g^g菌落數(shù)x剛從表3可以看出實驗結(jié)束后，該膠囊對疫霉菌同樣表現(xiàn)很好的防治效果。在距離施藥點橫向20cm的距離處仍然有接近60%的防效，在距離施藥點縱向15cm距離處對疫霉菌的防治效果也可以達到40%?？梢娫撃z囊對土傳疫霉菌屬病原真菌具有很好的防治效果。附圖1列出了微膠囊劑生產(chǎn)工藝流程圖。權(quán)利要求一種能防治線蟲、土傳病害的混合農(nóng)藥膠囊制劑加工技術(shù)，其特征在于1.將1，3-二氯丙稀(A，通用名為1，3-dichloropropene)與三氯硝基甲烷(B，通用名為chloropicrin，別名為氯化苦)組成混合物。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的混合物，其特征是將A和B兩種物質(zhì)按A:B=l:0.2-5比例加工而成膠囊制劑。3.膠囊包衣材料為三聚氰胺甲醛樹脂、脲醛樹脂、明膠、阿拉伯膠中某一個或某幾個的混合物，重量百分含量為1%-20%;4.膠囊的形狀為圓形、橄欖形、橢圓形，其大小為0.2-5cm3,單個膠囊重量為0.2-5g。全文摘要本發(fā)明涉及土壤熏蒸劑1，3-二氯丙烯與三氯硝基甲烷以合理比例形成的組合物及其相應(yīng)劑型——膠囊制劑的加工方法。該制劑適用于防治蔬菜、草莓、花卉、瓜類、蘆筍、芹菜、胡蘿卜、甘薯、大豆、果園、葡萄園、中草藥等作物上的根結(jié)線蟲及其它土壤線蟲，而且該化合物對土傳病原菌鐮刀菌屬(Fusariumspp.)和疫霉菌屬(Phytophthoraspp.)等土傳病原菌有很好的防效。文檔編號A01N25/26GK101480178SQ20081000098公開日2009年7月15日申請日期2008年1月11日優(yōu)先權(quán)日2008年1月11日發(fā)明者宋兆欣,曹坳程,王秋霞,云趙,郭美霞,陶俊德申請人:中國農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所