專利名稱：：5’-經(jīng)取代腺苷、其制備和作為s-腺苷甲硫氨酸脫羧酶抑制劑的用途的制作方法
技術(shù)領域：
：本發(fā)明涉及某些腺嘌呤衍生物，具體說來，涉及某些5'_取代的腺苷化合物。本發(fā)明還涉及腺嘌呤衍生物作為S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶抑制劑的用途。本發(fā)明還涉及腺嘌呤衍生物用于治療各種疾病(例如癌癥和寄生蟲感染)且尤其哺乳動物疾病的用途。本發(fā)明還關于制備所述化合物的方法。
背景技術(shù)：
：S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶是多胺生物合成路徑的關鍵酶，并且取決于脫羧過程的丙酮?；?。這種酶的抑制劑可能作為癌癥的化療藥物，并用于治療各種寄生蟲感染。先前已確定在活性位點具有各種抑制劑的酶的晶體結(jié)構(gòu)，并且證實，配體在與酶相互作用的過程中，其腺嘌呤堿基采用一種不常見的順式構(gòu)象。舉例來說，已知腺嘌呤環(huán)的8位取代使此核苷酸在溶液中采用順式構(gòu)象(37-40)。在順式構(gòu)象中，腺嘌呤堿基堆積于AdoMetDC的F223與F7殘基之間。S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶(AdoMetDC)是一種丙酮酰基依賴性脫羧酶，而且是多胺生物合成路徑中的關鍵酶，其存在于所有物種中(1-4)。多胺腐胺、亞精胺和精胺對于細胞生長至關重要，并且在細胞增殖和分化過程中起到重要作用(5-7)。人們發(fā)現(xiàn)，多胺在多種類型的癌癥中會增多，包括非小細胞肺癌、前列腺癌、黑色素瘤和胰腺癌(8，9)。細胞中多胺的含量取決于多胺的合成和分解路徑，以及多胺跨細胞膜的輸入和輸出。改變多胺路徑中關鍵酶的調(diào)控，將是治療各種類型癌癥的一種治療策略。AdoMetDC催化S-腺苷甲硫氨酸(AdoMet)轉(zhuǎn)化成脫羧-S-腺苷甲硫氨酸(dcAdoMet)，隨后dcAdoMet將氨基丙基提供給腐胺或亞精胺，分別形成亞精胺和精胺。AdoMetDC是所述路徑的重要分支點，而且其作用于將AdoMet提供到多胺生物合成中，并將其從可用于提供甲基的池中去除。調(diào)控多胺含量的嘗試，已導致開發(fā)出靶向生物合成酶鳥氨酸脫羧酶(ODC)(10)、AdoMetDC和分解酶亞精胺/精胺N1-乙酰轉(zhuǎn)移酶(SSAT)(Il)的抑制劑。眾所周知的ODC抑制劑為α-二氟甲基鳥氨酸(DFMO)，其會使ODC不可逆失活。由于細胞通過增加多胺的細胞攝入來補償多胺合成的減少，故DFMO在癌癥療法中的成效是有限的(12)。目前正在將DFMO作為針對癌發(fā)生的化學預防劑進行研究(13-15)。抑制AdoMetDC的藥物的開發(fā)是從結(jié)構(gòu)類似于亞精胺的競爭性抑制劑甲基乙二醛雙(脒基腙)(MGBG)開始(16)。使用MGBG會在人體中引起極高毒性，而在嘗試降低毒性的過程中，開發(fā)出許多MGBG的類似物。由此得到的一種此類AdoMet抑制劑為4-脒基茚-1-酮-2'-脒腙(CGP48664A)，其已作為癌癥的化療劑進行臨床試驗(17)。另外，還開發(fā)出結(jié)構(gòu)類似于天然底物的抑制劑，如MHZPA、MAOEA和MHZEA。這些化合物通過與活性位點的丙酮?；纬上７驂A(Schiffbase)來使AdoMetDC失活(18)。AdoMetDC的另一種已知的核苷抑制劑為5'-(18)-5'-脫氧腺苷。其被設計為酶激活不可逆抑制劑(19)，但隨后的實驗顯示，其通過丙酮酸輔基的轉(zhuǎn)氨基作用來起作用(18)。AdoMetDC與其S68A和H243A突變體的晶體結(jié)構(gòu)已得到解決，由此可了解脫羧和自加工的機制(20-22)。先前已解決AdoMetDC與抑制劑(如MAOEA、MHZPA和MeAdoMet)所形成的晶體結(jié)構(gòu)(23)。這些結(jié)構(gòu)顯示，抑制劑的腺嘌呤堿基在活性位點呈現(xiàn)一種不常見的順式構(gòu)象。
發(fā)明內(nèi)容根據(jù)本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，某些腺嘌呤類似物會形成在溶液中促成順式構(gòu)象的配體。本文揭示數(shù)種8-取代的AdoMet結(jié)構(gòu)類似物以及未經(jīng)取代的腺嘌呤(即，8位取代基為H)的合成，和其抑制AdoMetDC的能力的分析。還揭示AdoMetDCF223A突變體與MeAdoMet的復合物以及野生型蛋白質(zhì)與抑制劑5'-脫氧-5'-[N-甲基-N-[2-(氨基氧基)乙基]氨基-8-甲基]腺苷(MAOEMA)和5'-脫氧_5‘_[N-甲基-N-[4-(氨基氧基)丁基]氨基-8-乙基]腺苷(MAOBEA)的復合物的晶體結(jié)構(gòu)。為便利起見，本文中使用以下所寫。AdoMetDC，S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶；AdoMet，S-腺苷甲硫氨酸；MA0EMA，5'-脫氧-5'-[N-甲基-N-[2-(氨基氧基)乙基]氨基-8-甲基]腺苷；MA0BEA，5'-脫氧-5'-[N-甲基-N-[4-(氨基氧基)丁基]氨基-8-乙基]腺苷；MeAdoMet，S-腺苷甲硫氨酸甲酯；Tris，三(羥甲基)氨基甲烷；PEG，聚(乙二醇)；(XD，電荷耦合裝置；MGBG，甲基乙二醛雙(脒基腙)；CGP48664A，4-脒基茚-1-酮-2‘-脒腙；MA0EA，5'-脫氧_5‘-[N-甲基-N_[(2-氨基氧基)乙基]氨基]腺苷；MHZPA，5'-脫氧_5'-[N-甲基-N-(3-胼基丙基)氨基]腺苷；ifepes，^(2-羥乙基)哌嗪-N'-2-乙磺酸；IPTG，異丙基-1-硫基-β-D-吡喃半乳糖苷；DTT，二硫蘇糖醇；EDTA，乙二胺四乙酸。具體來說，本發(fā)明關于下式所示的化合物其醫(yī)藥學上可接受的鹽、其溶劑化物和其前藥；其中R1和R2各自個別地選自由H和烷基組成的群組；R3選自由H、烷基、NR1R2,OR1R2、芳基、雜芳基、鹵基和CF3組成的群組；R4選自由NR7R8和SR1R2組成的群組;R7和R8各自個別地選自由H、烷基、(CH2)nNR1R2,(CH2)HCONR1R2和(CH2)nC=ONR1R2組成的群組；其中η為1到8的整數(shù)；并且R5和R6各自個別地選自由H和?；M成的群組。本發(fā)明還關于醫(yī)藥組合物，其包含有效量的如上所揭示的化合物或其醫(yī)藥學上可接受的鹽，或其溶劑化物，或其前藥，以及醫(yī)藥學上可接受的載劑。本發(fā)明另一方面涉及抑制有需要的宿主的S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶，其包含對所述宿主投予有效量的上述化合物、其醫(yī)藥學上可接受的鹽、其溶劑化物或其前藥。本發(fā)明另一方面關于治療罹患寄生蟲感染或由卡氏肺孢子蟲(Pneumocystiscainii)引起的感染的宿主。所屬領域技術(shù)人員將易于從以下實施方式而對本發(fā)明的其它目的和優(yōu)勢顯而易見，在以下實施方式中將簡單地借助于說明預期的最佳模式展示和描述優(yōu)選實施例。如將意識到，本發(fā)明能夠具有其它和不同實施例，并且在不偏離本發(fā)明的情況下，可對各個明顯方面的多處細節(jié)進行修改。因此，所述描述應實際上視為說明而非限制。圖IA描繪在活性位點具有MeAdoMet的hAdoMetDC的實際晶體結(jié)構(gòu)。圖IB描繪通過將MeAdoMet在AdoMetDC活性位點的模型(以較深的形狀顯示)疊加到所述實際晶體結(jié)構(gòu)(以較亮的陰影顯示)上得到的結(jié)構(gòu)。圖2A和2B分別描述hAdoMetDCF223A與MeAdoMet的復合物以及hAdoMetDCF7A與MeAdoMet的復合物的模型。圖3描繪MeAdoMet在AdoMetDCF223A突變體的活性位點中的晶體結(jié)構(gòu)。圖4繪示hAdoMetDC的潛在抑制劑的結(jié)構(gòu)。圖5描繪hAdoMetDC與所述酶的兩種抑制劑的相互作用。具體實施例方式本發(fā)明關于下式所示的化合物其醫(yī)藥學上可接受的鹽、其溶劑化物和其前藥；其中R1和R2各自個別地選自由H和烷基組成的群組；R3選自由H、烷基、NR1R2,OR1R2、芳基、雜芳基、鹵基和CF3組成的群組；R4選自由NR7R8和SR1R2組成的群組;R7和R8各自個別地選自由H、烷基、(CH2)nNR1R2,(CH2)HCONR1R2和(CH2)nC=ONR1R2組成的群組；其中η為1到8的整數(shù)；并且R5和R6各自個別地選自由H和酰基組成的群組。下文將列出用于描述本發(fā)明的各個術(shù)語的定義。當術(shù)語在本說明書全篇中獨立使用，或作為較大基團的一部分使用時，除非在特定情況中另作限定，否則這些定義適用于所述術(shù)語。另外，在本文描述和主張的各結(jié)構(gòu)式中，預期當任一符號在一個特定結(jié)構(gòu)式或取代基中出現(xiàn)不止一次時，其在一種情形中的含義與在另一情形中的含義無關?！坝行Я俊笔侵缚芍委熡行У卦鰪娝巹┑墓πУ谋疚乃龌衔锏牧?。這些所需要的化合物的確切劑量將隨所用特定化合物或衍生物、待治療個體的年齡和病狀以及病狀的性質(zhì)和嚴重程度而變化。然而，所屬領域技術(shù)人員在理解本發(fā)明后，可在不進行過多實驗的情況下確定有效量?！搬t(yī)藥學上可接受”是指在合理醫(yī)學判斷的范圍內(nèi)，適于與人類和動物組織接觸使用而無不當毒性、刺激、過敏反應或其它問題并發(fā)癥，且與合理的效益/風險比相符的化合物、材料、組合物和/或劑型。“醫(yī)藥學上可接受的鹽”是指所述化合物的衍生物，其中通過制備母體化合物的酸或堿鹽來對其進行修飾。醫(yī)藥學上可接受的鹽的實例包括(但不限于)堿性殘基(例如胺)的無機或有機酸鹽；酸性殘基(例如羧酸)的堿金屬或有機鹽，等等。醫(yī)藥學上可接受的鹽包括例如由無毒無機或有機酸形成的母體化合物的常規(guī)無毒鹽或季銨鹽。用于形成此類鹽的典型無機酸包括鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硝酸、硫酸、磷酸、連二磷酸等。也可使用衍生自有機酸的鹽，所述有機酸例如脂肪族單羧酸和二羧酸、苯基取代的烷酸、羥基烷酸和羥基烷二酸、芳香族酸、脂肪族和芳香族磺酸。由此，所述醫(yī)藥學上可接受的鹽包括乙酸鹽、苯乙酸鹽、三氟乙酸鹽、丙烯酸鹽、抗壞血酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、鄰乙酰氧基苯甲酸鹽、萘-2-苯甲酸鹽、溴化物、異丁酸鹽、苯基丁酸鹽、β-羥基丁酸鹽、丁炔-1，4-二酸鹽、己炔-1，4-二酸鹽、癸酸鹽(cabrate)、辛酸鹽、氯化物、肉桂酸鹽、檸檬酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、乙醇酸鹽、庚酸鹽、馬尿酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、羥基馬來酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、煙酸鹽、異煙酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、對苯二酸鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、丙炔酸鹽、丙酸鹽、苯基丙酸鹽、水楊酸鹽、癸二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、焦硫酸鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磺酸鹽、苯磺酸鹽、對溴苯磺酸鹽、氯苯磺酸鹽、乙磺酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、甲磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、酒石酸鹽等。常用于形成鹽的堿包括氫氧化銨以及堿金屬和堿土金屬氫氧化物、碳酸鹽，以及脂肪族和伯胺、仲胺和叔胺、脂肪族二胺。特別適用于制備加成鹽的堿包括氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、碳酸鉀、甲胺、二乙胺和乙二胺?！扒八帯笔窃隗w內(nèi)轉(zhuǎn)化成具有醫(yī)學作用的活性形式的化合物。當活性藥物毒性過高而無法全身投藥；消化道對活性藥物的吸收不良；或在活性藥物到達其靶之前就被身體分解時，可使用前藥。前藥的制備方法揭示于漢斯邦德加德(HansBimdgaard)，前藥的設計(DesignofProdrugs)(愛思維爾科學出版社B.V.(ElsevierSciencePublishersB.V.)，1985)中，所述文獻是以全文引用的方式并入本文中。具有各種氮官能團(氨基、羥氨基、胼基、胍基、脒基、酰胺等)的化合物的前藥形式可包括以下各類衍生物，其中R基團可各獨立地為氫、經(jīng)取代或未經(jīng)取代的烷基、芳基、烯基、炔基、雜環(huán)基、烷基芳基、芳烷基、芳烯基、芳炔基、環(huán)烷基或環(huán)烯基(如上文所定義)。羧酰胺，-NHC(O)R氨基甲酸酯，-NHC(0)OR氨基甲酸(酰氧基)烷酯，NHC(0)OROC(0)R烯胺，-NHCR(=CHCRO2R)或-NHCR(=CHCR0NR2)希夫堿，-N=CR2曼尼希堿(MannichBase)(來自羧酰亞胺化合物)，RC0NHCH2NR2所述前藥衍生物的制備論述于各文獻來源(實例為亞歷山大(Alexander)等人，藥物化學雜志(J.Med.Chem.)1988，31，318；艾利格斯-馬丁(Aligas-Martin)等人，PCTWOpp/41531，第30頁)中。在制備這些衍生物的過程中轉(zhuǎn)化的氮官能團為本發(fā)明化合物的一個(或多個)氮原子。本發(fā)明的含羧基化合物的前藥形式包括酯(-CO2R)，其中R基團對應于任何醇，其在體內(nèi)通過酶或水解過程而以醫(yī)藥學上可接受的水平釋放。衍生自本發(fā)明的羧酸形式的另一前藥可為博德(Bodor)等人，藥物化學雜志(J.Med.Chem.)1980,23,469中所述的季鹽型結(jié)構(gòu)。當然，除非另作說明，否則應了解本發(fā)明化合物涉及所述分子中的各個可能原子的所有光學異構(gòu)體和立體異構(gòu)體?！叭軇┗铩笔侵赣扇軇┡c溶質(zhì)相互作用形成的化合物，并且包括水合物。溶劑化物一般為在晶體結(jié)構(gòu)中含有化學計量或非化學計量比例的溶劑分子的結(jié)晶固體加合物。術(shù)語“鹵素”或“鹵基”是指氟、氯、溴和碘。術(shù)語“芳基”是指在環(huán)部分中具有6到12個碳原子的單環(huán)或雙環(huán)芳香族烴基，例如苯基、萘基、聯(lián)苯基和二苯基，其各自可經(jīng)取代。芳香族基團或芳基較為常見為苯基和經(jīng)烷基取代的芳香族基團(芳烷基)，例如苯基。烷基和苯甲基。術(shù)語“芳烷基”或“烷基芳基”或“烷芳基(alaryl)”是指直接經(jīng)由烷基鍵結(jié)的芳基，例如苯甲基或苯乙基。術(shù)語“經(jīng)取代芳基”或“經(jīng)取代烷基芳基”是指經(jīng)例如1到4個取代基(例如烷基、經(jīng)取代烷基、鹵基和烷氧基)取代的芳基或烷基芳基?！敖?jīng)取代苯甲基”是指經(jīng)例如上文關于經(jīng)取代芳基所列的任一基團取代的苯甲基。術(shù)語“烷基”是指具有1到20個碳原子并且更通常具有1到8個碳原子的直鏈或分支鏈未經(jīng)取代的烴基，并且甚至更通常為具有1到4個碳原子的未經(jīng)取代的烷基。合適烷基的實例包括甲基、乙基和丙基。分支鏈烷基的實例包括異丙基和叔丁基。術(shù)語“雜芳基”是指在環(huán)中具有至少一個雜原子和至少一個碳原子的任選取代的不飽和芳香族環(huán)基，例如其為4到7元單環(huán)、7到11元雙環(huán)，或10到15元三環(huán)系統(tǒng)。雜環(huán)基含雜原子的各個環(huán)可具有1、2或3個選自氮原子、氧原子和硫原子的雜原子，其中氮和硫雜原子還可任選經(jīng)氧化，并且氮雜原子還可任選經(jīng)季銨化。雜環(huán)基可在任一雜原子或碳原子處連接。雜芳基的實例包括(但不限于)吡咯、咪唑、批唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、噠嗪、Π引嗪、異吲哚、吲哚、吲唑、嘌呤、喹喔啉、喹唑啉、噌啉、噻吩、呋喃和異吡咯。雜芳香族部分可如上文關于芳基所述任選經(jīng)取代，包括經(jīng)一個或多個選自烷氧基、鹵基和烷基的取代基取代。典型脂肪族?；?到6個碳原子并且包括甲酰基、乙?；捅；?。本發(fā)明化合物可利用以下方案制備。方案1提供所用前體核苷系列3和4以及其合成方法。方案1a(CH3)4Sn或(CH3CH2)4Sn,HMDS/二噁烷，NMP，(Ph3P)4Pd,110°C;bCH3NH2，MeOH，110°C；cC8H5B(OH)2,K2CO3,(Ph3P)4Pd,1,2-DME·H2O(21),90"C；dSOCl2,CH3CN/吡啶，0°C-RT，NH4OH,RT;eMsCl，吡啶，0°C;f33%CH3NH2,EtOH,RT(4e,f,g)或80°C(4a_d)；8NaOMe/MeOH,RT在C-5'處具有氨基氧基烷基氨基側(cè)鏈的目標化合物是使用方案2中所示的兩種不同途徑制備。在利用2',3'-O-亞異丙基進行保護的初始順序中，通過用所需胺置換甲苯磺酰基，產(chǎn)生羥烷基氨基前體10。使用N-羥基鄰苯二甲酰亞胺、三苯膦和DEAD，38制備氨基氧基前體11，隨后在酸性條件下，將其轉(zhuǎn)化成所需目標化合物12。隨后發(fā)現(xiàn)，首先產(chǎn)生氨基氧基前體N-(2-溴乙氧基)乙酰亞胺乙酯48和N-(N-4-溴丁氧基)乙酰亞胺乙酯49(方案2)更為有效，其可通過用5'-甲氨基-5'-脫氧核苷進行鹵化物置換側(cè)接至C-5'，由此制得產(chǎn)物系列6和8。此置換反應是在核苷上具有亞異丙基保護基的情況下進行。后來確定在沒有保護基的情況下，所述反應也能進行或更好地進行。借助于上述方式，制備出目標化合物7a_c和9a_f。方案2aCH3(OEt)C=NO(CH2)2Br(參看48)，DMF,DIEA,50°C；bINH2SO4,RT；cCH3(OEt)C=NO(CH2)4Br(參看49)，DMF，DIEA，60°C；d2-(甲氨基乙醇)，RT;eN_羥基鄰苯二甲酰亞胺，PPh3,DEAD,THF(參看38)，RT;flNH2SO4,60°C如方案3中所示，以類似程序制備所有酰胺和酰胼。用適當?shù)摩?氯酯處理5'_甲氨基-5'-脫氧核苷，隨后用氨或胼處理。如果涉及亞異丙基，則在酸脫保護步驟中將其去除。以此方式，制備出具有兩種不同的鍵聯(lián)基長度和各種8-取代基的目標化合物13d_f、j-m0方案3aCl(CH2)nCO2Et(η=1或2)，DMF，DIEA，60。C;bNH3/MeOH，RT;C1NH3S04，RT;dNH2NH2,H2O,EtOH，回流在C-5'處具有氨基烷基氨基側(cè)鏈的目標化合物主要是通過用不對稱胺置換C-5'離去基制備得到(方案4)。舉例來說，用3-甲氨基乙胺處理3a，得到14f與15d的混合物，將其分離得到純14f，即所需目標化合物。在此程序涉及具有亞異丙基的起始物質(zhì)的情況下，用酸處理，得到所需終產(chǎn)物。在早期的工作中，通過用3-溴丙基鄰苯二酰亞胺處理5'-甲氨基-5'-脫氧核苷，隨后進行兩個脫保護步驟，制備出化合物17c，d。方案4aCH3NH(CH2)nNH2(n=1或2)，RT;blNH2S04，RT;c3_溴丙基鄰苯二甲酰亞胺，DMF，DIEA，60°C；dNH2NH2,H2O,回流；eIH-吡唑-1-甲脒·HCI(參看50)，DMF，DIEA,RT;f3_(甲氨基)丙腈，RT(參看51)；gNH2OH·HCl，MeOH,DMF，KOH,RT基于氨基烷基氨基側(cè)鏈，14e與1_甲脒基吡唑50反應，得到目標胍18a。在相關順序中，通過用3-(甲氨基)丙腈處理3j得到腈18b，51在堿性條件下用羥胺鹽酸鹽處理，制備出目標酰胺肟(amidoxime)18c。5'-二甲氨基和5'-二甲基锍基化合物19a，b和21a_d都是通過常規(guī)方法制備(方案5)。通過用二甲胺置換3a或3g43上的5'-氯，來引入二甲氨基。用溴甲烷處理5'-甲基硫基化合物20a，b制得21a和21c。利用離子交換制備氯化物鹽21b和21d。通過用硫代甲醇鈉置換3a中的5'-氯，制備出8-甲基-5'-甲基硫基核苷20a。方案53(CH3)2NH,2M的MeOH溶液，90°C；bCH3SNa,DMF,RT；cCH3Br,Et2O,HCO2H,HOAc,RT；dIRA_400(CF)離子交換樹月旨提供以下非限制性實例以進一步說明本發(fā)明。實例15'-氯-5'-脫氧-8-甲基腺苷(3a)。向經(jīng)攪拌的2a4°(892mg，3.17mmol)于在冰浴中冷卻的無水吡啶(501mg，0.51mL，6.33mmol)和CH3CN(2.5mL)中的懸浮液中緩慢添加SOCl2(1.88g，1.15mL,15.80mmol)。在0-5°C下持續(xù)攪拌3到4小時，隨后升溫到環(huán)境溫度過夜。在真空中濃縮所得懸浮液。向此反應混合物中添加甲醇(20mL)、水(2mL)和NH4OH(4mL)，隨后在室溫下攪拌0.5小時。將反應混合物濃縮至干。將化合物溶解于MeOH中，添加硅膠(3g)，隨后去除溶劑。將硅膠上的混合物倒于填充有硅膠的柱上，并用氯仿甲醇(71)洗脫。合并所需部分，濃縮并在真空中干燥產(chǎn)量661mg(70%)；MSm/ζ300(M+H)+；1HNMR(DMS0-d6)δ8.09(bs，1H，H-2)，7.15(bs，2H，6_NH2)，5.81(d，1H，H-1‘，J1,j2,=5.7Ηζ)，5·49(d,1H,2'OH,J2,_2,0H=6.1Hz)，5.45(d,1H,3'OH,J3,_3,0H=5.3Hz),5.13(ddd，1Η，Η-2',J1,,2,=5.7Hz,J2,,3,=4.8Hz,J2,_2,0H=6.1Hz)，4.31(ddd，1H,H-3'，J2,，3,=4.8Hz,J3,，4,=4.OHz,J3,_3,0H=5.3Hz),4.03-4.10(bm,1H,H_4')，3.93-3.99(m,1H,5'-CH2),3.82-3.88(m,1H,5'-CH2)，2.55(s，3H，8_CH3)。實例25'-氯-5'-脫氧-8-乙基腺苷(3b)。本程序與上文關于3a所報導的相同，使用2b4°(l.28g，4.33mmol)、吡啶(685mg，0.70mL，8.65mmol)、CH3CN(IOmL)和SOCl2(2.57g,1.58mL,21.60mmol)進行產(chǎn)量498mg(37%)；MSm/z314(M+H)+；1HNMR(DMS0-d6)δ8.09(bs,1H,H-2)，7.14(bs,2H,6_NH2)，5.80(d,1H,H-I',J1、2,·=5.7Hz)，5.48(d,1H,2‘-OH,J2,_2,oh=6.IHz)，5.45(d,1Η,3‘-OH,J3,_3,0Η=5.4Ηζ)，5.20(ddd,1Η,Η-2'，J1,,2,=5.7Hz,J2,,.3,=4.6Hz,J2,_2,0Η=6.IHz),4.30-4.37(bm,1Η,Η_3')，4.03-4.10(bm，1Η，Η-4'),3.94-4.O(m,1Η,5'-CH2),3.83-3.89(m,1Η,5'-CH2),2.89(q,2Η,8-CH2CH3)，1·31(t，3Η，8_CH2CH3)。實例35'-氯-5'-脫氧-8_(甲氨基)腺苷(3c)。