專利名稱：：夏至草開發(fā)的植物源殺蟲劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及夏至草開發(fā)的植物源殺蟲劑及其制備方法，屬于植物源農(nóng)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，專用于夏至草開發(fā)為植物源殺蟲劑。
背景技術(shù)：
：隨著環(huán)境保護(hù)呼聲的日益提高，高毒性農(nóng)藥的大量使用對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)及生態(tài)環(huán)境造成的負(fù)面影響己引起世界范圍的廣泛關(guān)注。為了保護(hù)人類生存的環(huán)境和農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，農(nóng)藥的研制與使用將嚴(yán)格受到環(huán)境和生態(tài)的制約，植物源農(nóng)藥因其具有無公害、作用方式獨(dú)特、與環(huán)境兼容性好以及開發(fā)費(fèi)用低等優(yōu)點(diǎn)，所以利用中國豐富的植物資源開發(fā)研究新農(nóng)藥一直是我國農(nóng)藥化學(xué)及農(nóng)藥毒理學(xué)研究的熱點(diǎn)。夏至草，又稱燈籠棵、白花夏枯草，為唇形科一年生草本植物。廣泛分布于我國南北各省，生于溝邊路旁、田埂或農(nóng)舍附近，高15-35cm，莖直立方柱形分支，被倒生細(xì)毛。葉對(duì)生有長柄，被細(xì)毛，葉片輪廓近圓形，直徑1.5-2cm，掌狀3深裂，裂片有2深裂或有鈍裂齒，兩面均密生細(xì)毛，下面葉脈凸起。春夏開花，輪傘花序腋生，有花6-10朵，無?；蛴卸坦＃ㄆ?-4月，果期5-6月。夏至草適應(yīng)性強(qiáng)，各種環(huán)境都適宜生長，全國分布廣泛，資源豐富，原料易得，產(chǎn)量穩(wěn)定，具有很好的產(chǎn)業(yè)化前景。夏至草在醫(yī)學(xué)中研究的較多，主要用于婦科藥的輛制。目前在農(nóng)藥領(lǐng)域，研究夏至草殺蟲活性未見報(bào)道，本發(fā)明提供了一種提取并分離純化夏至草殺蟲有效成分的方法。
發(fā)明內(nèi)容技術(shù)問題本研究的目的一是提供一種安全、經(jīng)濟(jì)且無公害的天然植物源殺蟲劑及其制備方法，二是開發(fā)利用夏至草這一植物資源。技術(shù)方案夏至草開發(fā)的植物源殺蟲劑，其特征在于，該植物源殺蟲劑是通過以下方法制備而成(1)粉碎夏至草洗凈后陰干，烘干粉碎后過40目篩，獲得夏至草干粉；(2)提取稱量制備好的干粉，配以質(zhì)量10倍左右的石油醚、苯、三氯甲烷、乙酸乙酉旨、丙酮、乙醇作為提取溶劑進(jìn)行提取，得各溶劑粗提取液；(3)濃縮利用活性跟蹤確定最佳提取溶劑，然后將最佳溶劑提取液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器內(nèi)減壓濃縮至稠膏狀，獲得膏狀提取物；(4)萃取將膏狀提取物用IO倍水熱溶，然后用極性不同的有機(jī)溶劑石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得極性不同的浸膏，再利用活性跟蹤確定最佳萃取溶劑。將最佳萃取物用適量丙酮溶解即獲得所需濃度的植物源殺蟲劑。上述制備方法中最佳提取溶劑為乙醇；最佳萃取溶劑為石油醚。有益效果本發(fā)明所提供的夏至草開發(fā)的植物源殺蟲劑及其制備方法與現(xiàn)有方法相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)；(1)以分布規(guī)模大的夏至草為原料，原料來源廣，價(jià)格低廉，生產(chǎn)成本低，生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單，適合于各種規(guī)模生產(chǎn)。(2)殺蟲綜合效果好。實(shí)驗(yàn)證明，本藥劑對(duì)小菜蛾、棉蚜均有理想的防治效果。(3)制備方法簡(jiǎn)單易行，提取純度較高(4)生產(chǎn)中無環(huán)境污染，低殘留，對(duì)作物無害，對(duì)人畜安全，是一種無公害植物源殺蟲劑，可用于有機(jī)食品的生產(chǎn)。