專利名稱：壇紫菜幼苗的低溫冷藏保存方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種壇紫菜，尤其是涉及一種水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域的壇紫菜幼苗的低溫冷藏保存方法。
背景技術(shù)：
壇紫菜(尸w;7/^ra^/to"e"^s)是我國特有的暖溫帶性品種，是福建、浙江和廣東沿海人 工養(yǎng)殖的重要經(jīng)濟紅藻，其產(chǎn)量約占全國紫菜總產(chǎn)量的80%。壇紫菜藻種的低溫保存，已有大量的研究，現(xiàn)在對壇紫菜葉狀體一般采用先進行陰干處 理，后置于-20 -3(TC冰箱中冷凍保存的方法，但是在進行壇紫菜遺傳育種研究時，經(jīng)常需 要大批量處理每次實驗結(jié)束后的幼芽或幼苗。由于幼苗比較小且較脆弱，冷凍前的分離和陰 干工作比較麻煩、工作量大。而且隨著紫菜細胞工程育苗技術(shù)的發(fā)展，也經(jīng)常需要保存大量 壇紫菜幼苗，以用于后續(xù)葉狀體的酶解育苗。因此能否采用幼苗帶水直接冷藏，并達到與葉 狀體陰干冷藏相同的效果，已經(jīng)引起藻類學者的關(guān)注。目前，有關(guān)紫菜葉狀體的鮮活帶水冷藏， 尚未見過報道。公告號為CN1565168的發(fā)明專利提供一種利用人工誘變、體細胞克隆和單性生殖等選育 壇紫菜良種，通過化學或物理人工誘變法獲得壇紫菜的變異細胞，用生物工具酶將變異細胞 單個分離并將其培養(yǎng)成完整葉狀體。依據(jù)葉狀體的主要光合色素和色素蛋白質(zhì)含量的高低和 它們相互間的比值，游離氨基酸含量高低，生長速度，藻體的厚薄和色澤等指標，篩選出優(yōu) 良突變體葉狀體，并將它們再次酶解獲得單離體細胞進行再生培養(yǎng)。將獲得的幼小葉狀體單 個分離，培養(yǎng)至大葉狀體，利用單性生殖獲得純系絲狀體。優(yōu)良品系的純系絲狀體的F1代葉 狀體，其優(yōu)良性狀經(jīng)遺傳穩(wěn)定性分析和綜合品質(zhì)測定后，對優(yōu)良品系的純系自由絲狀體進行 擴增培養(yǎng)，并移植于貝殼內(nèi)使之成為貝殼絲狀體，隨后，進行用貝殼絲狀體進行大田采苗和 養(yǎng)殖試驗。經(jīng)大田試驗證明為性狀穩(wěn)定的優(yōu)良品系，以自由絲狀體的方式進行長期保存和推 廣應(yīng)用。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種壇紫菜幼苗的低溫冷藏保存方法。 本發(fā)明包括以下步驟1) 配制冷藏保護劑；2) 將冷藏保護劑分裝于凍存管中；3) 收集壇紫菜幼苗；4) 將收集到的壇紫菜幼苗置于裝有冷藏保護劑的凍存管中；5) 將裝有冷藏保護劑的凍存管冷藏。所配制的冷藏保護劑最好采用鹽度為25%。的消毒海水配制，按體積百分比，甘油為10%， 二甲基亞砜(DMSO)5X，葡萄糖15%，余為消毒海水。凍存管最好為50ml凍存管。每個50ml 凍存管中最好裝冷藏保護劑30ml。壇紫菜幼苗最好為l 3cm的鮮活壇紫菜幼苗。所述冷藏最 好將裝有冷藏保護劑的凍存管密封置于-20 -25'C冰箱中保存。收集到的壇紫菜幼苗直接置于裝有冷藏保護劑的凍存管中即可，無需陰干處理。當需要復(fù)蘇時，將裝有冷藏保護劑的凍存管置于水浴中解凍，即可取出。取出凍存管中 的壇紫菜幼苗，經(jīng)消毒海水洗滌后，即可進行恢復(fù)培養(yǎng)。水浴的溫度最好為2(TC，水浴中解 凍的時間可為15min，消毒海水洗滌的次數(shù)最好2 4次。復(fù)蘇后的壇紫菜幼苗，經(jīng)恢復(fù)培養(yǎng)， 低溫冷藏180d的鮮活壇紫菜幼苗，存活率仍然可達95%以上。由于本發(fā)明使用冷藏保護劑對壇紫菜幼苗進行鮮活保存，因此避免了常規(guī)低溫保存時，需對葉狀體進行分離、陰干處理等工作，大大節(jié)省了工作量，也提高了壇紫菜葉狀體低溫冷 藏的存活率。
