專利名稱：：一種合成寡肽及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)
技術(shù)領(lǐng)域：
，本發(fā)明涉及模擬谷胱甘肽結(jié)構(gòu)，合成的新的具有抗氧化活性的寡肽，本發(fā)明還涉及這些寡肽物質(zhì)的體外抗氧化效應(yīng)、提高細(xì)胞抗氧化能力以及提高小麥幼苗的抗熱性。
背景技術(shù)：
：生物體在正常生理?xiàng)l件下，體內(nèi)活性氧自由基(ROS)的產(chǎn)生和清除相對(duì)均衡，而在遭受各種生物和非生物逆境脅迫時(shí)，體內(nèi)的ROS的產(chǎn)生和清除平衡遭到破壞(王豐等，高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué)報(bào)，2007，28:10711076),造成氧負(fù)離子GO2-)和過氧化氬(H202)等ROS的大量積累，引發(fā)蛋白質(zhì)、核酸和脂類的氧化損傷。谷胱甘肽(GSH)是植物體內(nèi)一種非常重要的抗氧化肽，參與植物對(duì)多種逆境的抵抗過程。它能夠直接和間接地清除ROS，使細(xì)胞免受ROS以及各種有害物質(zhì)的毒害，具有抵抗逆境和解毒的作用，已被廣泛用于醫(yī)療保健方面(陳坤明等，西北植物學(xué)報(bào)，2004,24:11191130)。有研究表明，外源施加GSH能夠提高逆境脅迫下植物內(nèi)源抗氧化酶的活性和抗氧化物物質(zhì)的水平，降低丙二醛(MDA)的含量，保護(hù)植物免受活性氧的傷害(劉傳平等，南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2004，27:2630)。但是由于植物體內(nèi)存在GSH的代謝途徑，效應(yīng)濃度和成本較高，目前尚難在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中大面積應(yīng)用。在逆境脅迫條件下，植物體內(nèi)還會(huì)積累一些與抗逆相關(guān)的氨基酸，如脯氨酸(Pro)、甘氨酸(Gly)、Y-氨基丁酸(GABA)等，它們有些可以作為滲透調(diào)解物質(zhì)，有些可以作為信號(hào)物質(zhì)，參與植物抵抗逆境的過程。也有報(bào)道表明，在外源施加某些氨基酸時(shí)，也能夠提高植物對(duì)逆境脅迫的抵抗能力(賀巖等，大豆科學(xué)，2000,19(4):314~319;王寶山等，植物生理學(xué)通訊，1993,29(3):182184;高洪波等，植物生理與分子生物學(xué)學(xué)報(bào)，2004,30(6):651~659;田小磊等，實(shí)驗(yàn)生物學(xué)報(bào)，2005,38(1):75~79)。本發(fā)明通過模擬GSH的結(jié)構(gòu)，將一些與逆境相關(guān)的氨基酸重新組合，合成新的具有抗氧化活性寡肽。本發(fā)明對(duì)于現(xiàn)有的發(fā)明專利具有兩點(diǎn)明確的優(yōu)勢其一，相對(duì)于植物生長調(diào)節(jié)劑來說，合成的寡肽來源的氨基酸均為生物體內(nèi)天然存在的氨基酸，對(duì)人體不存在任何毒性，處理作物后不存在殘毒殘效；其二，相對(duì)于GSH外源施加，合成的寡肽物質(zhì)不是植物體內(nèi)本身存在的物質(zhì)，因此不易被植物所專一的降解，能在極低的使用濃度發(fā)揮高效的生物活性，能超過GSH的抵抗逆境功能。模擬GSH的結(jié)構(gòu)，將一些與逆境相關(guān)的氨基酸重新組合，合成一些新的寡肽可能也具有抗氧化活性，而且由于是非天然物質(zhì)而不易被植物所專一的降解。