(5)充分開發(fā)了分布廣的夏至草這一植物資源。具體實(shí)施例方式采用冷浸法提取、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮、液液萃取。(1)原料處理采集新鮮的夏至草，洗凈后陰干并放至恒溫烘箱內(nèi)于5(TC下烘至材料發(fā)脆，用多功能粉碎機(jī)將其粉碎，并通過40目篩制成干粉，密封于塑料袋中備用；(2)提取準(zhǔn)確稱取干粉20g或根據(jù)需要稱取，分別用石油醚、苯、三氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、乙醇等6種極性不同的溶劑于25r下浸泡4一5d/次，連續(xù)浸提3次，合并3次濾液備用；(3)濃縮將提取液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器內(nèi)減壓濃縮至稠膏狀，獲得膏狀提取物，按lg干粉/mL濃度將各提取物用丙酮稀釋，得不同溶劑粗提液，置于4t:冰箱中保存?zhèn)溆?，測(cè)定殺蟲生物活性；(4)萃取通過殺蟲生物測(cè)定選定好最佳提取溶劑后，用該溶劑用上述方法大量提取，得最佳溶劑提取物浸膏，將此干樣加入10倍量的蒸餾水，熱溶，裝入分液漏斗中，采用液一液分配法，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯各萃取3次。最后將這些萃取液和剩余水溶液減壓濃縮至稠膏狀，并稱重，得極性不同的浸膏。將最佳萃取物用適量丙酮溶解即得所需濃度的植物源殺蟲劑。選擇最佳提取溶劑的實(shí)施例見實(shí)施例1、2、3;選擇最佳萃取溶劑的實(shí)施例見實(shí)施例4。實(shí)施例l各粗提液對(duì)小菜蛾試蟲的觸殺作用甘藍(lán)葉適量放入養(yǎng)蟲盒中，取2齡小菜蛾試蟲30頭，置于浸蟲罩中，分別浸入極性不同的溶劑粗提液中，6秒后取出，蟲體晾干后置于甘藍(lán)葉上飼喂，分別用試蟲浸入對(duì)應(yīng)濃度的丙酮水溶液中作為對(duì)照，重復(fù)3次，記錄24、48小時(shí)試蟲死亡率。由結(jié)果(見表1)可得6種溶劑提取液中，石油醚、苯、三氯甲烷提取液殺蟲活性較差，均在10%以下，而丙酮、乙醇、乙酸乙酯提取液活性較好，尤以乙醇提取液最好，48h試蟲死亡率達(dá)到86.7%。表l不同溶劑粗提液(333mg干粉/mL)對(duì)小菜蛾的觸殺作用<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>實(shí)施例2各粗提液對(duì)小菜蛾試蟲的拒食作用用打孔器將新鮮的甘藍(lán)葉片打成直徑為3厘米的葉碟，再放入lOOmg/mL供試提取樣品的丙酮溶液中浸8秒即取出，待葉碟晾干后，將其放入直徑9厘米的培養(yǎng)皿中(內(nèi)墊濾紙，加少量蒸餾水保濕)，每個(gè)培養(yǎng)皿放入3片處理葉碟(對(duì)照為5片)，接入2頭饑餓2小時(shí)的2齡小菜蛾試蟲。每處理重復(fù)10次，24、48小時(shí)用方格紙測(cè)算葉碟面積，計(jì)算拒食率(％)。由結(jié)果可以分析得出，在供試濃度下各提取液對(duì)小菜蛾的拒食活性均不高，但丙酮、乙醇粗提液48h拒食率仍達(dá)到60%以上。表2不同溶劑提取液對(duì)小菜蛾的拒食作用(%)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>實(shí)施例3各粗提液對(duì)蚜蟲的觸殺作用采用載蜒葉片浸漬法。于溫室用營養(yǎng)液培育棉苗，每杯兩株，于子葉期每株接無翅成蚵數(shù)頭，待兩真葉期自然繁殖近百頭，剔除小齡若蚜，僅剩3齡若蚜及無翅成蚜，將供試提取液用0.1%十二烷基硫酸鈉水溶液(該溶液對(duì)提取物有乳化作用)稀釋成不同濃度，取出棉苗在藥液中浸蘸5秒鐘，用吸水紙吸去葉緣多余藥液，立即計(jì)數(shù)莖葉上的蚜蟲數(shù)為處理前蟲口基數(shù)，每杯為一重復(fù)，每處理重復(fù)3次，以用0.1%十二烷基硫酸鈉水溶液稀釋后的丙酮溶液為對(duì)照，于處理后24、48h記錄存活蚜蟲數(shù)，計(jì)算蚜蟲死亡率(％)。