具體實施方式
假設(shè)在壇紫菜遺傳育種時，通過壇紫菜殼孢子的放散、萌發(fā)獲得了大量壇紫菜幼苗，在 無法及時對各株壇紫菜幼苗進行單株培養(yǎng)，以考察各株壇紫菜的經(jīng)濟性狀時，即可采用該方 法對壇紫菜鮮活幼苗進行低溫冷藏。具體步驟如下1) 用鹽度為25%。的消毒海水配制冷藏保護劑，按體積百分比，含10%甘油，5% DMSO， 15%的葡萄糖，70%消毒海水；2) 將配制好的冷藏保護劑取30ml，分裝于50ml凍存管中；3) 將l 3cm的壇紫菜鮮活幼苗直接置于裝有冷藏保護劑的凍存管中；4) 將凍存管密封后，置于-20 -25'C冰箱中保存。存儲一段時間后，需使用這些幼苗時，即可將凍存管從冰箱中取出，進行復(fù)蘇培養(yǎng)將 凍存管從冰箱中取出，直接置于20'C水浴中解凍；15min后，將凍存管從水浴中取出，經(jīng)消 毒海水洗滌3次，即可置于培養(yǎng)瓶中進行單株培養(yǎng)。保存時間在180d以內(nèi)的壇紫菜幼苗，存活 率可達95%以上。
權(quán)利要求
1.壇紫菜幼苗的低溫冷藏保存方法，其特征在于包括以下步驟1)配制冷藏保護劑；2)將冷藏保護劑分裝于凍存管中；3)收集壇紫菜幼苗；4)將收集到的壇紫菜幼苗置于裝有冷藏保護劑的凍存管中；5)將裝有冷藏保護劑的凍存管冷藏。
2. 如權(quán)利要求l所述的壇紫菜幼苗的低溫冷藏保存方法，其特征在于所述的冷藏保護劑 采用鹽度為2596。的消毒海水配制，按體積百分比，甘油為10%， 二甲基亞砜5%，葡萄糖15 %，余為消毒海水。
3. 如權(quán)利要求l所述的壇紫菜幼苗的低溫冷藏保存方法，其特征在于凍存管為50ml凍存管。
4. 如權(quán)利要求3所述的壇紫菜幼苗的低溫冷藏保存方法，其特征在于每個50ml凍存管中 裝冷藏保護劑30ml。
5. 如權(quán)利要求l所述的壇紫菜幼苗的低溫冷藏保存方法，其特征在于壇紫菜幼苗為1 3cm的鮮活壇紫菜幼苗。
6. 如權(quán)利要求l所述的壇紫菜幼苗的低溫冷藏保存方法，其特征在于所述冷藏是將裝有 冷藏保護劑的凍存管密封置于-20 -25'C冰箱中保存。
全文摘要
壇紫菜幼苗的低溫冷藏保存方法，涉及一種壇紫菜，尤其是涉及一種水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域的壇紫菜幼苗的低溫冷藏保存方法。提供一種壇紫菜幼苗的低溫冷藏保存方法。配制冷藏保護劑；將冷藏保護劑分裝于凍存管中；收集壇紫菜幼苗；將收集到的壇紫菜幼苗置于裝有冷藏保護劑的凍存管中；將裝有冷藏保護劑的凍存管冷藏。當需要復(fù)蘇時，將裝有冷藏保護劑的凍存管置于水浴中解凍，即可取出。復(fù)蘇后的壇紫菜幼苗，經(jīng)恢復(fù)培養(yǎng)，低溫冷藏180d的鮮活壇紫菜幼苗，存活率仍然可達95％以上。由于使用冷藏保護劑對壇紫菜幼苗進行鮮活保存，因此避免了常規(guī)低溫保存時，需對葉狀體進行分離、陰干處理等工作，大大節(jié)省了工作量，也提高了壇紫菜葉狀體低溫冷藏的存活率。
文檔編號A01N3/00GK101326905SQ20081007152
公開日2008年12月24日 申請日期2008年8月1日 優(yōu)先權(quán)日2008年8月1日
發(fā)明者燕 徐, 紀德華, 謝潮添, 陳昌生 申請人:集美大學