有關(guān)人工合成GSH類似物的抗氧活性的研究未見報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供新的寡肽物質(zhì)，能有效緩解逆境脅迫對(duì)細(xì)胞的抑制生長，增強(qiáng)細(xì)胞抵抗逆境脅迫的能力。本發(fā)明人充分研究谷胱甘肽與其它氨基酸的抵抗逆境性能，模擬谷胱甘肽結(jié)構(gòu)合成類似寡肽，完成了本發(fā)明。本發(fā)明提供的寡肽含有三個(gè)氨基酸，序列中間為半胱氨酸，一端為谷氨酸或甘氨酸，另一端為具有抗逆作用的其他氨基酸脯氨酸或y-氨基丁酸。本發(fā)明的合成寡肽包括但不限于谷氨酰-半胱氨酰-Y-氨基丁酸(Glu-Cys-GABA)、y-氨基丁酰-半胱氨酰-谷氨酸(GABA-Cys-Glu)、脯氨酰-半胱氨酰-甘氨酸(Pro-Cys-Gly)以及甘氨酰-半胱氨酰-脯氨酸(Gly-Cys-Pro)。實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明提供的合成寡肽其對(duì)DPPH的體外清除率顯著高于游離氨基酸的組合，也顯著高于谷胱甘肽本身，其中谷氨酰-半胱氨酰-，氨基丁酸(Glu-Cys-GABA)對(duì)DPPH的體外清除效果尤其好。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，合成寡肽提高了鹽脅迫下魚腥藻7120細(xì)胞抗氧化能力；另一個(gè)實(shí)施例中，合成寡肽提高了鹽脅迫下煙草BY-2細(xì)胞的抗氧化能力；另一個(gè)實(shí)施例中，合成寡肽提高了鹽脅迫下煙草BY-2細(xì)胞系抗氧化酶活性；再一個(gè)實(shí)施例中，合成寡肽提高了小麥幼苗的抗熱性。由此可見，由于合成寡肽具有清除自由基和抗逆的作用，其能提高在鹽脅迫下植物細(xì)胞的抗氧化能力和氧化酶活性。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于(l)發(fā)明制備了未見報(bào)道的具有增強(qiáng)植物細(xì)胞和幼苗在鹽脅迫和高溫脅迫條件下抗氧化能力的寡肽；(2)發(fā)明制備的寡肽較其它常規(guī)的植物生長調(diào)節(jié)劑有更高的安全性和生理效應(yīng)；(3)發(fā)明制備的寡肽生理活性高效、穩(wěn)定，有理論支持(GSH結(jié)構(gòu)類似物)；相對(duì)與GSH而言，又不容易被植物所代謝降解，提高了其在植物體內(nèi)的穩(wěn)定性和高效活性；(4)發(fā)明制備的寡肽結(jié)合了一些與逆境相關(guān)的氨基酸，如脯氨酸(Pro)、Y-氨基丁酸(GABA)等，發(fā)明的新寡肽比GSH有更高的生物活性。圖i是寡肽谷氨酰-半胱氨酰卞氨基丁酸的質(zhì)譜圖2是寡肽谷氨酰-半胱氨酰-Y-氨基丁酸高效液相色譜圖。具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的內(nèi)容，但不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。在不背離本發(fā)明精神和實(shí)質(zhì)的情況下，對(duì)本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段。實(shí)施例1:寡肽谷氨酰-半胱氨酰個(gè)氨基丁酸的制備稱取2克2-氯三苯甲基氯樹脂，加入20亳升N-甲基吡咯烷酮溶脹樹脂2小時(shí)后排凈液體；加入二氯甲烷20亳升，混勻1分鐘，清空反應(yīng)器，再加入N-甲基吡咯烷酮20亳升，混勻1分鐘，清空反應(yīng)器，重復(fù)2次；稱取2克9-芴甲氧羰基，氨基丁酸，用5亳升N-甲基吡咯垸酮溶解并轉(zhuǎn)移至反應(yīng)器，加入40微升3M的二異丙基乙胺，混勻后加入反應(yīng)器，再加入15亳升N-甲基吡咯烷酮反應(yīng)2小時(shí)。