專利名稱：從新疆藁本中制備肉豆蔻醚的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種天然產(chǎn)物成分一肉豆蔻醚的提取制備方法及其用途，屬于醫(yī)藥和農(nóng)藥技 術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
肉豆蔻醚，即5-烯丙基-1-甲氧基-2， 3-(甲撐二氧基)苯，分子式dAA,分子量192. 21， CAS號(hào)607-91-0，具有如圖l所示的化學(xué)結(jié)構(gòu)式、圖2所示的紅外光譜圖以及圖3所示的 質(zhì)譜圖。它是肉豆蔻科肉豆蔻屬植物肉豆蔻釣Ti"j'ca /ra^g/7s Houtt揮發(fā)油的主要芳香成 分，肉豆蔻醚在肉豆蔻揮發(fā)油中含量為4-8% (Hallstroem and Thuvander， 1997)。除此之 夕卜，肉豆蔻醚還分布于傘形科的芹屬U; i鵬)、蒔蘿屬""e^ 層)、海茴香屬(6Wt力艦朋)、 茴香屬(尸oe/n'c〃J咖)、歐芹屬(尸etrasehV7咖)、茴芹屬(尸力z w'/jeJ7a)、水芹屬(AVo7/Ya)、 歐當(dāng)歸屬(Zew's"c"/ 7)、歐防風(fēng)屬(尸a"j'/7aca)、藁本屬aj'《〃"ic〃歷)和胡蘿卜屬("a〃c"s) 等(Harborne et al. ， 1969)。
肉豆蔻醚的抗腫瘤、抗氧化、抗菌、保肝、殺蟲、增效等生理活性及致幻、促進(jìn)細(xì)胞凋 亡的毒性吸引了研究者的極大關(guān)注?，F(xiàn)代研究表明，肉豆蔻醚具有誘導(dǎo)鼠肝臟谷胱甘肽硫轉(zhuǎn) 移酶(GSTs)活性和抑制苯并芘誘導(dǎo)的鼠肺腫瘤細(xì)胞生成的功能(Ahmadetal.， 1997; Zheng et al.，1992)，具有治療脂多糖導(dǎo)致的肝損傷功能(Morita et al. ， 2003)，對(duì)革蘭式陽(yáng) 性菌和陰性菌均有抗菌活性(Narasimhan and Dhake， 2006)，對(duì)鱗翅目、鞘翅目、雙翅目 的昆蟲和螨類具有一定的殺蟲活性并對(duì)氨基甲酸酯類和菊酯類殺蟲劑有較強(qiáng)的增效作用 (Lichterstein and Casida， 1963)。 然而，肉豆蔻醚在6-7mg/kg劑量時(shí)對(duì)人有致幻作用 (Hallstroem and Thuvander, 1997),通過細(xì)胞凋亡程序?qū)θ松窠?jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞有細(xì)胞毒活 性(Lee et al. ， 2005)。
肉豆蔻醚廣泛有益的生理活性及其特殊的毒性在醫(yī)藥、農(nóng)藥等領(lǐng)域顯示出較大的應(yīng)用前 景和較高的使用風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)其開展研究、檢測(cè)、應(yīng)用都需要肉豆蔻醚標(biāo)準(zhǔn)品，目前市場(chǎng)上購(gòu)買 困難、價(jià)格昂貴，因此從植物中制備肉豆蔻醚的簡(jiǎn)單實(shí)用的方法具有較高實(shí)用價(jià)值。
新疆藁本系傘形科山芎屬多年生草本植物鞘山芎&加'0^ "'/7咖ra^'/7^咖(Spreng) Thell的根莖，產(chǎn)新疆西部，以伊犁地區(qū)最多，歐洲中部亦有分布；具有祛風(fēng)散寒、止痛等功能，用于治療風(fēng)寒頭痛，寒濕腹痛、泄瀉、疥癬等。新疆藁本主要成分為揮發(fā)油，肉豆蔻 醚在新疆藁本揮發(fā)油中含量較高，是肉豆蔻醚的理想植物資源，但制備肉豆蔻醚的方法及其 抗植物病原真菌活性未見文獻(xiàn)和專利報(bào)道。 