專利名稱：內(nèi)源酶制備生物活性小肽的生產(chǎn)工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種動(dòng)物飼糧添加劑的生產(chǎn)工藝，特別是一種內(nèi)源酶制備生 物活性小肽的生產(chǎn)工藝。
背景技術(shù)：
小肽是動(dòng)物降解蛋白質(zhì)為氨基酸過程中的中間產(chǎn)物，是動(dòng)物的重要營(yíng)養(yǎng)物 質(zhì)，是除氨基酸之外的蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)吸收代謝的重要方式之一，小肽與游離氨基 酸具有相互獨(dú)立的吸收機(jī)制，二者互不干擾，并且有助于氨基酸的吸收，加 快蛋白質(zhì)的合成。在動(dòng)物飼糧中添加肽制品，可提高氨基酸利用率，減少疾 病發(fā)生，充分發(fā)揮其生產(chǎn)性能及提高經(jīng)濟(jì)效益。
目前生物活性肽的制備方法有多種，常見的是酶解法和微生物法，但是由 于酶解法中外用生化酶成本較高，微生物法制備小肽酶解時(shí)間太長(zhǎng)，成本較 高，很難實(shí)現(xiàn)工業(yè)化大生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種工藝簡(jiǎn)、 無需向體系中添加外用生化酶的內(nèi)源酶制備生物活性小肽的生產(chǎn)工藝。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下的技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明是 一種內(nèi)源酶制備生物活性小肽的生產(chǎn)工藝，其特點(diǎn)是，其步驟如下 (1)選取海洋低值小雜魚或水產(chǎn)品加工下腳料為原料(海洋低值小雜魚主要 為蝦唬魚，拔頭魚，鶴針魚，海龍魚。水產(chǎn)品下腳料包括魚頭、魚皮、 魚鱗、魚尾和魚體內(nèi)臟)，原料經(jīng)過清洗后攪碎，然后按重量比l: 2 3 向原料中加入2 6'C的水并投入勻漿機(jī)或者均質(zhì)機(jī)中制漿，得魚漿物
料；
(2) 將魚漿物料置于酶解設(shè)備中，然后向其中加入氯化鈣，使魚漿物料中氯 化鈣溶液的濃度為0. 02 0. 03mol/L，在制冷狀態(tài)下使魚漿物料搖勻； 然后對(duì)魚漿物料進(jìn)行加熱升溫并將溫度控制在53 57°C,用濃度為 1. 0 2. 0 mol/L的鹽酸溶液及濃度為1. 0 2. 0mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào) 節(jié)pH達(dá)到6.8 7.2，進(jìn)行酶解，得酶解產(chǎn)物；
(3) 對(duì)酶解產(chǎn)物進(jìn)行滅酶滅菌處理后，濾除酶解液中的雜質(zhì)，得到初濾酶解 液，濃縮，得液狀或膏狀的生物活性小肽。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題還可以通過以下的技術(shù)方案來進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。 以上所述的生產(chǎn)工藝，其特點(diǎn)是，在步驟(1)中，按重量比1: 2.5向原料 中加入4"C的水并投入勻漿機(jī)或者均質(zhì)機(jī)中制漿，制漿時(shí)間為3-5分鐘。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題還可以通過以下的技術(shù)方案來進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。 以上所述的生產(chǎn)工藝，其特點(diǎn)是，在步驟(2)中，酶解時(shí)對(duì)魚漿物料進(jìn)行攪 拌，攪拌速度為50 60轉(zhuǎn)/分鐘，酶解時(shí)間為1 1.2小時(shí)。