專利名稱：包含乳蛋白的豬精子稀釋培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及在家畜人工授精的準備過程中提高和/或保持精細胞活力的方
法。Ax4t精(AI)在家畜繁 沐改善的哺乳動^r^殖中已經(jīng)廣^l皮齢。 與直接交酉"目比，AI提供了許多優(yōu)點。例如，從單個雄性動物收集的精子可以 用于向多個雌性動物授精，從而減少了維^fW所需的雄性動物的數(shù)量。AI也 ^t^歹姊予更大的控制，這導(dǎo)致更大的繁殖率和更寬的且更有效率的基因或遺 傳決定的棒性的傳播。為了得到AX^fr的良好效果，從雄性動物收集的精子 首^^體夕H^存，然后對選賴雄性動物實;^fr。因此，AX4t精的繁歹誠 功高;1W^于在體外^"理的長時間內(nèi)賴"^液4^人滿意的儲^存。
通常，用于^^^精的精子在^^]合適的液###^養(yǎng)^##^#^存。 稀，養(yǎng)基的種類和儲存溫度與稀，養(yǎng)基中精細胞活力的提高和/或j械具
有密切的聯(lián)系，因而也與^t精能力密切相關(guān)。所用精子的工藝要求可育嫩照 樹的不同而不同。牛4^1t要料目對^^l的精細胞，并且合適的樣品可以被 i2ii4冷凍并儲存持久的時期而并不會負面影響樣品的繁殖力。相反，豬精子不
能以這種方式處理，因為向雄^t順要更多數(shù)量的精細i^更大量的糈;^戈
稀##液。^"^^it常^^"^適的液^^W養(yǎng)U^ft^釋，并且^HP到約17 r的儲存溫度。培養(yǎng)基足以將樣品的體積3t加到其原始^P、的約5至20倍，并 且提供#^^錄性物質(zhì)以提高和/或##精細胞的活力。因為精細胞的代謝不 負a妓分^y卬制，所以^fr液儲^^UL天^，精細胞活力紐絲的喪失。 因此，^AX^t精中，^^儲存超iti天的稀W^液會面臨低^^率的問題。 豬精子能^^存W目對短的時間內(nèi)，對用于AI的豬精細胞的^^I和分J1A生了 相當大的限制。
本發(fā)明提供了包^#精細1&^###^養(yǎng)基的改善后的組#。許多用于 提高和/或##豬精細胞活力的特定的液*養(yǎng)基制劑是已知的，或者在商業(yè)上 能夠4尋到。-"#^，稀#^養(yǎng)基制劑以固體形式(辦'J)提供，并JL^于水后 ^J I。 ^iM^頁域中可以發(fā)^W示準的制劑。例如，丄Gadea綜述了關(guān)于^AX^: 精過程中^f^J的豬糈液稀躲養(yǎng)基的最新知識。討論了有效的新鮮糈液稀躲養(yǎng)基的要求，并且比較了目前可以得到的稀釋培養(yǎng)基(參見
http: //www. engorinix. co『i/semen—extenders_used_in—e一articles—87 P0R-htm)。豬精細^NW養(yǎng)Uf常包含鹽類、能量源(例如葡萄糖)、 一種或 多種抗生素和至少一種緩沖劑(例如4-(2^^乙④-l-哌溱乙^t^( HEPES)) 以使得到的溶液具有6至7. 5之間的pH值。額外的組分可能^己二胺四乙酸 (EDTA)和牛血清清蛋白(BSA)。得到的物質(zhì)的^^,當溶于水時，將產(chǎn)生具 有220至380毫滲透^f"之間的滲透壓力的溶氣
牛血清清蛋白(BSA)是一種廣狄用于組*中以提高和/或##精細胞 妁活力的蛋白質(zhì)。BSA穩(wěn)定7K^液中的高分子，并皿廣^^用于細皿養(yǎng)l BSA敬^i午多有毒物質(zhì)并JU惑定稀辨養(yǎng)基的pH值。BSA的特性使它成為特 別適于提高和/或^#精細1^舌力的^^性物質(zhì)。然而，BSA的^^]具有兩個主 狄吾、。首先，BSA是從牛血清中分離^m的。由于某些牛產(chǎn)品的Y^，最值 得注意的是iL^制品，與牛海綿稀病(BSE)的U有關(guān)，因此，它絲了潛 在的威脅。其次，BSA的分離和提純是高成本方法，并且不能始終產(chǎn)生具有可靠 質(zhì)量和性能的產(chǎn)品。因此，BSA的^4^H^相對較高，并踴成了豬精細^#釋 培養(yǎng)基成本的主要部分。迄今為止，在豬精細1&#躲養(yǎng)基的應(yīng)用中沒有BSA 的^的^f鎖。為AI工業(yè):^供^i至、濟的并且^il合的BSA卩戈，;^^發(fā)明的 主要目的。
