專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種蠟蚧輪枝菌殺蟲(chóng)劑及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及植物保護(hù)及農(nóng)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體是指一種蠟蚧輪枝菌殺蟲(chóng)劑及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：蠟蚧輪枝菌(FeWc////ww/eom/z'(zimm)viegas)是一種絲孢綱的昆蟲(chóng)病原真菌。該菌在世界上最早是Neitner于1861年在錫蘭咖啡蠟階(Lecaniicoffeae)上首次發(fā)現(xiàn)。關(guān)于該菌的應(yīng)用基礎(chǔ)研究，以英國(guó)溫室作物研究所HallR.A.博士(1976~1985)開(kāi)展較早，并于20世紀(jì)80年代初主持了該菌制劑商品化的研究。自1981年Hall開(kāi)發(fā)的第一個(gè)K/ecam7殺蚜劑產(chǎn)品Vertalec^商品化以來(lái)，至今已有多個(gè)國(guó)家的8種以上的商品分別以Vertalec、Mycotal、Thriptal、Vertisol、AgroBiocontrolVerticillium50、Verticon、Verticillin和Mycolab'sVerticilliumlecanii等名稱(chēng)進(jìn)行生產(chǎn)、銷(xiāo)售，用于溫室等場(chǎng)所的蚜蟲(chóng)、粉虱和薊馬等害蟲(chóng)防治。該菌制劑產(chǎn)品由于效果較慢，對(duì)使用環(huán)境有一定要求；在發(fā)展過(guò)程中(尤其是在防治蚜蟲(chóng)的應(yīng)用過(guò)程中)，曾受到抗蚜威等專(zhuān)用化學(xué)農(nóng)藥的競(jìng)爭(zhēng)壓力影響，導(dǎo)致市場(chǎng)占有率有所下降。近年來(lái)，由于化學(xué)農(nóng)藥的殘留污染問(wèn)題及影響日益突出，在全球環(huán)境保護(hù)浪潮的影響和推動(dòng)下，該菌制劑產(chǎn)品的推廣和應(yīng)用又有了迅速的發(fā)展。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種蠟階輪枝菌殺蟲(chóng)劑及其應(yīng)用。本發(fā)明提供的蠟蚧輪枝菌(Ferto7/i鵬/ecflm'!')K1207，保藏單位中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心；地址北京市朝陽(yáng)區(qū)大屯路，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所；保藏日期2008年01月07日；保藏登記入冊(cè)的編號(hào)CGMCCNo.2326。本發(fā)明的蠟蚧輪枝菌K1207，分離自云南昆明罹病蚜蟲(chóng)體上，該菌株具有以下特征在PDA和CzA培養(yǎng)基上10d菌落直徑2427mm，厚度23mm,菌落圓狀，展開(kāi)，正面觀白色，氣生菌絲初期直立絨毛狀，后期密絮狀，邊緣稀疏，菌落從中間向四周有不明顯放射狀皺褶，培養(yǎng)后期菌落中部與邊緣有明顯的凹環(huán)，菌落背部呈奶黃色，無(wú)可溶性色素。氣生菌絲無(wú)色，有隔分枝，寬度1.22.5Mm，分生孢子?；颗虼?，向上變細(xì)呈錐形，單生、對(duì)生或輪生于氣生菌絲，氣生菌絲頂部輪狀瓶?？蛇_(dá)46個(gè)，分生孢子梗極少分枝。從梗的頂部長(zhǎng)出分生孢子，聚結(jié)成球形，孢子球直徑512nm，球遇水解體釋放出分成孢子(1025個(gè))，孢子棒形、橢圓形、卵形，兩端圓而對(duì)稱(chēng)，孢子大小2.58.0X0.752.8pm。本發(fā)明的菌株A1207與現(xiàn)有己知菌株相比，溫度適應(yīng)能力更好，溫度范圍在1533°C，分生孢子萌發(fā)率可達(dá)91.78100%。本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的蠟階輪枝菌(J^"c朋iw2/"fl"ii)K1207菌株的試管培養(yǎng)，固、液兩相發(fā)酵，制備成可濕性粉劑，將其防治各種蚜蟲(chóng)(桃蚜、白尾紅蚜、麥無(wú)網(wǎng)長(zhǎng)管蚜、甘藍(lán)蚜等)、菜青蟲(chóng)、小菜蛾、溫室白粉虱。