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題還可以通過以下的技術(shù)方案來進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。 以上所述的生產(chǎn)工藝，其特點(diǎn)是，在步驟(2)中，在制冷狀態(tài)下使魚漿物料 搖勻時(shí)間為3-5分鐘。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題還可以通過以下的技術(shù)方案來進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。 以上所述的生產(chǎn)工藝，其特點(diǎn)是，步驟(3)所述的滅酶滅菌方法是105°C -110。C瞬時(shí)高壓蒸汽滅菌10-20分鐘；或者70°C-9(TC巴氏滅菌法滅菌25-35分鐘。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題還可以通過以下的技術(shù)方案來進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。 以上所述的生產(chǎn)工藝，其特點(diǎn)是，步驟(3)中濾除酶解液中的雜質(zhì)時(shí)所用的 篩網(wǎng)孔徑為60 80目。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題還可以通過以下的技術(shù)方案來進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)。 以上所述的生產(chǎn)工藝，其特點(diǎn)是，將步驟(3)得到的液狀生物活性小肽液進(jìn) 行干燥處理得到粉狀的生物活性小肽。
以下是發(fā)明人做的對(duì)實(shí)施例3所述的工藝制得生物活性小肽進(jìn)行的檢測(cè) 及其結(jié)果
1、利用s印hedexG-25層析柱分離，參照?qǐng)D1。操作步驟如下
(1) 離心所得酶解產(chǎn)物液狀生物活性小肽10min，取上清液10ml;
(2) 使用抽濾裝置和0.4um微濾膜進(jìn)行微濾處理，微濾產(chǎn)物利用抽濾裝置進(jìn) 行脫氣處理，脫氣10min后，取出，冷藏待用；
(3) 利用雙重水蒸餾器制的二次蒸餾水1000ml，利用抽濾裝置和微濾膜進(jìn)行 微濾處理，微濾水利用抽濾裝置進(jìn)行脫氣處理，脫氣30min，制得脫氣 水，取出，冷藏待用；
(4) 以脫氣水為洗脫液，平衡層析柱，直至電腦顯示，譜線為一條均勻直線， 平衡時(shí)間約2h;
(5) 在層析柱中加入0.5ml待測(cè)樣品，同時(shí)收集采樣。
(6) 采樣400min結(jié)束。
圖1中，組分1-組分3之間的部分即為分子量200-1000Da的小肽成分， 組分l、組分2、組分3為三種不同分子量的標(biāo)樣所在分子量范圍，其中組分
1所在范圍的標(biāo)樣為L(zhǎng)-酪氨酸，組分2所在范圍的標(biāo)樣為維生素B12，組分3 所在范圍的標(biāo)樣為輔酶I 。在小肽樣品的譜圖中也相應(yīng)出現(xiàn)了三個(gè)峰。
2、檢測(cè)結(jié)果初步確定酶解產(chǎn)物生物活性小肽液的平均氨基酸數(shù)殘基為
7， 100%控制在IO個(gè)以內(nèi)，其中2—10個(gè)氨基酸占整個(gè)小肽產(chǎn)品的70%。
海洋低值魚體內(nèi)的內(nèi)源酶系非常發(fā)達(dá)，其中的胰蛋白酶系是內(nèi)源酶系中活 性較高，穩(wěn)定性較好的酶系，本發(fā)明在原有海洋低值魚生物胰蛋白酶酶解條 件研的基礎(chǔ)上，探索出胰蛋白酶酶原激活方法和海洋低值魚徹底酶解的工藝。 本發(fā)明利用海洋低值魚機(jī)體內(nèi)內(nèi)源酶系，尋求最佳的自體酶解條件，不僅極 大節(jié)省了成本，而且簡(jiǎn)化了生物活性肽的生產(chǎn)工藝，規(guī)?；a(chǎn)易于實(shí)現(xiàn)。


