專利名稱：魚類寄生蟲驅(qū)除劑及魚類寄生蟲驅(qū)除方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種魚類寄生蟲的驅(qū)除劑及驅(qū)除方法。更詳細的涉及將葉酸合成抑制 劑和/或葉酸活化抑制劑作為有效成分的魚類寄生蟲的驅(qū)除劑。尤其涉及寄生在養(yǎng)殖魚中 而成為問題的魚類寄生蟲的驅(qū)除劑以及驅(qū)除方法。
背景技術：
由于在海面養(yǎng)殖中寄生蟲病妨礙穩(wěn)定的生產(chǎn)，所以是非常大的問題。屬于原生動 物亞界纖毛蟲門的海水白點蟲Cryptocaryon irritans寄生在海水魚中而引起白點病。作 為其結(jié)果，寄生魚會衰弱至死。近年，海水白點蟲養(yǎng)殖魚的的寄生在日本養(yǎng)殖業(yè)中成為了深 刻的問題。目前報道了海水白點蟲寄生在比目龜Paralichthys olivaceus、杜氏獅Seriola dumerili、五條腳 Seriola quinqueradiata> 真鯛 PaRurs maior、紅鰭東方鮑 TakifURU rubripes。白點蟲有海水白點蟲和淡水白點蟲Ichthyophthitius multifiliis。海水白點 蟲的生活史和引起淡水魚白點蟲病的淡水白點蟲的生活史類似，重復進行以下生命周期 寄生在魚體內(nèi)且使宿主至死的營養(yǎng)體(成蟲)，從魚體脫離到海水中的原分裂前體，原分裂 前體沉降并附著在水底等處而停止活動的分裂前體(也稱作包囊、耐性卵)，從分裂前體再 次放出并尋找成為寄生宿主的魚的在水中浮游的掠食體(幼蟲)的階段。營養(yǎng)體寄生在魚 的表皮和腮的上皮組織，從宿主的組織攝取營養(yǎng)，并長到用眼睛能看得見的大小。掠食體對藥物比較弱，可以比較容易地殺死，壽命也短。帚體(phoront，寄生后的 幼蟲)進入到魚體表的真皮附近的表皮層而成為成蟲(營養(yǎng)體)，所以難以將它們從魚的體 表的外側(cè)用藥物驅(qū)除。包囊也有外殼包裹，用藥物難以驅(qū)除。因此，為了驅(qū)除白點蟲，需要 定期重復進行藥浴，驅(qū)除沒有進入體表的真皮層的掠食體或營養(yǎng)體來減少白點蟲的數(shù)量， 最終切斷增殖循環(huán)。盡管采用這種花費時間進行驅(qū)除的方法，但還是存在抑制不了魚的斃 死受害的情況。作為口服給藥制劑，對于真鯛的白點病，氯化溶菌酶作為水產(chǎn)用藥品被認可。另 夕卜，乳鐵蛋白也作為水產(chǎn)用添加劑而市售(專利文獻1)。據(jù)報道，如果將乳鐵蛋白按40mg/ kg魚體重/天的比例口服給藥，則在28天的實驗期間，沒有發(fā)現(xiàn)感染，與此相對，給與無添 加飼料的魚死亡了大半。目前認為氯化溶菌酶或乳鐵蛋白的作用機理是提高宿主魚的非特 異性機體防御功能，其效果有限(非專利文獻1)。期待通過口服給藥就能夠直接驅(qū)除寄生 蟲的寄生蟲藥。已知磺胺劑是具有磺胺基的抗菌劑，并已知機制是抑制細菌的葉酸合成。另外，作 為與磺胺劑同樣地通過與葉酸相關的機制顯示抗菌作用的藥劑有作為葉酸代謝拮抗劑已 知的甲氧芐氨嘧啶、奧美普林等。甲氨蝶呤、氨基蝶呤是葉酸的衍生物，分別作為抗癌劑、滅 鼠劑使用。磺胺間二甲氧嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶與奧美普林的配合劑是所 謂的抗菌、抗生素的類別，作為水產(chǎn)用藥品而被認可?；前穭┰臼强咕鷦?，已知對人的瘧 疾，或者作為動物用藥品對動物或者雞球蟲 病等有效(專利文獻2)。
專利文獻1 日本特開平9-301807號專利文獻2 日本特公昭51-16346號非專利文獻1:小川和夫(2004):原蟲癥.魚介類O感染癥·寄生蟲(若林久 嗣·室賀清邦編)，恒星社厚生閣，pp. 285-320。非專利文獻2 =Dickerson,H. W.，Dawe，D. L. (1995) Ichthyophthiriusmultifiliis and Cryptocaryon irritans(Phylum Ciliophora). In :ffoo, P.Τ.K. (Ed), Fish Diseases and Disorders. Protozoan and Metazoan Infection, vol. 1, CABInternational, UK, pp. 181-227.