利用與關于制備3a所述相同的程序，使用2c41(2.9g，9.78mmol)、吡啶(1.54g,1.57mL,19.46mmol)、CH3CN(5mL)和SOCl2(5.82g,3.56mL，48.91mmol)制備化合物3c產(chǎn)量1.95g(63%)；MSm/z315(M+H)+；1HNMR(DMS0-d6)δ7.91(bs,1H,H_2)，)，6.78(q,1H,8CH3_NH)，6.50(bs,2H,6_NH2)，5.70(d,1H,H-I',J1,’2,=5.0Hz)，5.41(d,1H,2'-OH,J2,_2,0H=5.6Hz)，5.32(d,1H,3'-OH,J3,_3,0H=5.3Hz)，5.18(ddd,1H,H_2‘，J1',2=5.OHz,J2,,3,=5.4Hz,J2,_2,0H=5.6Hz),4.33(ddd,1H,H-3‘，J2,,3,=5.4Hz,J3,,4,=4.4Hz,J3,_3,0H=5.3Hz)，)，3.91-4.02(bm,2H,H_4‘，5'-CH2),3.76-3.82(m,1H,5'-CH2)，2.88(d，3H，8NH_CH3，J=4.5Hz)。實例45'-氯-5'-脫氧-8-苯基腺苷(3d)。使用關于3a所述的程序，由2d42(4.5g，13.IOmmol),批啶(2.07g,2.12mL,26.2mmol),CH3CN(6mL)和SOCl2(7.79g，4.78mL，65.47mmol)制備3d產(chǎn)量2.21g(47%)；MSm/z362(M+H)+；1HNMR(DMS0_d6)δ8.20(s,1H,H-2)，7.71-7.76(m,2H,8-苯基鄰-H)，7.59-7.64(m,3H,8-苯基間-H和對-H)，7.40(bs,2H,6-ΝΗ2),5.75(d,1H,Η-Γ，J1,，2,=6·OHz)，5·52(d，1Η，2‘-OH,J2,_2,0H=5.6Hz)，5.39-5.44(m，2H，H-2'，3'-OH)，4.33(bs，1H，H_3')，3.98-4.06(bm，2H，H_4'，5'-CH2)，3.88-3.94(m,2H,5'-CH2)。實例55'-脫氧-5'_甲氨基-8-甲基腺苷(4a)。在鋼制反應釜中，將3a(660mg，2.20mmol)于33%甲胺/乙醇溶液(30mL)中的混合物在90°C下加熱2天。將反應混合物濃縮至干，并利用柱色譜分離法(用410.3的氯仿甲醇NH4OH洗脫)純化。合并所需部分，濃縮并在真空中干燥產(chǎn)量294mg(45%);MSm/z295(M+H)+；1HNMR(DMS0-d6)68.08(bs,1H,H-2),7.14(bs，2H，6_NH2)，5·72(d，1H，H_1'，J1,,2,=6.5Hz)，5.30(d,1H,2'-OH,J2,_2,0H=6.3Hz)，5.17(bd,1H,3'-OH,J3,_3,0H=3.5Hz)，5.01(ddd,1H,H-2'，J1,，2,=6.5Hz,J2,，3,=5.5Hz,J2,_2,0H=6.3Hz),4.16(bs,1H,H-3')，3.96-4.0(m，1Η，Η-4'),2.64-2.77(bm,2H,5'-CH2)，2.53(s，3H，8_CH3)，2.29(s，3H，5'NH-CH3)。實例65'-脫氧-5'_甲氨基-8-乙基腺苷(4b)。本程序與上文關于4a所報導相同，使用3b(1.00g，3.18mmol)和33%甲胺/乙醇溶液(30mL)進行。柱色譜分離法(用5:1:0.3的氯仿甲醇NH4OH洗脫)后，獲得玻璃狀黃色固體498mg(50%)；MSm/ζ309(M+H)+；1HNMR(DMS0-d6)δ8.08(bs，1H，H-2)，7.13(bs，2H，6_NH2)，5.70(d，1H，H-1‘，J1,,2,=6.6Hz)，5.30(d,1Η,2'-OH,J2,_2,0Η=6.4Ηζ)，5.16(d,1Η,3'-OH,J3,_3,0Η=4.5Ηζ),5.08(ddd,1Η,H-2'，J1,,2,=6·6Hz，J2,,3,=5·4Hz，J2,_2,0Η=6·4Ηζ)，4.14-4.18(m,1Η,Η_3')，3.96-4.0(m,1Η,Η_4')，2.88(q,2Η,8_CH2CH3)，2.64-2.78(m,2H,5'-CH2),2.29(s,3H,5'NH-CH3)，1.30(t，3H，8CH2CH3)。實例75'-脫氧-5'，8-雙(甲氨基)腺苷(4c)。利用與關于制備4a所述相同的程序，使用3c(1.OOg,3.17mmol)和33%甲胺/乙醇溶液(30mL)制備化合物4c。柱色譜分離法(用710.4的氯仿甲醇NH4OH洗脫)后，獲得玻璃狀黃色固體505mg(51%)；MSm/z310(M+H)+；1HNMR(DMS0_d6)δ7.89(bs禾口q，2H，H-2禾口8CH3_NH)，6·44(bs，2Η，6_ΝΗ2)，5.84(d,1Η,H-I‘，J1,,2,=7·OHz)，5·22(d，1H，2‘-OH,J2,_2,0H=6.4Hz)，5.12(d,1H,3'-OH,J3,_3,oh=4.0Hz),4.66(ddd,1H,H-2',J1,,2,=7.0Hz，J2,,3,=5.4Hz,J2,_2,0H=6.4Hz)，4.14(bm,1H,H_3')，3.94-4.0(bm,1H,H_4')，2.90(d,3H,8NH_CH3，J=4.4Hz)，2.77-2.83(m,1H,5'-CH2),2.57-2.62(m,1H,5'-CH2),2.35(s,3H,5'NH-CH3)。實例85'-脫氧-5'_甲氨基-8-苯基腺苷(4d)。利用與關于制備4a所述相同的程序，使用3d(2.OOg,5.52mmol)和33%甲胺/乙醇溶液(40mL)制備化合物4d。柱色譜分離法(用410.2的氯仿甲醇NH4OH洗脫)后，獲得玻璃狀黃色固體963mg(49%)；MSm/z357(M+H)+；1HNMR(DMS0_d6)δ8.19(s，1H,H-2),7.72-7.76(m，2H，8_苯基鄰-H)，7.58-7.61(111，3!1，8-苯基間-!1和對-!1)，7.40038，2!1，6-朋2)，5.70((1，1!1，Η-Γ，J1,’2,=6.4Ηζ)，5·38(d,1Η，2'-OH,J2,_2,0Η=6.2Ηζ)，5·29(ddd,1Η,Η_2'，J1,’2,=6.4Hz,J2,,3,=5.IHz,J2,_2,oh=6.2Ηζ)，5·14(bs,1Η，3'-0Η),4.19(bs,1Η,Η_3')，3·95—4.0(m，1Η,Η-4'),2.82(d,2H,5'-CH2,J=5.2Ηζ),2.34(s,3H,5'NR-CH3)。實例95'-脫氧-5'-[[2-[[(1-乙氧基亞乙基)氨基]氧基]乙基]甲氨基]-8-甲基腺苷(6￡1)。在氮氣下，于501下將化合物4￡1(4161^，1.41讓01)力-(2-溴乙氧基)乙酸酰胺乙酯48(350mg，1.66mmol)和DIEA(llmg，0.014mL，0.085mmol)于DMF(5mL)中的混合物加熱過夜。將反應混合物濃縮至干。利用柱色譜分離法(用710.1的氯仿甲醇NH4OH洗脫)純化所得漿液。合并所需部分，濃縮并在真空中干燥，得到玻璃狀黃色粘性固體產(chǎn)M50mg(8%)；MSm/z424(M+H)+；1HNMR(DMS0-d6)δ8.07(s，1H，H-2)，7.11(bs，2H，6_NH2)，5.73(d,1H,H-I‘，J1,，2,=5.5Hz)，4·31(d，1H，2‘-OH,J2,_2,0H=6.3Hz)，5.15(d,1H,3'-OH,J3,_3,oh=5.5Hz),5.04(ddd,1H,H-2'，J1,,2,=5.5Hz,J2,,3,=5.IHz,J2,_2,0H=6.3Hz),4.13(ddd,1Η,Η-3',J2,,3,=5.IHzjJ3,,4,=4.7Hz,J3,_3,0H=5.5Hz)，3.92(q，2H,CH2CH3)，3.88(t,2H,NO-CH2)，2.72-2.78(m,1H,5'-CH2)，2.56-2.62(m,4H,5‘-CH2,H-4'，N(CH3)-CH2)，2.53(s,3H,8_CH3)，2.21(s，3H,N-CH3)，1.83(s，3H,C-CH3)，1.19(t，3H，OCH2CH3)ο實例105'-脫氧-5'-[[2-[[(1_乙氧基亞乙基)氨基]氧基]乙基]甲氨基]_8-(甲氨基)腺苷(6b)。利用與關于6a所報導相同的程序，使用4c(500mg,1.61mmol)、N_(2-溴乙氧基)乙酰胺乙酯48(4071^，1.93讓01)、0比六(10411^，0·14mL,0.80mmol)和DMF(5mL)制備化合物6b。柱色譜分離法(用710.3的氯仿甲醇NH4OH洗脫)后，獲得玻璃狀黃色粘性固體產(chǎn)量209mg(30%)；MSm/z439(M+H)+；1HNMR(DMS0-d6)δ7.89(s，1H，H-2)，6.85(q,1H，8CH3-NH)，647(bs，2H，6-NH2)，5·69(d,1H,H-I‘,J1,j2,=5.OHz)，5·27(d,1Η,2‘-OH,J2,_2,oh=5.5Hz)，5.06(d,1H,3'-OH,J3,_3,0H=5.OHz)，4.88(ddd,1H,H_2‘，J1,,2,=5.OHz,J2,,3,=5.8Hz,J2,_2,oh=5.5Hz)，4·17(ddd,1H,H_3'，J2,,3,=5.8Hz,J3,,4,=4.7Hz,J3,_3,oh=5.OHz)，3.86-3.95(m,3H,H_4'，NO-CH2)，3.92(q,2H,CH2CH3)，2.88(d,3H,8nh-CH3,J=4.6Hz)，2.71-2.77(m,1H,5'-CH2)，2.56-2.67(m,3H,5‘-CH2,N(CH3)-CH2),2.24(s，3H，N-CH3)，1.83(s，3H，C-CH3)，1.19(t，3H，OCH2CH3)。實例115'-脫氧-5'-[[2-[[(1_乙氧基亞乙基)氨基]氧基]乙基]甲氨基]-8-苯基腺苷(6c)。使用關于6a所述的程序，由4d(400mg，l.12mmol)、N-(2-溴乙氧基)乙酰胺乙酉旨48(283mg，1.34mmol)禾口DIEA(72mg，0.10mL，0.55mmol)制備6c。柱色譜分離法(用71的氯仿甲醇洗脫)后，獲得玻璃狀黃色粘性固體產(chǎn)量105mg(20%)；MS:m/z486(M+H)+；1HnMR(DMSO-CI6)δ8.17(s，1H，H_2)，7.72-7.78(m，2H，8-苯基鄰-H)，7.58-7.63(m，3H，8-苯基間-H和對-H)，7.36(bs，2H，6-NH2)，5.67(d，lH，H-I‘，J1,’2,=5.2Hz)，5.29-5.34(m，2H,2'-OH,H-2')，5.13(d，lH，3'-0H，J3,_3,0H=5.3Hz)，4.14—4.18(m，1H，H_3')，3.88-3.97(m,3H,H_4‘，NO-CH2)，3.92(q,2H,CH2CH3)，2.78-2.84(m,1H,5'-CH2)，2.60-2.70(m，3H，5‘-CH2,N(CH3)-CH2)，2.24(bs，3H，N-CH3)，1.83(s，3H，C-CH3)，1.19(t,3H,OCH2CH3)。實例125'-[(2-氨基氧基乙基)甲氨基]-5'-脫氧-8-甲基腺苷硫酸鹽(2.21的鹽)(7a)。將化合物6a(50mg，0.llmmol)溶解于2mL2NH2SO4中，并在室溫下攪拌2天。用NaHCO3中和反應混合物，并凍干。用Et0H(2X10mL)萃取化合物，并濃縮至干。禾0用柱色譜分離法(硅膠230-400目，用710.3的氯仿甲醇NH4OH洗脫)純化殘余物。合并所需部分，濃縮并在真空中干燥。將產(chǎn)物溶解于3mLEtOH中并逐滴添加2NH2S04。過濾沉淀析出的所得硫酸鹽，并用EtOH洗滌。將此具有吸濕性的產(chǎn)物溶解于水(2mL)中，并凍干，得到白色固體產(chǎn)量20mg(29%)；MS:m/z354(M+H)+；1HNMR(DMS0_d6)δ8.25(s,1H,H-2)，7.80(bs，2H，O-NH2)，5.87(d，1H，Η-Γ，J1,’2,=5.7Hz)，4.88(t，1H，H-2'，J2,,3,=5.2Hz)，4.35-4.40(bm，1H，H-4'),4.23(t,1H,H-3'，J2,,3,=3.2Hz)，4.10(t,2H,NH2O-CH2)，3.50-3.57(m,1H,5'-CH2)，3.65-3.72(m,1H,5'-CH2)，3.45(bm,2H,N(CH3)-CH2),2.85(s，3H，N-CH3),2.58(s，3Η，8_CH3)；UVAmax,nm,pH1，274(ε15，200)，ρΗ7，276(ε15，500),pH13，277(ε15，900)。分析(C14H23N7O4.2.2H2S04.0.IC2H5OH.0.5Η20)C,H,N。實例Π5'-[(2-氨基氧基乙基)甲氨基]-5'-脫氧_8-(甲氨基)腺苷硫酸鹽(2.11的鹽)(7b)。使用關于7a所述的程序，由6b(200mg，0.45mmol)制備7b:產(chǎn)量125mg(46%)；MS:m/z369(M+H)+；1HNMR(DMS0_d6)δ8.16(s，1H,H-2),7.50-7.65(bm,2H,O-NH2)，5.83(d，1H，H-I‘,J1,j2,=5.3Hz)，6.56(bs，2Η，6_ΝΗ2)，4.96(t，1Η，Η_2‘,J2,,3,=4.8Ηζ)，4.28-4.35(bm,1Η,Η_4‘)，4.25(t,1Η,H-3‘,J2、3,=4.IHz)，3.96(t,2H,NH2O-CH2)，3.59-3.66(m,1H,5‘-CH2)，3.49-3.57(m,1H,5‘-CH2)，3.36-3.40(bm,2H,N(CH3)-CH2),2.94(s,3H,8nh-CH3),2.81(s,3H,N-CH3)；UVAmax,nm,pH1，274(ε14，300)，pH7，276.7(ε17，100)，pH13，276.1(ε17,500)。分析(C14H24N8O4.2.IH2SO4.0.3C2H50H.0.2H20)C,H，N，S。實例145'-[(2-氨基氧基乙基)甲氨基]-5'-脫氧-8-苯基腺苷硫酸鹽(21的鹽)(7c)。利用與關于制備7a所述相同的程序，使用6C(99mg，0.20mmol)制備化合物7c產(chǎn)量57mg(42%)；MS:m/z416(M+H)+；1HNMR(D2O)δ8.37(s,1H,H-2)，7.73-7.76(m,2H,8-苯基鄰-H)，7.60-7.70(m,3H,8_苯基間-H和對-H)，6.02(d,1H,H-I‘，J1,,2,=5.7Hz),5.25(t,1H,H-2‘，J2,，3,=4.9Hz)，4.46-4.54(bm，2H，H-3‘,4‘),4.03(t,2H,NH2O-CH2)，3.87-4.0(m,1H,5‘-CH2)，3.61-3.67(m,1H,5‘-CH2)，3.50-3.55(m,2H,N(CH3)-CH2)，3.0(s，3H，N-CH3)；UVλ隨，nm，pH1，275(ε21，600)，ρΗ7,275(ε17,100)，ρΗ13，274.4(ε16，800)。分析(C19H25N7O4.2.OH2SO4.3Η20)C,H，N，S。實例155'-脫氧-5'-[[4-[[(1_乙氧基亞乙基)氨基]氧基]丁基]甲氨基]_8-(甲氨基)腺苷(8a)。利用與關于6a所報導相同的程序，使用4C(1.00g，3.23mmOl)、N-(4-溴丁氧基)乙酰亞胺乙酯49(924mg，3.87mmol)和DIEA(209mg，0.28mL，1.6mmol)制備化合物8a產(chǎn)量635mg(42%)；MS:m/z467(M+H)+；1HNMR(DMS0-d6)δ7.89(s,1H,H-2),6.87(q,1H，8CH3-NH)，646(bs，2H，6-NH2)，5·69(d，1H，Η-Γ，J1,，2,=4.8Hz),5.25(d,1H,2'-OH,J2,_2:oh=5.6Hz),5.06(d,1H,3'-OH,J3,_3,0H=5.4Hz)，4.91(ddd，1H，H-2‘，J1,,2,=4.8Hz,J2,，3,=5.4Hz,J2,_2,0H=5.6Hz)，4.16(ddd,1H,H_3'，J2,，3,=5.4Hz,J3,,4,=4.9Hz，J3,_3,oh=5.4Hz),3.85-3.94(m,1H,H4')，3.92(q，2H，OCH2CH3)，3.80(t，2H，NO-CH2)，2.88(d,3H,8NH_CH3，J=4.6Hz)，2.65-2.74(m,1H,5'-CH2)，2.46-2.58(m,1H,5'-CH2)，2·34(t，2H，N(CH3)-CH2)，2.17(s，3H，N-CH3)，1·83(s，3Η，C-CH3)，1·37-1.61(bm，4H,NOCH2-CH2CH2)，1.19(t,3H,OCH2CH3)。實例165'-脫氧-5'-[[4-[[(1_乙氧基亞乙基)氨基]氧基]丁基]甲氨基]-8-苯基腺苷(8b)。使用與關于6a所述相同的程序，由4d(450mg，1.26mmOl)、N-(4-溴丁氧基)乙酰亞胺乙酯49(360mg，l.51mmol)和DIEA(81mg，0.10mL，0·62讓ol)制備8b。柱色譜分離法(用71的氯仿甲醇洗脫)后，獲得玻璃狀黃色粘性固體產(chǎn)量312mg(48%)；MS:m/z514(M+H)+；1HNMR(DMS0-d6)δ8.17(s,1H,H_2)，7.71-7.78(m，2H，8-苯基鄰-H)，7.58-7.64(m，3H，8-苯基間-H和對-H)，7.36(bs，2H，6_NH2)，5.67(d,1H,H-I‘，J1,’2,=5.7Hz),5.32(bs,1H,2'-OH)，5·31(t，1H，H_2'，J1,，2,=5.7Hz,J2,3=5.4Hz)，5.11(d,1H，3'-OH,J3,_3,oh=4.8Hz),4.16(bddd,1H,H_3‘，J2,，3,=5.4Hz,J3,，4,=4.OHz)，3.92-3.97(m,1H,H_4'),3.91(q,2H,OCH2CH3)，3.79(t,2H,NO-CH2)，2.72-2.80(m,1H,5'-CH2)，2.54-2.59(m,1H,5‘-CH2)，2.34(bt,2H,N(CH3)-CH2)，2.17(bs,3H,N-CH3)，1.83(s，3H,C-CH3)，1.39-1.60(bm,4H,NOCH2-CH2CH2)，1.18(t,3H,OCH2CH3)。實例175'-脫氧-5'-[[4-[[(1_乙氧基亞乙基)氨基]氧基]丁基]甲氨基]-8-氧代腺苷(8c)。使用關于6a所述的程序，由4i45(500mg，1.68mmol)、N-(4-溴丁氧基)乙酰亞胺乙酯49(481mg，2.Olmmol)、DIEA(109mg，0.14mL，0.84mmol)和DMF(5mL)制備8c。柱色譜分離法(用410.2的氯仿甲醇NH4OH洗脫)后，獲得玻璃狀黃色粘性固體產(chǎn)量200mg(26%)；MS:m/z454(M+H)+；1HNMR(DMS0-d6)δ10.34(bs，1H，8-OH)，8.02(s，1H,H-2)，6.49(bs,2H,6_NH2)，5.62(d,1H,Η-Γ,J1,j2,=5.OHz)，4.99(bs,1H,3'-OH)，5.19(bs,1H,2'-OH)，4·90(t，1H，H-2‘，J2,,3,=5.4Hz)，4.16—4.24(bm，1H，H_3')，3.83-3.89(m,1H,H_4')，3.92(q,2H,OCH2CH3)，3.77(t,2H,NO-CH2)，2.62-3.68(m,1H,5'-CH2),2.40-2.46(m,1H，5'-CH2),2.30(t，2H，N(CH3)-CH2)，2·13(s,3Η,N-CH3)，1·84(s，3Η,C-CH3)，1.35-1.60(bm,4H,NOCH2-CH2CH2)，1·21(t，3H,OCH2CH3)。實例185'-脫氧-2',3'-亞異丙基-5'-[[4-[[(1_乙氧基亞乙基)氨基]氧基]丁基]甲氨基]-8-甲基腺苷(8d)。利用與關于6a所報導相同的程序，使用4e(1.00g，3.llmmol)、MsCl(392mg,0.26mL，3.42mmol)、甲胺(25mL)、N_(4_溴丁氧基)乙酰亞胺乙酉旨(853mg，3.58mmol)、DIEA(200mg,0.27mL,1.54mmol)和DMF(8mL)制備化合物8d。柱色譜分離法(955的氯仿甲醇)后，獲得玻璃狀固體產(chǎn)量176mg(12%);MS:m/z492(M+H)+；1HNMR(CDCl3)δ8.27(s,1H,H-2),5.99(d,1H,H-I‘，Jlj2=1.8Hz)，5.75(dd,1H,H-2‘，Jlj2=1.8Hz，J2,3=6.4Hz)，5.39(bs，2H，6_NH2)，5.08(dd，1H，H_3‘，J2,3=6.4Hz,J3,4=3.5Hz),4.27-4.34(m,1H,H-4')，4·0(q，2H，OCH2CH3),3.84(t，2H，NO-CH2)，2.64(s，3H，8-CH3)，2.55-2.61(m，lH，5‘-CH2)，2.45-2.55(m,1H,5‘-CH2)，2.29-2.34(m,2H,N(CH3)-CH2),2.21(s，3H，N-CH3)，1.91(s，3H，C-CH3)，1.61禾口1.40(2s，6H，C(CH3)2)，1.51-1.60(m，2H，NOCH2-CH2)，1.37-1.45(m,2H,N(CH3)CH2-CH2)，1.27(t，3H，OCH2CH3)。實例195'-脫氧-2',3'-亞異丙基-5'-[[4-[[(1_乙氧基亞乙基)氨基]氧基]丁基]甲氨基]-8-乙基腺苷(Se)。使用關于6a所述的程序，由4f(1.00g，2.98mmOl)、MsCl(375mg，0.25mL，3.27mmol)、甲胺(25mL)、N_(4_溴丁氧基)乙酰亞胺乙酯(852mg，3.57mmol)、DIEA(192mg，0.25mL，1.48mmol)禾ΠDMF(IOmL)制備8e。柱色譜分離法(955的氯仿甲醇)后，獲得玻璃狀固體產(chǎn)量159mg(ll%)；MS:m/z506(M+H)+；1HNMR(CDCl3)δ8.27(s，1Η,H-2)，5.99(d,1H,H-I‘，Jlj2=2.OHz)，5.73(dd,1H,H—2‘，Jlj2=2.OHz,J2,3=6.4Ηζ),5.40(bs,2H,6-ΝΗ2),5.09(dd,1H,H_3‘，J2,3=6.4Hz,J3,4=3.6Hz)，4.26-4.33(m,1H,H-4‘)，4.0(q,2H,OCH2CH3)，3.84(t,2H,NO-CH2)，2.91-2.99(m,2H,8-Et的CH2)，2.59-2.65(m,1H,5‘-CH2)，2.46-2.53(m,1H,5‘-CH2)，2.30-2.35(m,2H,N(CH3)-CH2),2.21(s，3H，N-CH3)，1.91(s，3H，C-CH3)，1.61禾口1.40(2s，6H，C(CH3)2)，1.51-1.59(m，2H，NOCH2-CH2)，1.49-1.38(m,2H,N(CH3)CH2-CH2)，1.43(s，3H，8_Et的CH3)，1.27(t，3H，OCH2CH3)。實例205'-脫氧-2'，3'-亞異丙基-5'-[[4-[[(1_乙氧基亞乙基)氨基]氧基]丁基]甲氨基]-腺苷(8f)。利用與關于6a所報導相同的程序，使用4g43(1.00g，3.25mmol)、MsCl(447mg,0.30mL，3.90mmol)、甲胺(25mL)、N-(4-溴丁氧基)乙酰亞胺乙酉旨(511mg，2.15mmol)、DIEA(125mg，0.17mL，0.96mmol)禾ΠDMF(5mL)制備化合物8f。柱色譜分離法(955的氯仿甲醇)后，獲得淺黃色漿液產(chǎn)量839mg(86%)；MSm/ζ478(M+H)+；1HNMR(CDCl3)δ8.36(s,1H,H-2),7.96(s,1H,Η_8)，6·07(d,1H,H-I‘，J1,,2,=2·2Ηζ)，5·60(bs，2H，6-NH2)，5·49(dd，1Η，H-2‘,J1,j2,=2.2Hz，J2,，3,=6.4Hz)，4.95(dd，1H，H-3‘，J2,，3,=6.4Hz，J3,，4,=3.4Hz)，4.36-4.40(m，1H，H_4')，4.0(q，2H,OCH2CH3)，3.86(t,2H,NO-CH2)，2.61(dd,1H,5'-CH2)，2.55(dd,1H,5‘-CH2)，2.38(bt,2H,N(CH3)-CH2),2.26(s，3H，N-CH3)，1.91(s，3H，C-CH3)，1.61禾口1.40(2s，6H，C(CH3)2)，1.55-1.61(m,2H,NOCH2-CH2)，1.44-1.52(m,2H,N(CH3)CH2-CH2)，1.27(t,3H,OCH2CH3)。