各溶劑粗提液對(duì)棉蚜均有很好的觸殺效果(結(jié)果見表3)。丙酮、乙醇粗提液在50mg/mL濃度下，蚜蟲48h死亡率均在8(m以上，但乙醇粗提液活性稍好于丙酮提取液。表36種溶劑提取液對(duì)蚜蟲的觸殺作用<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>實(shí)施例4各萃取液對(duì)小菜蛾的觸殺作用通過以上實(shí)驗(yàn)選擇出夏至草最佳提取溶劑為乙醇后，用乙醇大量提取有效成分，然后采用液液分配法對(duì)有效成分進(jìn)行分離純化，得三:種溶劑萃取物，小菜蛾觸殺活性測(cè)定方法同上。由表4可以看出，夏至草有效成分最佳萃取溶劑為石油醚。各萃取物在低濃度(12.5mg/mL)時(shí)，石油醚萃取液活性明顯高于另兩種萃取液，而當(dāng)濃度達(dá)到25、50mg/mL時(shí)，石油醚和三氯甲烷萃取物活性明顯高于乙酸乙酯萃取物。表4不同溶劑萃取物對(duì)小菜蛾的觸殺作用<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>綜合表明夏至草干粉乙醇粗提液對(duì)小菜蛾、棉蚜均具有很好的觸殺活性，對(duì)小菜蛾還有較好的拒食作用，其次為丙酮、乙酸乙酯粗提液；在進(jìn)一步分離純化活性成分過程中，最佳萃取溶劑為石油醚，濃度在50mg/mL時(shí)小菜蛾死亡率即可達(dá)到96.7%。權(quán)利要求1、夏至草開發(fā)的植物源殺蟲劑及其制備方法，其特征在于，該植物源殺蟲劑是通過如下方法制備而成(1)粉碎夏至草洗凈后陰干，烘干粉碎后過40目篩，獲得夏至草干粉；(2)提取稱量制備好的干粉，配以質(zhì)量為10倍的石油醚、苯、三氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、乙醇作為提取溶劑進(jìn)行提取，得提取液；(3)濃縮將提取液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器內(nèi)減壓濃縮至稠膏狀，獲得膏狀提取物；(4)萃取浸膏用10倍水熱溶，采用液-液分配法選用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得極性不同的浸膏；(5)稱取浸膏用丙酮溶解，即可配成所需濃度的植物源殺蟲劑。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述夏至草開發(fā)的植物源殺蟲劑，其特征在于，干粉原料可以選用單獨(dú)的夏至草根、夏至草莖或夏至草葉片，也可選擇夏至草全株。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述夏至草開發(fā)的植物源殺蟲劑，其特征在于，制備方法中最佳提取溶劑為乙醇。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述夏至草開發(fā)的植物源殺蟲劑，其特征在于，制備方法中最佳萃取溶劑為石油醚。全文摘要本發(fā)明提供了一種以夏至草為資源開發(fā)的植物源殺蟲劑及其制備方法，以夏至草根、莖、葉或全株為原料，陰干粉碎并烘干后獲得夏至草干粉，配以質(zhì)量為10倍的乙醇作為提取溶劑提取，減壓濃縮干燥后獲得提取物干樣，用極性不同的溶劑石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯進(jìn)行萃取，選取石油醚萃取浸膏用丙酮溶解，即可配成所需濃度的植物源殺蟲劑。由此構(gòu)筑的本發(fā)明原料來源廣，生產(chǎn)成本低，殺蟲綜合防治效果好，生產(chǎn)中無環(huán)境污染，低殘留，對(duì)作物無害，對(duì)人畜安全，是一種無公害植物源殺蟲劑。文檔編號(hào)A01P7/04GK101336643SQ200810013808公開日2009年1月7日申請(qǐng)日期2008年1月4日優(yōu)先權(quán)日2008年1月4日發(fā)明者佳張,張宏軍,美李,高興祥,高宗軍申請(qǐng)人:山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所