參考文獻(xiàn)如下 Ahmad H， Tijerina MT， Tobola AS， 1997. Preferential overexpression of a class MU Glutathione S—transferase subunit in mouse liver by myristicin. j9ioc力e瓜 紐C麵諷236， 825-828. Hallstroem H， Thuvander A， 1997. Toxicological evaluation of myristicin. 7fetors2 7bu'y^ 5: 186-192. Harborne瓜Heywood VH， Williams CA， 1969. Distribution of myristicin in seeds of the Umbelliferae,腳toc力,'^2y 8: 1729-1732. Lee BK， Kim JH， Jung JW， Choi JW， Han ES， Lee SH， Ko KH ， Ryu JH， 2005 . Myristicin-induced neurotoxicity in human neuroblastoma SK-N-SH cells, 7b;r_z'C(92i9 157(1) : 49-56. Lichterstein EP，Casida JE， 1963. Naturally occurring insecticides, myristicin, an insecticide and synergist occurring naturally in the edible parts of parsnips, /扭j'c.尸"6Z e瓜11:410-415 Morita T， Jinno K， Kawagishi H， Arimoto Y， Suganuma H， Inakuma T， Sugiyama K， 2003. Hepatoprotective effect of myristincin from nutmeg( Myristica fragrans) on lipopolysaccharide/ D-galactosamine-induced liver injury. 4^"'。 尸6^t/ C力譜， 51:1560-1565 Narasimhan B， Dhake AS, 2006. Antibacterial principles from Myristica fragrans seeds. / ifeJ9 (3) : 395-399 Zheng GQ， Kenney PM， Zhang J， Lam LK， 1992. Inhibition of benzo(a)pyrene-induced tumorigenesis by myristicin, a volatile aroma constituent of parsley leaf oil. Ckrci卿潔^ 13: 1921-1923.中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志.北京:科學(xué)出版社，1992. [IO]中國(guó)科學(xué)院新疆生物土壤沙漠研究所.新疆藥用植物志(第二冊(cè)).烏魯木齊:新疆人民出 版社，1981.發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種從新疆藁本中提取制備殺菌活性成分肉豆蔻醚的方法，其 過程包括水蒸汽蒸餾、硅膠柱層析、冷凍結(jié)晶和生物測(cè)定等幾個(gè)步驟，提取制備工藝流 程參見圖4。具體而言，包括如下步驟1) 取新疆藁本材料，進(jìn)行干燥，并粉碎，得到新疆藁本粗粉，將所述粗粉與水混勻 后進(jìn)行冷浸處理，隨后置于水蒸汽蒸餾裝置進(jìn)行蒸餾，直到不再有揮發(fā)油冷凝下沉為止， 揮發(fā)油用分液漏斗分液后獲得下層精油；2) 將第l)步獲得的精油進(jìn)行硅膠柱層析，收集含有肉豆蔻醚的流分；3) 將所述流分與有機(jī)溶劑混合，進(jìn)行冷凍結(jié)晶，得到肉豆蔻醚白色結(jié)晶。