實例215'-[(4-氨基氧基丁基)甲氨基]-5'-脫氧-8-(甲氨基)腺苷硫酸鹽(0.41的鹽)(9a)。使用與用于制備7a相同的程序，使用8a(600mg，1.28mmol)和2NH2S04(IOmL)制備9a產(chǎn)量514mg(87%)；MS:m/z510(M+H)+；1HNMR(DMS0-d6)δ7.91(s，1H，H-2)，6.88(bq，1H,8CH3-NH),6.50(bs，2H，6-NH2)，5·72(d,1Η,H-I‘,J1,j2,=5.1Hz)，5·08-5.39(bm,2Η,2',3'-OH)，4.0-5.02(m，1Η，H-2‘)，4.19(t，1H，H_3‘),3.94-4.06(bm,1H,H-4')，3.45(bt,2H,NH2O-CH2)，3.36-3.54(m,2H,5'-CH2)，2.89(d,3H,8NH_CH3)，2.78-2.95(bm,2H,NCH3-CH2)，2.04(bs,3H,N-CH3)，1.38-1.52(bm,4H,NH2OCH2-CH2CH2)；UVλmax，nm,pH1，274.8(ε14，300)，pH7，276(ε16，700)，pH13，277(ε17，400)。分析(C16H28N8O4.0.4H2S040.2C2H50H.0.9H20)C,H，N，S。實例225'-[(4-氨基氧基丁基)甲氨基]-5'-脫氧-8-苯基腺苷硫酸鹽(1.751的鹽)(9b)。利用與關于制備7a所述相同的程序，使用8b(305mg，0.59mmol)和2NH2S04(4mL)制備化合物9b產(chǎn)量252mg(64%)；MS:m/z444(M+H)+；1HNMR(DMS0_d6)δ8.18(s，1Η,H-2)，7.20-7.78(m,2H,8-苯基鄰-H)，7.59-7.61(m,3H,8_苯基間-H禾口對-H)，7.37(bs,2H,6_NH2)，5.85(s,2H,O-NH2)，5.68(d,1H,H-1‘，J1,,2,=5.7Hz)，5.31(t,lH,H-2‘，J2,，3,=5.5Hz)，5·13(bd，1H，3‘-OH),4.18(t,1H,H-3',J3,j4,=3.9Hz)，3.94-3.99(bm,1H,H-4')，3.49(t,2H,NH2O-CH2)，2.73-2.79(m,1H,5'-CH2)，2.54-2.62(m,1H,5'-CH2),2.27-2.36(bm,2Η,N(CH3)-CH2),2.16(bs，3H，N-CH3)，1.33-1.53(bm，4H，NH2OCH2-CH2CH2)；1HNMR(D2O)δ8.36(s,1Η,H-2),7.72-7.78(m，2H，8_苯基鄰-!1)，7.63-7.71(111，3!1，8-苯基間-!1和對-!1)，6.02((1，1!1，！1-1'，J1,，2,.=5.8Hz)，5.28-5.41(bm,1H,H-2‘),4.43-4.53(bm,2H,H-3‘,4‘),3.92-4.03(m,1H,5‘-CH2),3.90(t，2H，NH2O-CH2)，3.49-3.59(m,1H，5‘-CH2)，3.22-3.32(bm，2H，N(CH3)-CH2)，2.92(bs,3H,N-CH3),1.61-1.83(bm,4H,NH2OCH2-CH2CH2)；UVλmax，nm，pH1，275(ε21,400)，pH7，274.5(ε16，900)，pH13，274.8(ε16，700)。分析(C21H29N7O4.1.75H2S04.0.05C2H50H.2.4H20)C,H，N，S。實例235'-[(4-氨基氧基丁基)甲氨基]-5'-脫氧-8-氧代腺苷硫酸鹽(1.91的鹽)(9c)。本程序與上文關于7a所報導相同，使用8c(190mg，0.41mmol)和2NH2S04(3mL)進行。利用柱色譜分離法(用410.5的氯仿甲醇NH4OH洗脫)純化化合物產(chǎn)量208mg(82%)；MS:m/z384(M+H)+；1HNMR(DMS0-d6)δ10.45(bs，1H，8-0H)，8.05(s，1H，H-2)，6·58(bs，2H，6-NH2)，5·77(d，1H，H-I'，J1,，2,=5.0Hz)，5.37-5.71(bm，2H，O-NH2)，4.83(t，1H，H-2‘，J2,,3,·=4.2Hz)，4.18-4.29(m，2H，H_3'，H_4')，3.88(t，2H，NH2O-CH2)，3.34-3.54(m，2H，5'-CH2)，3.06(bt，2H，N(CH3)-CH2)，2.73(s，3H，N-CH3)，1.46-1.74(bm，4H，NH2OCH2-CH2CH2)；UVAmax,nm,pH1,263.3(ε12，200)，pH7，268.9(ε13，600)，ρΗ13，279.9(ε15，600)。分析(C15H25N7O5.1.9H2S04.0.IC2H5OH.2Η20)C,H,N,S。實例245'-[(4-氨基氧基丁基)甲氨基]-5'-脫氧-8-甲基腺苷硫酸鹽(1.91的鹽)(9d)。將化合物8d(149mg，0.30mmol)溶解于2.5mLINH2SO4中，并在室溫下攪拌12天。用NaHCO3中和反應混合物，并凍干。用EtOH(2XIOmL)萃取化合物，并濃縮至干。利用柱色譜分離法(硅膠230-400目，用410.2的氯仿甲醇NH4OH洗脫)純化殘余物。收集所需部分，濃縮并在真空中干燥。將產(chǎn)物溶解于8mLEtOH中并逐滴添加2NH2S04。過濾沉淀析出的所得硫酸鹽，并用EtOH洗滌。將此產(chǎn)物溶解于水(2mL)中，并凍干，得到白色固體產(chǎn)量59mg(33%)；MS:m/z382(M+H)+；1HNMR(D2O)δ8.39(s,1H,H-2),6.08(d,1H,H-I'，J1,,2,=5·5Ηζ)，5·0-5.19(bm，1Η，Η-2'),4.51-4.58(bm,2H,H-3',4'),4.08(t,2H,NH2O-CH2)，3.73-4.0(m,1H,5'-CH2)，3.44-3.69(m,1H,5'-CH2)，3.16-3.36(bm,2H,N(CH3)-CH2)，2.92(bs,3H,N-CH3)，2.70(s,3H,8_CH3)，1.68-1.88(bm,4H,NH2OCH2-CH2CH2)；UVλmax,nm,ρΗ1,258.2(ε15，400)，ρΗ7,259.7(ε15，500)，ρΗ13,260.9(ε15，900)。分析(C16H27N7O4.1.9H2S04.0.4C2H50H)C,H,N。實例255'-[(4-氨基氧基丁基)甲氨基]-5'-脫氧-8-乙基腺苷硫酸鹽(1.91的鹽)(9e)。本程序與上文關于9d所報導相同，使用8e(155mg，0.30mmOl)進行產(chǎn)量55mg(30%)；MS:m/z396(M+H)+!1HNMR(D2O)δ8.39(s，1H，H-2)，6.09(d，1H，H_1‘，J1,,2,=5.6Hz),5.07-5.23(bm,1H,H-2‘),4.50-4.60(bm,2Η,H-3‘,4‘),4.06(t,2H，NH2O-CH2)，3.82-3.96(m，1H，5‘-CH2)，3.45—3.69(m，1H，5‘-CH2),3.27(bs,2H,N(CH3)-CH2)，3.0-3.10(m,2H,8CH2CH3),2.91(bs,3H,N-CH3)，1.68-1.86(bm,4H,NH2OCH2-CH2CH2),1.39(t,3H,8CH2CH3)；UVλmax，nm，ρΗ1,259.1(ε16,400),ρΗ7，260(ε15，700)，ρΗ13，260.2(ε15，900)。分析(C17H29N7O4.1.9H2S04.0.2C2H50H)C,H,N。實例265'-[(4-氨基氧基丁基)甲氨基]-5'-脫氧腺苷硫酸鹽(21的鹽)(9f)。本程序與上文關于9d所報導相同，使用8f(750mg，l.5mmol)進行產(chǎn)量457mg(48%)；MSm/z368(M+H)+；1HNMR(DMS0-d6)δ8.43(s,1H,H_8)，8.23(s，1H，H_2)，7.58(bs，2H，6_NH2)，6.03(d,1H,H-I'，J1,，2,=5.4Hz)，4·75(t,1H,H_2'，J1,，2,=5.4Hz,J2,，3,=4.8Hz)，4.32-4.40(bm，2H，H-4'),4.23(t,1H,H-3‘，J3,,4,=3.8Hz)，3.93(t，2H，NH2O-CH2)，3.68(dd，lH，5'-CH2)，3.49(bdd，1H，5'-CH2)，3.13(bt，2H，N(CH3)-CH2)，2.80(s，3H，N-CH3)，1.50-1.78(bm，4H，NH2OCH2-CH2CH2)。分析(C15H24N7O4.2.OH2SO4.0.3C2H50H.1.5H20)C,H,N,S。實例275'-脫氧-2'，3'-0-亞異丙基-5'_[(2_羥乙基)甲氨基]腺苷(10)。將化合物3i45(8.20g，17.79mmol)溶解于2-(甲氨基)乙醇(54mL，673mmol)中，并在室溫下攪拌41小時。蒸發(fā)溶劑，得到黃色殘余物。將殘余物溶解于IOOmL氯仿中，并用NaHCO3(3X50mL)洗滌。用Na2SO4干燥有機層，并濃縮至干，得到黃色泡沫狀物。利用柱色譜分離法(硅膠230-400目，用910.1的氯仿甲醇NH4OH洗脫)純化殘余物。合并所需部分，濃縮并在真空中干燥產(chǎn)量2.55g(39%)；MS:m/z365(M+H)+；1HNMR(DMS0-d6)δ8.34(s,1H,H-2)，8.18(s，1H,H-8)，7.33(bs,2H,6_NH2)，6.13(d,1H,H-I‘，J1,’2,=2.5Hz)，5.48(dd,1H,H-2‘，J2,,3,=6.3Hz)，4.96(dd,1H,H-3‘，J3,，4,=3.OHz)，4.33(t,1H,OH)，4.24(dt,1H,H-4‘)，3.44(t，2H，OH-CH2)，2.64(dd，1H，5‘-CH2)，2.35—2.49(m，3H，5‘-CH2,N(CH3)-CH2),2.18(s，3H，N-CH3)，1.54和1.33(2s，6H，C(CH3)2)。實例285'-脫氧-2'，3'-0-亞異丙基-5'_[(2_鄰苯二甲酰亞胺基氧基乙基)甲氨基]-腺苷(11)。在氮氣下，于室溫下經(jīng)3分鐘向化合物10(989mg，2.714mmol)、N_羥基鄰苯二甲酰亞胺(1.107g,6.786mmol)和P(Ph)3(1.780g,6.787mmol)于50mL無水THF中的溶液中添加DEAD(1.07mL，6.8mmol)之THF(IOmL)溶液。5分鐘后，將2%碳酸鈉(75mL)添加到反應混合物中，隨后添加二氯甲烷(IOOmL)。用2%Na2CO3(75mL)洗滌有機層，隨后用飽和NaCl(2X75mL)洗滌。用Na2SO4干燥有機層，并濃縮至干，得到泡沫狀物。利用柱色譜分離法純化殘余物，并用13的二氯甲烷丙酮洗脫柱。合并所需部分，濃縮并在真空中干燥產(chǎn)M842mg(61%)；MS:m/z510(M+H)+)+；1HNMR(CDCl3)δ8.36(s，1H，H-2)，8.07(s，1H，H-8)，7.79-7.83(m,2H，鄰苯二甲酰亞胺基的芳香族H)，7.63-7.72(m,2H，鄰苯二甲酰亞胺基的芳香族H)，6.12(d，1H，Η-Γ,J1,,=2.2Hz)，5.87(bs，2H，6_NH2)，5.49(dd，1H，H-2‘，J1,,2,=2.2Hz,J2,,3,=6.4Ηζ)，5·05(dd,1Η,Η-3‘，J2,,3,=6.4Hz,J3,,4,=3.3Hz)，4.40-4.45(m,1H,H-4')，4.29(t,2H,NO-CH2)，2.89(t,2H,NOCH2-CH2)，2.83-2.89(m,1H,5'-CH2),2.72-2.79(m,1Η,5'-CH2),2.40(s，3H，N-CH3)，1.62禾口1·40(2s，6H，C(CH3)2)。實例295'-[(2-氨基氧基乙基)甲氨基]-5'-脫氧腺苷硫酸鹽(11的鹽)(12)。60°C下，將11(373mg，0.73mmol)于INH2SO4(5mL)中的溶液加熱3小時。用NaHCO3中和反應混合物，并凍干。用Et0H(2X20mL)萃取化合物，并濃縮至干。利用柱色譜分離法(用77203的氯仿甲醇NH4OH洗脫)純化殘余物。收集所需部分，濃縮并在真空中干燥。將產(chǎn)物溶解于IOmLEtOH中，并在冷卻下逐滴添加INH2SO4以使鹽沉淀，過濾并用EtOH洗滌，并且在真空中干燥產(chǎn)量IOOmg；MS:m/z340(M+H)+^hnMR(DMSO-CI6)δ8.42(s，1H，H-8)，8.25(s，1H,H_2)，7.68(bs，2H，6_NH2)，5.99(d,1H,H-I',J1,j2,=5.3Hz)，5.67(t,1Η，Η-2'，J2,,3,=4.6Hz)，4.33-4.39(bm，1Η，Η-4')，4.22(t，1H，H_3‘，J3,,4,=4.7Hz)，4.06(bt，2H，NH2O-CH2),3.63-3.71(dd，lH，5'-CH2)，3.52—3.3.59(bdd，1H，5'-CH2),3.43(bm，2H，N(CH3)-CH2)，2.84(s，3H，N-CH3)；UVAmax,nm,pH1,258.2(ε14,300),pH7，259(ε14，600)，pH13，259(ε15，500)。分析(C13H21N7O4.1.OH2SO4.0.5C2H50H.1.OH2O)C,H,N0實例305'-[(2-乙氧羰基乙基)甲氨基]-5'-脫氧-8-甲基腺苷(13a)。60°C下，將4a(500mg,1.69mmol)、3_氯丙酸乙酯(270mg,1.97mmol)、DIEA(109mg,0.14mL，0.84mmol)與DMF(5mL)的混合物加熱2天。起始物質(zhì)仍有剩余，但由于溶液開始變深，故停止加熱。將反應混合物濃縮至干。利用柱色譜分離法(710.1的氯仿甲醇NH4OH)純化產(chǎn)物，得到粘性固體產(chǎn)量2IOmg(31%)；MSm/z395(M+H)+；1HNMR(DMS0_d6)δ8.08(s，1H,H-2),7.ll(bs，2H，6-NH2)，5.74(d5lH，H-I'，J1,，2,=5.6Hz)，5.33(bd，1H，0H-2')，5.16(bd,1H,OH-3')，5.12(bdd，lH，H_2‘，J1,’2,=5.6Hz，J2,，3,=5.5Hz)，4.21(bdd，lH,H-3',J2,,3,=5.5Hz,J3,,4,=4.3Hz)，4.Ol(q，2H，OCH2CH3)，3.914.OO(m，1H，H_4')，2.70-2.77(m,1H,5'-CH2)，2.54-2.66(m，3H，5'-CH2,CO-CH2)，2.53(s，3H，8_CH3)，2.38(t，2H，N(CH3)-CH2)，2.16(bs，3H，N-CH3)，1.15(t，3H，OCH2CH3)。實例315'-[(2-乙氧羰基乙基)甲氨基]-5'-脫氧-8-乙基腺苷(13b)。利用與關于制備13a所報導相同的程序，使用4b(260mg，0.84mmol)、3-氯丙酸乙酯(138mg，1.Ommo1)、DIEA(53mg，0.07mL，0.41mmol)和DMF(4mL)制備化合物13b。柱色譜分離法(用710.1的氯仿甲醇NH4OH洗脫)后，獲得玻璃狀粘性固體產(chǎn)量153mg(44%)；MS:m/z409(M+H)+；1HNMR(DMS0-d6)δ8.08(s,1H,H_2)，7·10(bs，2H，6_NH2)，5·71(d，1H，H-I‘,J1,j2,=5·5Ηζ)，5·32(bd，1Η，0Η-2‘，J2,_2,0Η=5·OHz)，5·16(bd，1Η，0Η-3‘，J3'_3'oh=5.ΙΗζ)，5.12(ddd,1Η,H-2'，J1',2'=5.5Hz,J2/>3'=5.7Hz,J2/0Η=5.OHz)，4·14(ddd，1Η，Η-3'，J2,,3,=5·7Hz，J3,,4,=4·1Hz，J3,_3,0Η=5·ΙΗζ)，4·01(q，2Η，OCH2CH3)，3.91-3.98(m,1Η,Η_4‘)，2.87(q,2H,8_Et的CH2)，2.71-2.79(m,1H,5'-CH2)，2.51-2.65(m，3H，5'-CH2,CO-CH2),2.38(t，2H，N(CH3)-CH2)，2.16(bs，3H，N-CH3)，1.30(t,3H,8-Et的CH3)，1·15(t，3H，OCH2CH3)。實例325'_[(乙氧羰基甲基)甲氨基]-5'-脫氧-8-甲基腺苷(13c)。利用與關于制備13a所述相同的程序，使用4a(415mg,1.41mmol)、氯乙酸乙酯(207mg,0.18mL,1.68mmol)、DIEA(91mg,0.12mL，0.70mmol)和DMF(5mL)制備化合物13c產(chǎn)量204mg(38%)；MS:m/ζ381(M+H)+;1HnMR(DMSO-CI6)δ8.06(s,1H,H_2)，7.11(bs，2H，6_NH2)，5.73(d，1H，H-I‘，J1,，2,=5.4Hz),5.33(bd,1H,OH-2‘，J2'_2'0H=4.7Hz)，5.19(bd,1H,OH-3',J3,0H=4.9Hz),5.03(ddd,1H,H-2'，J1,,2,=5.4Hz，J2,,3,=5.7Hz，J2,_2,0H=4.7Hz)，4.17(ddd,1H,H-3'，J2,,3,=5.7Hz，J3,,4,=4.4Hz，J3,_3,0H=4.9Hz)，4.02(q，2H，OCH2CH3)，3.92-3.99(m,1H,H4')，3.27(bs,2H,N(CH3)-CH2)，2.83-2.90(m,1H,5'-CH2)，2.70-2.79(m,1H,5‘-CH2)，2.53(s,3H,8_CH3)，2.31(s，3H,n-CH3)，1.13(t，3H，OCH2CH3)；UVλmax,nm,pH1,258.9(ε16，100),ρΗ7，260(ε15，900)，ρΗ13，260.1(ε16,200)。分析(C16H24n6O5.0.5CHC13.0.3CH30H)C,H,n。實例335'-[(2-甲酰胺基乙基)甲氨基]-5'-脫氧-8-甲基腺苷硫酸鹽(1.51的鹽)(13d)。將化合物13a(89mg，0.22mmol)溶解于5mL甲醇氨溶液中，并在室溫下攪拌溶液5天。將反應混合物濃縮至干，并利用柱色譜分離法(410.2的氯仿甲醇NH4OH)純化。收集所需部分，濃縮并在真空中干燥。將產(chǎn)物溶解于8mLEtOH中并逐滴添加2NH2S04。過濾沉淀析出的鹽，并用EtOH洗滌。將此具有吸濕性的產(chǎn)物溶解于水(2mL)中，并凍干，得到白色固體產(chǎn)量65mg(55%)；MS:m/z366(M+H)+；1HNMR(D2O)δ8.43(s，1H，H-2)，6.09(d,1H,H-I'，J1,，2,=5.9Hz)，5.0-5.30(bm，1H，H-2')，4.61-4.70(bm，1H，H_4')，4.51-4.54(bm,1H，H_3')，3.30-3.89(bm，5H，N-CH3和N(CH3)-CH2)，2.96(bs，2H，5'-CH2)，2.77(bs，2H，NH2CO-CH2)，2·70(s，3H，8-CH3);UVλmax，nm，pH1,258.4(ε14,900),pH7，260.1(ε14,900)，pH13，260.1(ε15,300)。分析(C15H23n7O4.1.5H2S04.0.8H20)C,H，n，S。實例345'-[(2-甲酰胺基乙基)甲氨基]-5'-脫氧-8-乙基腺苷硫酸鹽(1.11的鹽)(13e)。本程序與上文關于13d所報導相同，使用13b(149mg，0.36mmol)和甲醇氨溶液(5mL)進行產(chǎn)量94mg(51%)；MS:m/z380(M+H)+；1HNMR(DMS0-d6)δ8.08(s，1H，H-2)，7.31(bs，1H,CO-NH2)，7.10(bs,2H,6_NH2),6.71(bs,1H,CO-NH2)，5.72(d,1H,H-I‘，J1,，2,=5.4Hz)，5.31(d，lH，0H-2'，J2,_2,0Η=6.2Hz)，5.16(d，1H，0H—3‘，J3,_3,0Η=5.5Hz)，5.09(ddd，1Η,Η-2',J1,’2丨=5.4Hz，J2,，3,=5.7Hz，J2,_2,0H=6.2Hz),4.17(ddd,1Η,Η-3'，J2,，3,=5.7Hz，J3,,4,=4.3Hz，J3,_3,0H=5.5Hz)，3.92-3.99(m,1H,H_4')，2.87(q,2H,8_CH2CH3)，2.69-2.75(m,1H，5'-CH2)，2.52-2.60(m,3H,CO-CH2,5'-CH2)，2.18(bs，2H，N(CH3)-CH2)，2.16(s,3H,N-CH3)，1.30(t，3H，8-Et的CH3)；1HNMR(D2O)δ8.38(s,1H,H-2),6.09(d,1H,H-I'，J1,，2,=6.2Hz)，5·33(bs，1H，H-2'),4.56-4.62(m,1H,H-4')，4.51-4.54(m，1H，H-3')，3.87-3.96(bm,2H,NH2CO-CH2)，3.56(s,3H,N-CH3)，2.98-3.80(bm,2H,8_C42CH3)，2.96(bs，2H，5'-CH2)，2.72—2.82(m，2H，N(CH3)-CH2)，1.39(s，3H，8_Et的CH3)；UVλmax,nm,pH1,259.4(ε15,200),ρΗ7,260.8(ε15,100),ρΗ13，260.6(ε15，500)。分析(C16H25N7O4.1.IH2SO4.1.05H20)C,H,N,S。實例355'_[(甲酰胺基甲基)甲氨基]-5'-脫氧-8-甲基腺苷硫酸鹽(1.451的鹽)(13f)。使用與用于制備13d相同的程序，使用13C(200mg，0.52mmol)和甲醇氨溶液(5mL)制備13f產(chǎn)量105mg(39%)；MS:m/z352(M+H)+；1HNMR(DMS0_d6)δ8.08(s,1H,H-2)，7.ll(bs，2H，C0-NH2)，7.07(bs，2H，6-NH2)，5.74(d，lH，H-l',J1,’2,=5.2Hz)，5.34(d，1H，0H-2'，J2,_2,0H=5.9Hz)，5.21(d，lH，0H-3'，J3,_3,0H=5.7Hz)，4.97(ddd，1H，H_2‘，J1,,2,=5.2Hz,J2,,3,=5.5Hz,J2,_2,0H=5.9Hz),4.21(ddd,1H,H_3'，J2,,3,=5.5Hz,J3,,4,=5.2Hz，J3,_3,oh=5.7Hz)，3.94-4.01(m，lH，H-4')，2.94(d，1H，N(CH3)-CH2,J=15.7Hz),2.88(d,1H,N(CH3)-CH2,J=15.7Hz)，2.75-2.80(m,1H,5'-CH2)，2.63-2.70(m,1H，5'-CH2)，2.53(s，3H，8-CH3)，2.23(s，3H，N-CH3)；1HNMR(D2O)δ8.40(s,1H,H-2),6.08(d,1H,H-1',J1,，2,=4.8Hz)，5.01(t，lH，H-2'，J2,,3,=5.2Hz)，4.60(t，1H，H_3‘，J3,,4,=4.9Hz)，4.50-4.59(m,1H,H_4')，4.03-4.17(m,2H,NH2CO-CH2)，3.82-3.92(m,1H,5'-CH2),3.68-3.76(m,1H,5'-CH2),3.03(s,3H,N-CH3),2.70(s,3H,8-CH3)；UVλmax,nm,ρΗ1，259(ε15，900)，pH7,259.7(ε16,100),ρΗ13,260.2(ε16,100)分析(C14H21N7O4.1.45H2S04.0.2C2H50H.1.3H20)C,H,N,S。實例365'-[(2-乙氧羰基乙基)甲氨基]-5'-脫氧腺苷(13g)。使用先前關于13a所述的通用程序，使用4h47(400mg,1.42mmol)、3_氯丙酸乙酯(214mg,1.56mmol)、DIEA(92mg，0.12mL,0.71mmol)和DMF(5mL)制備13g。