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明要解決的問題本發(fā)明的課題是提供一種魚類寄生蟲的驅(qū)除劑，特別是白點蟲的驅(qū)除劑。解決問題的手段本發(fā)明人等為了獲得作為魚類的寄生蟲驅(qū)除劑而有效的物質(zhì)，對廣泛范圍的化合 物反復進行了研究。雖然研究了很多作為動物用的寄生蟲藥已知的物質(zhì)，但是由于就寄生 蟲而言寄生蟲本身也分為很多種類，且宿主也各種各樣，所以即使動物的抗寄生蟲病藥對 動物的寄生蟲病有效，但不一定對魚類的寄生蟲病也有效，一直也沒有發(fā)現(xiàn)對白點蟲有效 的物質(zhì)。其中，發(fā)現(xiàn)具有與葉酸代謝有關的機制的物質(zhì)對白點蟲有效，從而完成了本發(fā)明。本發(fā)明提供以下的(1) (10)的寄生蟲驅(qū)除劑。(1) 一種魚類的寄生蟲驅(qū)除劑，其中，含有葉酸合成抑制劑和/或葉酸活化抑制劑 作為有效成分。(2)根據(jù)(1)所述的寄生蟲驅(qū)除劑，該寄生蟲驅(qū)除劑是葉酸合成抑制劑和葉酸活 化抑制劑的合劑。(3)根據(jù)⑴或⑵所述的寄生蟲驅(qū)除劑，其中，所述葉酸合成抑制劑為磺胺劑。(4)根據(jù)(3)所述的寄生蟲驅(qū)除劑，其中，所述磺胺劑是磺胺甲基異噁唑、磺胺間 甲氧嘧啶、磺胺間二甲氧嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺異噁唑、磺胺二甲異嘧啶、磺胺甲噻二 唑、磺胺異唑、以及它們的藥學上可接受的鹽中的任意一種。(5)根據(jù)(1)至(4)中的任一項所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除劑，其中，所述葉酸活化 抑制劑為二氫葉酸還原酶抑制劑。(6)根據(jù)(1)至(4)中的任一項所述的寄生蟲驅(qū)除劑，其中，所述葉酸活化抑制劑 為嘧啶甲胺、甲氧芐氨嘧啶、奧美普林、甲氨蝶呤、二甲葉酸、蝶羅呤、氨基蝶呤、依達曲沙、 吡曲克辛、以及它們的藥學上可接受的鹽中的任意一種。(7)根據(jù)⑴至(6)中的任一項所述的寄生蟲驅(qū)除劑，其中，所述寄生蟲是屬于魚 類原生動物亞界的寄生蟲。(8)根據(jù)(7)所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除劑，其中，所述寄生蟲是屬于魚類原生動物 亞界纖毛蟲門的寄生蟲。(9)根據(jù)⑶所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除劑，其中，所述寄生蟲為白點蟲。(10)根據(jù)⑴至(9)中的任一項所述的魚 類的寄生蟲驅(qū)除劑，其中，所述魚類是鱸 形目、鰈形目、鯡形目、飩形目、鯉形目、鰻鱺目或鲇形目的魚類。
另外，本發(fā)明提供以下(11) (21)的魚類的寄生蟲驅(qū)除方法。(11) 一種魚類的寄生蟲驅(qū)除方法，其特征是，用葉酸合成抑制劑和/或葉酸活化 抑制劑對所述魚類進行給藥。(12)根據(jù)(11)所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除方法，其特征是，用葉酸合成抑制劑和葉 酸活化抑制劑的合劑進行給藥。(13)根據(jù)(11)或(12)所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除方法，其中，所述葉酸合成抑制劑 為磺胺劑。