上述方法制備的肉豆蔻醚對(duì)小麥赤霉病菌等植物病原真菌進(jìn)行離體生物活性測(cè)定， 發(fā)現(xiàn)具有極強(qiáng)的殺菌活性。其中，提取制備肉豆蔻醚一些更優(yōu)選的方面如下所述 第l)步中所述的新疆藁本粗粉是過三號(hào)篩得到。第l)步中的所述粗粉與水混勻是按料液重量比為1:4 1:6進(jìn)行混合；所述冷浸處 理的時(shí)間為3 — 9小時(shí)，優(yōu)選為5 — 7小時(shí)，最優(yōu)選為6小時(shí)。第l)步中的所述的在水蒸汽蒸餾裝置進(jìn)行蒸餾是指加熱至沸騰并保持微沸5 — 7小 時(shí)，優(yōu)選為6小時(shí)來(lái)進(jìn)行的。第2)步中硅膠柱層析所用的層析柱的直徑與長(zhǎng)度比為1:20 1:30;上樣前，用石 油醚浸泡硅膠，通過濕法裝柱；上樣時(shí)，上樣量與硅膠量按照1:8 1:16(重量比)的比 例進(jìn)行，優(yōu)選比例為l: 10;硅膠為300 400目層析用硅膠。第2)步中硅膠柱層析的洗脫劑為石油醚與氯仿，或者石油醚與二氯甲烷的混合物。 并且按照體積比10: 0， 9:1， 8:2, 7:3, 6:4， 5:5的比例進(jìn)行梯度洗脫。收集的流分 是指洗脫液的比例為8:2時(shí)洗脫的、在GF254硅膠板上紫外燈下顯紫色的流分，即為肉 豆蔻醚粗品。第3)步是將收集的流分與醇類有機(jī)溶劑，優(yōu)選為乙醇或甲醇混合，優(yōu)選等體積混合，進(jìn) 行冷凍結(jié)晶，優(yōu)選冷凍結(jié)晶是在-6CTC -8(TC下靜置2 3小時(shí)，取出后去除上層溶劑即得到 肉豆蔻醚白色晶體。當(dāng)處于室溫時(shí)，肉豆蔻醚呈無(wú)色油狀液體。采用平皿法(農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NYT 1156.2-2006)測(cè)定平皿內(nèi)本發(fā)明方法制得的肉豆蔻醚純品對(duì)小麥赤霉病菌、棉花枯萎病菌、煙草赤星病菌、白菜黑斑病菌、南瓜枯萎病菌和番茄 早疫病菌等植物病原真菌的菌絲生長(zhǎng)抑制作用，肉豆蔻醚表現(xiàn)出強(qiáng)烈的離體抑菌效果。 下面是相對(duì)具體的一種實(shí)施方式-
1) 水蒸汽蒸餾取新疆藁本材料，經(jīng)干燥粉碎后，過三號(hào)篩得到藁本粗粉，按照料液比
重量比1:5的比例將新疆藁本粗粉和水混勻后冷浸處理約6小時(shí)，隨后置于水蒸汽蒸餾裝置 中加熱至沸騰并保持微沸約6小時(shí)，直至不再有揮發(fā)油冷凝下沉為止，揮發(fā)油用分液漏斗分 液后獲得下層黃色精油，此步驟的收率為0.9% 1.2%。
2) 硅膠柱層析選擇直徑與長(zhǎng)度比為l:20的層析柱，石油醚浸泡硅膠濕法裝柱， 按照上樣量與硅膠量(300 400目層析用硅膠)1:10的比例上樣(上述黃色下層精油)， 石油醚與二氯甲垸按照10: 0， 9:1， 8:2， 7:3, 6:4， 5:5的比例梯度洗脫，按照與硅 膠等質(zhì)量的量收集各流分，合并石油醚與二氯甲烷8:2時(shí)洗脫出的在紫外燈下GF254薄 層層析硅膠板上紫外燈下顯色檢驗(yàn)呈紫色的流分得到淺黃色肉豆蔻醚粗品，其中肉豆蔻 醚含量達(dá)95%以上。
3) 冷凍結(jié)晶將淺黃色肉豆蔻醚粗品與無(wú)水乙醇按等體積比混合后放入玻璃器皿 中，然后置于-8(TC超低溫冰箱中靜置2 3小時(shí)后取出，迅速倒除上層溶劑后得肉豆蔻 醚白色結(jié)晶，室溫下呈無(wú)色油狀液體，經(jīng)色譜分析純度在99%以上。