在60°C下將反應混合物加熱2天。利用柱色譜分離法(71的氯仿甲醇)純化產(chǎn)物，得到固體產(chǎn)量102mg(19%)；MSm/z381(M+H)+。實例375'-脫氧-5'_[(乙氧羰基乙基)甲氨基]-2'，3'_0_亞異丙基腺苷(13h)。向無水CH3CN(5mL)中的化合物4g(380mg，1.18mmol)中添加3-氯丙酸乙酯(195mg，0.18mL，1.42mmol)和二異丙基乙胺(153mg，0.2mL，1.18mmol)，并在氮氣下，于75_80°C下將反應混合物攪拌72小時。將反應混合物蒸發(fā)至干，并利用柱色譜分離法(硅膠230-400目，用91的二氯甲烷甲醇洗脫)純化殘余物。合并所需部分，濃縮并在真空中干燥產(chǎn)量260mg(52%)；MS:m/z421(M+H)+實例385'_[(甲酰胺基乙基)甲氨基]-5'-脫氧-2'，3'-0-亞異丙基腺苷(13i)。在室溫下，將13h(80mg，0.19mmol)于飽和甲醇氨溶液(15mL)中的混合物攪拌12天。將所得溶液濃縮至干，并利用柱色譜分離法(用910.1的二氯甲烷甲醇NH4OH洗脫)純化殘余物。合并所需部分，濃縮并在真空中干燥產(chǎn)量40mg(55%)；MS:m/z392(M+H)+實例395'-[(2-甲酰胺基乙基)甲氨基]-5'-脫氧腺苷硫酸鹽(1.9:1的鹽)(13j)。將化合物13i(20mg)溶解于INH2SO4(2mL)中，并在室溫下將溶液攪拌36小時。將反應混合物濃縮到0.5mL，將無水乙醇(3mL)添加到溶液中，產(chǎn)生少量混濁，并在0°C下冷卻混合物。過濾固體，用乙醇洗滌并在高真空下干燥產(chǎn)量15mg(51%);MS:m/z352(M+H)+；1HnMR(DMSO-CI6)δ8.64(s，1Η,Η_8)，8·43(s,1Η,Η_2)，7·59(bs,1Η,NH2),7.17(bs,1Η,NH2)，6.02(bdd,1Η,H-I',J1,=3.4Ηζ)，4.65(t,1Η,Η_2',J2,>3'=6.4Ηζ)，4.17-4.21(bm,1Η,Η-3'),3.34-3.42(bm,1Η,Η-4'),3.52-3.67(bm,4H,5'CH2,N(CH3)-CH2),2.80(bs,3Η,N-CH3),2.54-2.60(bm,2Η,CO-CH2)；UVλmax，nm，ρΗ1,256.3(ε15,200),ρΗ7，258.5(ε15，400)，ρΗ13，259.6(ε16，100)。分析(C14H21N7O4.1.9H2S04.1.6Η20)C,H，N，S。實例405'-脫氧-5'-[(2-胼基羰基乙基)甲氨基]-8-甲基腺苷硫酸鹽(21的鹽)(13k)。將化合物13a(115mg，0.29mmol)溶解于IOmL無水乙醇中，并將單水合胼(73mg，0.07mL,1.46mmol)添加到溶液中。將反應混合物加熱到回流過夜。再添加單水合胼(0.07mL)，并繼續(xù)加熱過夜。將所得溶液蒸發(fā)至干。利用柱色譜分離法(410.5的氯仿甲醇NH4OH)純化粗產(chǎn)物。收集所需部分，濃縮并在真空中干燥，得到粘性固體。將產(chǎn)物溶解于SmLEtOH中并逐滴添加2NH2SO40過濾沉淀析出的鹽，并用EtOH洗滌。將此具有吸濕性的鹽溶解于水(2mL)中，并凍干，得到白色固體產(chǎn)量71mg(65%)；MS:m/z381(M+H)+；1HNMR(D2O)δ8.44(s,1Η，Η_2)，6·09(d,1H,H-1',J1,’2,=5.6Hz)，5.10(dd,1Η,Η-2'，J2,,3,=4.5Hz)，4.53-4.62(bm,2H,H_3‘，H_4')，3.86-3.94(m,1H,5'-CH2)，3.52-3.66(m,3H,5'-CH2,N(CH3)-CH2)，2.95(s,3H,N-CH3)，2.86(t,2H,NHCO-CH2)，2.70(s,3H,8_CH3)；UVλmax,nm,ρΗ1,258.4(ε15,000),ρΗ7,259.3(ε15，200)，ρΗ13,260.4(ε15,700)。分析(C15H24N8O4.2.OH2SO4.2.7H20)C,H,N,S。實例415'-脫氧-5'-[(2-胼基羰基乙基)甲氨基]-腺苷硫酸鹽(21的鹽)(131)。本程序與上文關于13k所報導相同，使用13g(95mg，0.25mmol)和單水合胼(63mg，0.06mL,1.25mmol)進行產(chǎn)量39mg(43%)；MS:m/z367(M+H)+；1HNMR(D2O)δ8.47(s,1H,H-8)，8.45(s，1H,H_2)，6.17(d,1H,H-I‘，J1,,2,=4.7Hz)，4.90(dd,1H,H_2‘，J2,,3,=5.2Hz)，4.56-4.60(bm,1H,H_4‘)，4.48(dd,1H,H-3‘，J3,，4,=5.OHz)，3.82(dd,1H,5‘-CH2),3.66(dd,1H,5‘-CH2)，3.59(bt，2H，N(CH3)-CH2)，2.97(s，3H，N-CH3)，2.86(t，2H,NHCO-CH2)；UVAmax,nm,ρΗ1,256.8(ε16,600),ρΗ7,258.5(ε16,800),ρΗ13，259.5(ε17，600)。分析(C14H22N8O4.2.OH2SO4.2.OH2O)C,H,N。實例425'-脫氧-5'_[(胼基羰基甲基)甲氨基]-8-甲基腺苷(13m)。使用與用于制備13k相同的程序，使用13c(167mg,0.44mmol)和單水合胼(109mg，0.IlmL,2.18mmol)制備13m。柱分離后，得到白色固體產(chǎn)量154mg(96%)；MS:m/z367(M+H)+；1HNMR(DMS0-d6)δ8.75(bs,1H,NH)，8.09(s,1H,H-2)，7.10(bs,2H,NH-NH2)，5.74(d,1H,H-I‘，J1,,2,=5.2Hz)，5.31(d,1H,0H-2‘,J2,0H=6.OHz)，5.18(d,1H,0H-3‘，J3,_3,0H=5.6Hz)，5.0(ddd,1H,H-2‘,J1,j2,=5.2Hz，J2,，3,=5.7Hz，J2,_2,0H=6.0Hz)，4.19(ddd，1H，H-3'，J2,,3,=5.7Hz，J3,,4,=4.9Hz，J3,_3,0H=5.6Hz)，3.94-3.99(m，1H，H-4')，3.01(d，lH，CO-CHaHb,J=15.2Hz)，2.95(d，1H，CO-CHaHb,J=15.2Hz)，2.78(dd，1H，5'-CH2)，2.66(dd，1H，5'-CH2),2.53(s,3H,8-CH3),2.22(s,3H,N-CH3)；UVAmax,nm,pH1，258·9(ε15，300)，ρΗ7，259·3(ε15，600)，pH13,260.1(ε16,100)分析(C14H22N8O4.0.2CH30H.0.4H20)C,H,N。實例435'-[(3-氨基丙基)甲氨基]-5'-脫氧_8-(甲氨基)腺苷硫酸鹽(2.41的鹽)(14a)和5'-脫氧_8-(甲氨基)-5'_(3-甲氨基丙氨基)腺苷硫酸鹽(2.41的鹽)(15a)。在環(huán)境溫度下，將3c(175mg，0.55mmol)于2mLN_甲基-1，3-丙二胺中的溶液攪拌4天。將混合物倒入乙醚(20mL)中。傾析出乙醚層，留下油狀物，利用柱色譜分離法純化。用410.5的氯仿甲醇NH4OH洗脫柱。收集所需部分，濃縮并在真空中干燥，得到兩種異構(gòu)體。將這些分離的異構(gòu)體分別溶解于6mLEtOH和5mLEtOH中，并逐滴添加2NH2S04。過濾沉淀析出的硫酸鹽，并用EtOH洗滌。將這些具有吸濕性的鹽溶解于水(2mL)中，并凍干，得到白色固體14a產(chǎn)量50mg(15%)；MS:m/z367(M+H)+；1HNMR(DMSO-Cl6)δ7.91(s,1H,H-2)，6.90(bs,1H,8CH3_NH)，649(bs,2H,6_NH2)，5.70(d,1H,H-I‘,J1,j2,=4.8Hz),4.92(t,1H,H-2‘，J2,,3,=5.5Hz)，4·17(t，1H，H_3‘，J3,,4,=5.2Hz),3.89-3.96(bm,1H,H-4')，2.89(s，3H，8NH_CH3)，2.53-2.70(m，4H，NH2-CH2,5'-CH2)，2.38(t，2H，N(CH3)-CH2),2.17(s，3H，N-CH3)，1.48-1.60(m，2H，NH2CH2-CH2)；1HNMR(D2O)δ8.28(s，1H，H-2)，5.87(d，1H，H-I'，J1,,2,=5.1Hz),5.18(t,1H,H-2‘，J2,,3,·=5.1Hz)，4.54(t,1H,H_3'，J3,,4,=5.1Hz)，4.46-4.51(m,1H,H-4')，3.01-3.82(bm，6H，5'-CH2,NH2-CH2,N(CH3)-CH2),3.05(s，3H，8NH_CH3)，2.94(s,3H,N-CH3)，2.05-2.18(bm，2H，NH2CH2-CH2)；UVλmax，nm，pH1，275.5(ε14，500)，pH7，275(ε17，200)，pH13，277(ε17，500)。分析(C15H26N8O3.2.4H2S04.0.2C2H50H)C,H,N；15a產(chǎn)量29mg(7%)；MS:m/z367(M+H)+;1HnMR(DMSO-CI6)δ7.96(s,1H,H_2)，7·0(bs，1H，8CH3_NH)，6.57(bs，2H，6-NH2),5.80(d,1H,H-I‘，J1,’2,=5.5Hz),4.97(t,1H,H-2‘，J2,，3,=5.5Hz),5.4(bs,2H，2'，3'-OH's)，4·33(t，1H，H-3‘，J3,，4,=3.7Hz)，4.17—4.24(bm，1H，H_4')，3.20-3.50(m,2H,5'-CH2)，3.05-3.85(m,4H,NH-CH2)，2.88(s,3H,8NH_CH3)，2.49(s,3H,NH-CH3)，1.85-2.0(bm,2H,NHCH2-CH2)；1HNMR(D2O)δ8.27(s,1H,H-2)，5.86(d,1H,H-I‘，J1,，2,=5.2Hz)，5.16(t,1H,H-2‘,J2,j3'=5.5Hz)，4.55(t,1H,H-3‘，J3,，4,=4.5Hz)，4.36-4.44(m，1H，H-4')，3.47-3.69(m，2H，5'-CH2)，3.22(t，2H，NH-CH2)，3.10(t，2H，CH3NH-CH2)，3.05(s,3H,8NH_CH3)，2.71(s,3H,NH-CH3)，2.04-2.18(bm,2H,NHCH2-CH2)；UVλmaXjnm,ρΗ1,274.1(ε14,300),ρΗ7，276(ε17，100)，ρΗ13，277.1(ε18，700)。分析(C15H26N8O3.2.4H2S04.0.2C2H50H)C,H,N。實例445'-[(3-氨基丙基)甲氨基]-5'-脫氧-8-苯基腺苷硫酸鹽(2.21的鹽)(14b)和5'-脫氧-5'-(3-甲氨基丙氨基)-8_苯基腺苷硫酸鹽(1.71的鹽)(15b)。使用與上文關于1如所述相同的程序，由3d(200mg，0.55mmol)和N-甲基-1，3-丙二胺(3mL)制備14b和15b，但在此情況下，在室溫下攪拌1天后，將反應混合物在65°C下加熱2天。用410.2的氯仿甲醇NH4OH洗脫柱。進行相同處理后，獲得兩種異構(gòu)體14b產(chǎn)量124mg(34%)；MS:m/z414(M+H)+!1HnMR(DMSO-CI6)δ8.38(s,1H,H_2)，7.61-7.84(m,7H,8-苯基，6_NH2)，5.88(d,1H,H-1‘，J1,,2,=6.3Hz)，5.17-5.30(bm,1H,H-2‘)，4.34-4.38(bm,1H,H-3‘)，4.25-4.31(bm,1H,H-4‘)，3.10-3.85(bm,4H,N(CH3)-CH2,5‘-CH2)，2·80-2.94(m，2H，NH2-CH2)，2.78(s，3H，N-CH3)，1.81—2.0(bm，2H,NH2CH2-CH2)；UVAmax,nm,ρΗ1,274.2(ε20,500),ρΗ7,275.8(ε16,300),ρΗ13，274.5(ε16，400)。分析(C2tlH27N7O3.2.2H2S04.0.IC2H5OH.2.5H20)C,H,N，S;15b產(chǎn)量151mg(42%)；MS:m/z414(M+H)+!1HnMR(DMSO-CI6)δ8.23(s，lH，H_2)，7.0-7.74(m，2H，8-苯基鄰-H)，7.60-7.65(m,3H,8-苯基間-H和對-H)，7.46(bs,2H,6_NH2)，5.80(d,1H,H-I‘，Jlj2=6.2Hz)，5.25(t,1H,H—2‘,J2j3=4.9Hz)，5.5-6.0(m,2H,NH's)，4.29-4.35(bm,1H,H-3'),4.12-4.20(m,1Η,Η-4'),3.40-3.47(m,1H,5'-CH2),3.19-3.25(m,1H,5'-CH2),2.94(m,4H,NH-CH2,CH3NH-CH2)，2.54(s,3H,NH-CH3)，1-80-1.95(bm,2H,NHCH2-CH2)；UVAmax,nm,ρΗ1,275.5(ε20，600)，ρΗ7,274.9(ε16，200)，ρΗ13,274.9(ε16，300)。分析(C20H27N7O3.1.7H2S04.0.05C2H50H.3.3H20)C,H,n,S。實例455'-[(3-氨基丙基)甲氨基]-5'-脫氧-2'，3'_0_亞異丙基腺苷(14c)。在氬氣氛圍下，將3h44(l.0g，2.60mmol)和N-甲基-1，3-丙二胺(1.35mL，13.Ommol)的混合物攪拌過夜。將反應混合物濃縮至干，并利用柱色譜分離法，使用氯仿甲醇NH40H(610.1)作為洗脫劑來純化粗物質(zhì)。合并所需部分，濃縮并在真空中干燥，得到半固體。將此物質(zhì)溶解于3mL水中并凍干產(chǎn)量361mg(37%)；MS:m/z378(M+H)+；1HNMR(DMS0-d6)δ8.33(s，1H,H_8)，8·17(s，1Η,H-2),7.33(bs，2H，6_NH2)，6·13(d,1H,H-I'，1,,2,=2.3Hz)，5·49(dd，1H，H-2‘，J2,，3,=4.0Hz),4.94(dd,1H,H-3‘，J3,,4,=2.9Hz)，4.21-4.27(m,1H,H-4')，2.52-2.58(m,2H,NH2-CH2)，2.26-2.38(m,4H,5'-CH2,N(CH3)-CH2)，2.12(s,3H,N-CH3)，1.53禾口1.33(2s,6H,C(CH3)2)，1.37-1.47(m,2H,NH2CH2-CH2)。實例465'-[(3-氨基丙基)甲氨基]-5'-脫氧腺苷硫酸鹽(21的鹽)(14d)。使用關于13j所述的程序，由14c(200mg，0.53mmol)制備14d產(chǎn)量121mg(41%)；MS:m/ζ338(M+H)+!1HnMR(DMSO-CI6)δ8.47(bs，1H，Η-8)，8·29(bs，1H，Η-2)，7·0-10.0(寬峰，NH2s+H2S04)，5.97(d，1Η，H-I‘,J1,j2,=4.7Hz),5.70(bs,1Η,2'-OH),5.56(bs,1H,3'-OH),4.72(bt,lH,H-2'),4.30(bm,1H,H-4'),4.21(bt,1H,H-3'),3.30-3.70(bm,2H，5'-CH2)，3.08(bs，2H，N(CH3)-CH2)，2.83(bm，2H，NH2-CH2)，2.70(bs，3H，N-CH3)，1·84-1.92(m，2H，NH2CH2-CH2)；UVλmax,nm,ρΗ1，257(ε14，700)，ρΗ7,259.2(ε15,000),ρΗ13，260(ε15，300)。分析(C14H23N7O3.2.OH2SO4.0.25C2H50H.0.7Η20)C,H,N。實例475'-[(2-氨基乙基)甲氨基]-5'-脫氧腺苷(14e)和5'-脫氧_5'_(2_甲氨基乙氨基)腺苷(15c)。在室溫下，將3g43(1.0g，3.5mmOl)與N-甲基乙二胺(SmL)的混合物攪拌12天。將反應混合物倒入乙醚(50mL)中。傾析出乙醚層，并利用柱色譜分離法(硅膠230-400目，用410.5的氯仿甲醇NH4OH洗脫)純化所得漿液。合并所需部分，濃縮并在真空中干燥，得到兩種異構(gòu)體產(chǎn)量(14e)576mg(51%)；MS:m/ζ324(M+H)+；1HNMR(DMS0-d6)δ8.35(s,1H,H-8),8.15(s,1H,H_2)，7·27(bs，2H，6_NH2)，5.85(d,1H,H-I‘,J1,j2,=5.3Hz)，4.64(dd，1Η，Η_2'，J2,,3,=5.3Hz)，4.11(dd，1H，H-3'，J3,，4,=4.3Hz)，3.95-4.0(m，1H，H-4')，2.90-3.60(bs，4H，2',3'-OHs+NHs)，2.70(dd,1H,5'-CH2)，2.50-2.60(bm,3H,5'-CH2,N(CH3)-CH2)，2.36(t,2H,NH2-CH2)，2.19(s，3H，N-CH3)；UVAmax,nm,ρΗ1,256.9(ε14，100)，ρΗ7,259.5(ε14，700)，ρΗ13，259.2(ε15，300)。分析(C13H21N7O3.0.25CHC130.5Η20)C，H，N；產(chǎn)量(15c)323mg(29%)；MSm/z324(M+H)+;1HWR(DMSo-CI6)δ8.35(s,1H,H_8)，8.14(s，lH，H_2)，7.28(bs，2H，6_NH2)，5.84(d,1H,H-I',J1,j2,=5.9Hz)，4.69(dd，1H，H_2'，J2,,3,=5.3Hz)，4.12(dd，1H，H-3'，J3,,4,=3.5Hz)，3.94-3.99(m，1H，H-4'),2.90-3.60(bs,4H,2'，3'-OHs+NHs),2.80(dd,1H,5'-CH2)，2.73(dd,1H,5'-CH2)，2.50-2.62(bm,4H,NHCH3-CH2,NH-CH2)，2.25(s，3H，NH-CH3)；UVλmax,nm,ρΗ1,256.4(ε13,900),ρΗ7，259(ε13，900)，ρΗ13，259.8(ε14，000)。分析(C13H21N7O3-0.05CH30H.0.IH2O)C,H,N。實例485'-[(2-氨基乙基)甲氨基]-5'-脫氧-8-甲基腺苷(14f)和5'-脫氧-8-甲基-5'-(2-甲氨基乙氨基)腺苷(15d)。使用上文關于14e/15c所述的程序，由3a(300mg,1.Ommol)和N-甲基乙二胺(3mL)制備14f/15d產(chǎn)量(14f)69mg(18.3%)；MS:m/z338(M+H)+；1HNMR(DMS0-d6)δ8.08(s,1H,H_2)，7·11(bs，2H，6_NH2)，5·74(d，1H，H-I',J1,j2,=5.4Hz)，5.31(bs，lH，2'-OH)，5.04(dd，1H，H_2'，J2,,3,=5.6Hz)，4.17(dd,1H,H-3‘，J3,,4,=4.5Hz)，4.08(bs，1H，3'_0H)，3.93—3.98(m，1H，H_4')，2.70(dd，lH，5'-CH2),2.53-2.57(bm,3H,5'-CH2,N(CH3)-CH2)，2.53(s，3H，8_CH3)，2.30-2.35(m，2H，NH2-CH2)，2.16(s，3H，N-CH3)；UVAmax,nm,pH1,258.5(ε15,600),ρΗ7，259.1(ε16,000)，ρΗ13，260(ε16，200)。分析(C14H23N7O3.0.5CH30H.0.3H20)C，H，N；產(chǎn)量(15d)58mg(15.4%)；MS:m/z338(M+H)+；1HNMR(DMS0-d6)δ8.07(s，1H，H_2)，7.12(bs，2H,6-NH2),5.72(d,1H,H-I'，J1,，2,=6.4Hz)，5.27(bs，1H，2'-OH),5.02(dd,1H,H-2'，J2,，3,=5.4Hz)，4·17(dd,1H,H_3'，J3,，4,=3.1Hz)，3.94-3.99(m,1H,H_4')，2.80(dd,1H,5'-CH2)，2.74(dd,1H,5'-CH2)，2.54-2.63(bm,4HNHCH3-CH2,NH-CH2)，2.54(s,3H,8-CH3)，2·24(s，3H，NH-CH3)；UVλmax.nm,ρΗ1,258.4(ε15，400)，ρΗ7,259.5(ε15，400)，ρΗ13，260(ε15，900)。分析(C14H23N7O3.0.4CH30H.0.7Η20)C,H,N。實例495'-脫氧-2'，3'-0-亞異丙基-5'_[(3_鄰苯二甲酰亞胺基丙基)甲氨基]-8-甲基腺苷(16a)。向化合物2e(500mg，1.5mmOl)于無水吡啶(2m)中的冷溶液中添加甲磺酰氯(196mg，0.13mL,1.7mmol)，并在0°C下將溶液攪拌2小時。將反應混合物濃縮至干，得到粗物質(zhì)3e。將甲胺(33%的EtOH溶液，12mL)添加到此粗混合物中，并在室溫下將溶液攪拌3天。將反應混合物蒸發(fā)至干。將所得粗物質(zhì)4e溶解于無水DMF(3mL)中，添加DIEA(0.07mL)和N_(3_溴丙基)鄰苯二甲酰亞胺(502mg，1.87mmol)，并在60°C下將反應混合物加熱過夜。將溶液蒸發(fā)至干，并將殘余物溶解于CHCl3(IOmL)中，用水洗滌，用Na2SO4干燥，并濃縮至干。利用柱色譜分離法純化所得漿液。用973的氯仿甲醇洗脫柱。合并所需部分，濃縮并在真空中干燥產(chǎn)量108mg(13%)；MSm/z522(M+H)+^HNMR(⑶Cl3)δ8.26(s，1Η，Η-2)，7.82-7.86(m，2H，鄰苯二甲酰亞胺的芳香族H)，7.69-7.73(m，2H，鄰苯二甲酰亞胺的芳香族H)，5.98(d，lH，Η-Γ，J1,，2,=1.8Hz)，5.76(dd，1H，Η-2‘，J1,,2,=1.8Hz,J2,j3'=6·5Ηζ)，5·38(bs，2H，6-NH2)，5·10(dd，1Η，Η-3‘,J2,j3,=6.5Hz,J3,,4,=3.5Ηζ)，4·26-4.32(m,1Η,Η_4')，3·60-3.76(m,2Η,N-CH2),2.64(s，3Η，8_CH3)，2.58-2.63(m，1Η，5'-CH2),241-2.48(m,1H,5'CH2)，2.38(t，2H，N(CH3)-CH2)，2·21(s，3H，N-CH3)，1.68-1.80(m，2H，NCH2-CH2)，1.61禾口1.40(2s，6H，C(CH3)2)。實例505'-脫氧-2'，3'-0-亞異丙基-5'_[(3_鄰苯二甲酰亞胺基丙基)甲氨基]-8-乙基腺苷(16b)。使用與關于16a所述相同的程序，由2f(600mg，1.78mmOl)、MsCl(225mg，0.15mL，1.96mmol)、甲胺(12mL)和N-(3-溴丙基)鄰苯二甲酰亞胺(553mg，2.06mmol)制備16b產(chǎn)量81mg(8.5%)；MS:m/z536(M+H)+；1HNMR(CDCl3)δ8.26(s,1H,Η-2)，7.81-7.86(m,2H，鄰苯二甲酰亞胺的芳香族H)，7.67-7.72(m,2H，鄰苯二甲酰亞胺的芳香族H)，5.98(d,1H,H-I‘,J1,j2,=2.OHz)，5.75(dd,1H,H-2‘,J1,j2,=2.OHz,J2,,3.=6.5Hz)，5·37(bs，2H，6-NH2)，5·12(dd，1H，Η-3‘，J2,，3,=6.5Hz，J3,，4,=3·5Ηζ)，4.25-4.33(m,1Η，Η_4')，3·61-3.75(m，2Η，N-CH2)，2·94(q，2H，8_Et的CH2)，2·62-2.68(m,1Η，5'-CH2)，243-2.49(m，1Η，5'CH2)，2·38(bt，2Η，N(CH3)-CH2)，2·22(s，3Η，N-CH3)，1.70-1.80(m，2H，NCH2-CH2)，1.60禾口1.40(2s，6H，C(CH3)2)，1.42(t，3H，8_Et的CH3)。實例515'-脫氧-2'，3'-0-亞異丙基-5'_[(3_氨基丙基)甲氨基]_8_甲基腺苷(17a)。