清空反應(yīng)器，加入二氯甲烷20毫升，混勻1分鐘，清空反應(yīng)器，再加入N-甲基吡咯烷酮20亳升，混勻l分鐘，清空反應(yīng)器，重復(fù)2次。加入20%六氫吡啶20亳升，反應(yīng)30分鐘后清空反應(yīng)器，再加入20%六氫吡啶20毫升，反應(yīng)30分鐘后清空，加入二氯甲烷20亳升，混勻l分鐘，清空反應(yīng)器，再加入N-甲基吡咯烷酮20亳升，混勻1分鐘，清空反應(yīng)器，重復(fù)2次；稱取2克9-芴甲氧羰基半胱氨酸，用5亳升N-甲基吡咯烷酮溶解，加入40微升3M的二異丙基乙胺，混勻后加入反應(yīng)器，再加入15亳升N-甲基吡咯烷酮反應(yīng)2小時(shí)。清空反應(yīng)器，加入二氯甲烷20亳升，混勻l分鐘，清空反應(yīng)器，再加入N-甲基吡咯烷酮20亳升，混勻l分鐘，清空反應(yīng)器，重復(fù)2次。取樣檢測。加入20%六氫吡啶20亳升，反應(yīng)30分鐘后清空反應(yīng)器，再加入20%六氫吡啶20亳升，反應(yīng)30分鐘后清空，加入二氯甲烷20亳升，混勻l分鐘，清空反應(yīng)器，再加入N-甲基吡咯烷酮20毫升，混勻1分鐘，清空反應(yīng)器，重復(fù)2次；稱取2克9-荀甲氧羰基谷氨酸，用5毫升N-甲基吡咯烷酮溶解，加入40微升3M的二異丙基乙胺，混勻后加入反應(yīng)器，再加入15亳升N-甲基吡咯烷酮反應(yīng)2小時(shí)。清空反應(yīng)器，加入二氯甲烷20毫升，混勻l分鐘，清空反應(yīng)器，再加入N-甲基吡咯烷酮20毫升，混勻l分鐘，清空反應(yīng)器，重復(fù)2次。取樣加入20%六氫吡啶20毫升，反應(yīng)30分鐘后清空反應(yīng)器，再加入20%六氫吡啶20亳升，反應(yīng)30分鐘后清空，加入二氯甲烷20毫升，混勻1分鐘，清空反應(yīng)器，再加入N-甲基吡咯烷酮20毫升，混勻1分鐘，清空反應(yīng)器，重復(fù)2次。加入切割液三氟乙酸，反應(yīng)4小時(shí)，過沙芯漏斗過濾，收集濾液，用冰乙醚離心沉淀，凍干即得目標(biāo)寡肽產(chǎn)物。產(chǎn)物用質(zhì)譜和高效液相色譜進(jìn)行確證與含量測定。合成寡肽的質(zhì)譜和液相色譜檢測圖譜見附圖1和附圖2。質(zhì)譜分析數(shù)據(jù)表明所合成產(chǎn)物即為目標(biāo)寡肽谷氨酰-半胱氨酰-Y-氨基丁酸，實(shí)測合成產(chǎn)物分子量為334.43(M+H+),與理論值分子量333.39接近。高效液相色譜的分析數(shù)據(jù)表明，合成寡肽的純度為99.36%。寡肽r氨基丁酰-半胱氨酰-谷氨酸的制備步驟與上述谷氨酰-半胱氨酰-Y-氨基丁酸的步驟類似。產(chǎn)物經(jīng)上述液相色譜和質(zhì)譜分析驗(yàn)證為目標(biāo)寡肽。寡肽甘氨酰-半胱氨酰-谷氨酸、寡肽谷氨酰-半胱氨酰-甘氨酸的制備步驟與上述谷氨酰-半胱氨酰-Y-氨基丁酸、y-氨基丁酰-半胱氨酰-谷氨酸的步驟類似。產(chǎn)物經(jīng)上述液相色譜和質(zhì)譜分析驗(yàn)證為目標(biāo)寡實(shí)施例2:寡肽脯氨酰-半胱氨酰-甘氨酸(Pro-Cys-Gly)的制備稱取2克2-氯三苯甲基氯樹脂，加入20亳升N-甲基吡咯烷酮溶脹樹脂2小時(shí)后排凈液體；加入二氯甲烷20亳升，混勻l分鐘，清空反應(yīng)器，再加入N-甲基吡咯烷酮20亳升，混勻l分鐘，清空反應(yīng)器，重復(fù)2次；稱取2克9-芴甲氧羰基甘氨酸，用5亳升N-甲基吡咯烷酮溶解并轉(zhuǎn)移至反應(yīng)器，加入40微升3M的二異丙基乙胺，混勻后加入反應(yīng)器，再加入15毫升N-甲基吡咯烷酮反應(yīng)2小時(shí)。