4) 生物測(cè)定用丙酮作溶劑、PDA作培養(yǎng)基將肉豆蔻醚倍性稀釋成系列濃度的含藥 平板，等量丙酮與PDA混合液為對(duì)照，每處理三次重復(fù)，無(wú)菌條件下接入直徑為5mm 病原菌菌落，在25i2'C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時(shí)后用十字交叉法測(cè)定菌落直徑，按照下式 計(jì)算肉豆蔻醚對(duì)植物病原真菌菌絲生長(zhǎng)抑制率
/(。/。)"7"xlOO(式中:I——菌絲生長(zhǎng)抑制率；DO——對(duì)照菌落增長(zhǎng)直徑； Dt——藥劑處理菌落增長(zhǎng)直徑。)
生物測(cè)定結(jié)果顯示肉豆蔻醚對(duì)小麥赤霉病菌、棉花枯萎病菌、煙草赤星病菌、白菜黑斑 病菌、南瓜枯萎病菌和番茄早疫病菌等植物病原真菌的菌絲生長(zhǎng)的最低有效抑制濃度 (Minimum Effective Concentration, MEC)在0.06 0.5pl.ml/1之間，肉豆蔻醚表現(xiàn)出強(qiáng)烈 的離體抑菌效果。
本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)
本發(fā)明是首次從新疆藁本中高效提取制備肉豆蔻醚，原料易得、操作簡(jiǎn)單，相對(duì)化學(xué)合
成的方法操作更簡(jiǎn)單、成本更低廉。按照本發(fā)明的方法步驟精制肉豆蔻醚，肉豆蔻醚收率高、
純度高，可以用作中藥中有毒成分肉豆蔻醚檢測(cè)分析所需標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品，以及醫(yī)藥和農(nóng)藥研究開發(fā)所需肉豆蔻醚純品。采用平皿法測(cè)定平皿內(nèi)本發(fā)明方法制得的肉豆蔻醚純品對(duì)小麥赤霉 病菌、棉花枯萎病菌、煙草赤星病菌、白菜黑斑病菌、南瓜枯萎病菌和番茄早疫病菌等植物 病原真菌的菌絲生長(zhǎng)抑制作用，肉豆蔻醚表現(xiàn)出強(qiáng)烈的離體抑菌效果。肉豆蔻醚本身具有一 定的抗腫瘤、抗氧化、抗菌、保肝、殺蟲、增效等活性，從而也能以此化合物為模板衍生合 成系列化合物并從中篩選更高活性的醫(yī)藥及農(nóng)藥新產(chǎn)品提供原料。


圖1肉豆蔻醚的化學(xué)結(jié)構(gòu)式 圖2肉豆蔻醚的紅外光譜圖 圖3肉豆蔻醚質(zhì)譜圖
圖4從新疆藁本中制備肉豆蔻醚工藝流程圖 圖5新疆藁本精油化學(xué)成分GC-MS分析結(jié)果 圖6新疆藁本精油柱層析第2 第7號(hào)流分GC-MS分析結(jié)果
具體實(shí)施例方式
下面通過具體實(shí)施方式
的詳細(xì)描述來(lái)進(jìn)一步闡明本發(fā)明，但并不是對(duì)本發(fā)明的限制， 僅僅作示例說(shuō)明。
實(shí)施例1:
1)水蒸汽蒸餾
取新疆藁本粉碎，過三號(hào)篩后得到新疆藁本粗粉1.5千克，按照料液比l: 5(重量比)的比例將新疆藁本粗粉和水混勻后冷浸處理6小時(shí)，然后置于水蒸汽蒸餾裝置中蒸餾6 小時(shí)至沒有揮發(fā)油冷凝下沉為止，揮發(fā)油用分液漏斗分液后，合并下層精油得18.3克， 收率為1.2%，藁本精油化學(xué)成分GC-MS分析結(jié)果參見圖5和表1;
其中，GC-MS分析條件AI/AS 3000 Trace GC 2000 DSQ氣相色譜質(zhì)譜儀;DB-1701 毛細(xì)管柱(30 mX0.25誦，膜厚0.25 Wn );升溫程序起始溫度40° C，保持1分 鐘，10° C/分鐘升溫至200° C，保留IO分鐘；進(jìn)樣口溫度200° C， 40° C;進(jìn)樣量1W， 分流比100:1;離子源溫度250。 C， 70ev，30-300質(zhì)量范圍全掃描。