向沸騰的16a(lOOmg，0.19mmol)于3mL乙醇中的溶液中添加單水合胼(50mg,.048mL,0.99mmol)并將溶液加熱到回流，持續(xù)1小時。將反應混合物冷卻到室溫，并過濾固體，并用乙醇洗滌。將濾液蒸發(fā)至干。利用柱色譜分離法，使用氯仿甲醇NH4OH(710.2)進行洗脫，來純化粗產(chǎn)物產(chǎn)量69mg(92%)；MS:m/z392_)+;1HnMR(DMSO-CI6)δ8.12(s，lH，Η-2),7.18(bs，2Η，6_ΝΗ2)，6·06(d，1Η，H_1‘，J1,,2,=1.9Ηζ)，5·79(dd,1Η,Η_2'，J1,’2,=1.9Hz,J2,，3,=6.3Ηζ)，5·0(dd，1Η,Η_3'，J2,，3,=6.3Hz,J3,,4,=3.IHz)，4.15-4.21(m,1Η,Η_4')，2.56(s,3Η,8_CH3)，2.40-2.50(m,2Η,N(CH3)-CH2),2.13-2.31(bm,4Η,NH2-CH2,5'-CH2),2.07(s,3Η,N-CH3)，1.53和1.33(2s，6H，C(CH3)2)，1.22-1.32(m,2H,NH2CH2-CH2)。實例525'-脫氧-2'，3'-O-亞異丙基-5'_[(3_氨基丙基)甲氨基]_8_乙基腺苷(17b)。利用與關于17a所報導相同的程序，使用16b(76mg，0.Hmmol)和單水合胼(38mg,.036mL,0.76mmol)制備化合物17b產(chǎn)量47mg(82%)；MS:m/z406(M+H)+；1HnMR(DMSO-CI6)δ8.12(s,1Η,Η_2)，7·16(bs，2Η，6_ΝΗ2)，6·03(d，1Η，Η_1'，J1,,2,=2·OHz)，5·76(dd，1Η，Η-2',J1,=2.ΟΗζ，J2,，3,=6·4Ηζ)，5·Ol(dd，1Η，Η_3',J2,,3,=6·4Hz，J3,，4,=3·ΟΗζ)，4·15-4.22(m，1Η，Η-4')，2·87-2.94(bm，2Η，5'-CH2),2.38-2.53(m,2Η,8_Et的CH2)，2.13-2.34(m,4Η,N(CH3)-CH2，NH2-CH2)，2.08(s,3H,N-CH3)，1.53禾口1.33(2s，6H，C(CH3)2)，1.22-1.39(m,2H,NH2CH2-CH2)，1.31(t，3H，8_Et的CH3)。實例535'-[(3-氨基丙基)甲氨基]-5'-脫氧-8-甲基腺苷硫酸鹽(21的鹽)(17c)0將化合物17a(66mg，0.168mmol)溶解于2mLINH2SO4中，并攪拌過夜。向此溶液中添加乙醇(IOmL)，使微細固體分離。傾析出溶劑，將化合物溶解于水(ImL)中，并添加15mL乙醇。將所得固體溶解于水(2mL)中，并凍干，得到白色固體產(chǎn)量66mg(61%)；MS:m/z352(M+H)+；1HWR(DMS0-d6)δ8.16(s,1H,H_2)，7·74(bs，2H，CH2-NH2),7.24(bs,2H，6-NH2)，5.84(d，1H，H-I‘，J1,，2,=6.0Hz)，5.62(bs，2H，2',3'-OH's),4.98(t,1Η，Η-2'，J2,3=4.4Hz)，4.29-4.36(bm，1H，H-4'),4.23(t,1H,H-3'),3.40-3.68(bm,2H,5'-CH2)，2.99-3.19(bm,2H,N(CH3)-CH2)，2.83(t,2H,NH2-CH2)，2.70(bs,3H,N-CH3)，2·55(s，3H，8-CH3)，1·80-1.93(m，2H，NH2CH2-CH2)；UVAmax,nm,pH1,258.7(ε14,900),ρΗ7,259.5(ε15，100),ρΗ13，260.7(ε15，300)。分析(C15H25N7O3.2.OH2SO4.2.5Η20)C，H，N，S。實例545'-[(3-氨基丙基)甲氨基]-5'-脫氧-8-乙基腺苷硫酸鹽(2.51的鹽)(17d)。使用關于17c所述的程序，由17b(44mg，0.IOSmmol)制備17d。在此情況下，在添加EtOH后，析出微細固體，利用離心收集。隨后將其溶解于水(2mL)中并凍干產(chǎn)量30mg(69%)；MS:m/z366(M+H)+；1HNMR(DMS0_d6)δ8.15(s，1H,Η-2),7.68(bs,2Η，CH2-NH2)，7.21(bs，2H，6-NH2)，5.82(d，lH，H-I',J1,j2,=6.ΟΗζ),5.61(bs,2Η,2‘，3'-OH's)，5·04(t，1Η，Η-2‘),4.19-4.27(bm,2Η,H-3‘，4')，3.22-3.43(bm，4H，5‘-CH2,N(CH3)-CH2)，2.90(q,2H,8CH2CH3)，2·81(t，2H,NH2-CH2)，2.50(bs,3H,N-CH3)，1.73-1.88(bm，2H，NH2CH2-CH2)，1·32(t，3H，8CH2CH3)；UVλmax,nm,ρΗ1,259.3(ε15,100)，ρΗ7,260.5(ε15，100)，ρΗ13，260.3(ε15，100)。分析(C16H27N7O3.2.5H2S04.2.5H20)C,H,N0實例555'-脫氧5'-[(2-胍基乙基)甲氨基]腺苷(18a)。在氮氣下，于5°C下向經(jīng)攪拌的14e(218mg，0.67mmol)和IH-吡唑-1-甲脈鹽酸鹽50(196mg，1.34mmol)的無水THF(5mL)溶液中添加DIEA(479mg，0.65mL，3.7mmol)。在室溫下持續(xù)攪拌過夜。將反應混合物濃縮至干，并利用柱色譜分離法(硅膠230-400目，用410.3的氯仿甲醇NH4OH洗脫)純化產(chǎn)物。合并所需部分，濃縮并在真空中干燥，得到白色固體產(chǎn)量219mg(89%)；MSm/z366(M+H)+；1HNMR(DMS0_d6)δ8.34(s，1H,H_8)，8.15(s，1H,H_2)，7.48，7.37，7.28(bs,NHs)，5.87(d,1H,H-I',J1,j2,=5.2Hz)，5.50(d,1H,2'-OH,J2,_2,0H=5.7Hz)，5.28(d,1H，3'-0H，J3,_3,0H=4.5Hz)，4.65(ddd，1H，Η-2',J1,j2,=5.2Hz，J2,,3,=5.IHz,J2,_2,OH=5.7Hz),4.12(ddd，1Η，Η-3',J2,，3,=5.IHz，J3,，4,=4.6Hz,J3,_3,0H=4.5Hz)，4.0-4.10(bm,1H,H_4')，3.30-3.50(bm,2H,5'-CH2)，3.12-3.28(bm,2H,NH-CH2)，2.55-2.65(bm,2H,N(CH3)-CH2),2.25(bs,3H,N-CH3)；UVAmax,nm,ρΗ1,256.3(ε10,900),ρΗ7，259(ε11，300)，pH13，259(ε11，000)。分析(C14H23N9O3.0.05CHC13.3·5Η20)C，H，N。實例565'-[(2-氰基乙基)甲氨基]-5'-脫氧腺苷(18b)。在室溫下，將3j46(1.0g，2.37mmol)于IOmL3_(甲氨基)丙腈中的溶液攪拌5天。將反應混合物倒入乙醚(50mL)中。傾析出乙醚層，并利用柱色譜分離法(硅膠，用710.1的氯仿甲醇NH4OH洗脫)純化所得漿液。合并所需部分，濃縮并在真空中干燥產(chǎn)量685mg(87%)；MS:m/z324(M+H)+；1HNMR(DMS0-d6)δ8.34(s，1H,H_8)，8·15(s，1H,H_2)，7·29(bs，2H，6_NH2)，5·87(d,1H,H-I'，J1,，2,=5.4Hz)，5·46(bd，1H，2'-OH)，5·22(bd，1H，3'-OH),4.65(m,1H,H-2')，4.13(m,1H,H-3')，3.97-4.03(m，1H，H_4'),2.78(dd,1H,5'-CH2)，2.58-2.68(bm，5H，5'-CH2，NC-CH2CH2)，2.24(s，3H，N-CH3)。實例575'-脫氧-5'-[(2-羥基脒基乙基)甲氨基]腺苷(18c)。在氮氣下，向18b(470mg,1.4mmol)于20mL無水MeOH和4mL無水DMF中的溶液中添加羥胺鹽酸鹽(258mg,3.7mmol)和氫氧化鉀(206mg，3.7mmol)，并在室溫下將所得懸浮液攪拌2天。將反應混合物濃縮至干，并用EtOAc(2X40mL)萃取粗產(chǎn)物，并用鹽水溶液(20mL)洗滌。用Na2SO4干燥有機層，過濾，用EtOAc洗滌并濃縮至干。利用柱色譜分離法純化產(chǎn)物。用4:1:0.5的氯仿甲醇NH4OH洗脫柱，合并所需部分，濃縮并在真空中干燥，得到固體產(chǎn)量165mg(32%)；MS:m/z367(M+H)+；1HNMR(DMS0-d6)δ8.70(bs,1H,NOH),8.33(s,1H，H-8)，8.15(s，1H，H-2)，7.27(bs，2H，6-NH2)，5.86(d，1H，H-I',J1,j2,=5.3Hz)，5.43(d,1H,2'-OH,J2,_2,0H=6.0Hz)，5.35(bs，2H，C-NH2)，5.20(d，1H，3'_0H，J3,_3,0H=5.2Hz)，4.63(ddd，1H，H-2',J1,j2,=5.3Hz，J2,,3,=4.9Hz，J2,_2,0H=6.0Hz)，4.10(ddd,1H,H_3'，J2,，3,=4.9Hz,J3,，4,=3.5Hz,J3,_3,0H=5.2Hz)，3.96—4.0(m，1H,H-4'),2.64-2.75(bm，2H，5'-CH2)，2.56(t，2HN(CH3)-CH2)，2.20(s，3H，N-CH3)，2·09(t，2ΗC-CH2)。分析(C14H22N8O4.1.2C2H50H.0.2CH30H)C,H,N。實例585'-脫氧-5'-(N，N-二甲氨基)-8_甲基腺苷(19a)。在鋼制反應釜中，將3a(150mg,0.50mmol)與2M二甲胺的甲醇溶液(IOmL)的混合物在90°C下加熱2天。將反應混合物濃縮至干，并利用柱色譜分離法(用410.15的氯仿甲醇NH4OH洗脫)純化。合并所需部分，濃縮并在真空中干燥產(chǎn)量38mg(25%)；MSm/z309(M+H)+；1HnMR(DMSO-CI6)δ8.08(s,1H,H_2)，7·11(bs，2H，6_NH2)，5·74(d，1H，H_1'，J1,,2,=5.5Hz)，5.31(d,1H,0H-2',J2,0H=5.9Hz)，5.18(d,1H,0H-3‘，J3,_3,0H=5.4Hz)，5.03(ddd,1H,H-2',J1,j2,=5.5Hz,J2,,3,=4.6Hz,J2,_2,0H=5.9Hz),4.15(ddd,1H,H-3'，J2,,3,=4.6Hz，J3,,4,=5.5Hz，J3,_3,0H=5.4Hz)，3.91-3.96(m，1H，H-4')，2.55-2.61(m,1H,5'-CH2)，2.53(s，3H，8_CH3)，2.42-2.48(m，1H，5'-CH2),2.14(bs,6H,N-(CH3)2)；UVAmax,nm,pH1,258.5(ε15,300),pH7,259.3(ε15,300),pH13，260.1(ε15,500)。分析(C13H20N6O3.0.35CHC13.0.5C2H50H)C,H,N。實例595'-脫氧-5'-(N，N-二甲氨基)_腺苷(19b)。利用與關于制備19a所述相同的程序，使用3g(500mg，l.75mmol)和2M二甲胺的甲醇溶液(20mL)制備化合物19b產(chǎn)M238mg(46%)；MSm/z295(M+H)+；1HNMR(DMS0-d6)δ8.33(s，1H，H_8)，8.15(s，1H，H_2)，7.29(bs,2H,6-NH2),5.86(d,1H,H-I',J1,j2,=5.4Hz)，5.45(d，1H，OH-2'，J2,_2,0H=5.9Hz)，5.22(bd,1H,OH-3‘，J3'_3'0H=3.9Hz)，4.65(ddd,1H，H_2'，J1,,2,=5.4Hz，J2,，3,=5.5Hz,J2,_2,oh=5.9Hz)，4.10(ddd,1H,H_3'，J2,，3,=5.5Hz,J3,，4,=4.5Hz,J3,_3,oh=3.9Hz)，3.94-4.0(m,1H,H_4')，2.62(dd,1H,5'CH2)，2.48(dd,1H,5'-CH2)，2.18(bs，6H，N-(CH3)2)；UVAmax,nm,pH1,256.3(ε15，100)，ρΗ7,259.2(ε15，500)，ρΗ13，259.7(ε15，600)。分析(C12H18N6O3.0.35CH30H)C,H,N。實例605'-脫氧-5'-甲基硫基-8-甲基腺苷(20a)。在室溫下，將3a(200mg，0.66mmOl)和硫代甲醇鈉(47mg，0.67mmol)于2mL無水DMF中的溶液攪拌2天，隨后濃縮至干。利用柱色譜分離法，使用氯仿甲醇(71)作為洗脫劑，來純化粗產(chǎn)物。收集所需部分，濃縮并在真空中干燥產(chǎn)量102mg(49%);MSm/z312(M+H)+!1HnMR(DMSO-CI6)δ8.09(s,1Η，Η-2)，7·12(bs，2H，6-NH2)，5·77(d，1Η，Η-Γ,J1,j2,=5.7Hz),5.38(bd,1Η,0Η-2‘，J2'-2'oh=4.4Hz)，5.31(d，lH，0H-3'，J3,_3,0Η=4·2Ηζ)，5·15(bddd，1Η，Η_2',J1,’2,=5.7Hz,J2,,3,=5.7Hz,J2,_2,0Η=4.4Ηζ)，4·20(ddd,1Η,Η_3'，J2,,3,=5.7Hz,J3,,4,=3·6Ηζ，J3,_3,oh=4.2Ηζ),3.97-4.05(m,1Η,Η-4')，2·74-2.92(m,2H,5'CH2)，2·54(s，3Η，8-CH3),2.03(s，3H，S-CH3)。實例615'-脫氧-5'-二甲基锍基-8-甲基腺苷溴化物(21a)。用2Μ溴甲烷的乙醚溶液(5mL)處理21的甲酸與乙酸的混合物(4mL)中的化合物20a(78mg，0.25mmol)，并在室溫下于暗處攪拌6天。在真空中去除溶劑，并用(3XIOmL)乙醚萃取殘余物的水(IOmL)溶液。將水層濃縮至干。將所得產(chǎn)物溶解于MeOH(IOmL)中，過濾并用乙醚處理，沉淀析出鹽。過濾鹽，用乙醚洗滌，并在真空中干燥，得到白色固體產(chǎn)量79mg(78%)；MSm/z326(M)+；1HNMR(D2O)δ8.24(s，1H,Η-2),6.03(d,1Η,H-I'，J1,’2,=5.4Hz)，5·29(t,1Η,Η_2'，J2,,3.=5.7Ηζ)，4.80(t,1Η,Η-3'，J3,，4,=4.8Ηζ)，4.52-4.60(m,1Η,Η-4')，4.11-4.20(m,1Η,5'CH2)，3.81-3.90(m,1Η,5'CH2)，2.92和2·89(2s,6Η,S-(CH3)2)，2.67(s,3Η,8_CH3)。實例625'-脫氧-5'-二甲基锍基-8-甲基腺苷氯化物(21b)。用水反復洗滌離子交換樹脂(IRA-400，Cl—形式)，并裝入柱中。使柱靜置過夜，并再次用水反復洗滌。將溴化物鹽21a(50mg)溶解于水(ImL)中，并放于柱上。在暗處，用水極慢地洗脫柱。合并所需部分并凍干得到30mg(68%)；MSm/z326(M)+；1HNMR(D2O)δ8.24(s,1H,Η-2),6.03(d,1H,Η-Γ,J1,j2,=5.4Hz),5.29(t,1Η,Η-2‘，J2,,3,=5·6Hz)，4·80(t，1Η，Η_3‘,J3-,4'=4.9Hz),4.52-4.60(m,1Η,Η-4'),3.82-4.ll(m,1Η,5'-CH2),3.75-3.83(m,1Η,5'-CH2),2·95和2·92(2s，6H，S-(CH3)2)，2·69(s，3H，8-CH3)；UVλmax,nm,ρΗ1,258.8(ε15,000),ρΗ7，259.1(ε14,700)，ρΗ13，263.5(ε13，000)。分析(C13H20ClN5O3S.2Η20)C,H,N。實例635'-脫氧-5'-二甲基锍基腺苷溴化物(21c)。使用關于21a所述的程序，由20b(58mg，0.19mmol)制備21c產(chǎn)量49mg(65%)；MSm/z312(M)5'-脫氧-5'-二甲基锍基腺苷氯化物(21d)。用水洗滌離子交換樹脂(IRA-400，Cl_形式)，并裝入柱中。使柱靜置過夜，并再次用水反復洗滌。將鹽21c(48mg)溶解于水(ImL)中，并放于柱上。在暗處，用水極慢地洗脫柱。將所需部分合并在一起并凍干得至Ij30mg(44%)；MSm/z312(M)+；1HNMR(D2O)δ8.29(s,1H,Η_8)，8·27(s,1H,H-2)，6.12(d,1H,H-I‘,J1,j2,=4.4Hz)，4·99(t，1H，H-2‘，J2,,3,=5.1Hz),4.55-4.62(m,2H,H-3‘，H-4'),3.84-4.0(m,2H,5'-CH2)，2.95和2·93(2s,6H,S-(CH3)2)；UVλmax，nm,pH1,256.4(ε14,300),ρΗ7,259.6(ε14,400),ρΗ13，266(ε12，300)。分析(C12H18ClN5O3S.1.5Η20·0.IC2H5OH)C,H,N,S。實例645'-[[4-[[(1-乙氧基亞乙基)氨基]氧基]丁基]甲氨基]-5'-脫氧-8-羥基腺苷(23a)。使用關于6a所述的程序，由4e(500mg,1.68mm)、13(481mg,2.01mm)、DIEA(109mg，0.14ml，0.84mm)和DMF(5ml)制備23a。柱色譜分離法(用410.2的氯仿甲醇NH4oh洗脫)后，獲得玻璃狀黃色粘性固體產(chǎn)量200mg(26%)；MSm/z454(M+H)+；1HNMR(DMS0-d6)δ10.34(bs,1H,8-0H),8.02(s,1Η,H-2),6.49(bs，2H，6-ΝΗ2)，5·62(d，1Η，Η-Γ,J1,j2,=5.OHz),4.99(bs,1Η,3'-OH),5.19(bs,1Η,2'-0Η)，4.90(t,1Η,H-2'，J2,,3,=5·4Ηζ)，4·16-4.24(bm，1Η，Η-3')，3·83-3.89(m，1Η，Η_4')，3.92(q,2Η,CH3-CH2)，3.77(t,2Η,NH2O-CH2)，2.62-3.68(m,1Η,5'-CH2)，2.40-2.46(m,1H,5'-CH2)，2.30(t，2H，NCH3-CH2)，2.13(s,3H,N-CH3)，1.84(s,3H,C-CH3)，1.35-1.60(bm，4H，NOCH2-CH2CH2)，1.21(t，3H，OCH2-CH3)。實例655'-[[4-[[(1_乙氧基亞乙基)氨基]氧基]丁基]甲氨基]-5'-脫氧-8-羥基腺苷(23b)。利用與關于6a所報導相同的程序，使用4c(1.OOg,3.23mm)、13(924mg,3.87mm)和DIEA(209mg，0.28ml，1.6mm)制備化合物23b產(chǎn)量635mg(42%)；MS:m/z467(M+H)+；1HWR(DMSo-CI6)δ7.89(s，1H,H_2)，6·87(q,1H，8CH3_NH)，6·46(bs，2H，6_NH2)，5·69(d,1H,H-I'，J1,,2,=4.8Hz)，5·25(d，1H，2'-0H，J2,_2,0H=5.6Hz)，5.06(d，1H，3'_0H，J3,_3,0HH=5.4Hz)，4.91(ddd，lH，H-2‘，J1,,2,=4.8Hz,J2,,3,=5.4Hz,J2,_2,0H=5.6Hz)，4.16(ddd,1H,H-3‘，J2,，3,=5.4Hz,J3,’4,=4.9Hz,J3,_3,0H=5.4Hz)，3.85-3.94(m,1H,H-4')，3.92(q,2H,CH3-CH2)，3.80(t,2H,NO-CH2)，2.88(d,3H,8NH_CH3，J=4.6Hz)，2.65-2.74(m,1H,5'-CH2)，2.46-2.58(m,1H,5'-CH2)，2.34(t,2H,NCH3-CH2)，2.17(s,3H,N-CH3)，1.83(s，3H,C-CH3)，1.37-1.61(bm,4H,NOCH2-CH2CH2)，1.19(t,3H,OCH2-CH3)。實例665'-[[4-[[(1_乙氧基亞乙基)氨基]氧基]丁基]甲氨基]-5'-脫氧_8-(甲氨基)腺苷(23c)。使用與關于6a所述相同的程序，由4d(450mg，1.26mm)、13(360mg，1.51mm)和DIEA(81mg，0.10ml，0.62mm)制備23c。柱色譜分離法(用71的氯仿甲醇洗脫)后，獲得玻璃狀黃色粘性固體產(chǎn)量312mg(48%)；MS:m/z514(M+H)+^hnMR(DMSO-CI6)δ8.17(s，1Η,H-2)，7.71-7.78(m,2H,8C6H5-鄰H)，7.58-7.64(m,3H,8C6H5-間H禾口對H)，7.36(bs，2H，6-NH2)，5.67(d，1H，H-1',J1,’2,=5.7Hz),5.32(bs,1H,2'-OH)，5.31(t，1H，H-2'，J1,，2,=5.7Hz,J2,3=5.4Hz),5.11(d,1H，3'-OH,J3,_3,0H=4.8Hz),4.16(bddd,lH,H-3'，J2,，3,=5.4Hz，J3,，4,=4.0Hz),3.92-3.97(m,1H,H-4')，3.91(q，2H，CH3-CH2)，3.79(t，2H，NO-CH2)，2.72-2.80(m，1H，5'-CH2)，2.54-2.59(m,1H,5'-CH2)，2.34(bt，2H,NCH3-CH2),2.17(bs,3H,N-CH3)，1.83(s,3H,C-CH3)，1.39-1.60(bm,4H,NOCH2-CH2CH2)，1.18(t，3H，OCH2-CH3)。實例675'_[(乙氧羰基乙基)甲氨基]-5'-脫氧-8-甲基腺苷(33a)。使用先前關于6a所述的通用程序，由4a(500mg,1.69mm)、3_氯丙酸乙酯(270mg,1.97mm)、DIEA(109mg,0.14ml,0.84mm)和DMF(5ml)制備33a。在60°C下將反應混合物加熱2天。起始物質(zhì)仍有剩余，但由于溶液開始變深，故停止加熱。利用柱色譜分離法(610.1的氯仿甲醇NH4OH)純化產(chǎn)物，得到粘性固體產(chǎn)量210mg(31%)；MSm/z395_)+;1HnMR(DMSO-CI6)δ8.08(s，1H，H-2)，7.11(bs，2H，6-NH2)，5.74(d，lH，H-I‘，J1,2,=5.6Hz),5.33(bd,1H,0H-2‘)，5.16(bd，1H，0H—3‘)，5.12(bddd，1H，H_2‘,J1,j2,=5.6Hz,J2,，3,=5.5Ηζ)，4.21(bddd，lH，Η_3‘，J2,，3,=5.5Hz,J3,，4,=4·3Ηζ)，4·01(q，2Η,CH3-CH2)，3.91-4.00(m,1Η,Η_4‘)，2.70-2.77(m,1Η,5'-CH2)，2.54-2.66(m,3H,5'-CH2,CO-CH2)，2·53(s，3H，8-CH3)，2·38(t，2H，NCH3-CH2)，2·16(bs，3H，N-CH3),1.15(t，3H,OCH2-CH3)。實例685'_[(乙氧羰基乙基)甲氨基]-5'-脫氧-8-乙基腺苷(33b)。利用與關于制備6a和33a所述相同的程序，使用4b(260mg，0.84mm)、3-氯丙酸乙酯(138mg，1.0mm),DIEA(53mg,0.07mL,0.41mm)和DMF(4ml)制備化合物33b。柱色譜分離法(用710.1的氯仿甲醇NH4OH洗脫)后，獲得玻璃狀粘性固體產(chǎn)量153mg(44%)；MS:m/z409(M+H)+；1HNMR(DMS0-d6)δ8.08(s,1H,H_2)，7·10(bs，2H，6_NH2)，5·71(d，1H，H-I‘,J1,j2,=5·5Ηζ)，5·32(bd，1Η，0Η-2‘，J2,_2,0Η=5·OHz)，5·16(bd，1Η，0Η-3‘，J3'_3'oh=5.