本發(fā)明涉絲波態(tài)豬精細^"辨養(yǎng)基中，主要作為BSA替代物的來自牛 乳的蛋白質(zhì)的應(yīng)用。吝'L^白是相對便宜的并且廣^^可得到的蛋白質(zhì)來源。乳 蛋白是多種蛋白質(zhì)集合的名稱，可以從乳汁或乳清中分離，所述乳清是從牛乳 制itA干酪中一種的副產(chǎn)品。它一to^;UL疫-球蛋白、P-專U求蛋白、a-乳白 蛋白、血清清蛋白^i午多其它蛋白質(zhì)的';^^;,它們的天然形iU:可溶的。在 精f"^辦養(yǎng)基中^^)IL^白已經(jīng)由MR,E. J. Cassou在1953年描述了 (專利 FR1043684 )。 Cassou描述了使用脫脂乳稀釋乳牛精子。在更新近的時期有 Batellier等的廣泛研究(Theriogenology 48 (1997) pp 391-410; patent EP 0969850B1 )。這些研究主要涉及乳汁的S^白組分在馬精^NW養(yǎng)基中的應(yīng) 用。在更近的日械L. de Backer en S. Poncelet的成果(專利NL 1024129A )。 在這些專利中，描述了在馬精子稀，養(yǎng)基中脫脂乳粉(由Nestl6生產(chǎn)的 Gloria牌)的應(yīng)用。絲，MT. Pellicer-Rubio等的研究描述了包含山羊精
5子稀釋培養(yǎng)基的乳汁的應(yīng)用(HT. Pellicer-Rubio， T. Magallon and Y. Corabarnous. Biology of ^production 57 (1997) 1023—1031 )。與上述實例 相反，(歸旨)乳汁或絲白(天^^白)i^殳有成功地用于在17 。C^M^豬 精細胞。雖然已經(jīng)才te了^^1 (，旨)乳汁或^"白^i顯^^豬精細胞。但是 并^M^頁^功地廣^用。
已知乳汁的^Mt組分對精子活力既有益又有害。近年所做的研究表明, 白，乳汁的主M白，在^4培養(yǎng)基中顯示出對精子具有保護的作用。作為卵 黃蛋白以翻以的方式，終白減少了脂質(zhì)結(jié)^白絲的成員(所謂的BSP蛋
白，誘導(dǎo)膽固醇^l脂A^子^ji除去)對精子的結(jié)合以;^r子脂質(zhì)的喪失，
同時在儲存期間##精報動4沐活力。絲白^HM絲期間防止BSP蛋白 對精子膜的不利影響(A. Bergeron, Y.Brindle， P. Blondin， P.Manjunath， Biology of ^production 77, (2007) ppl20-126; A. Bergeron, P. Manj皿ath. Molecular Reproduction and Development. Volume 73， 2007， pp 1338 - 1344 )。 令人驚訝地，Batellier等發(fā)5^'L清蛋白濃縮物、乳汁孩&慮液^_濾、液在4或 15。C儲存48和96h^斷氐了種馬精子的存活率(R Batellier， M Magistrini, J. Fauquant， E. Palmer. Theriogenology 48 (1997) pp. 391-410)。因此， 乳汁血清蛋白或乳清蛋白的4t^ ^4頁域不可能具有那些用途。
