專利名稱：一種堿處理龍血樹活葉片誘導(dǎo)血竭產(chǎn)生的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物制藥領(lǐng)域
背景技術(shù)：
血竭(Dragon,s blood或Resina Draconis)是傳統(tǒng)名貴中藥，有活血化 瘀、鎮(zhèn)痛止血、消炎抗菌等功效，在我國有悠久的用藥歷史，但歷來依靠進(jìn)口。 在自然狀態(tài)下，龍血樹樹干木質(zhì)部在受到損傷或微生物侵染后，植物會產(chǎn)生防 御反應(yīng)而形成防御性物質(zhì)來抵抗微生物侵染，這種物質(zhì)提取后就是藥用的血竭。 1972年我國醫(yī)藥工作者在云南、廣西等地發(fā)現(xiàn)了能產(chǎn)生血竭的劍葉龍血樹 coc力/"c力/'/7e/7".i1 (Lour.) S. C. Chen]。 1999年國家藥品監(jiān)督管 理局頒布的國家標(biāo)準(zhǔn)中(WS3-082 (Z-016)-99(Z))，血竭以一類新藥材收載。隨 著需求的增長，野生龍血樹資源遭到了嚴(yán)重破壞。龍血樹生長極為緩慢，幾十 年樹齡的樹干才有可能用于血竭生產(chǎn)，而且血竭產(chǎn)量很低。依靠人工繁殖龍血 樹，在樹干上誘導(dǎo)血竭形成來解決血竭的藥源問題困難很大。
在龍血樹資源研究方面，李宗恒等人申請了專利《劍葉龍血樹種苗培育 方法(CN101116397A)》、《劍葉龍血樹栽培方法(CN101116398A)》，刀祥生等人 申請了《一種劍葉龍血樹的扦插繁殖方法(200510010881.6)》的專利。龍血樹 樹干木質(zhì)部形成傷口后，龍血樹會產(chǎn)生防御反應(yīng)而形成血竭，劉寶等人據(jù)此原 理申請了《一種快速獲得龍血竭原料的方法(CN101138305A)》的專利；在龍血 樹的傷口上施用植物激素，可以增加血竭的產(chǎn)量，楊本鵬等人據(jù)此原理申請了 《一種人工栽培龍血樹誘導(dǎo)生產(chǎn)血竭的方法(CN101032207A)》的專利。在傷口
上接種微生物，也可以刺激龍血樹產(chǎn)生較多的血竭，王興紅等人發(fā)表了相關(guān)的 研究論文(王興紅，江東福，馬萍等，真菌與龍血樹血竭形成關(guān)系的初步研究， 中國青年科學(xué)技術(shù)論文精選，中國科學(xué)技術(shù)出版社，1994， 11， 500 — 503;江東福，馬萍，王興紅等，龍血樹真菌群及其對血竭形成的影響，1995，云南植 物研究，17 ( 1 ): 79—82。)；宋啟示等據(jù)此原理申請了《一種田間人工誘導(dǎo)生 產(chǎn)龍血竭的方法(CN1817105A)》、《一種龍血竭人工誘導(dǎo)劑及其制備方法 (CN1821387A)》、《一種龍血竭的人工培育方法(CN1821388A)》的專利；楊本 鵬等人還提出了利用組織培養(yǎng)方法生產(chǎn)血竭的專利申請《運(yùn)用龍血樹組織培養(yǎng) 生產(chǎn)血竭的方法(CN1316876C)》。
這些方法雖然在一定程度上有望緩解龍血樹的資源問題和血竭形成問題， 除組織培養(yǎng)外，這些專利方法都必須利用活體龍血樹的樹干木質(zhì)部，而樹干的 生長又是極其緩慢的，而且對樹干的利用也只能是一次性的；組織培養(yǎng)也存在 培養(yǎng)時間長、成本高等問題，無法較快地滿足現(xiàn)實(shí)生產(chǎn)的緊迫需要。