ΙΗζ)，5.12(ddd,1Η,H-2'，J1',2'=5.5Hz,J2/>3'=5.7Hz,J2/0Η=5.OHz)，4·14(ddd，1Η，Η-3'，J2,,3,=5·7Hz，J3,,4,=4·1Hz，J3,_3,0Η=5·ΙΗζ)，4·01(q，2Η，CH3-CH2)，3.91-3.98(m,1Η,Η_4‘)，2.87(q,2H,8_Et的CH2)，2.71-2.79(m,1H,5'-CH2)，2.51-2.65(m，3H，5'-CH2,CO-CH2),2.38(t，2Η，NCH3-CH2)，2·16(bs,3Η,N-CH3)，1.30(t，3H，8-Et的CH3)，1·15(t，3H，OCH2-CH3)。實例695'_[(甲酰胺基乙基)甲氨基]-5'-脫氧-8-甲基腺苷硫酸鹽(1.51的鹽)(34a)。將化合物33a(89mg，0.22mm)溶解于5mL甲醇氨溶液中，并在室溫下攪拌溶液5天。將反應混合物濃縮至干，并利用柱色譜分離法(410.2的氯仿甲醇NH4OH)純化。收集所需部分，濃縮并在真空中干燥。將產(chǎn)物溶解于8mlEtOH中并逐滴添加2MH2S04。化合物沉淀析出，過濾，并用EtOH洗滌。將此具有吸濕性的產(chǎn)物溶解于水(2ml)中，并凍干，得到白色固體產(chǎn)量65mg(55%)；MS:m/z366(M+H)+；1HNMR(D2O)δ8.43(s,1H,H-2)，6.09(d,1H,H-I‘，J1,，2,=5.9Hz)，5.0-5.30(bm,1H,H-2‘)，4.61-4.70(bm,1H,H-4‘)，4·514.54(bm，1H，H-3‘)，3.30-3.89(bm，5H，N-CH3CH2)，2.96(bs，2H，5‘-CH2),2.77(bs，2H，NH2CO-CH2)，2.70(s，3H，8-CH3)；UVλmax,nm,pH1,258.4(ε14,900),ρΗ7，260.1(ε14,900)，ρΗ13，260.1(ε15,300)。實例705'_[(甲酰胺基乙基)甲氨基]-5'-脫氧-8-乙基腺苷硫酸鹽(1.11的鹽)(34b)。本程序與上文關于34a所述相同，使用33b(149mg,0.36mm)和甲醇氨溶液(5ml)進行產(chǎn)量94mg(51%)；MS:m/z380(M+H)+；1HNMR(DMS0-d6)δ8.08(s，1H，H-2)，7.31(bs，1H,CO-NH2)，7.10(bs,2H,6_NH2),6.71(bs,1H,CO-NH2)，5.72(d,1H,H-I‘，J1,，2,=5.4Hz)，5.31(d，lH，0H-2'，J2,_2,0Η=6.2Hz)，5.16(d，1H，0H—3‘，J3,_3,0Η=5.5Hz)，5.09(ddd，1Η,Η-2',J1,’2丨=5.4Hz，J2,，3,=5.7Hz，J2,_2,0H=6.2Hz),4.17(ddd,1Η,Η-3'，J2,，3,=5.7Hz，J3,，4,=4.3Hz,J3,_3,0H=5.5Hz),3.92-3.99(m,1H,H-4')，2.87(q，2H，CH3-CH2)，2.69-2.75(m,1H,5'-CH2)，2.52-2.60(m,3H,CO-CH2,5'-CH2)，2.18(bs,2H,NCH3-CH2)，2.16(s,3H,N-CH3)，1.30(t，3H，8-Et的CH3)；1HNMR(D2O)δ8.38(s,1H,H-2),6.09(d,1H,H-I'，J1,，2,=6.2Hz)，5·33(bs，1H，H-2'),4.56-4.62(m,1H,H-4')，4.51-4.54(m，1H，H-3')，3.87-3.96(bm,2H,NH2CO-CH2)，3.56(s,3H,N-CH3)，2.98-3.80(bm,2H,CH3-CH2)，2.96(bs，2H，5'-CH2)，2·72—2.82(m，2Η，NCH3-CH2)，1·39(s，3Η，8_Et的CH3)；UVλmax,nm,ρΗ1，259·4(ε15，200)，ρΗ7,260.8(ε15，100)，ρΗ13,260.6(ε15，500)。實例715'_[(乙氧羰基甲基)甲氨基]-5'-脫氧-8-甲基腺苷(35)。利用與關于制備6a所述相同的程序，使用4a(415mg，1.41mm)、氯乙酸乙酯(207mg，0.18ml，1.68mm)、DIEA(91mg,0.12mL，0.70mm)和DMF(5ml)制備化合物35產(chǎn)量204mg(38%)；MS:m/z381(M+H)+；1HNMR(DMS0-d6)δ8.06(s，1H，H_2)，7.11(bs，2H，6_NH2)，5.73(d，1H，H_1‘，J1,，2,=5.4Hz),5.33(bd,1H,0H-2‘，J2'_2'0H=4.7Hz)，5.19(bd,1H,0H-3',J3,0H=4.9Hz),5.03(ddd,1H,H-2'，J1,,2,=5.4Hz，J2,,3,=5.7Hz，J2,_2,0H=4.7Hz)，4.17(ddd,1H,H-3'，J2,,3,=5.7Hz，J3,,4,=4.4Hz，J3,_3,0H=4.9Hz)，4.02(q，2H，CH3-CH2)，3.92-3.99(m,1H,H-4')，3.27(bs,2H,NCH3-CH2)，2.83-2.90(m,1H,5'-CH2)，2.70-2.79(m,1H,5'-CH2)，2.53(s,3H,8_CH3)，2·31(s，3H,N-CH3)，1·13(t，3H，OCH2-CH3)；UVλmax，nm,ρΗ1,258.9(ε16，100)，ρΗ7，260(ε15，900)，ρΗ13，260.1(ε16,200)。實例725'_[(甲酰胺基甲基)甲氨基]-5'-脫氧-8-甲基腺苷硫酸鹽(1.451的鹽)(36)。使用與用于制備34a相同的程序，使用35(200mg，0.52mm)和甲醇氨溶液(5ml)制備36產(chǎn)量105mg(39%)；MS:m/z352(M+H)+；1HNMR(DMS0-d6)δ8.08(s,1H,H-2),7.ll(bs，2H，C0-NH2)，7.07(bs，2H，6-NH2)，5.74(d，lH，H-l',J1,’2,=5.2Hz)，5.34(d，1H，0H-2'，J2,_2,0H=5.9Hz)，5.21(d，lH，0H-3'，J3,_3,0H=5.7Hz)，4.97(ddd，1H，H_2‘，J1,,2,=5.2Hz,J2,,3,=5.5Hz,J2,_2,0H=5.9Hz),4.21(ddd,1H,H_3'，J2,,3,=5.5Hz,J3,，4,=5.2Hz,J3,_3,oh=5.7Hz)，3.94-4.01(m，lH，H-4')，2.94(d，lH，NCH3-CH2,J=15.7Hz)，2.88(d,1H,NCH3-CH2,J=15.7Hz)，2.75-2.80(m,1H,5'-CH2)，2.63-2.70(m,1H,5'-CH2)，2·53(s，3H，8-CH3)，2·23(s，3H，N-CH3)；1HNMR(D2O)δ8.40(s,1H,H-2),6.08(d,1H,H-I‘,J1,j2,=4.8Ηζ),5.01(t,lH,H-2‘，J2,,3,=5.2Hz)，4·60(t，1H，H_3‘，J3,,4,=4.9Hz)，4.50-4.59(m,1H,H-4‘)，4.03-4.17(m,2H,NH2CO-CH2)，3.82-3.92(m,1H,5'-CH2)，3.68-3.76(m，1H，5'-CH2),3.03(s,3H,N-CH3),2.70(s,3H,8-CH3)；UVλmax,nm,ρΗ1，259(ε15，900)，ρΗ7，259.7(ε16，100)，ρΗ13，260.2(ε16，100)。誘變和質(zhì)粒構(gòu)建如先前所述，制造基于pQE30載體的質(zhì)粒，以在大腸桿菌中產(chǎn)生重組野生型和F223A突變體hAdoMetDC，用于結(jié)晶學研究(23)。這一構(gòu)建體利用MRGS(H)6GS_或通過固定金屬親和色譜法(immobilizedmetalaffinitychromatography)純化來替換N末端甲硫氨酸。使用一種也基于PQE30載體的不同質(zhì)粒產(chǎn)生蛋白質(zhì)以用于hAdoMetDC酶分析。在此質(zhì)粒中，(H)6標簽位于羧基端，代替了末端的-QQQQQS。(H)6標簽的位置不會改變純化酶的活性。蛋白質(zhì)表達和純化根據(jù)?？怂雇心?Ekstrom)等人所述的方案，純化野生型hAdoMetDC(20)。編碼所述酶的質(zhì)粒在PQE30載體中，并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌JM109菌株的細胞中。在37°C下，使細胞在LB培養(yǎng)基中生長，得到過夜培養(yǎng)物，隨后將其引入較大細胞培養(yǎng)物中，其中兩種培養(yǎng)物都含有l(wèi)OOmg/mL氨芐西林(ampicillin)。使細胞生長，直到其0.D600值達到0.6，隨后用100!^/1異丙基-1-硫基-0-0吡喃半乳糖苷(IPTG)誘導。使細胞在15°C下生長過夜，隨后通過離心收集，使用含有20mMNa2HPO4(pH7.0)、500mMNaCl、2.5mM腐胺、0.02%布里杰-35(Brij-35)和IOmM咪唑的洗滌緩沖液洗滌，并在_80°C下存儲。將冷凍的細胞小球解凍，懸浮于洗滌緩沖液中，并使用法式濾壓壺(Frenchpress)在1500psi下進行溶解。借助離心，在12000g下分離細胞碎片與溶解產(chǎn)物。用洗滌緩沖液平衡塔隆金屬親和色譜樹脂(Talonmetalaffinityresin)，隨后小心地將溶解產(chǎn)物與樹脂旋轉(zhuǎn)在一起，歷時1.5小時。將樹脂裝載到柱上，并用體積相當于柱體積的15-20倍的洗滌緩沖液洗滌。接下來，以相同方式，用含有25mM咪唑的洗滌緩沖液洗滌柱。隨后，用含有100-200mM咪唑的緩沖液洗脫蛋白質(zhì)。將洗脫的蛋白質(zhì)濃縮到約10ml，并使其通過經(jīng)IOmMHepes(pH7.5)、2.5mM腐胺、5mMDTT,0.ImMEDTA、0.02%布里杰-35和300mMNaCl預平衡的葡聚糖凝膠G-75(SephadexG-75)柱。使緩沖液通過柱，并利用UV在280nm下鑒別含有蛋白質(zhì)的部分。將蛋白質(zhì)濃縮到約10mg/mL，并在-80°C下存儲。F223A突變體的純化與原生酶類似。結(jié)晶在冰上解凍蛋白質(zhì)，并使用伯樂公司的緩沖液更換色譜柱(伯樂生命醫(yī)學產(chǎn)品有限公司(Bio-radLaboratories)，加州海克里斯(Hercules，CA)94547)，將緩沖液更換成IOmMHepes(pH7.5)、200mMNaCl和ImMDTT。將原生蛋白質(zhì)與4_6倍摩爾過量的MAOBEA和MAOEMA—起培育24小時，然后結(jié)晶。將F223A突變體稀釋到約6mg/mL，并且與4_6倍摩爾過量的MeAdoMet—起培育24小時，然后結(jié)晶。使用懸滴法(hangingdropmethod)，在22°C下使原生復合物和突變體復合物的晶體在13-16%PEG8000、IOOmMTris(pH8.0-9.0)和IOmMDTT中生長。一夜間出現(xiàn)晶體，并穩(wěn)定1-2周。數(shù)據(jù)收集和處理在利用理學RU-300旋轉(zhuǎn)陽極式發(fā)生器(RigakuRU-300rotatinganodegenerator)產(chǎn)生的CuΚα輻射的理學R-axisIV+檢測器上的源代碼(homesource)處收集MAOEMA復合物的數(shù)據(jù)。使用ADSC奎騰315檢測器(ADSCquantum315detector)，在先進光子源(AdvancedPhotonSource，APS)NE-CAT束線的8BM基站，收集MAOBEA復合物的數(shù)據(jù)。使用ADSC奎騰4檢測器，在CHESS的F2基站收集AdoMetDCF223A突變體與MeAdoMet所形成的復合物的數(shù)據(jù)。在液氮或液氮流下快速冷凍所有晶體。晶體的衍射質(zhì)量與晶體的冷凍保護密切相關。將晶體依序轉(zhuǎn)移到含有孔溶液的溶液中，其中所述孔溶液含2%、5%、8%、15%和18%甘油，其中在各步驟間平衡1-2分鐘。將所有復合物的數(shù)據(jù)編入索引中，積分并使用HKL2000(24)程序套件按比例繪圖。數(shù)據(jù)收集統(tǒng)計概述于表1中。結(jié)構(gòu)測定和精修使用結(jié)合MeAdoMet的原生AdoMetDC的結(jié)構(gòu)(PDB1I7B)作為搜索模型，并且使用CNS程序套件，利用分子置換法測定所有復合物的結(jié)構(gòu)(25)。使用程序0建立MAOEMA和MAOBEA復合物的模型(26)。使用程序coot建立AdoMetDCF223A突變體與MeAdoMet的復合物的模型(27)。利用fo-fc差異圖和合成省略圖(compositeomitmap)測定配體分子的構(gòu)象。使用hic-up服務器(hic-upserver)產(chǎn)生配體的參數(shù)和拓撲文件(28)。差異圖還顯示在所有三種結(jié)構(gòu)中結(jié)合腐胺的分子的密度。復合物的精修統(tǒng)計提供于表2中。MeAdoMet在AdoMetDC活性位點中的分子模型利用程序Macromodel7.2版測定配體在AdoMetDC活性位點的優(yōu)勢構(gòu)象(29)。堿基原子的殼層包括在活性位點的20.O埃內(nèi)的任何殘基(來自pdb1I7B)，并用作構(gòu)象搜索和能量最小化的起始模型。將配體添加到活性位點，隨后去除水分子并進行適當?shù)臍涮幚怼Ｅ潴w的氨基末端與丙酮?；g形成共價鍵。使所得結(jié)構(gòu)經(jīng)歷50，000個混合蒙特卡洛MCMM/低模式構(gòu)象搜索步驟(mixedMonteCarloMCMM/lowmodeconformationalsearchst印)(30)(31)，使活性位點周圍5埃殼層中的殘基移動。然而，殘基H5、E67、C226和E247固定不動。使用AMBER*力場(介電常數(shù)為4的距離依賴性電介質(zhì)(distancedependentdielectric))(32，33)和TNCG最小化技術(shù)(TNCGminimizationtechnique)(34)，將所產(chǎn)生的結(jié)構(gòu)能量最小化成0.05kJ/mol的梯度。采用此搜索的全局最小值(收斂后)并以0.OlkJ/mol的梯度(剛好使配體能移動)進行微調(diào)。出于完全性考慮，堿基分別以順式和反式構(gòu)象開始，執(zhí)行所述工作。锍離子的AMBER*參數(shù)是由馬克漢姆博士(Dr.Markham)等人所進行的工作改編得到(35)。MAOBEA在AdoMetDC活性位點中的模型通過使用構(gòu)象搜索和分子力學，使用程序Macromode7.2版，建立MAOBEA末端三個原子的模型。由于已通過電子密度以高精確度確定配體與蛋白質(zhì)的剩余部分的位置，故在構(gòu)象搜索期間，蛋白質(zhì)和配體中除最后三個原子外的所有原子都固定不動。在構(gòu)象搜索期間，圍繞C5-C4和C4-01鍵進行扭轉(zhuǎn)。使用AMBER*力場(介電常數(shù)為4的距離依賴性電介質(zhì))和TNCG最小化技術(shù)，將由蒙特卡洛搜索產(chǎn)生的結(jié)構(gòu)最小化成0.OlkJ/mol的梯度?？焖兕A覽前5種能量最小的結(jié)構(gòu)顯示，其極為相似并且研究所述搜索的全局最小值，以獲得MAOBEA中無序的末端原子的坐標。AdoMetDC活性分析和抑制劑IC5tl值測定通過測量14CO2從S-腺苷酰基-L-[羧基-14C]甲硫氨酸(安發(fā)瑪西亞生物技術(shù)公司(AmershamPharmaciaBiotech)，約60mCi/mmol)中的釋放，來分析AdoMetDC(36)。在這些條件下分析30ngC末端經(jīng)his標記的AdoMetDC，在背景值為30和每納克蛋白質(zhì)每分鐘活性為約1.5pmol下，得到約7000cpm。為了測定化合物抑制AdoMetDC的能力，在無抑制劑的情況下以及在至少5種濃度的各可能抑制劑存在下，測定酶活性。通過曲線擬合抑制劑濃度對AdoMetDC的抑制％的圖，測定IC5tl值。結(jié)果MeAdoMet在AdoMetDC活性位點中的模型AdoMetDC與MeAdoMet或抑制劑MHZPA和MAOEA的復合物的晶體結(jié)構(gòu)顯示，配體以不常見的順式構(gòu)象結(jié)合腺嘌呤堿基。23AdoMetDC中結(jié)合MeAdoMet的活性位點殘基顯示于圖1中。然而，NMR數(shù)據(jù)結(jié)合分子模型研究表明，在溶液中，AdoMet根據(jù)能量最低原則呈現(xiàn)反式構(gòu)象。35關于結(jié)合AdoMet的晶體結(jié)構(gòu)的研究顯示所述底物呈具有一定范圍的糖苷扭轉(zhuǎn)角(glycosidictorsionangle)的位置，并且揭示出，在大部分結(jié)構(gòu)中，優(yōu)選反式構(gòu)象，但在一些結(jié)構(gòu)中觀察到順式構(gòu)象。35為了說明配體結(jié)合AdoMetDC的優(yōu)勢構(gòu)象和相關能量學，建立MeAdoMet在AdoMetDC活性位點中的模型。由于MeAdoMet通過與丙酮?；矁r鍵結(jié)而限制在AdoMetDC的活性位點，故并未進行涉及位置和定向采樣(orientationalsampling)的對接(docking)。而是使用混合蒙特卡洛/低模式構(gòu)象搜索法，在MacroModel程序內(nèi)進行構(gòu)象搜索，以確定AdoMet在AdoMetDC活性位點中的密集低能量構(gòu)象。29_31構(gòu)象搜索是以呈反式或順式構(gòu)象的AdoMet開始，并且在各情況下，關于腺嘌呤核苷，搜索得到的5種能量最低的結(jié)構(gòu)均展現(xiàn)順式構(gòu)象。模型結(jié)構(gòu)與晶體結(jié)構(gòu)的疊加(圖1B)表明，構(gòu)象搜索的結(jié)果與以結(jié)晶學方法觀察到的結(jié)果完全相符。同樣對結(jié)合AdoMetDC的AdoMet、5'-脫氧_5‘-(二甲基锍基)腺苷(MMTA)、MHZPA和MAOEA進行構(gòu)象搜索，并且其各自得到所述堿基的順式構(gòu)象(資料未圖示)。核糖與E247形成關鍵的氫鍵，而腺嘌呤堿基堆積于F7與F223之間，并且與E67主鏈的酰胺和C末端羧基形成氫鍵。迫使堿基呈順式構(gòu)象的主要相互作用為堿基與F223和F7的π-π堆積效應，以及堿基與Ε67主鏈之間的兩個氫鍵。AdoMetDC活性位點中的虛擬突變進行虛擬突變以研究各個殘基對經(jīng)結(jié)合核苷構(gòu)象的影響。使用MeAdoMet在活性位點中的AdoMetDCF223A和F7A單氨基酸突變體，利用MacroModel程序進行構(gòu)象搜索，在低能量集合中得到順式和反式構(gòu)象的混合物。在各突變存在下，全局最小值為腺嘌呤堿基的反式構(gòu)象后緊跟著順式構(gòu)象，其中能量差為約0.5kcal/moL·在F223A突變體中，以反式構(gòu)象結(jié)合的配體的全局最小能量構(gòu)象展現(xiàn)出相對于采用順式構(gòu)象的第二最小能量構(gòu)象異構(gòu)體的主要變化。在F223A結(jié)合位點中，具有全局最小能量結(jié)構(gòu)的核糖移位，并與E247和C226而非單獨E247形成氫鍵(圖2A)。這一變化使配體自身彎曲，锍堆積于腺嘌呤堿基上，并且腺嘌呤堿基與S66形成三個氫鍵。在F7A結(jié)合位點中，配體采用與利用F223A突變體類似的構(gòu)象。F223殘基經(jīng)歷扭轉(zhuǎn)變化，以容納配體的構(gòu)象變化，并且還堆積有腺嘌呤堿基(圖2B)。在進行虛擬突變的酶活性位點中，配體低能量結(jié)構(gòu)中反式構(gòu)象的存在顯示苯基對于維持野生型酶結(jié)合位點內(nèi)配體的順式構(gòu)象的重要性。還獲得F223A突變體與MeAdoMet的復合物的晶體結(jié)構(gòu)。AdoMetDC和F223A突變體的三級結(jié)構(gòu)人AdoMetDC(hAdoMetDC)二聚體為四層的αββα夾心型結(jié)構(gòu)。酶原是由334個氨基酸殘基組成，并且酶自加工得到α和β亞基。20自加工得到具有丙酮?；o助因子的活性酶。丙酮?；挥贜末端β折疊(β-sheet)的末端，而且活性位點涉及兩個β折疊的殘基。腐胺(活化hAdoMetDC的自加工和脫羧反應)的結(jié)合位點位于野生型酶內(nèi)遠離配體結(jié)合位點處。酶純化的實驗條件包括濃度足以確保腐胺結(jié)合位點的高占有率的腐胺。在晶體結(jié)構(gòu)中，殘基1-4、21-27、165-173、288-299、329-334之間的環(huán)是無序的。AdoMetDCF223A突變體的結(jié)構(gòu)類似于野生型蛋白。AdoMetDCF223A突變體與MeAdoMet的復合物的晶體結(jié)構(gòu)使用分子置換法解析hAdoMetDCF223A與MeAdoMet的復合物的晶體結(jié)構(gòu)。fo_fc密度差異顯示，MeAdoMet與酶共價結(jié)合，并且腺嘌呤堿基采用清晰的順式構(gòu)象(圖3)。與所預期的一樣，合成省略密度圖未顯示F223的密度。核糖與E247形成兩個氫鍵，由此將配體錨定，并且堿基通過與F7的堆積相互作用以及與E67形成的氫鍵而保持順式構(gòu)象。在突變蛋白質(zhì)中，腐胺結(jié)合位點中每個單體存在一分子腐胺。MeAdoMet在F223A結(jié)構(gòu)中與在原生結(jié)構(gòu)中的疊加顯示，配體的位置或構(gòu)象都沒出現(xiàn)明顯變化。在野生型蛋白質(zhì)中無序的環(huán)在突變體中同樣無序?？赡艿膆AdoMetDC抑制劑的合成和生物化學分析通過在腺嘌呤8位用甲基到苯基進行取代，合成數(shù)種AdoMet結(jié)構(gòu)類似物。隨后分析所述各化合物抑制hAdoMetDC的能力，并測定抑制的IC5tl值(表3)。如化學合成部分中所述，所測試的抑制劑分為四組。第1組(7a-C、9a-f、12)在C-5'具有氨基氧基烷基側(cè)鏈，其可與AdoMetDC的丙酮酸形成希夫堿。18’41’42這一組化合物為有效滅活劑，其中4-氨基氧基丁基略優(yōu)于添加2-氨基氧基乙基。第2組化合物(13d、e、f、j、k、l、m)在C-5'具有酰胺或酰胼側(cè)鏈，而第3組抑制劑(14a、b、d、e、f;15a、b、c、d；17c、d)在C-5'具有氨基烷基氨基側(cè)鏈。18a和18c也與第3組的合成方法有關，其分別在C-5'側(cè)鏈的末端具有胍和酰胺肟。第2組和第3組的化合物不太有效(尤其具有氨基烷基氨基、胍或酰胺肟側(cè)鏈者)，但很可能在體內(nèi)條件下穩(wěn)定。最后一組化合物是由5‘-二甲基氨基(19a、b)或5'-二甲基锍基(21b、d)化合物組成。先前曾報導，化合物21d為Ki值在微摩爾濃度(μΜ)范圍內(nèi)的AdoMetDC抑制劑。43如表3所示，用氮置換硫?qū)⑹笰doMetDC的失活略有改良。在所述各組內(nèi)，當將8-甲基取代基添加到腺嘌呤環(huán)中時，出現(xiàn)了一致的抑制劑活性改良。IC5tl值降低在化合物9d的3.4倍到化合物19a和13d的15-17倍間變化。當將腺嘌呤8-甲基取代基添加到化合物12(MAOEA)中，形成化合物7a時，效力增加8倍。這與以下觀念一致腺嘌呤上8-甲基取代使相應核苷偏向于順式構(gòu)象，并且此為在活性位點結(jié)合的形式。腺嘌呤的8-羥基取代基使效力相對于無取代基情形略有增加，但不如8-甲基取代基有效(比較9c與9e和9e)。較大的8位取代基不會改良功效。將8_苯基加到化合物12、9f和14d中會消除抑制活性。例如8-乙基(比較9d與9e、13d與13e以及17c與17d)或8-甲基氨基(比較7a與7b以及17c與14a)等較小基團添加為可接受的，但不如8-甲基。7a的晶體結(jié)構(gòu)使用分子置換法解析利用7a的原生hAdoMetDC的晶體結(jié)構(gòu)。如上文所述，7a的結(jié)構(gòu)類似于先前研究的抑制劑MA0EA，但其在腺嘌呤堿基的8位具有甲基取代。電子密度顯示，7a的氨基末端與酶的丙酮酰基形成希夫堿。