盡管在5'C或左右，包含乳汁或包^蛋白的稀W"養(yǎng)M功應(yīng)用于個別物 種，例^^馬和/^HS但是vMv4U殳有^il過豬精細皿態(tài)稀，養(yǎng)基的刻以成 功應(yīng)用。豬精細胞與許多其它物種的精細胞非常不同，因為它們極端易受^ 克損害。因此，不能假設(shè)能夠應(yīng)用于某^乳動物的精^# #基也可以
適用于所有哺乳動物，所以;M貞域^M^A員可以容易^Mf成功的稀糾養(yǎng)狄
一個樹轉(zhuǎn)用到另一^Wt。與許多其它哺乳動物相比，豬精細餘l^h具有 不同的磷脂組，。低膽固醇/磷脂比率和膽固醇在膜內(nèi)不對稱的分布使豬精細 胞變4尋對^^溫度非常敏感，導(dǎo) 滲透性增加和受^^作用的喪失。因此，
一次射出的糈液'lfe^HP到i5x:或^p至低于i5x:導(dǎo)致活力的喪失。為了a
這種4^克，粉子的做法是#^稀#^1一^出的精液保留在15匸以上幾個小
時以誘導(dǎo)*性。在實踐中，橋液被收絲隔離罐中以狄與更冷的表面接觸，
并iLI^的稀釋是在35-37。C朋稀辨養(yǎng)絲樹釋，^賄子W轉(zhuǎn)至 17TC。在17匸進^##^子的進一步儲存，在該溫度下精子的代謝(^f氐，il^:延長儲存時間的必^H^。低于12'C的儲存對運動，li^膜的在體外的完整)"生具 有消^fel^^ (P. Vyt. Thesis. Examination and storage of liquid porcine semen. Faculty of Veterinary Medicine, Ghent University 2007)。
本發(fā)明涉及來自牛乳的蛋白，特別是來源于乳清的蛋白的應(yīng)用，所述應(yīng)用 主要目的是在氣態(tài)豬精細^##^養(yǎng)基中作為BSA的替換物。l'L^白(既不是 酪蛋白也不是來自乳汁或乳清的其它蛋白)在BSA如上所ii^揮自身作用以及 其^f戈BSA的功能的應(yīng)用^f戈BSA的用途，對于豬精細^r辨養(yǎng)U^史有報 道。令人驚訝地，我們發(fā)現(xiàn)源于乳清的蛋白的一種特歹衫且分在液^#辨養(yǎng)基 中^E見出提高和/或^^豬精細^力相關(guān)的積淑特性。該源于乳清的蛋白的特 歹衫且分名為Porex,以便于簡略描iie Porex在關(guān)于提高和/或###精細# 力方面顯示出超過BSA的^^性能，正如絲細胞儲存期間的運動性所示，并 且^^:豬產(chǎn)仔率所示，以狄重要的同窩仔大小。
Porex由乳清，物產(chǎn)生。關(guān)于本發(fā)明的Porex生產(chǎn)是通#中等##下膜 濾法進行的。本領(lǐng)域中有幾種方法來分離和純化水溶除的乳汁或乳清蛋白。這 些方法中，過濾AX^斤周知的并且廣泛應(yīng)用的4支術(shù)(Rombaut et al. J. Dairy Sci. 90 (2007) pp 1662-1673)。液#^匕品^±>應(yīng)乂頁域的技權(quán)員可以容易地應(yīng) 用現(xiàn)有的過濾4支術(shù)。為了制造Porex，首先^^具有200賴來孔徑的薄膜濾器對 乳清棘物進行#>慮。iiyt許所有較小的生物活性蛋白通過，而截獲了來自微 生物或變性蛋白的^f射可孩M立。得到的生物活性蛋白通it^濾進^^一步純化。 ^;慮的特征為具有Mi々3000至100， 000道爾頓的襯量截獲范圍(MWCO)。使 用10， 000道爾頓的MWCO制造Porex。具有10， 000道爾頓^^圣的itifl器允許來 自乳清的礦物質(zhì)和專t^過，而生物活性蛋白被進一步濃縮。然后噴霧干;^ 縮蛋白。制備適于本發(fā)明的Porex的鄉(xiāng)樹必^Ht是在乳清處理過程中4橫pH 械當溫度。在孩G慮之前，將乳清棘物在66XM橫3^4中。船斷&顯度并 ^^在22'C。以這種方法純化的Porex主要由p-孝U求蛋白、a-乳白蛋白械 巨^^賦。另外，Porex還包含少量在乳汁中以^Wf多的ia^存在的富絲白， 例如乳鐵傳遞蛋白和乳it!U膽酶。這些蛋白在4條的液^"精細^NW養(yǎng) 基中起重要作用。Porex的進一步重JMt征是缺少游離或M合的脂肪和礦物 質(zhì)。Porex僅包含極少量的與蛋白結(jié)合的脂肪和礦物質(zhì)。