清空反應(yīng)器，加入二氯甲烷20亳升，混勻l分鐘，清空反應(yīng)器，再加入N-甲基吡咯烷酮20毫升，混勻1分鐘，清空反應(yīng)器，重復(fù)2次。取樣檢測。加入20%六氫吡啶20亳升，反應(yīng)30分鐘后清空反應(yīng)器，再加入20%六氫吡啶20亳升，反應(yīng)30分鐘后清空，加入二氯甲烷20毫升，混勻1分鐘，清空反應(yīng)器，再加入N-甲基吡咯烷酮20亳升，混勻1分鐘，清空反應(yīng)器，重復(fù)2次；稱取2克9-芴甲氧羰基半胱氨酸，用5亳升N-甲基吡咯烷酮溶解，加入40微升3M的二異丙基乙胺，混勻后加入反應(yīng)器，再加入15亳升N-甲基吡咯烷酮反應(yīng)2小時(shí)。清空反應(yīng)器，加入二氯甲烷20亳升，混勻l分鐘，清空反應(yīng)器，再加入N-甲基吡咯烷酮20毫升，混勻l分鐘，清空反應(yīng)器，重復(fù)2次。取樣檢測。加入20%六氫吡啶20毫升，反應(yīng)30分鐘后清空反應(yīng)器，再加入20%六氫吡啶20亳升，反應(yīng)30分鐘后清空，加入二氯甲烷20毫升，混勻1分鐘，清空反應(yīng)器，再加入N-甲基吡咯烷酮20亳升，混勻1分鐘，清空反應(yīng)器，重復(fù)2次；稱取2克9-芴甲氧羰基脯氨酸，用5亳升N-甲基吡咯烷酮溶解，加入40微升3M的二異丙基乙胺，混勻后加入反應(yīng)器，再加入15亳升N-甲基吡唂烷酮反應(yīng)2小時(shí)。清空反應(yīng)器，加入二氯甲烷20亳升，混勻l分鐘，清空反應(yīng)器，再加入N-甲基吡咯烷酮20亳升，混勻l分鐘，清空反應(yīng)器，重復(fù)2次。取樣加入20%六氫吡啶20毫升，反應(yīng)30分鐘后清空反應(yīng)器，再加入20%六氫吡啶20毫升，反應(yīng)30分鐘后清空，加入二氯甲烷20亳升，混勻1分鐘，清空反應(yīng)器，再加入N-甲基吡咯烷酮20亳升，混勻1分鐘，清空反應(yīng)器，重復(fù)2次。加入切割液三氟乙酸，反應(yīng)4小時(shí)，過沙芯漏斗過濾，收集濾液，用冰乙醚離心沉淀，凍干即得目標(biāo)寡肽產(chǎn)物。產(chǎn)物用質(zhì)譜和高效液相色譜進(jìn)行確證與純度測定(方法同谷氨酰-半胱氨酰-Y-氨基丁酸)。寡肽甘氨酰-半胱氨酰-脯氨酸的制備步驟與上述脯氨酰-半胱氨酰-甘氨酸的步驟類似。產(chǎn)物經(jīng)上述液相色譜和質(zhì)譜分析驗(yàn)證為目標(biāo)寡肽。寡肽脯氨酸-半胱氨酰-Y-氨基丁酸、寡肽Y-氨基丁酰-半胱氨酰-脯氨酸的制備步驟與上述脯氨酰-半胱氨酰-甘氨酸、甘氨酰-半胱氨酰-脯氨酸的步驟類似。產(chǎn)物經(jīng)上述液相色譜和質(zhì)譜分析驗(yàn)證為目標(biāo)寡實(shí)施例3:合成寡肽對(duì)離體條件下自由基的清除1、實(shí)驗(yàn)方法寡肽對(duì)離體條件下自由基的清除通過對(duì)l，l-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基的清除率進(jìn)行評(píng)價(jià)將寡肽配置成0.2mmol/L溶液，與DPPH乙醇溶液混合反應(yīng)30分鐘，用CARY100紫外可見分光光度計(jì)(CARY100BioUV-visiblespectrophotometer,美國VARIAN公司生產(chǎn))在517nm波長下測定吸光值，以乙酸緩沖液作為空白，以GSH作為陽性對(duì)照。寡肽對(duì)DPPH的體外清除率用以下公式計(jì)算<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>空白吸光值各樣品重復(fù)5次，取平均值。