與所預期的一樣，7a的腺嘌呤堿基在晶體結(jié)構(gòu)中采用順式構(gòu)象。7a的復合物的電子密度顯示于圖4A(5A)中。在腐胺結(jié)合位點中結(jié)合有1分子腐胺。9e的晶體結(jié)構(gòu)使用分子置換法解析利用9e的原生hAdoMetDC的晶體結(jié)構(gòu)。9e與MAOEA類似，但腺嘌呤堿基8位上為乙基取代基，并且叔氮(靠近核糖)與末端氮之間具有兩個額外碳原子。核糖與氨基末端之間長鍵聯(lián)基團的存在使此配體特別值得進行研究。電子密度圖顯示并無有關丙酮?；c配體氨基末端之間形成的希夫堿的密度。不存在配體末端三個原子的密度，并且配體剩余部分的密度明顯(圖4B)。通過使用分子模型，建立呈現(xiàn)能量最有利構(gòu)象的最后三個原子的模型，來獲得所述原子的位置。丙酮酰基周圍的密度對其極為適合，并且并無任何證據(jù)顯示希夫堿形成。核糖與E247形成關鍵的氫鍵并錨定配體。堿基保持順式構(gòu)象，并通過η-η堆積穩(wěn)定。堿基上乙基取代基的密度得到完全確定，并且指示末端乙基并非無序的。討論通過丙酮?；缍ˋdoMetDC的活性位點。利用由酶與先前報導的抑制劑ΜΗΖΡΑ、MAOEA,MeAdoMet,MGBG和CGP48664A的復合物獲得的晶體結(jié)構(gòu)，闡明各種配體在活性位點的相互作用23。共價結(jié)合至酶的MeAdoMet的晶體結(jié)構(gòu)與在活性位點中的底物AdoMet極為相似。晶體結(jié)構(gòu)顯示出MeAdoMet與酶的關鍵相互作用包括1.核糖氧與Ε247的氫鍵結(jié)；2.腺嘌呤環(huán)與F223和F7的堆積相互作用；3.腺嘌呤環(huán)6-氨基取代基與Ε67末端羧基的氫鍵結(jié)；和4.腺嘌呤環(huán)N1與Ε67酰胺N-H的氫鍵結(jié)(圖1Α)。在MHZPA和MAOEA與hAdoMetDC的復合物的結(jié)構(gòu)中也存在類似相互作用。在這三種結(jié)構(gòu)中，腺嘌呤堿基的糖苷角在128°到139°的范圍內(nèi)，這表明衍生自腺嘌呤的核苷特別偏好順式構(gòu)象。順式構(gòu)象是通過腺嘌呤堿基與F223和F7的Ji-JI堆積以及與蛋白質(zhì)主鏈的氫鍵結(jié)穩(wěn)定。MGBG和CGP48664A與酶的復合物的晶體結(jié)構(gòu)顯示，其堆積于兩個苯環(huán)之間，并與E247和蛋白質(zhì)的其它殘基形成氫鍵。如先前所述，通過使用混合蒙特卡洛/低模式構(gòu)象搜索，實施MeAdoMet在hAdoMetDC活性位點中的分子模型化。在構(gòu)象搜索期間，糖苷扭轉(zhuǎn)角自由旋轉(zhuǎn)，這將在能量最小化之前產(chǎn)生多種可與活性位點的空間限制相容的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體。低能量結(jié)構(gòu)顯示，衍生自腺嘌呤的核苷更傾向于在MdoMetDC的活性位點中呈現(xiàn)順式構(gòu)象。馬克海姆(Markham)等人已研究出AdoMet在溶液中和在真空中的構(gòu)象偏好35?；?HNMR的研究以及基于NMR限制的計算顯示，AdoMet在溶液中偏好反式構(gòu)象，并且在真空中偏好順式構(gòu)象。在溶液中，反式構(gòu)象與相應順式構(gòu)象之間的能量差(包括空間、靜電和溶劑化的貢獻)為約_34kJ/mol。晶體結(jié)構(gòu)和模型化結(jié)果顯示，酶更傾向于以能量不利的順式構(gòu)象結(jié)合配體，而且與蛋白質(zhì)中含有芳香族環(huán)的殘基的n-n相互作用將幫助維持此構(gòu)象。平行幾何結(jié)構(gòu)中的典型JI-Ji相互作用產(chǎn)生2-3kCal/mol的穩(wěn)定化作用44。存在多種穩(wěn)定化因素來幫助配體在結(jié)合至酶期間克服糖苷扭轉(zhuǎn)能障?？捎兄谑购塑盏捻樖綐?gòu)象穩(wěn)定的其它因素涉及锍離子與腺嘌呤堿基的相互作用。在哈特里_?？?HartreeFock)6-3IG**水平下，對F223和F7位于AdoMet附近(基于晶體結(jié)構(gòu)pdbid1I7B)的AdoMet進行從頭計算(Abinitiocalculation)，以獲得單點能量和原子上的相應電荷。這些計算值顯示，腺嘌呤堿基N3的電荷為-0.79，并且與攜帶+0.39電荷的锍離子的距離為3.4埃(數(shù)據(jù)未圖示)。因此，這兩個原子間存在可使順式構(gòu)象穩(wěn)定的有利的靜電相互作用。先前已通過晶體結(jié)構(gòu)和動力學實驗研究F223和F7在AdoMetDC中的作用23。AdoMetDC與如MGBG和CGP48664A等抑制劑所形成的晶體結(jié)構(gòu)顯示，苯環(huán)產(chǎn)生涵蓋MGBG整個長度和CGP48664A雙環(huán)的堆積結(jié)構(gòu)。由hAdoMetDCF223A和F7A突變體與底物AdoMet的反應得到的動力學數(shù)據(jù)顯示，F(xiàn)7A突變體的特異性常數(shù)(k。at/km)降低45倍，并且F223A突變體降低1400倍。有關如MGBG和CGP48664A等抑制劑進行抑制的動力學數(shù)據(jù)顯示，當與野生型酶相比較時，兩種突變體的IC5tl值明顯增加。F223A突變體的活性降低高于F7A突變體。相比F7環(huán)，腺嘌呤堿基更接近F223環(huán)的事實也支持這些發(fā)現(xiàn)。已對MeAdoMet在hAdoMetDCF223A突變體活性位點中的結(jié)構(gòu)和構(gòu)象特性進行研究。進行利用虛擬突變的構(gòu)象搜索，以便了解F223和F7對于穩(wěn)定順式構(gòu)象的作用。與利用野生型酶的結(jié)構(gòu)(其中在低能量結(jié)構(gòu)集合中僅觀察到順式構(gòu)象)進行的計算相比，由兩種突變體得到的全局最小值具有呈反式構(gòu)象的堿基，并且次高能量結(jié)構(gòu)具有呈順式構(gòu)象的堿基。這些構(gòu)象之間的能量差為約0.5kJ/mol，在基于分子力學的計算的誤差限度內(nèi)。兩種結(jié)構(gòu)的順式與反式構(gòu)象之間的能量差較低，并且如從活性位點中結(jié)合有MeAdoMet的hAdoMetDCF223A的X射線結(jié)構(gòu)可看出，酶實際上更傾向于以順式構(gòu)象結(jié)合配體。因此，盡管模型研究無法準確預測到F223A突變體中將維持核苷的順式構(gòu)象，但可能從這些研究推斷出，核苷與酶的結(jié)合親和力將降低。由hAdoMetDCF223A與MeAdoMet所形成的晶體結(jié)構(gòu)的數(shù)據(jù)顯示出清晰的呈順式構(gòu)象的腺嘌呤堿基的密度。腺嘌呤堿基與F7殘基仍保持有利的Ji-JI相互作用，而且核糖與E247形成兩個關鍵氫鍵。這些發(fā)現(xiàn)顯示，一對π-π相互作用與靜電相互作用可使堿基保持順式構(gòu)象，而且F7殘基有助于維持MeAdoMet和其它配體在活性位點的構(gòu)象。AdoMetDC與MHZPA、MAOEA、MeAdoMet、MGBG和CGP48664A所形成的結(jié)構(gòu)顯示，E247有助于與配體形成關鍵氫鍵，從而使配體保持適合于活性位點的適當構(gòu)象。23大部分核苷的核糖氧常常會與酶的天冬氨酸、谷氨酸或羰基形成關鍵氫鍵，從而使其保持提供催化活性的適當構(gòu)象。在AdoMetDC中，AdoMet類似物中的核糖與E247通過形成兩個氫鍵而保持在適當位置，這便利在末端氮與丙酮酰基之間形成希夫堿，而且可使腺嘌呤堿基處于一定位置以堆積于苯環(huán)之間。hAdoMetDCF223A的晶體結(jié)構(gòu)顯示，MeAdoMet的核糖仍與E247形成兩個氫鍵，這些氫鍵將其限制在使腺嘌呤堿基有利地與F7π-π相互作用并獲得順式構(gòu)象的構(gòu)象。本發(fā)明確定，將甲基加到腺嘌呤C8中將產(chǎn)生對于酶的抑制活性為未經(jīng)取代的母體化合物的8到18倍的化合物，因此，此為本發(fā)明的一個優(yōu)選方面。然而，如上文所提及，本發(fā)明范圍內(nèi)的各個方面也涵蓋未經(jīng)取代的母體化合物。具有較大取代基(例如超過3個碳原子)的某些化合物并未提供優(yōu)于未經(jīng)取代母體化合物的益處，因此，其并非本發(fā)明的優(yōu)選方面。實際上，8-苯基取代基使化合物抑制hAdoMetDC的能力低得多?；钚晕稽c的模型研究表明，在腺嘌呤呈順式構(gòu)象的情況下，應存在足夠的空間以容納較大基團。對于腺嘌呤C8取代基所占區(qū)域進行的較為詳細的觀察表明，此區(qū)域接近溶劑界面。因此，盡管空間上存在足夠的地方容納較大取代基，但所選取代基都為不與鄰近溶劑界面相容的疏水性基團。根據(jù)生物化學結(jié)果，疏水性基團不完全包埋于蛋白質(zhì)疏水腔內(nèi)的代價隨取代基尺寸變大而增力口，這一代價明顯高于使抑制劑偏向于順式構(gòu)象所得到的增益?；衔?a的結(jié)構(gòu)類似于先前研究的MA0EA，并且在腺嘌呤堿基的8位上具有甲基取代。7a與hAdoMetDc的復合物的晶體結(jié)構(gòu)顯示出清晰的與丙酮酰基形成的希夫堿的密度，表明其作為AdoMetDC抑制劑所起作用類似于MA0EA。核糖與E247形成氫鍵，腺嘌呤堿基以順式構(gòu)象堆積，腺嘌呤堿基的6-氨基取代基與E67主鏈的羧基形成氫鍵，并且E67的酰胺氫與腺嘌呤環(huán)N3形成氫鍵。帶明顯負電荷的N3氮與在生理相關質(zhì)子化狀態(tài)下具有形式正電荷的叔氮之間的距離為2.94埃，小于在相應位置具有硫原子的MeAdoMet中所見的距離。腺嘌呤環(huán)上的甲基取代基也迫使堿基呈順式構(gòu)象，并使靜電效應增強，由此解釋了當與在腺嘌呤C8處無取代基的MHZPA和MAOEA相比時，N3氮與叔氮之間的距離有所降低的原因。結(jié)合AdoMetDC的多種AdoMet類似物的結(jié)構(gòu)顯示，其通過與酶的丙酮?；纬上７驂A來抑制酶。這些抑制劑中叔銨/硫與末端氮之間的鍵聯(lián)基團的長度為3-4個原子，這使得希夫堿的形成在幾何學上和空間上都是可行的。9e的鍵聯(lián)基團長度為5個原子。9e復合物的電子密度圖顯示在丙酮?；竺芏冉档停砻魑葱纬上７驂A。配體存在良好密度，但三個末端原子除外，其為無序的并且沒有密度。使用分子力學將最后三個原子的位置固定在能量有利的構(gòu)象。鍵聯(lián)基團區(qū)中的5個原子似乎會使希夫堿的形成處于空間上不利的狀態(tài)。配體通過與E247形成氫鍵以及與F7和F223的π堆積相互作用而牢固地保持在活性位點中，由此允許極小移動以容納調(diào)節(jié)到較長鍵聯(lián)基團區(qū)和形成希夫堿可能需要者。AdoMetDC可通過最初在溶液中與高度密集的反式構(gòu)象相互作用，隨后誘導腺嘌呤堿基旋轉(zhuǎn)成順式構(gòu)象，或可通過結(jié)合已呈順式構(gòu)象的底物/配體來結(jié)合底物/配體，所述底物/配體的溶液平衡濃度較小，并且只需極少量構(gòu)象變化。結(jié)果表明，8位取代將增加呈順式構(gòu)象的抑制劑分子群體，由此增加對AdoMetDC的抑制。然而，AdoMetDC結(jié)合配體的確切機制尚不明了。實驗部分誘變和質(zhì)粒構(gòu)建如先前所述，制造基于pQE30載體的質(zhì)粒，以在大腸桿菌中產(chǎn)生重組野生型和F223A突變體hAdoMetDC，用于結(jié)晶學研究。23這一構(gòu)建體利用MRGS(H)6GS-替換N末端甲硫氨酸以便通過固定金屬親和色譜法進行純化。使用一種也基于PQE30載體的不同質(zhì)粒產(chǎn)生蛋白質(zhì)以用于hAdoMetDC酶分析。在此質(zhì)粒中，(11)6標簽位于羧基端，代替了末端的-QQQQQS。(H)6標簽的位置不會改變純化酶的活性。蛋白質(zhì)表達和純化根據(jù)埃克斯托姆(Ekstrom)等人所述的方案，純化野生型hAdoMetDC。20編碼所述酶的質(zhì)粒在PQE30載體中，并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌JM109菌株的細胞中。在37°C下，使細胞在LB培養(yǎng)基中生長，得到過夜培養(yǎng)物，隨后將其引入較大細胞培養(yǎng)物中，其中兩種培養(yǎng)物都含有100mg/mL氨芐西林。使細胞生長，直到其0.D600值達到0.6，隨后用100mg/L異丙基1-硫基-β-D吡喃半乳糖苷(IPTG)誘導。使細胞在15°C下生長過夜，隨后通過離心收集，使用含有20mMNa2HPO4(pH7.0)、500mMNaCl、2.5mM腐胺、0.02%布里杰-35和IOmM咪唑的洗滌緩沖液洗滌，并在-80°C下存儲。將冷凍的細胞小球解凍，懸浮于洗滌緩沖液中，并使用法式濾壓壺在1500psi下進行溶解。借助離心，在12000g下分離細胞碎片與溶解產(chǎn)物。用洗滌緩沖液平衡塔隆金屬親和色譜樹脂，隨后小心地將溶解產(chǎn)物與樹脂旋轉(zhuǎn)在一起，歷時1.5小時。將樹脂裝載到柱上，并用體積相當于柱體積的15-20倍的洗滌緩沖液洗滌。接下來，以相同方式，用含有25mM咪唑的洗滌緩沖液洗滌柱。隨后，用含有100-200mM咪唑的緩沖液洗脫蛋白質(zhì)。將洗脫的蛋白質(zhì)濃縮到約10ml，并使其通過經(jīng)IOmMHepes(pH7.5)、2.5mM腐胺、5mMDTT,0.ImMEDTA、0.02%布里杰-35和300mMNaCl預平衡的葡聚糖凝膠G-75柱。使緩沖液通過柱，并利用UV在280nm下鑒別含有蛋白質(zhì)的部分。將蛋白質(zhì)濃縮到約IOmg/mL,并在_80°C下存儲。F223A突變體的純化與原生酶類似。結(jié)晶在冰上解凍蛋白質(zhì)，并使用伯樂公司的緩沖液更換色譜柱(伯樂生命醫(yī)學產(chǎn)品有限公司，加州?？死锼?4547)，將緩沖液更換成IOmMHepes(pH7.5)、200mMNaCl和ImMDTT0將原生蛋白質(zhì)與4-6倍摩爾過量的9e和7a—起培育24小時，然后結(jié)晶。將F223A突變體稀釋到約6mg/mL，并且與4_6倍摩爾過量的MeAdoMet—起培育24小時，然后結(jié)晶。使用懸滴法，在22°C下使原生復合物和突變體復合物的晶體在13-16%PEG8000U00mMTris(pH8.0-9.0)和IOmMDTT中生長。一夜間出現(xiàn)晶體并穩(wěn)定1-2周。數(shù)據(jù)收集和處理在利用理學RU-300旋轉(zhuǎn)陽極式發(fā)生器產(chǎn)生的CuKα輻射的布魯克CXD檢測器(BrukerCCDdetector)上的源代碼處收集7a復合物的數(shù)據(jù)。使用ADSC奎騰315檢測器，在先進光子源(APS)NE-CAT束線的8BM基站，收集9e復合物的數(shù)據(jù)。使用ADSC奎騰4檢測器，在CHESS的F2基站收集利用AdoMetDCF223A與MeAdoMet所形成的復合物的數(shù)據(jù)。在液氮或液氮流下快速冷凍所有晶體。晶體的衍射質(zhì)量與晶體的冷凍保護密切相關。將晶體依序轉(zhuǎn)移到含有孔溶液的溶液中，其中所述孔溶液含2%、5%、8%、15%和18%甘油，其中在各步驟間平衡1-2分鐘。將所有復合物的數(shù)據(jù)編入索引中，積分并使用HKL2000(24)程序套件按比例繪圖。數(shù)據(jù)收集統(tǒng)計概述于表1中。結(jié)構(gòu)測定和精修使用結(jié)合MeAdoMet的原生AdoMetDC的結(jié)構(gòu)(PDB1I7B)作為搜索模型，并且使用CNS程序套件，利用分子置換法測定所有復合物的結(jié)構(gòu)。25使用程序0建立7a和9e復合物的模型。26使用程序coot建立AdoMetDCF223A與MeAdoMet的復合物的模型。27利用fo-fc差異圖和合成省略圖測定配體分子的構(gòu)象。使用hic-up服務器產(chǎn)生配體的參數(shù)和拓撲文件。28差異圖還顯示在所有三種結(jié)構(gòu)中結(jié)合腐胺的分子的密度。復合物的精修統(tǒng)計提供于表2中。MeAdoMet在AdoMetDC活性位點中的分子模型利用購自薛丁格公司(Schriidinger，L.L.C)的Macromodel7.2版29測定配體在AdoMetDC活性位點的優(yōu)勢構(gòu)象。將蛋白質(zhì)截短至原子殼層，其包括含有在位于AdoMetDC活性位點中的MeAdoMet的20.O埃內(nèi)的原子的任何殘基(來自pdb1I7B)，并用作構(gòu)象搜索/能量最小化的起始模型。從所述“對接殼層(dockingshell)”中去除水分子，隨后在薛丁格公司蛋白質(zhì)制劑效用的幫助下進行適當氫處理，所述蛋白質(zhì)制劑效用有助于使活性位點氨基酸產(chǎn)生適當離子狀態(tài)和組氨酸互變異構(gòu)體，并通過一系列限制能量最小化法使蛋白質(zhì)的潛在能量梯度減到最小。為進行構(gòu)象搜索，將適當配體加到活性位點中，并且在適當時，使配體氨基末端與丙酮?；g形成共價鍵。使所得結(jié)構(gòu)經(jīng)歷50，000個混合蒙特卡洛MCMM/低模式構(gòu)象搜索步驟3°’31，使在活性位點周圍5埃殼層內(nèi)的殘基能夠在所述搜索的各蒙特卡洛/低模式步驟以及隨后的能量最小化步驟期間自由移動。所有其它蛋白質(zhì)原子都被限制在其初始位置。殘基H5、E67、C226和E247也被限制在其初始位置。當能量梯度低于0.05kJ/mol時，考慮收斂能量最小化步驟。使用距離依賴性介電“常數(shù)”進一步減小到1/4的AMBER*力場32’33進行計算，而且能量最小化依賴于TNCG最小化技術(shù)。34利用能量最小化法進一步精修全局最小值和(收斂后)全局最小值在15kJ/mol內(nèi)的低能量結(jié)構(gòu)集合，直到梯度小于O.OlkJ/mol，此時配體剛好能在此后續(xù)能量最小化程序期間移動。所有蛋白質(zhì)原子在此過程中都被限制在其初始位置。出于完全性考慮，核苷分別以順式和反式構(gòu)象開始，執(zhí)行所述工作。锍離子的AMBER*參數(shù)是由馬克漢姆博士等人所進行的工作改編得到。359e在AdoMetDC活性位點中的模型如上文所述，通過使用利用Macromodel7.2版進行的構(gòu)象搜索，建立9e末端三個原子的模型。由于已通過擬合由X射線衍射法測定的電子密度，以高精確度確定配體與蛋白質(zhì)的剩余部分的位置，故在構(gòu)象搜索期間，蛋白質(zhì)和配體原子中除最后三個非氫原子和其所連接的氫外的所有原子都固定不動。在構(gòu)象搜索期間，圍繞C5-C4和C4-01鍵進行扭轉(zhuǎn)。快速預覽前5種能量最小的結(jié)構(gòu)顯示，其極為相似并且利用所述搜索的全局最小值，以獲得9e中無序的末端原子的坐標。AdoMetDC活性分析和抑制劑IC5tl值測定通過測量14CO2從S-腺苷?；?L_[羧基-14C]甲硫氨酸(安發(fā)瑪西亞生物技術(shù)公司，約60mCi/mmol)中的釋放，來分析AdoMetDC(36)。在這些條件下分析30ngC末端經(jīng)his標記的AdoMetDC，在背景值為30和每納克蛋白質(zhì)每分鐘活性為約1.5pmol下，得到約7000cpm。為了測定化合物抑制AdoMetDC的能力，在無抑制劑的情況下以及在至少5種濃度的各可能抑制劑存在下，測定酶活性。通過曲線擬合抑制劑濃度對AdoMetDC的抑制％的圖，測定IC50值。目標合成在安萊爾科技公司(Analtech)的預涂(250μm)硅膠的GF板上進行TLC分析。在Mel-Temp型數(shù)字式熔點儀(Mel-Tempapparatus)上測定熔點并且未經(jīng)校正。在墨克(Merck)硅膠(230-400目)上進行快速色譜法純化。利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器進行蒸發(fā)，在真空(<1mm，浴溫為35°C)中去除沸點較高的溶劑(DMF、吡啶)。在真空(<Imm)中，在22-25°C下經(jīng)P2O5干燥產(chǎn)物。利用瓦里安-MAT311A質(zhì)譜儀(Varian-MAT3IlAmassspectrometer)以快原子轟擊(FAB)模式，或使用利用電噴霧電離(ESI)的布魯克BIOTOFIKBrukerBI0T0FII)，獲得質(zhì)譜數(shù)據(jù)。1HNMR質(zhì)譜記錄于以300.635MHz操作的尼克萊NT-300NB質(zhì)譜儀(NicoletNT-300NBspectrometer)上。在CDCl3和Me2S0_d6中的化學位移是從四甲基硅烷(TMS)往低磁場移動以百萬分率表示，并且在D2O中的化學位移是從3-(三甲基硅烷基)丙酸-2，2，3.3-山鈉(TMSP)往低磁場移動以百萬分率表示。所列多重峰的化學位移(S)是由近似中心開始測量，并且峰面積的相對積分與所預期的指定結(jié)構(gòu)的積分值一致。UV吸收光譜是通過將各化合物溶解于MeOH或EtOH中，并用0.INHCl、PH7緩沖液或0.INNaOH稀釋10倍，在珀金埃爾默λ19光譜儀(Perkin-ElmerLambda19spectrometer)上測定。括號里的數(shù)字為消光系數(shù)(εX10_3)。顯微分析是由亞特蘭大麥博公司(AtlanticMicrolab,Inc.)(佐治亞州亞特蘭大(Atlanta,GA))或南方調(diào)查研究所(SouthernResearchInstitute)的光譜禾口分析部門(SpectroscopicandAnalyticalDepartment)進行。利用元素符號表示的分析結(jié)果都在理論值的士0.4%內(nèi)，并且其中溶劑是以化學式表示，其存在是通過1HNMR確定。在溶液中，AdoMet維持順式到反式和介于其間的一系列構(gòu)象。AdoMetDC可通過獲得高度密集的反式構(gòu)象，隨后使腺嘌呤堿基旋轉(zhuǎn)成順式構(gòu)象，或通過直接從溶液中獲得呈順式構(gòu)象的配體而無需構(gòu)象變化，來結(jié)合底物/配體。上述結(jié)果顯示，順式構(gòu)象密集的配體的存在將增加對AdoMetDC的抑制。AdoMetDC結(jié)合配體的確切機制尚不明了。表1=AdoMetDC復合物的數(shù)據(jù)收集統(tǒng)計括號里的值是關于最高分辨率殼層。表2=AdoMetDC復合物的精修統(tǒng)計學hAdoMetDCF223A,A,Λ<Γ爪廣“,Α,,,“mimhAdoMetDC+7ahAdoMetDC+9e__+MeAdoMet___'分辨率(A)—2.62“2.431.83“'R因子一0.1980.1910.204表3.蛋白質(zhì)抑制劑抑制hAdoMetDC的能力。如“材料和方法”中所述，分析各可能抑制劑抑制hAdoMetDC的能力。使用至少5種濃度的各化合物，并通過曲線擬合抑制劑濃度對hAdoMetDC抑制％的圖，來計算IC5tl值。圖注下表顯示本發(fā)明各化合物的化學式。已發(fā)現(xiàn)，本申請案中所揭示的化合物可抑制S-腺苷甲硫氨酸羧酶，因此潛在適用于治療哺乳動物且尤其人類的腫瘤和癌癥。此外，本申請案中的化合物適用于治療寄生蟲感染，例如原蟲感染，包括錐蟲病、瘧疾，或由卡氏肺孢子蟲引起的感染肺部炎癥，例如肺部炎癥。圖式說明圖1:hAdoMetDC的晶體結(jié)構(gòu)以及與由模型得到的結(jié)構(gòu)的比較。A.繪示hAdoMetDC在活性位點中與MeAdoMet所形成的實際晶體結(jié)構(gòu)。活性位點的丙酮?；越{紅色顯示。配體碳原子以綠色顯示。MeAdoMet與丙酮?；纬上７驂A。核糖與E247形成兩個氫鍵(以紅色顯示)。腺嘌呤堿基以不常見順式構(gòu)象堆積于F223與F7之間。腺嘌呤堿基與Glu67主鏈之間的氫鍵使順式構(gòu)象穩(wěn)定。B.將由MeAdoMet在AdoMetDC活性位點中的模型(以較深的陰影顯示)得到的結(jié)構(gòu)疊加到所述實際晶體結(jié)構(gòu)(以較淺的形狀顯示)上。