上述制造Porex的方法產(chǎn)生高度純化的^W沐非變性天然蛋白產(chǎn)品，其可溶于水，高達30克每100毫升。一^^析表明，干燥的Porex包含97。/。的蛋 白、2. 3 %的灰'絲0. 3 %的脂肪。蛋白組分包含46 ± 3 %的p -享L球蛋白，16 土2o/o的a-乳白蛋白和26±2%的糖巨肽。10%的剩^^且分包含，許多其它蛋 白之中的牛血清清蛋白、乳鐵傳遞蛋白和乳it!U緣酶。
本發(fā)明提供包^"精細胞稀，養(yǎng)基的改善的組合物，所述培養(yǎng)基包含 Porex， ^P!r有通it^t蛋白的協(xié)同作用j錄精細胞的功能。這些蛋白其中之一 是結(jié)合了樹^4糊質(zhì)的P-孝U求蛋白，所述物質(zhì)其中包^^午多金屬和發(fā)u7]^生分 子例如長鄉(xiāng)旨肪酸、類維生素A、類固醇和膽固醇。n'U求蛋白的結(jié)^^性可 以在除去氧^^旨質(zhì)方面給予幫助，否則##^#氧^^豫:1^"損害精細 。 存在于Porex中的另一種蛋白是a-乳白蛋白。該蛋白具有抗菌和"^^化寸錄， 并JL^^^屬。糖巨肽具有抗病毒和抗菌'^t。牛血清清蛋白能夠可i^ki^合 樹物質(zhì)。它還能夠齡自由基并且使多種有毒親騰l"生代謝物失去活性。清蛋 白具有對脂肪酸、血色素、膽紅素的高度親合力，并財小的帶負電荷的絲 ^^具有廣泛的親合力。它與p比噴磷酸酯(pyridoxyl phosphate )、半M 酸、谷胱甘#多種金屬形成^#加賴。乳鐵傳遞蛋白是纟綠妙白，^'J 多重效果，包括作為抗糸&物劑。乳過氧化物酶已經(jīng)確定作為抗微生物劑。已 經(jīng)證明它對多種微生物具有殺菌和抑菌作用。這些蛋白的協(xié)同作用可育將到存 在于乳清中的許多其它蛋白的幫助。
本發(fā)明提供包^"精細麟，養(yǎng)基的改善的組合物，所述培養(yǎng)基包含 Porex，其超ij保護其中精細胞的作用，尤其是對抗多種有毒物質(zhì)并對^^化。 有/Ut有4^質(zhì)可肯M員害精細胞。它們是來自死亡精細胞和其它細胞例如細菌 和白細胞的代謝產(chǎn)物、由細菌產(chǎn)生的有毒產(chǎn)物、微量重金屬和自由差^例如活性 綠活性氮。
^子發(fā)生期間，在射精并懸浮在稀#^養(yǎng)基之后，以凡g引入雌性生殖 道^，精細J!&^育W史自由基(活'Iil^活性氮)損害。在一次射出的橋液 中，在稀辦養(yǎng)基中以^^雌性生殖道中，來自雄性生殖器官的精細胞面臨新 的生物化學(xué)環(huán)境，其中存在不同的氧化體系。Porex^j^JL^旨精細胞防治氧 化的作用。最重要的，Porex通過包含p-孝L^蛋白和乳itlU⑩酶的A^t蛋白 的^IU旨用，防止細^M^且^i氧4匕。
細菌和細菌毒素主要來自于陰莖包皮，來自于^"^t理或來自于稀釋劑制備中使用的水。并且，用于制備稀，養(yǎng)基的化學(xué)品并不是完全隔離細菌和細 菌污染物的。取決于物種，細菌通過直接作用于精子或通過酸^i^境，對精子 品質(zhì)具有有害影響，即斷腿動性、細艦亡和聚集。豬精細胞非常容易被細 菌'f錄毒的產(chǎn)物攻擊。與許多其它哺乳動物相比，豬精細^^膜中具有不同的 磷脂組合物，這也使它們對細菌毒素動。敏感。親水f生毒素可以^口容易的通
ii^itA細胞。最值得注意的是，由于豬精細胞的這種異常特征，豬精子運動