表1新疆藁本精油化學(xué)成分GC-MS分析結(jié)果，化合物名稱 分子式分子量U2) 硅膠柱層析然后取10克精油進(jìn)行硅膠柱層析選80厘米X3厘米的玻璃層析柱，石油醚(60 9(TC)浸泡300 400目層析用硅膠IOO克濕法裝柱，石油醚與二氯甲烷梯度洗脫(按照 10:0， 9:1， 8:2, 7:3, 6:4, 5:5比例)，100毫升/瓶收集流分，接著對(duì)各流分進(jìn)行TLC 和GC-MS檢測(cè)分析(第2 第7號(hào)流分化學(xué)成分GC-MS分析結(jié)果參見圖6)，合并第2、 3、 4號(hào)流分，減壓蒸餾除去溶劑后得淺黃色肉豆蔻醚粗品6. 12克(GC-MS分析結(jié)果顯示 肉豆蔻醚含量為95.7%)。3) 冷凍結(jié)晶將淺黃色肉豆蔻醚粗品與乙醇等體積比混合后放入玻璃器皿中，然后 置于-8(TC超低溫冰箱中靜置2小時(shí)后取出，迅速倒除上層溶劑后得一白色結(jié)晶，室溫下1246789101112131415161718 9202122232425262728291360.,151200,,681360,.161360,.511360,.121362,■491360,.141502,.451480,.511540,■ 891520,.211962,.202040,.531501,092040.152041.082040.422040.182220.1219268.272080.612200.762200.161880.801620.362040.141卯9..851884..301920.405.84 a-旅烯(a-Pinene) C10H166.22 異丙苯(Isopropylbenzene) C9H126.682國(guó)a-旅烯(2-a-Pinene) C10H167.14 1-水齊烯(l-Phellandrene) C10Hi67.37 "厶、油* (a-Terpi腿e) C10H167.66a-7jC開烯(a-Phellandrene) C10H168.46 1-甲基-4-(1-甲基亞乙基)-環(huán)己烯 C1()H16l-Methyl-4-(l-methylethylidene)- cyclohexene)9.59 6-丁基-l，4-杯庚二痛(6-Butyl-l，4-cycloheptadiene) C9.84 丁基苯(Pentyl-benzene) C11.12 a-松油烯醇(a-Terpineol) C12.55 水開醛(Phenllandral) C12.87 a-乙酸松油酉旨(a-Terpinyl acetate) C 13.30 1,6-二甲基-4-(1-甲基乙基)-l，2，3，4，4a，7-六氫萘 C ( l,6-Dimethyl-4-(l-methylethyl)-1,2,3，4，4a,7-Hexahydro-naphthalene) 13.53 4-乙*基-2-甲氧基苯酚(4-Ethenyl-2-methoxy-phenol) C13.62 異石竹烯(Isocaryophyllene) C14.16 喇叭裙(Ledene) C14.32 a-柏木烯(a-Cedrene) C14.60 p-桕木烯(p-Cedrene) C14.87 表藍(lán)桉醇(Epiglobulol) C15.73 肉豆疊醚(Myristicin) C 16.09 M香脂素(l,2，3-Trimethoxy-5-(2-propenyl)-benzene ) C16.21 (-)-匙葉桉油烯醇((-)-Spathulenol) C16.84 異匙葉桉油烯醇(Isospathulenol) C18.36 亞丁基苯酞(Butylidenephthalide) C18.52 2-乙氧基-l(2H)-苯并環(huán)丁烯酮 C(2-Ethoxy-1 (2H)-benzocyclobutenone)18.78 5,6-亞甲二氧基-2-丙基-2H-卩引哇 C(5,6-Methy lenedioxy-2-propyl-2H-indazole )19,66 3-正丁基苯酞(3-n-Butylphthalide) C20.03 