模型建立的結(jié)果與實驗測定出的晶體結(jié)構(gòu)一致。圖2hAdoMetDCF223A和hAdoMetDCF7A與MeAdoMet所形成的復合物的模型。MeAdoMet在hAdoMetDC的F223A突變體(A)和F7A突變體(B)活性位點中的模型的全局最小值(有關細節(jié)，參看材料和方法)。丙酮酰基以僅次于最深陰影顯示，并且配體碳原子以僅次于最淺陰影顯示。在這些復合物中，腺嘌呤堿基呈反式構(gòu)象。核糖與E247形成一個氫鍵，并且與C226主鏈羰基形成另一個氫鍵。腺嘌呤堿基與S66形成3個氫鍵。在F7A模型(B.)中，F(xiàn)223殘基改變其構(gòu)象以與呈反式構(gòu)象的MeAdoMet腺嘌呤堿基堆積。圖3=MeAdoMet在AdoMetDCF223A突變體活性位點中的晶體結(jié)構(gòu)。顯示實驗測定出(參看“材料和方法”)的MeAdoMet與AdoMetDCF223A的復合物的結(jié)構(gòu)。配體與連接鏈的碳原子以僅次于最淺陰影顯示。輪廓在2.5巧的lfo-fc密度顯示腺嘌呤堿基呈順式構(gòu)象，以及末端氮與丙酮?；g形成希夫堿。在所述圖的計算中，省略丙酮?；cS69殘基。核糖與E247形成兩個關鍵氫鍵。腺嘌呤環(huán)與F7堆積，并與E67主鏈形成兩個氫鍵。圖4:hAdoMetDC的可能抑制劑的結(jié)構(gòu)。如“材料和方法”中所述，合成所有化合物。圖5:hAdoMetDC與酶的兩種抑制劑的相互作用。A.顯示實驗測定出的hAdoMetDC與MAOEMA的復合物結(jié)構(gòu)(有關細節(jié)，參看材料和方法)。配體與連接鏈的碳原子以僅次于最淺陰影顯示。輪廓在1.0巧的合成省略圖的密度顯示以順式構(gòu)象堆積的腺嘌呤堿基以及希夫堿的形成。出于清楚起見已省略E67。B.顯示實驗測定出的MAOBEA在活性位點中的hAdoMetDC的結(jié)構(gòu)。配體碳原子以僅次于最淺陰影顯示。輪廓在3.Oo的lfo-fc密度顯示，腺嘌呤堿基以順式構(gòu)象堆積。電子密度中不存在希夫堿形成的證據(jù)，并且不存在配體末端3個原子的密度。在所述圖的計算中，省略丙酮?；?。最后三個原子的位置是通過建立模型測定。調(diào)配物本發(fā)明的化合物可以獨立治療劑或治療劑組合的形式通過可供與醫(yī)藥劑聯(lián)合使用的任何常規(guī)方式投予。其可單獨投予，但通常與根據(jù)所選投藥途徑和標準醫(yī)藥實踐選擇的醫(yī)藥載劑一起投予?；衔镞€可與其它治療劑聯(lián)合投予，所述其它治療劑例如干擾素(IFN)、干擾素α-2a、干擾素α-2b、復合干擾素(CIFN)、利巴韋林(ribavirin)、金剛烷胺(amantadine)、金剛乙胺(remantadine)、白細胞介素-12、熊去氧膽酸(UDCA)和甘草甜素(glycyrrhizin)。所屬領域技術(shù)人員眾所周知本文所述的醫(yī)藥學上可接受的載劑，例如媒劑、佐劑、賦形劑或稀釋劑。通常，醫(yī)藥學上可接受的載劑在化學性質(zhì)上對活性化合物呈惰性，而且在使用條件下無有害副作用或毒性。醫(yī)藥學上可接受的載劑可包括聚合物和聚合物基質(zhì)。本發(fā)明化合物可以個別治療劑或治療劑組合的形式通過可供與醫(yī)藥劑聯(lián)合使用的任何常規(guī)方法投予。所投予的劑量當然將視已知因素而變化，例如特定藥劑的藥物動力學特征以及其投藥模式和途徑；接受者的年齡、健康狀況和體重；癥狀的性質(zhì)和程度；同時治療的種類；治療頻率；和所需作用。預期活性成分的每日劑量可為每公斤(kg)體重約0.001到1000毫克(mg)，其中優(yōu)選劑量為0.1到約30mg/kg。劑型(適于投藥的組合物)含有每單位約Img到約500mg活性成分。在這些醫(yī)藥組合物中，活性成分通常以組合物總重量計以約0.5-95重量％的量存在?；钚猿煞挚梢岳缒z囊、片劑和散劑等固體劑型或者例如酏劑、糖漿和懸浮液等液體劑型經(jīng)口投予。其也可以無菌液體劑型不經(jīng)腸投予。活性成分還可經(jīng)鼻內(nèi)(鼻滴液)或通過吸入藥粉霧投予。其它劑型也有可能，例如經(jīng)由貼片機制或油膏透皮投予。適于經(jīng)口投予的調(diào)配物可含有(a)液體溶液，例如有效量的化合物溶解于例如水、生理鹽水或橙汁等稀釋劑中；(b)膠囊、藥包、片劑、錠劑和藥片，其各自含有預定量的固體或顆粒形式的活性成分；(c)散劑；(d)于適當液體中的懸浮液；和(e)適當乳液。液體調(diào)配物可包括稀釋劑，例如水和醇類，例如乙醇、苯甲醇、丙二醇、甘油和聚乙二醇，其中添加或未添加有醫(yī)藥學上可接受的表面活性劑、懸浮劑或乳化劑。膠囊形式可為含有例如表面活性劑、潤滑劑和惰性填充劑(例如乳糖、蔗糖、磷酸鈣和玉米淀粉)的常見硬殼或軟殼明膠型膠囊。片劑形式可包括一種或多種以下物質(zhì)乳糖、蔗糖、甘露糖醇、玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、褐藻酸、微晶纖維素、阿拉伯膠、明膠、瓜爾膠、膠狀二氧化硅、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸鋅、硬脂酸和其它賦形劑、著色劑、稀釋劑、緩沖劑、崩解劑、潤濕劑、防腐劑、調(diào)味劑和藥理學可相容載劑。錠劑形式可包含于調(diào)味劑、通常蔗糖和阿拉伯膠或黃芪膠中的活性成分，并且口含錠包含于例如明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯膠等惰性基質(zhì)中的活性成分，乳液和凝膠除含有活性成分外，還含有例如所屬領域中已知的載劑?？蓪为毣蚺c其它適當組分組合的本發(fā)明化合物制成氣霧劑調(diào)配物以經(jīng)由吸入投予?？蓪⑦@些氣霧劑調(diào)配物放入例如二氯二氟甲烷、丙烷和氮氣等加壓可接受推進劑中。對于非加壓制劑，其也可調(diào)配成例如噴霧器或霧化器中的醫(yī)藥劑。適于不經(jīng)腸投予的調(diào)配物包括水性和非水性、等滲無菌注射溶液，其可含有抗氧化齊、緩沖劑、抑菌劑和使調(diào)配物與預定接受者的血液等滲的溶質(zhì)；以及水性和非水性無菌懸浮液，其可包括懸浮劑、增溶劑、增稠劑、穩(wěn)定劑和防腐劑?；衔锟梢蕴砑踊蛭刺砑俞t(yī)藥學上可接受的表面活性劑(例如肥皂或清潔劑)、懸浮劑(例如果膠、卡波姆(carbomer)、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素或羧甲基纖維素)或乳化劑和其它醫(yī)藥佐劑的醫(yī)藥載劑中的生理學上可接受的稀釋劑投予，所述載劑例如無菌液體或液體混合物，包括水、生理鹽水、右旋糖水溶液和相關糖溶液、醇類(例如乙醇、異丙醇或十六烷醇)、二醇類(例如丙二醇，或聚乙二醇，例如聚(乙二醇)400)、甘油縮酮(例如2，2-二甲基-1，3-二氧戊環(huán)-4-甲醇)、醚類、油、脂肪酸、脂肪酸酯或甘油酯，或者乙?；舅岣视王ァ？捎糜诓唤?jīng)腸調(diào)配物中的油包括石油、動物油、植物油或合成油。油的具體實例包括花生油、大豆油、芝麻油、棉籽油、玉米油、橄欖油、石蠟油和礦物油。適用于不經(jīng)腸調(diào)配物中的適當脂肪酸包括油酸、硬脂酸和異硬脂酸。油酸乙酯和豆蔻酸異丙酯為適當脂肪酸酯的實例。適用于不經(jīng)腸調(diào)配物中的適當肥皂包括脂肪堿金屬鹽、銨鹽和三乙醇胺鹽，并且適當清潔劑包括(a)陽離子清潔劑，例如二甲基二烷基鹵化銨和鹵化烷基吡啶鐺鹽；(b)陰離子清潔劑，例如烷基、芳基和烯烴磺酸酯，烷基、烯烴、醚以及單甘油酯硫酸酯和磺基琥珀酸酯；(c)非離子清潔劑，例如脂肪胺氧化物、脂肪酸烷醇酰胺和聚氧乙烯聚丙烯共聚物；(d)兩性清潔劑，例如β-氨基丙酸烷酯和2-烷基咪唑啉季銨鹽；和(e)其混合物。不經(jīng)腸調(diào)配物通常在溶液中含有約0.5重量％到約25重量％活性成分。所述調(diào)配物中可使用適當防腐劑和緩沖劑。為使注射部位的刺激最小或消除注射部位的刺激，所述組合物可含有一種或多種親水_親脂平衡值(HLB)為約12到約17的非離子表面活性劑。所述調(diào)配物中表面活性劑的量在約5重量％到約15重量％的范圍內(nèi)。適當表面活性劑包括聚乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯，例如脫水山梨糖醇單油酸酯；以及環(huán)氧乙烷與由環(huán)氧丙烷與丙二醇縮合形成的疏水性基質(zhì)的高分子量加合物。所屬領域技術(shù)人員還熟知醫(yī)藥學上可接受的賦形劑。賦形劑的選擇將部分由特定化合物以及用于投予組合物的特定方法決定。因此，有多種適當?shù)谋景l(fā)明醫(yī)藥組合物的調(diào)配物。以下方法和賦形劑僅為例示性的，而并非限制。醫(yī)藥學上可接受的賦形劑優(yōu)選不會妨礙活性成分的作用并且不會引起不利副作用。適當載劑和賦形劑包括例如水、乙醇和丙二醇等溶劑、固體吸收劑和稀釋劑、表面活性劑、懸浮劑、片劑粘合劑、潤滑劑、調(diào)味劑和著色劑。調(diào)配物可存在于單位劑量或多劑量密封容器(例如安瓿和小瓶)中，并且可在冷凍-干燥(凍干)條件下存儲，只需要在即將使用前添加例如注射用水等無菌液體賦形劑即可。即時注射溶液和懸浮液可由無菌粉末、顆粒和片劑制備。所屬領域技術(shù)人員眾所周知關于用于可注射組合物的有效醫(yī)藥載劑的要求。參看制藥學和藥劑實踐(PharmaceuticsandPharmacyPractice)，利平科特公司(J.B.LippincottCo.)，賓夕法尼亞州費城(Philadelphia,PA)，班克(Banker)和查爾姆斯(Chalmers)編，238-250(1982)；和美國衛(wèi)生系統(tǒng)藥師雜志-可注射藥物手冊(ASHPHandbookonInjectableDrugs)，托伊西爾(Toissel)，第4版，622-630(1986)。適于局部投予的調(diào)配物包括錠劑，其包含于調(diào)味劑、通常蔗糖和阿拉伯膠或黃芪膠中的活性成分；口含錠，其包含于例如明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯膠等惰性基質(zhì)中的活性成分；和漱口液，其包含于適當液體載劑中的活性成分；以及乳膏、乳液和凝膠，其除含有活性成分外，還含有例如所屬領域中已知的載劑。另外，適于直腸投予的調(diào)配物可通過與例如乳化基質(zhì)或水溶性基質(zhì)等多種基質(zhì)混合而呈栓劑形式。適于陰道投予的調(diào)配物可呈子宮托、棉塞、乳膏、凝膠、糊劑、泡沫或噴霧配方的形式，其除含有活性成分外，還含有例如所屬領域已知適當?shù)妮d劑。適當?shù)尼t(yī)藥載劑描述于雷氏藥學大全(Remington‘sPharmaceuticalSciences)，麥克出版公司(MackPublishingCompany)(此領域的標準參考書)中。在本發(fā)明的情況下，投予動物、尤其人類的劑量應足以在合理時間段內(nèi)影響動物的治療反應。所屬領域技術(shù)人員將認識到，劑量將取決于多種因素，包括動物的病狀、動物的體重以及所治療的病狀的嚴重程度和階段。適當劑量為將在患者體內(nèi)產(chǎn)生已知影響所需反應的活性劑濃度的劑量。優(yōu)選劑量為引起對所治療的病狀的最大抑制并且無難以處理的副作用的量。劑量大小也將由投藥途徑、時程和頻率以及可能伴隨化合物的投予和所需生理學作用的任何不利副作用的存在、特性和擴展確定。投予本發(fā)明化合物的有用醫(yī)藥劑型可說明如下硬殼膠囊通過用IOOmg粉末狀活性成分、150mg乳糖、50mg纖維素和6mg硬質(zhì)酸鎂分別填充標準兩件式硬質(zhì)明膠膠囊，來制備大量單位膠囊。軟質(zhì)明膠膠囊制備活性成分于例如大豆油、棉籽油或橄欖油等可消化油中的混合物，并借助于正排量泵(positivedisplacementpump)將其注入熔融明膠中以形成含有IOOmg活性成分的軟質(zhì)明膠膠囊。洗滌膠囊并干燥?？蓪⒒钚猿煞秩芙庥诰垡叶肌⒏视团c山梨糖醇的混合物中以制備與水混溶的藥劑混合物。片劑通過常規(guī)程序制備大量片劑，以致劑量單位為IOOmg活性成分、0.2mg膠狀二氧化硅、5mg硬質(zhì)酸鎂、275mg微晶纖維素、Ilmg淀粉和98.Smg乳糖?？赏扛策m當水性和非水性涂層以增加可口性、改良外觀和穩(wěn)定性或延緩吸收。立即釋放片劑/膠囊立即釋放片劑/膠囊為通過常規(guī)和新穎方法制成的固體口服劑型。這些單位是經(jīng)口服用，無需水來使藥物立即溶解和遞送。將活性成分混入含有例如糖、明膠、果膠和甜味劑等成分的液體中。通過冷凍干燥和固態(tài)提取技術(shù)使這些液體凝固成固體片劑或囊片?？蓪⑺幬锘衔锱c粘彈性和熱彈性糖和聚合物或起泡組分一起壓制，以產(chǎn)生預期在無需水的情況下立即釋放的多孔基質(zhì)。此外，本發(fā)明化合物可以鼻滴液或定劑量和鼻或口腔吸入劑的形式投予。所述藥物是由經(jīng)鼻溶液以薄霧形式或由散劑以氣霧劑形式遞送。關于這些申請案，本發(fā)明方法包括對動物、尤其哺乳動物并且更具體地說人類投予治療有效量的有效抑制S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶，或抑制寄生蟲感染，或抑制由卡氏肺孢子蟲引起的感染或瘤形成和腫瘤生長的化合物。前述描述說明和描述了本發(fā)明。此外，本發(fā)明僅展示和描述優(yōu)選實施例，但如上文所述，應了解本發(fā)明能用于各種其它組合、修改和環(huán)境中，并且能在如本文所表述、與上述教示和/或相關技術(shù)的技能或知識相符的概念范圍內(nèi)加以改變或修改。另外，預期本文所述的實施例將說明申請人所知的最佳模式，而且使所屬領域其他技術(shù)人員能夠利用所述或其它實施例中的揭示內(nèi)容，和其特定應用或用途所需的各種修改。因此，預期所述描述將不會局限于本文所述的形式。另外，預期隨附權(quán)利要求書應解釋為包括替代性實施例。所屬領域技術(shù)人員將易于從以上實施方式而對本發(fā)明的其它目的和優(yōu)勢顯而易見，在以上實施方式中，僅簡單地借助于最佳模式的說明展現(xiàn)和描述優(yōu)選實施例。如將意識到的，本發(fā)明能夠具有其它和不同實施例，并且在不偏離本發(fā)明的情況下，可對各個明顯方面的多個細節(jié)加以修改。因此，所述描述應實際上視為說明而非限制。本說明書中所引用的所有公開案、專利和專利申請案都是以引用的方式并入本文中，并用于任何和所有目的，其引用程度就如同將各個別公開案或?qū)＠暾埌妇唧w而個別地以引用的方式并入一般。參考文獻(I)M.L.漢克特(Hackert，Μ.L.)；Α.Ε.佩格(Pegg，Α·Ε·)，丙酮?；蕾囆悦?Pyruvoy1-dependentenzymes.)生物催化綜合(ComprehensiveBiologicalCatalysis)；Μ.L.斯諾特(Sinnott，Μ.L.)編；倫敦學術(shù)出版社(AcademicPressLondon)，1997；第201-216頁。(2)Α·Ε.佩格(Pegg,Α.Ε.)；熊H.(Xiong，H.)；D.費斯(Feith，D.)；L.M.善茲(Shantz,L.M.)，S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶結(jié)構(gòu)、功能和多胺的調(diào)控(S-AdenosylmethionineDecarboxylase!Structure,FunctionandRegulationbyPolyamines.),生物化學會匯干Ij(Biochem.Soc.Trans.)，1998，26，580—586。(3)C.W.塔博(Tabor,C.W.)；H.塔博(Tabor，H.)，多胺(Polyamines).生物化學年鑒(Annu.Rev.Biochem.)，1984，53，749-790。(4)C.W.塔博(Tabor,C.W.)；H.塔博(Tabor,H.)，甲硫氨酸腺苷轉(zhuǎn)移酶(S-腺苷甲硫氨酸合成酶)和S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶(MethionineAdenosyltransferase(S-AdenosylmethionineSynthetase)andS-AdenosylmethionineDecarboxylase).與有關分子生物學領域進展(Advan.Enzymol.RelatedAreasMol.Biol)，1984，56，251-282。(5)P.D.范溥杰(vanPoelje,P.D.)；Ε.Ε.斯尼爾(Snell，E·Ε.)丙酮酰基依賴性酶(Pyruvoyl-d印endentEnzymes).生物化學年鑒(Ann.Rev.Biochem.)，1990，5929-59。(6)H.Μ.瓦雷克(Wallace，H.Μ.)；Α.V.福雷瑟(Fraser，Α.V.)；Α.漢格斯(Hughes,Α.)多胺代謝觀察(APerspectiveofPolyamineMetabolism).生物化學雜志(Biochem.J.)，2003，376，1—14。(7)R.A.,Jr.卡瑟羅(Casero,R.Α.，Jr)；P.瑟拉諾(Celano,P.)；S.J.厄爾文(Ervin,S.J.)；N.B.埃普格倫(Applegren,N.B.)；L.維斯特(ffiest,L.)；Α.E.佩格(Pegg，Α.Ε.)編碼人類亞精胺/精胺m-乙酰轉(zhuǎn)移酶的cDNA克隆的分離和表征(Isolationan(!CharacterizationofacDNAClonethatCodesforHumanSpermidine/SpermineNl-acetyltransferase).生物化學雜志(J.Biol.Chem.)，1991，266，810—4。(8)A.E.佩格(Pegg，A.E.)多胺代謝以及其對于瘤生長和作為化療法的靶的重要性(PolyamineMetabolismanditsImportanceinNeoplasticGrowthandasaTargetforChemotherapy).癌癥研究(CancerRes.)，1988，48，759-774。(9)E.W.吉納(Gerner,Ε.W.)；F.L.，Jr.梅斯肯(Meyskens,F.L.，Jr.)多胺和癌癥老分子，新理解(PolyaminesandCancer:01dMolecules,NewUnderstanding).癌癥自然評論(Nat.Rev.Cancer)，2004，4，781-792。(IO)B.W.梅特卡夫(Metcalf,B.W.)；P.貝(Bey,P.)；C.丹琴(Danzin,C)；M.J.君格(Jung，Μ.J.)；P.卡瑟拉(Casara，P.);J.P.維爾特(Vevert，J.P.)利用底物和產(chǎn)物類似物催化性不可逆抑制哺乳動物鳥氨酸脫羧酶(EC41117)(CatalyticIrreversibleInhibitionofMammalianOrnithineDecarboxylase(EC41117)bySubstrateandProductAnalogs).美國化學協(xié)會雜志(J.Amer.Chem.Soc),1978,100,2551-2553。(Il)M.C比瓦雷(Bewley,Μ.C)；V.格拉澤諾(Graziano,V.)；江J.(Jiang,J.)；Ε·馬茲(Matz，Ε.)；F.W.斯達迪爾(Studier，F(xiàn).W.)；Α.Ε.佩格(Pegg,Α.Ε.)；C.S.克勒曼(Coleman,C.S.)J.Μ.福拉根(Flanagan,J.Μ.)野生型和突變型人類亞精胺/精胺m-乙酰轉(zhuǎn)移酶，一種潛在治療性藥物的靶(StructuresofWild-typeandMutantHumanSpermidine/SpermineNl-Acety!transferase,aPotentialTherapeuticDrugTarget).美國國家科學院院刊(ProcNatlAcadSciUSA)，2006，103，2063-8。(12)L.阿爾霍寧-洪斯托(Alhonen-Hongisto,L.)；P.瑟帕倫(Seppanen,P.)；和J.杰尼(Jarme，J.)細胞內(nèi)腐胺和亞精胺喪失誘導天然多胺和甲基乙二醛雙(脒腙)的攝入增力口(IntracellularPutrescineandSpermidi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甲基锍基-8-甲基腺苷氯化物；5'-脫氧-5'-二甲基锍基腺苷溴化物；5'-脫氧-5'-二甲基锍基腺苷氯化物；5'-[[4-[[(1_乙氧基亞乙基)氨基]氧基]丁基]甲氨基]-5'-脫氧-8-羥基腺苷；5'-[[4-[[(1_乙氧基亞乙基)氨基]氧基]丁基]甲氨基]-5'-脫氧-8-羥基腺苷；5'-[[4-[[(1_乙氧基亞乙基)氨基]氧基]丁基]甲氨基]-5'-脫氧_8-(甲氨基)腺苷；5'-[(乙氧羰基乙基)甲氨基]-5'-脫氧-8-甲基腺苷；5'_[(乙氧羰基乙基)甲氨基]-5'-脫氧-8-乙基腺苷；5'_[(甲酰胺基乙基)甲氨基]-5'-脫氧-8-甲基腺苷硫酸鹽；5'_[(甲酰胺基乙基)甲氨基]-5'-脫氧-8-乙基腺苷硫酸鹽；5'_[(乙氧羰基甲基)甲氨基]-5'-脫氧-8-甲基腺苷；和5'_[(甲酰胺基甲基)甲氨基]-5'-脫氧-8-甲基腺苷硫酸鹽；其醫(yī)藥學上可接受的鹽；其溶劑化物，和其前藥。7.—種醫(yī)藥組合物，其包含有效量的根據(jù)權(quán)利要求1、2、3、4、5或6中任一權(quán)利要求所述的化合物或其醫(yī)藥學上可接受的鹽、或其溶劑化物或其前藥，以及醫(yī)藥學上可接受的載劑。8.一種抑制有需要的宿主的S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶的方法，其包含對所述宿主投予有效量的根據(jù)權(quán)利要求1、2、3、4、5或6中任一權(quán)利要求所述的化合物；其醫(yī)藥學上可接受的鹽、其溶劑化物或其前藥。9.一種治療罹患寄生蟲感染或由卡氏肺孢子蟲(Pneumocystiscainii)引起的感染的宿主的方法，其包含對所述宿主投予有效量的根據(jù)權(quán)利要求1、2、3、4、5或6中任一權(quán)利要求所述的化合物；其醫(yī)藥學上可接受的鹽、其溶劑化物或其前藥。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述感染為原蟲感染。11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述感染為錐蟲病或瘧疾。全文摘要本發(fā)明提供S-腺苷甲硫氨酸甲酯與hAdoMetDCF223A的復合物的晶體結(jié)構(gòu)，所述hAdoMetDCF223A是一種消除F7、腺嘌呤和F223的芳香族環(huán)堆積的突變體。此突變體與所述酯所形成的結(jié)構(gòu)表明，配體利用與F7的π-π相互作用、與Glu67主鏈的氫鍵以及靜電相互作用的幫助，仍能維持順式(syn)構(gòu)象。已合成數(shù)種在腺嘌呤的8位具有各種取代基的AdoMet底物類似物，并分析其抑制hAdoMetDc的能力。為了理解這些結(jié)果，已通過實驗方式確定所述酶抑制劑復合物的虛擬模型以及在活性位點具有5’-脫氧-5’-[N-甲基-N-[2-(氨基氧基)乙基]氨基-8-甲基]腺苷(MAOEMA)和5’-脫氧-5’-[N-甲基-N-[4-(氨基氧基)丁基]氨基-8-乙基]腺苷(MAOBEA)的人AdoMetDC的晶體結(jié)構(gòu)。文檔編號A01N43/04GK101842008SQ200880101632公開日2010年9月22日申請日期2008年8月1日優(yōu)先權(quán)日2007年8月2日發(fā)明者什里達爾·貝爾,史蒂夫·伊利克,安東尼·E·佩格,約翰·A·西克里斯特三世,韋恩·C·吉達,黛安娜·E·麥克洛斯基申請人:南方研究所;康奈爾大學;賓州研究基金會;H·李·莫菲特癌癥中心研究所公司