圖1為本發(fā)明產(chǎn)物生物活性小肽層析色譜圖。
具體實(shí)施例方式
以下進(jìn)一歩描述本發(fā)明的具體技術(shù)方案，以便于本領(lǐng)域的技術(shù)人員進(jìn)一 步地理解本發(fā)明，而不構(gòu)成對(duì)其權(quán)利的限制。
實(shí)施例l。
一種內(nèi)源酶制備生物活性小肽的生產(chǎn)工藝，其步驟如下
(1) 選取海洋低值小雜魚或水產(chǎn)品加工下腳料為原料，原料經(jīng)過清洗后攪 碎，然后按重量比1: 2向原料中加入2r的水并投入勻漿機(jī)或者均質(zhì)機(jī) 中制漿，得魚漿物料；
(2) 將魚漿物料置于酶解設(shè)備中，然后向其中加入氯化鈣，使魚漿物料中氯 化鈣溶液的濃度為0. 02mol/L，在制冷狀態(tài)下使魚槳物料搖勻；然后對(duì) 魚漿物料進(jìn)行加熱升溫并將溫度控制在53°C，用濃度為1. 0mol/L的鹽酸溶液及濃度為1. 0mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH達(dá)到6. 8，進(jìn)行酶解， 得酶解產(chǎn)物；
(3)對(duì)酶解產(chǎn)物進(jìn)行滅酶滅菌處理后，濾除酶解液中的雜質(zhì)，得到初濾酶解 液，濃縮，得液狀或膏狀的生物活性小肽。
實(shí)施例2。 一種內(nèi)源酶制備生物活性小肽的生產(chǎn)工藝，其步驟如下
(1) 選取海洋低值小雜魚或水產(chǎn)品加工下腳料為原料，原料經(jīng)過清洗后攪 碎，然后按重量比h 3向原料中加入6"的水并投入勻漿機(jī)或者均質(zhì) 機(jī)中制漿，得魚漿物料；
(2) 將魚槳物料置于酶解設(shè)備中，然后向其中加入氯化l丐，使魚漿物料中氯 化鈣溶液的濃度為0.03mol/L，在制冷狀態(tài)下使魚漿物料搖勻；然后對(duì) 魚漿物料進(jìn)行加熱升溫并將溫度控制在57°C ，用濃度為2. 0 mol/L的鹽 酸溶液及濃度為2. 0mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH達(dá)到7. 2，進(jìn)行酶解， 得酶解產(chǎn)物；
(3) 對(duì)酶解產(chǎn)物進(jìn)行滅酶滅菌處理后，濾除酶解液中的雜質(zhì)，得到初濾酶解 液，濃縮，得液狀或膏狀的生物活性小肽。
實(shí)施例3。 一種內(nèi)源酶制備生物活性小肽的生產(chǎn)工藝，其步驟如下
(1) 選取海洋低值小雜魚或水產(chǎn)品加工下腳料為原料，原料經(jīng)過清洗后攪 碎，然后按重量比1: 2. 5向原料中加入4匸的水并投入勻漿機(jī)或者均質(zhì) 機(jī)中制漿，得魚漿物料；
(2) 將魚漿物料置于酶解設(shè)備中，然后向其中加入氯化轉(zhuǎn)，使魚漿物料中氯 化鈣溶液的濃度為0. 025mol/L，在制冷狀態(tài)下使魚漿物料搖勻；然后對(duì) 魚漿物料進(jìn)行加熱升溫并將溫度控制在55°C，用濃度為1. 5 mol/L的鹽
酸溶液及濃度為1. 5mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH達(dá)到7，進(jìn)行酶解， 得酶解產(chǎn)物；
(3)對(duì)酶解產(chǎn)物進(jìn)行滅酶滅菌處理后，濾除酶解液中的雜質(zhì)，得到初濾酶解 液，濃縮，得液狀或膏狀的生物活性小肽。 實(shí)施例4。 一種內(nèi)源酶制備生物活性小肽的生產(chǎn)工藝，其步驟如下
(1) 選取海洋低值小雜魚或水產(chǎn)品加工下腳料為原料，原料經(jīng)過清洗后攪 碎，然后按重量比1: 2.2向原料中加入3"C的水并投入勻漿機(jī)或者均質(zhì)
機(jī)中制漿，制漿時(shí)間為3分鐘，得魚漿物料；