3-異亞丁基苯酞(3-Isobutylidenphthalide) C 20.21 4,5- 二氫-3-正丁基苯酞 (4,5-Dihydro-3-n- Cbutylp她alide)00086860411112 2H H H H H Hooo33> 22 2 2220002000 N ooo4 4 4 4 6 2 6 4 4 2 o 2 4-2 6，122221-12211- 1 111-HHHHHHHHHHH H HHH呈無(wú)色油狀液體，經(jīng)色譜分析純度在99%以上，經(jīng)GC-MS分析后譜圖檢索并參考文獻(xiàn)比 對(duì)質(zhì)譜及紅外光譜鑒定，所獲得的產(chǎn)品具有如圖l所示的化學(xué)結(jié)構(gòu)式，圖2和3所示的 紅外光譜圖和質(zhì)譜圖。因此，表明通過上述方法獲得的產(chǎn)品確系肉豆蔻醚。
4)生物活性測(cè)定用丙酮作溶劑、PDA作培養(yǎng)基將肉豆蔻醚倍性稀釋成系列濃度的 含藥平板，等量丙酮與PDA混合液為對(duì)照，每處理三次重復(fù)，無(wú)菌條件下接入直徑為5mm 病原菌菌落，在25i2'C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時(shí)后用十字交義法測(cè)定菌落直徑，按照下式 計(jì)算肉豆蔻醚對(duì)植物病原真菌菌絲生長(zhǎng)抑制率
/(°/0)=D0 —"xl00(式中:I——菌絲生長(zhǎng)抑制率；Do——對(duì)照菌落增長(zhǎng)直徑； Z)。
Dt——藥劑處理菌落增長(zhǎng)直徑。)
按照上述平板法測(cè)定制備的肉豆蔻醚純品對(duì)小麥赤霉病菌、棉花枯萎病菌、煙草赤 星病菌、白菜黑斑病菌、南瓜枯萎病菌和番茄早疫病菌等植物病原真菌的抑菌活性，首 先將肉豆蔻醚稀釋并制備終濃度為1. 0， 0.5， 0.25， 0.125， 0.0625， 0.03125， O.OlSeZS^il.ml/1 等系列濃度含藥平板，等量丙酮與PDA混合液為對(duì)照，每處理三次重復(fù)，無(wú)菌條件下接 入直徑為5mm植物病原菌菌落，在25i2'C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時(shí)后測(cè)定并計(jì)算抑制率， 結(jié)果見表2。
表2肉豆蔻醚對(duì)植物病原真菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用
濃度 (pl'mr1)72h押制率(％)
小麥赤霉病菌煙草赤星病菌白菜黑斑病菌南瓜枯姜病菌棉花枯萎病菌番茄早疫病菌
1.0100.00100.00100.00100.00100.00100.00
0.5100.00100.00100.00100.00100.00100.00
0.25100.00100.00100.00100.0085.78100.00
0.125100.00100.00100.0088.2467.57100.00
0.062589.8681.25綱.oo85.2951.35100.00
0.0312574.6472.7380.0075.4943.9279.61
0.01562545.6538.6471.0041.1841.8955.26
MEC (—r1)0.1250.1250.06250.250.50.062權(quán)利要求