本發(fā)明蠟蚧輪枝菌(KeWc////ww/ecam7)K1207菌株的培養(yǎng)方法1、試管種培養(yǎng)試管斜面培養(yǎng)基配方為馬鈴薯20%，葡萄糖1.7~2%，瓊膠1.4~1.5%，自然pH將^W/c/〃/Mw/ec朋/z'K1207移到試管斜面培養(yǎng)基上，在28"C恒溫培養(yǎng)3~4d，獲得試管種。2、液體培養(yǎng)液體發(fā)酵基配方為改良SDAY培養(yǎng)液1%蛋白胨、4°/。葡萄糖、0.5%酵母膏；0.136%KH2P04、0.12%,MgS047H20;p朋.06.5將試管種接種到500ml三角瓶液體培養(yǎng)基中，每瓶裝200ml，于28。C恒溫振蕩培養(yǎng)45d，轉(zhuǎn)速為100120rpm，將各瓶種子液混勻，以20ml/瓶量加入到二級(jí)培養(yǎng)液(改良SDAY)中，搖床培養(yǎng)培養(yǎng)45d(100120rpm)獲得液體制劑。3、固體培養(yǎng)固體培養(yǎng)基配方為麥麩--谷糠培養(yǎng)基56%麥麩、24%細(xì)糠、20%谷殼、0.136%KH2P04、0.12%MgSO4'7H2O。將液體制劑用滅菌水稀釋3倍后，按6:10的比例加固體培養(yǎng)基，拌勻后置于過(guò)氧乙酸熏蒸滅菌后的固體發(fā)酵室中25土rC黑暗培養(yǎng)6d，連續(xù)光照3d，獲得固體培養(yǎng)物。4、可濕性粉劑的制備將培養(yǎng)得到的產(chǎn)品經(jīng)烘干、粉碎、加濕潤(rùn)劑、填充劑和穩(wěn)定劑混合制成可濕性粉劑。可濕性粉劑各組分的優(yōu)選組成及比例是孢子粉(5060%)、潤(rùn)濕劑(十二垸基苯磺酸鈉，26%)、穩(wěn)定劑(甘油，0.5%1%)、填料(硅藻土，3040%)。成品質(zhì)量指標(biāo)測(cè)定有效孢子濃度、過(guò)篩率、細(xì)度、潤(rùn)濕時(shí)間、懸浮率、含水量、pH值物化指標(biāo)的測(cè)定均參照中國(guó)農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)匯編進(jìn)行，結(jié)果如表1表1蠟蚧輪枝菌K1207殺蟲(chóng)劑的各項(xiàng)物理指標(biāo)物理指標(biāo)有效孢子濃度3.0xl()9個(gè)/g過(guò)篩率31.2%細(xì)度97%以上過(guò)300目篩潤(rùn)濕時(shí)間2分57秒懸浮率75.6%含水量3.0%pH值6~7活孢率測(cè)定采用孢子萌發(fā)法測(cè)定取0.5g制劑加30mL滅菌水用6層紗布過(guò)濾，濾液沉淀1min后取上清液500rpm離心1min，再取上清液1500rpm離心10min,去掉上清液，用1%葡萄糖液稀釋沉淀至1(^個(gè)孢子/mL濃度，將該稀釋液均勻涂布在清水瓊膠培養(yǎng)基上，1824h后觀察孢子萌發(fā)情況。制劑制成后取樣分別保存于4'C冰箱及室溫陰涼處，l個(gè)月及8個(gè)月后分別測(cè)其活孢率。測(cè)試結(jié)果如下制劑制成時(shí)活孢率63.5%;1個(gè)月后室溫下保存制劑的活孢率60.8%;8個(gè)月后4。C冰箱中保存制劑的活孢率54%;8個(gè)月后室溫下保存制劑的活孢率46.6%。本發(fā)明蠟蚧輪枝菌殺蟲(chóng)劑的藥效試驗(yàn)1、制備蠟階輪枝菌殺蟲(chóng)劑按前述蠟階輪枝菌(^^07//"附/e^m'0K1207菌株的培養(yǎng)方法制備試驗(yàn)用制劑。2、蠟蚧輪枝菌(KW!'c!'仍ww/ecam'0K1207液體制劑對(duì)各種蚜蟲(chóng)(桃蚜、白尾紅蚜、麥無(wú)網(wǎng)長(zhǎng)管蚜、甘藍(lán)蚜等)、菜青蟲(chóng)、小菜蛾、溫室白粉虱的防治試驗(yàn)將其用孢子液浸漬法進(jìn)行的室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果，見(jiàn)表217表2蠟蚧輪枝菌K1207分生孢子對(duì)桃蚜(MyzMspers!'cae)的LCmj和LC80處理后天數(shù)毒力回歸方程相關(guān)系數(shù)lX5oLC80(d)(y=a+bx)(r)(分生孢子/ml)(分生孢子/ml)4y=3.1063+0.2178x0.99539.27xl0610.07xl085y=2.9137+0.3684x0.97184.60xl058.98xl076y=2.8752+0.4235x0.97771.04xl051.02xl077y=3.2307+0.4132x0.9582L91xl042.11xl06表3蠟蚧輪枝菌K1207分生孢子對(duì)桃蚜(Myzuypera'cae)的LTso禾BLT8I<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>根據(jù)表2、3的測(cè)定結(jié)果，用蠟階輪枝菌K1207分生孢子對(duì)桃蚜進(jìn)行防治時(shí)，以57d為顯效期限，80%為防效標(biāo)準(zhǔn)，適宜的使用濃度為1.8xl(^分生孢子/ml。