(2) 將魚漿物料置于酶解設(shè)備中，然后向其中加入氯化鈣，使魚漿物料中氯 化鈣溶液的濃度為0.022mol/L，在制冷狀態(tài)下使魚漿物料搖勻；然后對(duì) 魚漿物料進(jìn)行加熱升溫并將溫度控制在54°C，用濃度為1. 2 mol/L的鹽 酸溶液及濃度為1. 2mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH達(dá)到6. 9，進(jìn)行酶解， 得酶解產(chǎn)物；
(3) 對(duì)酶解產(chǎn)物進(jìn)行滅酶滅菌處理后，濾除酶解液中的雜質(zhì)，得到初濾酶解 液，濃縮，得液狀或膏狀的生物活性小肽。
實(shí)施例5。 一種內(nèi)源酶制備生物活性小肽的生產(chǎn)工藝，其步驟如下
(1) 選取海洋低值小雜魚或水產(chǎn)品加工下腳料為原料，原料經(jīng)過清洗后攪 碎，然后按重量比1: 2.8向原料中加入5"C的水并投入勻漿機(jī)或者均質(zhì) 機(jī)中制漿，制漿時(shí)間為5分鐘，得魚漿物料；
(2) 將魚漿物料置于酶解設(shè)備中，然后向其中加入氯化鈣，使魚漿物料中氯 化鈣溶液的濃度為0.028mol/L，在制冷狀態(tài)下使魚漿物料搖勻；然后對(duì) 魚漿物料進(jìn)行加熱升溫并將溫度控制在56°C ,用濃度為1. 8 mol/L的鹽酸溶液及濃度為1. 8mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH達(dá)到7. 1,進(jìn)行酶解， 得酶解產(chǎn)物-，
(3)對(duì)酶解產(chǎn)物進(jìn)行滅酶滅菌處理后，濾除酶解液中的雜質(zhì)，得到初濾酶解 液，濃縮，得液狀或膏狀的生物活性小肽。
實(shí)施例6。實(shí)施例1-5任何一項(xiàng)所述的生產(chǎn)工藝，在步驟(2)中，酶解 時(shí)對(duì)魚漿物料進(jìn)行攪拌，攪拌速度為50轉(zhuǎn)/分鐘，酶解時(shí)間為l小時(shí)。
實(shí)施例7。實(shí)施例1-5任何一項(xiàng)所述的生產(chǎn)工藝，在步驟(2)中，酶解 時(shí)對(duì)魚漿物料進(jìn)行攪拌，攪拌速度為60轉(zhuǎn)/分鐘，酶解時(shí)間為1.2小時(shí)。
實(shí)施例8。實(shí)施例1-5任何一項(xiàng)所述的生產(chǎn)工藝，在步驟(2)中，酶解 時(shí)對(duì)魚漿物料進(jìn)行攪拌，攪拌速度為55轉(zhuǎn)/分鐘，酶解時(shí)間為l.l小時(shí)。
實(shí)施例9。實(shí)施例1-8任何一項(xiàng)所述的生產(chǎn)工藝，在步驟(2)中，在制 冷狀態(tài)下使魚漿物料搖勻時(shí)間為3分鐘。
實(shí)施例IO。實(shí)施例l-8任何一項(xiàng)所述的生產(chǎn)工藝，在步驟(2)中，在制 冷狀態(tài)下使魚漿物料搖勻時(shí)間為5分鐘。
實(shí)施例11。實(shí)施例1-10任何一項(xiàng)所述的生產(chǎn)工藝，步驟(3)所述的滅 酶滅菌方法是105。C瞬時(shí)高壓蒸汽滅菌10分鐘；或者7(TC巴氏滅菌法滅菌 25分鐘。
實(shí)施例12。實(shí)施例卜10任何一項(xiàng)所述的生產(chǎn)工藝，步驟(3)所述的滅 酶滅菌方法是11(TC瞬時(shí)高壓蒸汽滅菌20分鐘；或者9(TC巴氏滅菌法滅菌 35分鐘。
實(shí)施例13。實(shí)施例1-10任何一項(xiàng)所述的生產(chǎn)工藝，步驟(3)所述的滅 酶滅菌方法是107。C瞬時(shí)高壓蒸汽滅菌15分鐘；或者8(TC巴氏滅菌法滅菌
30分鐘。
實(shí)施例14。實(shí)施例1-13任何一項(xiàng)所述的生產(chǎn)工藝，步驟(3)中濾除酶 解液中的雜質(zhì)時(shí)所用的篩網(wǎng)孔徑為60目。
實(shí)施例15。實(shí)施例卜13任何一項(xiàng)所述的生產(chǎn)工藝，步驟(3)中濾除酶 解液中的雜質(zhì)時(shí)所用的篩網(wǎng)孔徑為80目。
施例16。實(shí)施例1-15任何一項(xiàng)所述的生產(chǎn)工藝，將步驟(3)得到的 生物活性小肽液進(jìn)行干燥處理得到生物活性小肽粉。