性抑制^^^^了用于^N^員害毒素的特歹iM^測^(D. Hoornstra， M A. Andersson， R. Mikkola， R S. Salkinoja-Salonen. Toxicology in Vitro, 17 (2003)， pp 745-751 )。 BSA由于吸收來自稀，養(yǎng)基的代謝細菌產(chǎn)物而被認為
對其中幸存的精子具有積^ l影響。同樣地，但是由于不同蛋白的存在而可能更 加有效，Porex防jh^t精細胞受到來自細菌毒素的作用。
本發(fā)明提供包含對豬精細胞有用的精細l^養(yǎng)基的組合物。通過運動性測 定，并ib t^4頁域技^A員來iX^明確地是按照工業(yè)定位中的;U^莫AI，通過 母豬產(chǎn)仔率和每窩產(chǎn)仔數(shù)，顯示出提高了儲M子的活力。
為了#^說明，本發(fā)明的組* 過以下在^^^晴的豬精細^4頁域中 良好的用途^^fiH兌明。下面是通過實施本發(fā)明的方法的實施例的方式進行的 描述。那些與^"AX^t樹目關(guān)的人員了解制備培養(yǎng)基、^^計^^纖助分析 測定j的和漸進的運動性、^^#^*##^液以^1#^"4^方面的4支術(shù)。進一 步的必JM言息通過下列三個實施例給出。
液，養(yǎng)基中組分的^^J^hW^量數(shù)的方M示。^^域技#員 能夠3S^，本發(fā)明的培養(yǎng)基能夠以任何體積制備，并JL^發(fā)明并不意味著局限 于以-"fH^ 、制備的培養(yǎng)基。進一步的，本發(fā)明并不奮M局限于給出的制劑。 其它包^[S可數(shù)量的Porex或^f可分離自乳汁或Porex的蛋白，并非,白， 的制劑也可以應(yīng)用。
實施例1. 豬精"f^辨養(yǎng)絲過將980毫升的水加入到27. 4克葡萄糖、 8克檸^^鈉、2.4克EDTA、 1. 2克重碳酸鈉、0.4克氯化鉀、0. 6克慶大霉素、 9克HEPES和l克Porex的組合中制備。該組*名為Porex稀，養(yǎng)l作 為參考-與市售稀，養(yǎng)勤目比4捐^fi4接受的稀，養(yǎng)基Bel tsvi 1 le解凍液 (BTS )。 BTS培養(yǎng)絲過將980ml水加AJl] 36. 4克葡萄糖、6克檸#^_鈉、1. 25 EDTA、 1. 25重碳酸鈉、0. 75克氯化鉀和0. 6 M大霉素的組合中制備。橋M12頭隨才;1^#^|性成^/>豬收集。^^Porex稀，養(yǎng)J^BTS^^^"子，并 JL^H^f釋后在l、 3、 5、 9天評怙一般運動.'^M^ii^動性。
~^_運動性1^據(jù)如下。對BTS來說，在稀釋后l、 3、 5、 9天，得到的具有 to的-^^運動性的精細胞的。/。-壽命分別為71. 4、 70. 4、 68. 9、 47. 9。對Porex 稀辦養(yǎng)J^M兌，在稀釋后1、 3、 5、 9天，具有^J^動性的精細胞的。/。-壽 ^^分別為85. 0、 82.9、 80. 5和69. 6。
洋斤i^運動性iyt^下。對BTS來i兌，在稀釋后l、 3、 5、 9天，具有to的 漸般動性的精細胞的％-壽命分別為42. 3、 37.8、 36.2、 24.3。對Porex^r釋 培養(yǎng)JJM兌，在稀釋后1、 3、 5、 9天，具有^"漸般動性的精細胞的％-壽 命分別為76. 4、 73.4、 68. 5和57. 5。
實施例2. 該實施例涉及商業(yè)AI站進ff^;^t、稀#^舶己，以及在8 個不同養(yǎng)豬農(nóng)場的Al。豬精"^i^W養(yǎng)^ii過將980毫升的水加入到27. 4克葡 萄糖、8克檸#^鈉、2. 4克EDTA、 1. 2克重碳酸鈉、0. 4克氯化鉀、0. 6克慶 大霉素、9克HEPES和1克乳汁Porex的組合中制備。在4星期時間內(nèi)(2006. 5 ) >^自5個不同^t (Pietrain， York, Dalpo， Primeur， Hampshire)的28 頭性成^>豬收集精子。4狄Porex精^#料養(yǎng)1_###子，并且向890頭 #^授精。得到的平均母豬產(chǎn)仔率為92.0%，并且得到的平均每窩產(chǎn)仔^ 13.8。