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果八種合成寡肽對(duì)有機(jī)自由基DPPH的體外清除率優(yōu)于陽性對(duì)照GSH;合成寡肽的組成氨基酸組合施用以及氨基酸Cys也具有體外清除DPPH的作用，但顯著低于合成寡肽與陽性對(duì)照GSH。表1合成寡肽對(duì)DPPH的體外清除<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實(shí)施例4:合成寡肽提高鹽脅迫下魚腥藻7120細(xì)胞抗氧化能力1、實(shí)驗(yàn)方法用BG-11培養(yǎng)基，2%魚腥藻7120(購自華中農(nóng)業(yè)大學(xué))接種于50mL三角瓶中，25。C光照靜置培養(yǎng)并定時(shí)搖動(dòng)。繼代時(shí)用0.2mmol/L的合成寡肽進(jìn)行處理；培養(yǎng)2天后用100mmol/LNaCl處理，3天后進(jìn)行取樣測定細(xì)胞生長量、細(xì)胞提取液對(duì)DPPH的清除率以及細(xì)胞內(nèi)氧負(fù)離子002-)的產(chǎn)生速率和過氧化氫(H202)的含量。細(xì)胞生長量用OD75o表示，用CARYIOO紫外可見分光光度計(jì)(CARY100BioUV-visiblespectrophotometer,美國VARIAN公司生產(chǎn))測定。.O2-和H202測定按照VermaS.和MishraS.N.的方法(JouumalofPlantPhysiology,2005年，162卷，669-677頁)。以GSH作為陽性對(duì)照。各樣品作5個(gè)平行重復(fù)，取平均值。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果鹽脅迫顯著抑制了魚腥藻的生長，降低了細(xì)胞的抗氧化水平；鹽脅迫下八種合成寡肽處理均促進(jìn)了魚腥藻的生長，對(duì)DPPH的清除率顯著提高，而'02—的產(chǎn)生速率和11202的含量均明顯降低。結(jié)果表明，八種合成多肽顯著提高鹽脅迫下魚腥藻7120的抗氧化能力。_表2合成寡肽對(duì)魚腥藻7120抗氧化能力的影響_細(xì)胞生長細(xì)胞提取液.02—的產(chǎn)生速率H202的含量處理i(OD75o)對(duì)DPPH清除(nmol'^FW'h-1)Oimol'g"FW)率(％)對(duì)照0.22826.017.43.84NaCl脅迫0.15818.933.45.79NaCl+GSH0.21325.822.94.57NaC+Glu-Cys-GABA0.17726,325.74.86NaCl+GABA-Cys-Glu0.19525.123,34.72NaCl+Pro-Cys-Gly0.18824.421.84.51NaCl+Gly-Cys-Pro0.20424,922.64.63NaCl+Glu-Cys曙Gly0.19624.823.04.65NaCl+Gly-Cys-Glu0.18024.623.24.60NaCl+Pro-Cys-GABA0.21025.021,54.55NaCl+GABA-Cys-Pro0,20625.222.04.50實(shí)施例5:合成寡肽提高鹽脅迫下煙草BY-2細(xì)胞的抗氧化能力1、實(shí)驗(yàn)方法用改良的LS培養(yǎng)基，5。/。煙草BY-2細(xì)胞(購自中國農(nóng)業(yè)大學(xué)植物生理與生物化學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室)接種于50mL三角瓶中，27°C130rmin"避光震蕩培養(yǎng)。