權(quán)利要求
1、一種內(nèi)源酶制備生物活性小肽的生產(chǎn)工藝，其特征在于，其步驟如下(1)選取海洋低值小雜魚或水產(chǎn)品加工下腳料為原料，原料經(jīng)過清洗后攪碎，然后按重量比1∶2～3向原料中加入2～6℃的水并投入勻漿機(jī)或者均質(zhì)機(jī)中制漿，得魚漿物料；(2)將魚漿物料置于酶解設(shè)備中，然后向其中加入氯化鈣，使魚漿物料中氯化鈣溶液的濃度為0.02～0.03mol/L，在制冷狀態(tài)下使魚漿物料搖勻；然后對(duì)魚漿物料進(jìn)行加熱升溫并將溫度控制在53～57℃，用濃度為1.0～2.0mol/L的鹽酸溶液及濃度為1.0～2.0mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH達(dá)到6.8～7.2，進(jìn)行酶解，得酶解產(chǎn)物；(3)對(duì)酶解產(chǎn)物進(jìn)行滅酶滅菌處理后，濾除酶解液中的雜質(zhì)，得到初濾酶解液，濃縮，得液狀或膏狀的生物活性小肽。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)工藝，其特征在于，在步驟(1)中，按重 量比1: 2.5向原料中加入4'C的水并投入勻漿機(jī)或者均質(zhì)機(jī)中制漿，制 漿時(shí)間為3-5分鐘。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)工藝，其特征在于，在步驟(2)中，酶解 時(shí)對(duì)魚漿物料進(jìn)行攪拌，攪拌速度為50 60轉(zhuǎn)/分鐘，酶解時(shí)間為l 1.2小時(shí)。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)工藝，其特征在于，在步驟(2)中，在制 冷狀態(tài)下使魚漿物料搖勻時(shí)間為3-5分鐘。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)工藝，其特征在于，步驟(3)所述的滅酶滅菌方法是105'C-110。C瞬時(shí)高壓蒸汽滅菌10-20分鐘；或者7(TC-90 °C巴氏滅菌法滅菌25-35分鐘。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)工藝，其特征在于，步驟(3)中濾除酶解 液中的雜質(zhì)時(shí)所用的篩網(wǎng)孔徑為60 80目。
7、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)工藝，其特征在于，將步驟(3)得到的液 狀生物活性小肽液進(jìn)行干燥處理得到粉狀的生物活性小肽。
全文摘要
本發(fā)明是一種內(nèi)源酶制備生物活性小肽的生產(chǎn)工藝，其特征在于，選取海洋低值小雜魚或水產(chǎn)品加工下腳料為原料，原料經(jīng)過清洗后攪碎，加水并制成魚漿物料；將魚漿物料置于酶解設(shè)備中，然后向其中加入氯化鈣，然后對(duì)魚漿物料進(jìn)行加熱升溫并將溫度控制在53～57℃，調(diào)節(jié)pH，進(jìn)行酶解，得酶解產(chǎn)物；對(duì)酶解產(chǎn)物進(jìn)行滅酶滅菌處理后，濾除酶解液中的雜質(zhì)，得到初濾酶解液，濃縮，得液狀或膏狀的生物活性小肽。本發(fā)明利用海洋低值魚機(jī)體內(nèi)內(nèi)源酶系，尋求最佳的自體酶解條件，不僅極大節(jié)省了成本，而且簡(jiǎn)化了生物活性肽的生產(chǎn)工藝，規(guī)模化生產(chǎn)易于實(shí)現(xiàn)。
文檔編號(hào)A23K1/10GK101341924SQ20081019564
公開日2009年1月14日 申請(qǐng)日期2008年9月1日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月1日
發(fā)明者陳憶鳳 申請(qǐng)人:陳憶鳳