實施例3. 該實施例涉及商業(yè)AI站進^^i糸睛、稀#射己，以及在8 個不同##"^的AI。豬精^##^養(yǎng)基是通過將980毫升的7jc加AJ！) 27. 4 克葡萄糖、8克檸#^鈉、2. 4克EDTA、 1. 2克碳^H鈉、0. 4克氯化鉀、0. 6 克慶大霉素、9克HEPES和1克Porex的組合中制備。在4星期時間內(nèi)(2006. 6 ) ^MJJ^自5個不同## (Pietrain, York, Dalpo， Primeur， Hampshire)的28 頭性成齡豬收集精子。朋Porex稀W養(yǎng)UNW子，并且向930頭麟 麟。得到的平均母豬產(chǎn)仔率為91.0%，并且得到的平均每窩產(chǎn)仔IM; 13. 5。
與實施例1相比，實施例2和3為4^貞域才i^A員提供了更多決定性信息， 因為母豬產(chǎn)仔率和每窩產(chǎn)仔^bi豬行業(yè)中的經(jīng)濟W:。因為母豬產(chǎn)仔率^窩 產(chǎn)仔數(shù)才娥農(nóng)場管理的不同而變化，比較了相同條的稀,養(yǎng)基。得到的每 窩產(chǎn)仔數(shù)比使用如實施例1中描述的標準BTS稀#^養(yǎng)1^斤得到的每窩產(chǎn)仔數(shù) 高0. 6。與使用BTS稀^^養(yǎng)勤目比，使用Porex稀，養(yǎng)基而得到的平均母豬產(chǎn)仔率高了 4%。
在上述實施例所描述的工作^^，從2006年7月1日到2007年12月25 日期間，使用實施例2和3中描述的Porex稀，養(yǎng)^iJi行了 80. 000次授精。 得到94. 0%的平均母豬產(chǎn)仔率和14.1的平均每窩產(chǎn)仔數(shù)。豬出生成活的數(shù)目為 平均13.4。豬出生成活的數(shù)目是絲業(yè)中最重要的經(jīng)濟指標。在荷蘭4^J標準 稀^^養(yǎng)基(BTS )的豬出生成活數(shù)目可以從由Agrovision出版的以Pigmanager
軟件為基礎(chǔ)的數(shù)據(jù)中獲得 (http: 〃麗.agrovision. nl/f iles/ksp20062007website01 pdf )。從2006年 7月1曰到2007年6月30曰期間，得到的母豬產(chǎn)仔率為86%、每窩產(chǎn)仔妙 13.1，并且豬出生成活率為12. 5。 it^明與廣泛^^J的BTS相比，Porex稀釋 培養(yǎng)基;l^p經(jīng)濟的稀辦養(yǎng)基。
與本發(fā)明實施方式一致，我們已纟^^Mit^包含Porex的培:^基中^^釋, 能夠提高和/或##豬精細胞的活力，因此可以在持久的時期內(nèi)提高和/或## 精細胞的麟能力。從而，通過"f捐商標名為Porex的乳汁血清蛋白替換BSA 我們已^i見了更經(jīng)濟和M的^NW^^基。
結(jié)論
雖然在上面僅僅詳細描述了本發(fā)明的示范性實施方案，但是^4頁域技^A 員#^容易，解，可能進^i午多修改而實質(zhì)上并^W離本發(fā)明的新穎的教導(dǎo) 和優(yōu)點。因此，如同下文權(quán)矛J^求中所定義的那樣，所有這類修改桐旨定被包 ^^M^發(fā)明的范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1、包含液態(tài)豬精細胞稀釋培養(yǎng)基的組合物，所述培養(yǎng)基旨在保持和/或提高精細胞的活力，所述組合物包含名為Porex的牛乳蛋白組分，所述Porex的產(chǎn)生基于在此描述的乳清。