表4蠟蚧輪枝菌K1207分生孢子對(duì)白尾紅蚜(t/w/ewcOT/wworamwj)的LC5o和LCso<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>表5蠟蚧輪枝菌K1207分生孢子對(duì)白尾紅蚜(C/ra/ewco"/onwwaraw)的1^50和^80<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>根據(jù)表4、5的測(cè)定結(jié)果，用K1207菌株分生孢子對(duì)白尾紅蚜進(jìn)行防治時(shí)，以57d為顯效期限，80%為防效標(biāo)準(zhǔn)，適宜的使用濃度為2.5xl(^分生孢子/ml。<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>根據(jù)表8、9的測(cè)定結(jié)果，用K1207菌株分生孢子對(duì)甘藍(lán)蚜進(jìn)行防治時(shí)，以57d為顯效期限，80%為防效標(biāo)準(zhǔn)，適宜的使用濃度為1.3xl()S分生孢子/ml。表IO蠟蚧輪枝菌K1207分生孢子對(duì)菜青蟲(chóng)"rtoge/ara/we)的LCs。和LC:處理后天數(shù)毒力回歸方程相關(guān)系數(shù)LC50(d)(y=a+bx)(r)(分生孢子/ml)(分生孢子/ml)4y=2.7275+0.2324x0.97976.00xl092.056xl0135y=2.8076+0,3021x0.9844l.SlxlO72.96xl0126y=3.2593+0.2947x0.9卯68.07xl055.88xl087y=3.2298+0.3452x0.99581.34xl053.73xl078y=3.2590+0.3840x0.99823.42xl045.38xl06表ll蠟蚧輪枝菌K1207分生孢子對(duì)菜青蟲(chóng)的LT5o和LT80濃度毒力回歸方程相關(guān)系數(shù)LT50.LT80(分生孢子/ml)(y=a+bx)(r)(分生孢子/ml)(分生孢子/ml)2.0x103y=l.3936+3.5128x0.959610.618.52.0x104y=1.3544+3.9444x0.98528.413.72.(M05y=1.4358+4.3712x0.99716.510.22.0x106y=1.2506+4.8540x0.99965.98.82.0x107=0,9420+5.7688x0.99745.07.1y=1.6288+5.2165x0.99194.46.4根據(jù)表10、ll的測(cè)定結(jié)果，用K1207菌株分生孢子對(duì)菜青蟲(chóng)進(jìn)行防治時(shí)，以57d為顯效期限，80%為防效標(biāo)準(zhǔn)，適宜的使用濃度為2.0xl0"分生孢子/ml。表12蠟蚧輪枝菌K1207分生孢子對(duì)小菜蛾(尸/1^/^"/0他&)2齡幼蟲(chóng)的LC5o和LC80處理后天數(shù)毒力回歸方程相關(guān)系數(shù)LC50LC8o(d)(y=a+bx)(r)(分生孢子/ml)(分生孢子/ml)4y=2.0045+0.3253x0.98101.62xl096.33x0'15y=2,8853+0.2958x0,95991.41xl07l.OOxlO106y=3.1601+0.3070x0.99089.84xl055.51xio87y=2.9892+0.3839x0.99091.73xl052.72xl078y=3.1835+0.4204x0.99472.09x1042.13xl068表13蠟階輪枝菌K1207分生孢子對(duì)小菜蛾(/V"/e//ax>Voste//a)2齡幼蟲(chóng)的LT5Q和LT8<<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>根據(jù)表12、13的測(cè)定結(jié)果，用K1207菌株分生孢子對(duì)小菜蛾進(jìn)行防治時(shí)，以57d為顯效期限，80%為防效標(biāo)準(zhǔn)，適宜的使用濃度為2.2xl(^分生孢子/ml。