自然狀態(tài)下龍血樹的樹葉生長較快，而且每年都會衰老枯死一批，還可以 通過快速培養(yǎng)龍血樹苗迅速得到大量的龍血樹葉片，所以利用龍血樹活葉片誘 導(dǎo)生產(chǎn)血竭，可以重復(fù)利用珍貴的龍血樹。目前，尚未發(fā)現(xiàn)有誘導(dǎo)龍血樹活葉 片生產(chǎn)血竭的專利申請或方法報道。人工誘導(dǎo)龍血樹葉片生產(chǎn)血竭有望解決血 竭生產(chǎn)原料嚴(yán)重短缺的局面，滿足人民群眾的用藥需求，又有助于保護(hù)自然資 源。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明使用堿處理龍血樹葉片，龍血樹葉片受到刺激后會產(chǎn)生防御反應(yīng)， 形成的反應(yīng)產(chǎn)物就是血竭。
本發(fā)明所述的堿處理龍血樹活葉片形成血竭的方法由以下步驟組成
一、 配制一定濃度的堿性液體，或者堿性固體粉末。
二、 將配制后的堿性物質(zhì)用以下三種方法中的一種或幾種處理生長健壯的 龍血樹葉片。2. 1將堿性液體或堿性粉末施于幼嫩的龍血樹葉片上。
2. 2將堿性液體或堿性粉末施于龍血樹葉片的基部或頂端的樹芯部位。
2.3采用刀片、釘子、或針狀物人為損傷葉片，在損傷處施用堿性液體或
堿性粉末。
三、 堿處理龍血樹葉片一段時間以后，用潔凈的水淋洗葉片去掉堿性物質(zhì)， 以免葉片損傷過度并保持葉面清潔。
四、 堿處理后的龍血樹按正常栽培條件管理，1-3周內(nèi)即可在葉片受損處 產(chǎn)生紅色的血竭。
五、 將產(chǎn)生血竭的葉片收獲后，采下葉片上的紅色部位，干燥后用甲醇或 乙醇浸泡含脂葉片，然后蒸發(fā)掉溶劑，提取物經(jīng)干燥后即可得到紅色血竭。
本發(fā)明所述的龍血樹，包括整個龍血樹屬(""cse朋)可以產(chǎn)生血竭的所 有植物，如劍葉龍血樹coc力^由./ 譜i^ (Lour.) S. C. Chen]， 索禾斗牛寺拉龍血lt ["racse/ a c/"/7a6ar/Balf. f.]，龍血|^ ["racse/Ls dracoL.]， 阿拉伯龍血樹["racae朋sc力/zai^力a]，小花龍血樹或海南龍血樹["rscae朋 ca勵ot/Za朋Pierre ex Gagnep]，巖棕/oure/r/]等植物。
本發(fā)明所述的葉片，是指生長在活體龍血樹上有生命力的葉片，只有葉片 在生活狀態(tài)時，才會形成血竭，即血竭的形成是一個活細(xì)胞對損傷的反應(yīng)，該 反應(yīng)的啟動需要有一個時間過程，從幾個小時至幾天時間不等。已死亡的葉片 或即將死亡的葉片是不會形成血竭的。正常野生的龍血樹葉片很少會自動產(chǎn)生 血竭。
本發(fā)明所述的堿，可以是純化的氫氧化鈉(NaOH)、氫氧化鉀(K0H)、碳 酸鈣(CaC03)、生石灰(Ca0)、石灰水(Ca(0H)2)等堿性化合物，也可以是含 有一種或幾種堿性物質(zhì)的混合物。這些堿性物質(zhì)可以混于液態(tài)溶劑中制成堿性液體使用；也可以將這些堿性物質(zhì)混入其它非堿性或堿性的固態(tài)載體中，制成 堿性固體粉末。
本發(fā)明所述的樹芯或葉片的基部，是龍血樹葉片分生組織存在的部位，它 具有形成和延長葉片的功能。損傷這些分生組織后，利用分生組織延長葉片的 自然特性，可以保持較長時間的誘導(dǎo)效果，葉片上能形成血竭的面積也較大。
本發(fā)明所述的人為損傷，是因?yàn)橐话闱闆r下特別是老的龍血樹葉片對堿性 物質(zhì)的腐蝕有較強(qiáng)的抵抗力，使用人為損傷的辦法，可以增加堿處理的效果， 也可以利用此方法控制血竭在葉片上形成的位置和密度。