繼代時(shí)用0.2mmol/L的合成寡肽進(jìn)行處理；培養(yǎng)2天后用100mmol/LNaCl處理，3天后進(jìn)行取樣測定細(xì)胞鮮重、細(xì)胞提取液對(duì)DPPH的清除率以及細(xì)胞內(nèi)氧負(fù)離子('02。的產(chǎn)生速率和過氧化氫(H202)的含量。O2-和&02測定按照VermaS.和MishraS.N.的方法(JouumalofPlantPhysiology,2005年，162卷,669-677頁)。以GSH作為陽性對(duì)照。各樣品作5個(gè)平行重復(fù)，取平均值。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果鹽處理明顯抑制了煙草細(xì)胞的生長，降低了細(xì)胞的抗氧化水平。鹽脅迫下八種合成寡肽處理煙草細(xì)胞，其鮮重提高30%以上，細(xì)胞提取液對(duì)DPPH的清除率提高23%以上，'02-的產(chǎn)生速率和H202的含量也顯著降低。結(jié)果表明，合成多肽能顯著的提高鹽脅迫下煙草BY-2細(xì)胞的抗氧化能力。_表3合成寡肽對(duì)煙草BY-2細(xì)胞抗氧化能力的影響_<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>實(shí)施例6:合成寡肽提高鹽脅迫下煙草BY-2細(xì)胞系抗氧化酶活性1、實(shí)驗(yàn)方法供試材料與培養(yǎng)、處理方法同實(shí)施例4。收集煙草細(xì)胞，加入50mmolU1pH=7.0磷酸緩沖液，在冰洛上研磨提取，12,000g離心15min,取上清液備用。測定SOD、CAT和POD的活性。.0"則定按照VermaS.和MishraS.N.的方法(JouumalofPlantPhysiology,2005年，162卷，669-677頁)。SOD、POD、CAT活性測定方法和具體操作見鄒琦等主編的植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)(中國農(nóng)業(yè)出版社，2000年)。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果鹽脅迫明顯提高了煙草細(xì)胞的SOD活性，而POD和CAT的活性則降低。鹽脅迫下八種寡肽處理的煙草細(xì)胞SOD和POD的活性顯著提高，使細(xì)胞的抗氧化能力提高。表4合成寡肽對(duì)煙草BY-2細(xì)胞抗氧化酶活性的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>實(shí)施例7:合成寡肽提髙小麥幼苗的抗熱性1、實(shí)驗(yàn)方法供試小麥品種為京都40，購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院國家農(nóng)作物種質(zhì)保存中心，將表面消毒的種子培養(yǎng)于裝有蛭石花土為1:1的塑料花盆(長x寬x高=8cmx8cmx10cm)中，25。C下培養(yǎng)。當(dāng)小麥苗齡7天時(shí)，用0.2mmol/L的合成寡肽對(duì)小麥葉片進(jìn)行涂抹處理，以GSH作為陽性對(duì)照。兩天后進(jìn)行高溫脅迫處理，白天(14小時(shí)，光強(qiáng)5000Lux)40。C/晚上(10小時(shí))30°C。48小時(shí)后取樣，測定小麥葉片-02-產(chǎn)生速率和抗氧化酶SOD、POD、CAT的活性。.02-測定按照VermaS.和MishraS.N.的方法(JouumalofPlantPhysiology,2005年,162卷，669-677頁)。