表14蠟階輪枝菌K1207分生孢子對(duì)溫室白粉虱(7h'a/ewro^sv④orar/on/w)若蟲(chóng)的LC5o和LQo<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表15蠟階輪枝菌K1207分生孢子對(duì)溫室白粉虱(7h'a/ewra^svqporan'onw)若蟲(chóng)的LTmj和LT80<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>根據(jù)表M、15的測(cè)定結(jié)果，用K1207菌株分生孢子對(duì)溫室白粉虱進(jìn)行防治時(shí)，以57d為顯效期限，80%為防效標(biāo)準(zhǔn)，適宜的使用濃度為1.8xl(^分生孢子/ml。表16蠟階輪枝菌K1207對(duì)(蘇鐵上的)紅蠟階(Cera/7/osfesra6era)的LCso禾t]LC:<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表17蠟蚧輪枝菌K1207分生孢子對(duì)(蘇鐵上的)紅蠟階(Ceroptotora6era)的1^5()和1^80<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>根據(jù)表16、17的測(cè)定結(jié)果，用K1207菌株分生孢子對(duì)蘇鐵上的紅蠟蚧進(jìn)行防治時(shí)，以1012d為顯效期限，80%為防效標(biāo)準(zhǔn)，適宜的使用濃度為1.76"061.76><108分生孢子/ml?？傮w結(jié)果表明，本發(fā)明的蠟蚧輪枝菌(^^"7//,/"朋//)殺蟲(chóng)劑防治桃蚜、白尾紅蚜、麥無(wú)網(wǎng)長(zhǎng)管蚜、甘藍(lán)蚜等)、菜青蟲(chóng)、小菜蛾、溫室白粉虱效果顯著。其防治植物蟲(chóng)害的效果與使用次數(shù)和使用方法有關(guān)，同時(shí)與被防治的蟲(chóng)害的種類(lèi)有關(guān)。具體實(shí)施例方式本生防制劑可以與其他的殺蟲(chóng)農(nóng)藥、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑混合使用，但必須保證所混藥劑對(duì)本發(fā)明采用的蠟階輪枝菌(F抓/c朋訓(xùn)/ecam7)K1207無(wú)副作用。本發(fā)明的蠟蚧輪枝菌(旨ft'c朋顯/ecam'z')對(duì)桃蚜、白尾紅蚜、麥無(wú)網(wǎng)長(zhǎng)管蚜、甘藍(lán)蚜等)、菜青蟲(chóng)、小菜蛾、溫室白粉虱防治效果明顯，具有成本低、使用簡(jiǎn)便、有效期較長(zhǎng)等特點(diǎn)。下面用實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步詳述本發(fā)明，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。實(shí)施例一將蠟蚧輪枝菌(Krricz7/^m/ecam'"K1207移到試管斜面培養(yǎng)基上，試管斜面培養(yǎng)基配方為馬鈴薯20%，葡萄糖1.7~2%，瓊膠1.4-1.5%,自然pH。在28'C恒溫培養(yǎng)34d，獲得試管種。將試管種接種到500ml三角瓶(每瓶裝200ml)液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基配方為1%蛋白胨、4%葡萄糖、0.5%酵母膏;0.136%KH2P04、0.12%MgS047H20;pH6.06.5，于28'C恒溫振蕩培養(yǎng)4~5d，轉(zhuǎn)速為100120rpm，以20ml/瓶量加入到二級(jí)培養(yǎng)液(改良SDAY)中，搖床培養(yǎng)培養(yǎng)45d(100~120rpm)獲得本發(fā)明液體制劑。實(shí)施例二首先獲得液體制劑(同實(shí)施例一)，將液體制劑用滅菌水稀釋3倍后，按6:10的比例加固體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基配方為為麥麩一谷糠培養(yǎng)基56%麥麩、24%細(xì)糠、20%谷殼、0.136%KH2PO4、0.12%MgS(V7H2O，拌勻后置于過(guò)氧乙酸熏蒸滅菌后的固體發(fā)酵室中25士rC黑暗培養(yǎng)6d，連續(xù)光照3d，之后取出平鋪在發(fā)酵室內(nèi)的玻璃板上，35±1'C、100檔風(fēng)速下風(fēng)干5d。