(14)根據(jù)(13)所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除方法，其中，所述磺胺劑是磺胺甲基異噁 唑、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺間二甲氧嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺異噁唑、磺胺二甲異嘧啶、磺 胺甲噻二唑、磺胺異唑、以及它們的藥學上可接受的鹽中的任意一種。(15)根據(jù)(11)至(14)中的任一項所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除方法，其中，所述葉酸 活化抑制劑為二氫葉酸還原酶抑制劑。(16)根據(jù)(11)至(14)中的任一項所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除方法，其中，所述葉酸 活化抑制劑為嘧啶甲胺、甲氧芐氨嘧啶、奧美普林、甲氨蝶呤、二甲葉酸、蝶羅呤、氨基蝶呤、 依達曲沙、吡曲克辛、以及它們的藥學上可接受的鹽中的任意一種。(17)根據(jù)(11)至(16)中的任一項所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除劑，其中，所述寄生蟲 是屬于魚類原生動物亞界的寄生蟲。(18)根據(jù)(17)所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除方法，其中，所述寄生蟲是屬于魚類原生 動物亞界纖毛蟲門的寄生蟲。(19)根據(jù)(18)所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除方法，其中，所述寄生蟲為白點蟲。(20)根據(jù)(11)至(19)中的任一項所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除方法，其中，所述魚類 是鱸形目、鰈形目、鯡形目、飩形目、鯉形目、鰻鱺目或鲇形目的魚類。(21)根據(jù)(11)至(20)中的任一項所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除劑，其中，根據(jù)魚的體 重，以1 1000mg/kg 口服給藥葉酸合成抑制劑和/或葉酸活化抑制劑。發(fā)明效果通過本發(fā)明的魚類寄生蟲驅(qū)除劑，可以驅(qū)除魚類的寄生蟲特別是屬于纖毛蟲的寄 生蟲。特別是對在養(yǎng)殖界成為問題的白點蟲有效。本發(fā)明的白點蟲驅(qū)除劑可以口服給藥， 特別是可以通過與飼料進行混合后喂食的方法給藥，對于寄生在魚體的寄生蟲也能發(fā)揮生 長抑制效果或者殺蟲效果。


圖1是將實施例1的結(jié)果用對照區(qū)的寄生數(shù)作為1時的各區(qū)的寄生數(shù)表示的圖。圖2是在實施例2中寄生在暴露3天后的各區(qū)真鯛腮中的白點蟲照片。細長的是鰓，附著在上面的呈黑色圓形至橢圓形的是白點蟲。圖中，(a)為喂食無藥劑添加飼料的對 照區(qū)；(b)是將磺胺間二甲氧嘧啶按216mg/kg魚體重/天和甲氧芐氨嘧啶按24mg/kg魚體 重/天口服給藥3天的區(qū)；(c)是將磺胺甲基異噁唑按429mg/kg魚體重/天和甲氧芐氨嘧 啶按86mg/kg魚體重/天口服給藥3天的區(qū)。圖3是表示實施例2的結(jié)果，顯示了暴露3天后的寄生蟲長度的比較。在圖3中， * 表示 P < 0. 01。