SOD、POD、CAT活性測定方法和具休操作見鄒琦等主編的植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)(中國農(nóng)業(yè)出版社，2000年)。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果高溫脅迫使小麥葉片中02-的產(chǎn)生速率顯著加快。八種寡肽處理均顯著的降低了高溫脅迫下小麥葉片中<^的產(chǎn)生速率，效果與GSH相當(dāng)。八種合成寡肽處理提高了高溫脅迫下SOD、POD和CAT的活性，增強(qiáng)了小麥幼苗在高溫脅迫下的抗氧化能力。表5合成寡肽對(duì)高溫脅迫下小麥葉片氧自由基產(chǎn)生速率和抗氧化酶活性的影響-02-的產(chǎn)生速率SODPODCAT處理(nmol.g-'FW'h")(U.g-'FW)(U.g-1FW)(U-g-lFW)對(duì)照127.7110.3436.427.4NaCl脅迫240.1150.9442.1,19.9NaCl+GSH202.4168.4542.945.6NaCl+Glu-Cys-GABA196.4165.4499.337.4NaCl+GABA-Cys-Glu203.9158.3483.236.9NaCl+Pro-Cys-Gly214.1154,8476.738.6NaCl+Gly-Cys-Pro208.6157,0494.834.5NaCl+Glu-Cys-Gly206.5150.0486.536.8NaCl+Gly-Cys-Glu210.2154.5490.239.5NaCl+Pro-Cys-GABA192.5165.0518.539.1NaCl+GABA-Cys-Pro200.0158.2520.038,權(quán)利要求1、一種合成寡肽，其含有三個(gè)氨基酸，該寡肽序列中間為半胱氨酸，一端為谷氨酸或甘氨酸，另一端為脯氨酸或γ-氨基丁酸。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述寡肽，其氨基酸序列為谷氨酰-半胱氨酰-，氨基丁酸、Y-氨基丁酰-半胱氨酰-谷氨酸、脯氨酰-半胱氨酰-甘氨酸或甘氨酰-半胱氨酰-脯氨酸。3、含有權(quán)利要求1或2所述合成寡肽的植物生長調(diào)節(jié)劑。4、權(quán)利要求1或2所述寡肽在離體條件下清除活性氧自由基DPPH中的應(yīng)用。5、權(quán)利要求1或2所述寡肽在提高鹽脅迫下植物細(xì)胞的抗氧化能力和/或活性氧清除酶活性中的應(yīng)用。6、如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其中所述植物為魚腥藻或煙草。7、權(quán)利要求l或2所述寡肽在提高小麥幼苗抗熱性中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及一種含有三個(gè)氨基酸的合成寡肽，其序列中間為半胱氨酸，一端為谷氨酸或甘氨酸，另一端為具有抗逆作用的氨基酸脯氨酸或γ-氨基丁酸，其功能與谷胱甘肽類似，能夠在離體條件下清除1，1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基，提高鹽脅迫下魚腥藻和煙草細(xì)胞的抗氧化能力和氧化酶活性，提高小麥幼苗的抗熱性。文檔編號(hào)A01N63/00GK101434645SQ20081024095公開日2009年5月20日申請(qǐng)日期2008年12月24日優(yōu)先權(quán)日2008年12月24日發(fā)明者張明才,李召虎,李建民,段留生,田曉莉,虹祁,翟志席,董學(xué)會(huì),譚偉明申請(qǐng)人:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)