獲得固體制劑。實(shí)施例三首先進(jìn)行液固兩相發(fā)酵(同實(shí)施例一，例二)，然后將培養(yǎng)得到的產(chǎn)品經(jīng)烘干、粉碎、加濕潤(rùn)劑、填充劑和穩(wěn)定劑混合制成可濕性粉劑?？蓾裥苑蹌└鹘M分的優(yōu)選組成及比例是孢子粉(5060%)、潤(rùn)濕劑(十二烷基苯磺酸鈉，26%)、穩(wěn)定劑(甘油，0.5%1%)、填料(硅藻土，3040%)。成品質(zhì)量指標(biāo)測(cè)定有效孢子濃度、過(guò)篩率、細(xì)度、潤(rùn)濕時(shí)間、懸浮率、含水量、pH值物化指標(biāo)的測(cè)定均參照中國(guó)農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)匯編進(jìn)行，結(jié)果如表1表1蠟蚧輪枝菌K1207殺蟲(chóng)劑的各項(xiàng)物理指標(biāo)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>活孢率測(cè)定采用孢子萌發(fā)法測(cè)定取0.5g制劑加30mL滅菌水用6層紗布過(guò)濾，濾液沉淀1min后取上清液500rpm離心1min，再取上清液1500rpm離心10min，去掉上清液，用1%葡萄糖液稀釋沉淀至1(^個(gè)孢子/mL濃度，將該稀釋液均勻涂布在清水瓊膠培養(yǎng)基上，1824h后觀察孢子萌發(fā)情況。制劑制成后取樣分別保存于4'C冰箱及室溫陰涼處，l個(gè)月及8個(gè)月后分別測(cè)其活孢率。測(cè)試結(jié)果如下-制劑制成時(shí)活孢率63.5%;1個(gè)月后室溫下保存制劑的活孢率60.8%;8個(gè)月后4'C冰箱中保存制劑的活孢率54%;8個(gè)月后室溫下保存制劑的活孢率46.6%。即得本發(fā)明生物制劑。權(quán)利要求1、一種蠟蚧輪枝菌殺蟲(chóng)劑，其特征在于該制劑的生產(chǎn)菌株為蠟蚧輪枝菌(Verticilliumlecanii)K1207，保藏號(hào)CGMCCNo.2326。2、權(quán)利要求1所述蠟蚧輪枝菌(Fert/d仍,/eca剛7)K1207菌株的培養(yǎng)方法，其特征在于所述菌株是經(jīng)過(guò)液固兩相培養(yǎng)獲得，其液體和固體發(fā)酵培養(yǎng)基配方如下(1)液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方1%蛋白胨、4%葡萄糖、0.5%酵母膏；0.136%KH2P04、0.12%MgS047H20;pH6.06.5;(2)固體發(fā)酵培養(yǎng)基配方56%麥麩、24%細(xì)糠、20%谷殼、0.136%KH2P04、0.12%MgSO4'7H2O。3、權(quán)利要求1所述的蠟蚧輪枝菌(J^^'a7/iww/ecam'0K1207菌株在防治桃蚜、白尾紅蚜、麥無(wú)網(wǎng)長(zhǎng)管嫁、甘藍(lán)蚜、菜青蟲(chóng)、小菜蛾、溫室白粉虱害蟲(chóng)中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及一種蠟蚧輪枝菌殺蟲(chóng)劑及其應(yīng)用，屬植物保護(hù)及農(nóng)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
。本發(fā)明所提供的菌株為蠟蚧輪枝菌(Verticilliumlecanii)K1207，保藏號(hào)CGMCCNo.2326。本發(fā)明將該菌株，通過(guò)液固兩相發(fā)酵生產(chǎn)，特點(diǎn)是固體培養(yǎng)基采用麥麩--谷糠培養(yǎng)基。將培養(yǎng)得到的產(chǎn)品經(jīng)烘干、粉碎、加入濕潤(rùn)劑、填充劑和穩(wěn)定劑混合制成可濕性粉劑。本發(fā)明的蠟蚧輪枝菌菌株毒力高，對(duì)桃蚜、白尾紅蚜、麥無(wú)網(wǎng)長(zhǎng)管蚜、甘藍(lán)蚜、菜青蟲(chóng)、小菜蛾、溫室白粉虱害蟲(chóng)有良好的防治效果。發(fā)酵生產(chǎn)中原料便宜、來(lái)源廣，易于工業(yè)化生產(chǎn)，不污染環(huán)境。文檔編號(hào)A01P7/00GK101248799SQ20081005814公開(kāi)日2008年8月27日申請(qǐng)日期2008年3月4日優(yōu)先權(quán)日2008年3月4日發(fā)明者周天雄,楊美林,秦小萍申請(qǐng)人:云南農(nóng)業(yè)大學(xué)