圖4是表示實施例3和4的各區(qū)寄生蟲的生長率的圖。比較了將對照區(qū)作為100時 的白點蟲的大小。各區(qū)測定的白點蟲數(shù)均為60個體。在圖4中，最左側(cè)的棒狀圖(control 對照區(qū))表示沒有投藥時的結(jié)果，從左起第2 8個棒狀圖分別表示將葉酸合成抑制劑 (SDMX，SMXZ, SMMX, SMDN, SID, SMZ以及SIZ)按300mg/kg魚體重/天給藥3天后的結(jié)果，從 左起第9 12個棒狀圖分別表示將葉酸活化抑制劑(MTX，PRY, TMP以及PMD)按60mg/kg 魚體重/天給藥3天后的結(jié)果，最右側(cè)的棒狀圖(SDMX+TMP)表示將葉酸合成抑制劑SDMX 按216mg/kg魚體重/天和葉酸活化抑制劑TMP按24mg/kg魚體重/天給藥3天后的結(jié)果。 全部的區(qū)與對照區(qū)比較均有顯著性差異(P ( 0. 01). 圖5是表示實施例5的試驗概要的圖。圖6中，(a)是表示實施例5的暴露第3天的對照區(qū)2的寄生數(shù)的圖；(b)是表示 實施例5的暴露第5天的各區(qū)的寄生數(shù)進行比較的圖。圖7是表示實施例5的各區(qū)的(a)包囊數(shù)和(b)包囊大小進行比較的圖。(a)表 示暴露5天后、9天后的各區(qū)的包囊數(shù)。在(a)中，白色棒狀圖(口)表示暴露5天后的結(jié) 果，黑色棒狀(■)表示暴露9天后的結(jié)果。(b)表示暴露5天后的各區(qū)的包囊長度。在 (a)禾Π (b)中，* 表示 P < 0. 01。圖8是表示實施例5的各區(qū)的斃死數(shù)進行比較的圖。圖9中，(a)是表示實施例6的無投藥區(qū)暴露3天后的對照區(qū)2的寄生數(shù)的圖；(b) 是表示實施例6的暴露5天后的各區(qū)的包囊長度進行比較的圖。在(a)和(b)中，*表示P < 0. 01。圖10是表示實施例6的各區(qū)斃死數(shù)進行比較的圖。圖11是表示實施例7的暴露3天后的對照區(qū)2的寄生數(shù)的圖。圖12中，(a)是表示實施例7的各區(qū)暴露5天后的平均寄生數(shù)的圖；(b)是表示實 施例7的各區(qū)的暴露5天后的平均寄生蟲長度的圖。在(b)中，*表示P <0.05。圖13是表示實施例7的暴露后的各區(qū)寄生數(shù)的變化的圖。圖14是表示實施例7的各區(qū)斃死數(shù)進行比較的圖。圖15中，(a)是表示實施例8的暴露3天后的各區(qū)紅鰭東方飩的白點蟲寄生數(shù) (平均寄生數(shù))進行比較的圖；(b)是表示實施例8的寄生在暴露3天后的各區(qū)紅鰭東方飩 中的白點蟲的寄生蟲長度(平均寄生蟲長度)進行比較的圖。在(b)中，*表示P <0.01。圖16中，(a)是表示實施例9的暴露3天后的各區(qū)比目魚的白點蟲寄生數(shù)(平均 寄生數(shù))進行比較的圖；(b)是表示實施例9的寄生在暴露3天后的各區(qū)比目魚中的白點 蟲的寄生蟲長度(平均寄生蟲長度)進行比較的圖。在(a)中，*表示P <0.05，#表示P < 0. 01。在(b)中，* 表示 P < 0. 01。