2、 權(quán)矛]^求1的組楊，其中細M馬細胞。
3、 權(quán)矛J^^1的組^，其中細 _牛細胞。
4、 權(quán)矛J^求1的組^/,其中細^^綿羊細胞。
5、 ；^Uf'J^求1的組楊，其中細^IA細胞。
6、 擬，^"求1的組楊，其中細^_哺乳動物細胞。
7、 包含液態(tài)豬精細麟辨養(yǎng)基的組她所述培養(yǎng)基旨在##^/或提 高精細胞的活力，所i^且^;包含分離自牛乳的蛋白， 白(^卜。
8、 |^"求7的組*，其中細^_馬細胞。
9、 ^U'漆求7的組楊，其中細^1牛細胞。
10、 權(quán)矛漆求7的組^，其中細M綿羊細胞。
11、 權(quán)矛J^"求7的組讀，其中細I^A^胞。
12、 權(quán)矛]^求7的組*,其中細^1哺乳動物細胞。
13、 包含氣態(tài)豬精細麟鰣養(yǎng)基的組她所述培養(yǎng)基旨在##^/錄 高精細胞的活力，所i^且^包含分離自哺乳動物乳汁的蛋白，絲白ft^卜。
14、 權(quán)矛J^求13的組^，其中細^1馬細胞。
15、 權(quán)矛J^"求13的組楊，其中細1^|_牛細胞。
16、 權(quán)矛J^求13的組^7，其中細M綿羊細胞。
17、 權(quán)矛J^求13的組^，其中細l^l:Aiw胞。
18、 權(quán)矛漆求13的組^，其中細l&^:哺乳動物細胞。
19、 包含名為Porex的牛吝'1^白組^組*，所述Porex的產(chǎn)^^于在 述的乳清，所必且綠旨在培養(yǎng)和柳繁殖性豬細戯細麟諸M胚。
20、 權(quán)矛]^求19的組擔，其中細^i馬細胞。
21、 權(quán)矛j^求19的組楊，其中細^1牛細胞。
22、 權(quán)矛澳求19的組^/,其中細M綿羊細胞。
23、 權(quán)矛]^求19的組楊，其中細J^lAiffl胞。
24、 權(quán)矛J^求19的組合物，其中細胞是哺乳動物細胞。
25、 包含分離自牛乳的除了*白"卜的蛋白的組^7，所iil且^/旨在 培養(yǎng)和翻繁殖性豬細賊細鰣諸如豬胚。
26、 W慎求25的組^7，其中細賊馬細胞。
27、 權(quán)艦求25的組郵，其中細紋牛細胞。
28、 權(quán)矛J^求25的組^ ，其中細M綿羊細胞。
29、 權(quán)矛J^"求25的組^，其中細I^^Aiw胞。
30、 權(quán)禾'J^求25的組^;，其中細^1哺乳動物細胞。
31、 包含分離自哺乳動物乳汁的除了絲白"卜的蛋白的組^7,所iii且 姊旨絲養(yǎng)和細繁殖性豬細賊細麟諸械胚。
32、 權(quán)矛J^求31的組^ ，其中細M馬細胞。
33、 權(quán)矛j^求31的組^，其中細J^1牛細胞。
34、 ^U'J^求31的組^，其中細M綿羊細胞。
35、 ^U'J^求31的組^，其中細^AJw胞。
36、 權(quán)矛漆求31的組^;，其中細^_哺乳動物細胞。
全文摘要
本發(fā)明公開了來自乳汁的蛋白質(zhì)組分在豬精子稀釋培養(yǎng)基中的應(yīng)用。包含該蛋白質(zhì)組分的組合物顯示出改善的并且更加經(jīng)濟的特性。本發(fā)明主要涉及豬精子的稀釋培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基旨在保持和/或改善豬精細胞的活力并且應(yīng)用于豬的人工授精。然而，可以預(yù)料，本發(fā)明在其它物種的繁殖技術(shù)或方法諸如人工授精和體外受精中將是有用的。
文檔編號A01N1/02GK101610669SQ200880001920
公開日2009年12月23日 申請日期2008年1月3日 優(yōu)先權(quán)日2007年1月9日
發(fā)明者B·M·范登博格 申請人:Imv技術(shù)股份有限公司