本發(fā)明所述的堿處理時間和堿液濃度，可根據(jù)葉片的生長時間、季節(jié)、樹 葉的老嫩程度、樹的活力狀態(tài)和堿性物質(zhì)的性質(zhì)不同而適當(dāng)作一些調(diào)整。 一般 情況下，處理嫩葉時堿濃度可低一些，處理較老的葉片時，堿液濃度可高一些； 生長旺盛的樹葉，堿處理時間可長一些，生長狀態(tài)較差的樹葉，堿處理時間可 以短一些。堿性物質(zhì)的使用濃度范圍在0. 5%-100%之間，依據(jù)堿性物質(zhì)的堿性強(qiáng) 弱可以有濃度上的變化，如氫氧化鈉(NaOH)、氫氧化鉀(KOH)的堿性較強(qiáng)，使 用比例可以在0. 5%-10°/。之間，而生石灰(Ca0)和其溶于水后形成的石灰水 [Ca(0H)2]堿性弱，生石灰(Ca0)作為固體粉末使用時可以用純的生石灰，石灰 水可以使用其飽和溶液。堿性強(qiáng)時，堿處理時間可短一些；反之亦然。以氫氧 化鈉(NaOH)為例，由于其堿性較強(qiáng)，濃度為1%-5% (W/V)的氫氧化鈉水溶液 處理時間為12-72小時即可。若用碳酸鈣(CaC03)處理，由于其堿性較弱，100% 含量的碳酸鈣處理時間可能需要長達(dá)1-2個月。評價堿處理效果的唯一標(biāo)準(zhǔn)是: 不可讓葉片大面積死亡，只能讓葉片呈點(diǎn)狀損傷。
本發(fā)明所述的堿性液體，其溶劑可以是水，也可以是甲醇、乙醇或其它有 機(jī)溶劑；也可以是液體溶劑中含有固體成分的漿狀物，甚至可以在液體中加入 一定含量的粘結(jié)劑，增強(qiáng)堿性物質(zhì)在葉片中的附著性能。堿性固體粉末，可以是堿性物質(zhì)本身，如生石灰粉，或者是將堿性物質(zhì)混在賦形劑中，如將氫氧化
鈉(NaOH)按一定比例配入硅藻土中等。
本發(fā)明所述的用清潔的水淋洗葉片，是指一般的生活用水即可，通過淋洗， 可以控制葉片堿處理的程度，并保持葉面清潔，也有利于提高所提取的血竭質(zhì) 量。特別是在堿處理葉片過度時，適時淋洗是矯正的措施之一。在生產(chǎn)時需要
注意的是在人工淋洗堿處理葉片之前，要防止雨水淋濕葉片而降低堿處理的效果。
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是利用堿的腐蝕性使龍血樹葉片受傷后，堿性物 質(zhì)又進(jìn)一步刺激龍血樹葉片產(chǎn)生防御反應(yīng)形成血竭，并利用龍血樹葉的生長快 速且可反復(fù)生長的特性，解決血竭資源短缺的問題。
該技術(shù)由以下的特征組成將堿性物質(zhì)配制成堿性液體或堿性固體粉末； 噴涂堿性物質(zhì)于龍血樹活葉片上；堿處理一段時間后用水淋洗去掉堿性物質(zhì)， 以免葉片損傷過度并保持葉面潔凈；葉片損傷后，必須滿足龍血樹的正常生長 條件；傷口形成1-2周后即開始出現(xiàn)血竭。繼續(xù)培養(yǎng)1-2月后，即可收獲含有 紅色血竭的葉片，干燥后用乙醇或甲醇提取含脂葉片，提取物經(jīng)干燥后即可作 為藥用。
有益效果是利用龍血樹葉片的快速生長特性，通過堿處理葉片快速形成 血竭，持續(xù)利用珍貴的龍血樹資源，解決龍血樹生長速度過慢、血竭資源緊張 的問題。
為了更好的理解本發(fā)明，下面用實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行說明
配制2%的氫氧化鈉水溶液，將堿液噴或涂于人工損傷后的葉片上，增加堿 處理的效果，3天后淋洗葉片，繼續(xù)培養(yǎng)葉片2個月，紅色血竭出現(xiàn)在傷口部位， 割取產(chǎn)脂葉片，去掉葉片的綠色部分，含脂葉片干燥后，用甲醇提取，經(jīng)旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)干燥后即得紅色血竭。具體實(shí)施例1、 配制2%氫氧化鈉甲醇溶液，將氫氧化鈉甲醇溶液噴于葉片的基部24小
時后，用IO倍堿液量的清水淋洗堿處理部位，待2-3個月后，葉片伸長生長并 形成血竭后，繼續(xù)培養(yǎng)龍血樹2-3個月，割取含脂葉片，去掉葉片未產(chǎn)生血竭 的綠色部分，保留紅色含脂部分，干燥后用95%的乙醇提取，提取物經(jīng)千燥后即 得血竭。