1.一種從新疆藁本中制備殺菌活性成分肉豆蔻醚的方法，其特征在于，包括如下步驟1)取新疆藁本的根莖作材料，進(jìn)行干燥并粉碎，得到新疆藁本粗粉，將所述粗粉與水混勻后進(jìn)行冷浸處理，隨后置于水蒸汽蒸餾裝置進(jìn)行蒸餾，直到不再有揮發(fā)油冷凝下沉為止，揮發(fā)油用分液漏斗分液后獲得下層精油；2)將第1)步獲得的精油進(jìn)行硅膠柱層析，有機(jī)溶劑梯度洗脫后收集含有肉豆蔻醚的流分；3)將所述流分與醇類有機(jī)溶劑混合，進(jìn)行冷凍結(jié)晶，得到肉豆蔻醚白色晶體。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于第l)步中所述的藁本粗粉是過三號(hào) 篩得到。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于第l)步中所述粗粉與水混勻是按料 液重量比為1:4 1:6混合；所述冷浸處理的時(shí)間為3 — 9小時(shí)，優(yōu)選為5 — 7小時(shí)，最優(yōu) 選為6小時(shí)。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于第l)步中的所述的在水蒸汽蒸餾裝 置進(jìn)行蒸餾是指加熱至沸騰并保持微沸5 — 7小時(shí)，優(yōu)選為6小時(shí)。
5. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于第2)步中硅膠柱層析所用的層析柱 的直徑與長(zhǎng)度比為1:20 1:30;上樣前，用石油醚浸泡硅膠，通過濕法裝柱；上樣時(shí)， 上樣量與硅膠量按照重量比1:8 1:16的比例進(jìn)行；硅膠為300 400目層析用硅膠。
6. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于第2)步中硅膠柱層析時(shí)采用石油醚 與氯仿，或者石油醚與二氯甲垸進(jìn)行梯度洗脫。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于所述梯度洗脫是兩種物質(zhì)按照體積比 為10: 0， 9:1， 8:2, 7:3， 6:4, 5:5的比例進(jìn)行。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于收集含肉豆蔻醚的流分是在兩種物質(zhì) 按照體積比為8:2時(shí)洗脫的、在GF254硅膠板上紫外燈下顯紫色的流分。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于第3)步是將收集的流分與 醇類有機(jī)溶劑，優(yōu)選為乙醇或甲醇混合，優(yōu)選等體積混合，進(jìn)行冷凍結(jié)晶，優(yōu)選為超低 溫冷凍結(jié)晶，即在-6(TC -8CTC下靜置2 3小時(shí)，取出后去除上層溶劑即得到肉豆蔻醚 白色結(jié)晶。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的方法制得的肉豆蔻醚作為醫(yī)藥標(biāo)準(zhǔn)品和植物源 殺菌劑的應(yīng)用。
全文摘要
一種從新疆藁本中制備肉豆蔻醚的方法，利用新疆藁本的根莖，干燥粉碎過篩后通過水蒸汽蒸餾獲取下層精油；隨后進(jìn)行硅膠柱層析，石油醚與二氯甲烷梯度洗脫后收集合并GF254硅膠板上紫外燈下顯紫色的流分，獲取含量在90％以上肉豆蔻醚粗品；然后將肉豆蔻醚粗品與醇類有機(jī)溶劑混合，超低溫冷凍結(jié)晶，得到肉豆蔻醚含量在99％以上的白色晶體，室溫下為無(wú)色油狀液體，該化合物對(duì)小麥赤霉病菌等植物病原真菌具有極強(qiáng)的離體殺菌活性。按照本發(fā)明的方法步驟精制肉豆蔻醚，原料易得、操作簡(jiǎn)單，且肉豆蔻醚收率高、純度高，可以用作醫(yī)藥和農(nóng)藥研究開發(fā)所需肉豆蔻醚純品。
文檔編號(hào)A01N43/02GK101407509SQ20081022723
公開日2009年4月15日 申請(qǐng)日期2008年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月25日
發(fā)明者萬(wàn)傳星, 劉文杰, 張利莉, 董紅強(qiáng) 申請(qǐng)人:塔里木大學(xué)