圖17中，(a)是表示實施例10的暴露3天后的各區(qū)杜氏螄的白點蟲寄生數(shù)(平 均寄生數(shù))進行比較的圖；(b)是表示實施例10的寄生在暴露3天后的各區(qū)杜氏螄中的白 點蟲的寄生蟲長度(平均寄生蟲長度)進行比較的圖。在(a)中/表示P <0.05;在(b) 中，*表示P < 0. 01。圖18中，(a)是表示實施例11的暴露3天后的各區(qū)七帶石斑魚的白點蟲寄生數(shù) (平均寄生數(shù))進行比較的圖；(b)是表示實施例11的寄生在暴露3天后的各區(qū)七帶石斑魚 中的白點蟲的寄生蟲長度(平均寄生蟲長度)進行比較的圖。在(a)中，*表示P<0.05;在(b)中，* 表示 P < 0.05，** 表示 P <0.01。圖19是表示實施例12的暴露第3天和第7天的各區(qū)寄生數(shù)進行比較的圖。圖20是拍攝了實施例12的暴露第9天的受試魚(黑龍睛金魚(Carassiusauratus auratus))的淡水白點蟲寄生狀況的圖。(a)表示對照區(qū)的感染第9天的狀況。在受試魚 的體表能看見無數(shù)的白點蟲。(b)表示將ΑΜΜΧ+0ΜΡ的配合劑進行給藥的區(qū)的感染第9天的 狀況。與對照區(qū)比較幾乎看不到白點蟲。
具體實施例方式在本發(fā)明中魚類包括海產(chǎn)魚、淡水魚的任意魚種。從實用上是需要驅(qū)除寄生蟲的、 作為養(yǎng)殖魚或者觀賞魚而對待的魚種。其中在產(chǎn)業(yè)上特別重要的是養(yǎng)殖魚，例如飩形目飩 形科的紅鰭東方飩、鱸形目鯔科的石斑魚、鱸形目麗魚科的羅非魚、鲇形目鲇形科或者鯉形 目鲇形科的鲇魚等已知會寄生白點蟲等魚類寄生蟲的魚種，或者存在寄生魚類寄生蟲的可 能性的魚種，可以將本發(fā)明的藥劑用作預防或者治療。成為本發(fā)明的對象的魚種包括生活在淡水或海水中的全部年齡的養(yǎng)殖魚、水族館 或者商業(yè)的觀賞魚。特別是作為已知會寄生白點蟲等的魚種，養(yǎng)殖魚為鱸形目、鰈形目、鯡 形目、飩形目、鯉形目、鰻鱺目、鲇形目、鼠鯖目的魚類等，是五條螄類、石斑魚類、鯛類、比 目魚類、鮭魚類、飩魚類、鯉魚類、鰻魚類、鲇魚類的魚。具體可以舉出杜氏螄、長鰭杜氏螄 (Greater amberjack Seriola dumerili)、五條螄(hamachi)、黃尾螄、竹夾魚、條紋鰺、鮐 魚、鱸魚、真鯛、條石鯛、斑石鯛、羅非魚、軍曹魚、赤點石斑魚、褐石斑魚、七帶石斑魚、點帶 石斑魚、駝背鱸、花斑刺鰓鯧、鞍帶石斑魚、斜帶石斑魚、褐菖鈾、北方藍鰭金槍魚、南方藍鰭 金槍魚、大眼金槍魚、黃鰭金槍魚、長鰭金槍魚、比目魚、條斑星鰈、圓斑星鰈、大菱鲆、大比 目魚、虹鱒、大西洋鮭、銀鮭魚、紅鮭、香魚、紅鰭東方飩、絲背細鱗飩、黃高鰭刺尾魚、鯉魚、 日本鰻鱺、歐洲鰻鱺、斑點叉尾鮰、虱目魚(Milkfish)等。本發(fā)明中的寄生蟲是原蟲。寄生在魚類中的原蟲類分類在鞭毛蟲、纖毛蟲、頂復 體、微孢子蟲的動物門。本發(fā)明對其中的白點蟲所屬的纖毛蟲特別有效。具體可以舉出屬 于纖毛蟲的白點蟲(Ichthyophthirius multifiliis、Crvptocaryon irritans)、車輪蟲 (Trichodina sp.)、斜管蟲(Chilodonella Sp.)