2、 配制6%氫氧化鉀水溶液，將氫氧化鉀溶液呈霧狀直接噴于幼嫩的龍血樹 葉片上，48小時后，用2G倍量的清水淋洗堿處理過的葉片，龍血樹按正常生長 條件管理，3個月后，收獲產(chǎn)脂葉片，去掉葉片綠色部位，保留紅色含脂部位， 含脂葉片干燥后用乙醇提取，蒸發(fā)掉乙醇，提取物經(jīng)干燥即得紅色血竭。
3、 將碳酸鈣粉碎成過200目篩的粉末，加入碳酸鈣5倍重量的水和0.5% 的膠水，攪拌均勻。用刀片劃傷較老的葉片，將碳酸鈣漿狀物涂抹于傷口處， 繼續(xù)培養(yǎng)葉片6個月，傷口處出現(xiàn)紅色血竭，再繼續(xù)培養(yǎng)一段時間后，去掉葉 面上碳酸鈣塊狀物，收獲葉片，含脂葉片干燥后用甲醇提取，再蒸發(fā)掉甲醇溶 劑，即得紅色血竭，粉碎后即可藥用。
4、 將生石灰粉碎成150目左右的粉末，直接噴撒于龍血樹嫩葉上，每IOO 平方厘米葉面約撒20克，15-30天后，葉面出現(xiàn)點(diǎn)狀損傷，用清水淋洗葉面， 保持龍血樹的正常生長狀態(tài)，3個月后收獲含脂葉片，葉片干燥后提取血竭即可。
權(quán)利要求
1、一種堿處理龍血樹活葉片誘導(dǎo)血竭產(chǎn)生的方法，其特征在于該方法由將堿性物質(zhì)施于龍血樹活葉片上，損傷并誘導(dǎo)龍血樹葉片產(chǎn)生血竭，收獲含有血竭的葉片，含脂葉片干燥后，用乙醇或甲醇提取血竭、血竭提取物干燥等步驟組成。
2、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的堿，是指PH大于7的所有堿性物質(zhì)，可以是液體狀 態(tài)，也可以是固體粉末狀，所謂的液體狀態(tài)，可以是溶解狀態(tài)，也可以是不溶 解的漿狀物，溶劑可以是水，也可以是甲醇、乙醇等有機(jī)溶劑。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的誘導(dǎo)龍血樹葉產(chǎn)生血竭的方法，其特征在于誘導(dǎo) 的部位是龍血樹的活葉片，而不是樹干木質(zhì)部，也不是已經(jīng)死亡的葉片。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的誘導(dǎo)龍血樹葉產(chǎn)生血竭的方法，其特征在于 所述的堿處理龍血樹葉片時，堿性物質(zhì)的濃度根據(jù)堿性的強(qiáng)弱、葉片的老嫩、 樹體的活力狀態(tài)等條件的不同，誘導(dǎo)所需的時間會有相應(yīng)的變化,堿處理程度 的標(biāo)準(zhǔn)是即要讓葉片呈現(xiàn)較多而小的斑點(diǎn)，而又不能讓葉片死亡。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種堿處理龍血樹活葉片誘導(dǎo)血竭產(chǎn)生的方法。本發(fā)明所述的方法由以下步驟組成一、將堿性物質(zhì)配入液體或固體粉末；二、將配制后的堿性物質(zhì)施于龍血樹葉片上或產(chǎn)生葉片的分生組織處；三、堿性物質(zhì)處理龍血樹葉片一段時間后，用水洗或用其它方法去掉堿性物質(zhì)；四、堿處理龍血樹活葉片一段時間以后，血竭才可以形成；五、收獲產(chǎn)生血竭的含脂葉片，干燥后用乙醇或甲醇提取，提取物經(jīng)干燥后即得血竭。本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是利用龍血樹葉更新速度快的特性，將堿性物質(zhì)作為誘導(dǎo)龍血樹葉片損傷和血竭形成的誘導(dǎo)劑，解決龍血樹資源的可持續(xù)利用的問題。
文檔編號A01G7/06GK101406144SQ200810233619
公開日2009年4月15日 申請日期2008年11月21日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月21日
發(fā)明者王興紅 申請人:云南大學(xué)