、動基片綱類的布魯克原蟲(Brooklynella hostilis)、纖毛蟲(義夕一子力)(海洋尾絲蟲(Uronemamarinum)、盾纖蟲(Philasterides dicentrarchi)、貪食邁阿密蟲(Miamiensis avidus)、暗尾絲蟲(Uronema nigricans)、尾 絲蟲(Uronema sp.))等。對海水白點蟲、淡水白點蟲尤其有效。本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)葉酸合成抑制劑、葉酸活化抑制劑等具有抑制葉酸功能的機制的 藥劑具有驅(qū)除魚類寄生蟲的作用。這些藥劑不僅能夠驅(qū)除寄生蟲，還可以抑制寄生蟲的生 長。這表示白點蟲是自己合成葉酸，并將葉酸作為其生存、生長的必須成分的原蟲。將葉酸 合成抑制劑和葉酸活化抑制劑的合劑進行給藥的結(jié)果，確認了更加明顯的生長抑制和驅(qū)蟲 效果。極少數(shù)的該蟲變成了包囊，但是其大小與對照區(qū)相比顯著地小。對這些包囊進行12 天觀察的結(jié)果，觀察到孵化延遲或者包囊產(chǎn)生異常，處于不能正常生長的狀態(tài)。因此，具有 阻礙葉酸的合成或其利用的作用的藥劑對驅(qū)除魚類的寄生蟲有效。在本發(fā)明中的葉酸合成抑制劑是作為抗菌劑已知 的藥物群。細菌將鳥苷作為原料 經(jīng)過數(shù)階段的反應而生物合成2-氨基-4-羥基-6-羥基甲基二氫蝶啶焦磷酸，對其加成對氨基苯甲酸(PABA)而成為二氫蝶呤酸(DHP)。催化該反應的酶是DHP合成酶，以磺胺劑為 代表的葉酸合成抑制劑作起到PABA的代謝拮抗劑的作用，抑制DHP的合成。其結(jié)果，導致 細菌不能生物合成葉酸。四氫葉酸(THF)是嘌呤或胸腺嘧啶等核酸堿基或者蛋氨酸、絲氨 酸、甘氨酸等氨基酸的生物合成所必需的輔酶，所以其合成如果受抑制則細菌的增殖受抑 制。另一方面，以人為代表的高等動物沒有DHP合成路線，將從外部攝取的葉酸還原而合成 THF，所以不受磺胺劑的影響?？菇Y(jié)核藥物對氨基水楊酸或者抗麻風病藥物二氨基二苯基砜 也以相同的機理顯示抗菌活性?；前穭┦菍σ詫Π被交酋０纷鳛榛竟羌埽０坊桓?種雜環(huán)取代的化合物群的總稱。作為磺胺劑合成了多達數(shù)千種的化合物，但是作為用于本 發(fā)明的磺胺劑是確認了對人或者動物的效果和安全性的化合物，特別是優(yōu)選使用作為魚類 用抗菌劑使用的磺胺劑。作為此類磺胺劑可以舉出磺胺甲基異噁唑、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺 間二甲氧嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺異噁唑、磺胺二甲異嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺異唑，進 一步作為其它的磺胺劑可以舉出磺胺二甲嘧啶(sulfadimidine) (sulfamethazine)、磺胺 喹沙啉、磺胺嘧啶(sulfadiazine)、磺胺胍、磺胺醋酰、磺胺甲氧基噠嗪、磺胺乙氧基噠嗪、 磺胺氯吡嗪、磺胺氯噠嗪、柳氮磺胺吡啶、磺胺曲沙唑、磺胺噻唑、磺胺苯酰、磺胺多辛、磺胺 硝苯、氨苯磺胺、磺胺吡啶、磺胺溴甲嘧啶、磺酰氨苯砜(sulfamoildapsone)、10_脫氮氨基 蝶呤(pralatrexate，下一代葉酸拮抗劑)等。 本發(fā)明中的葉酸活化抑制劑是指葉酸合成抑制劑以外的與葉酸的代謝相關的、被 稱為葉酸活化抑制劑、葉酸拮抗劑、葉酸類似物等的藥物。作為主要的葉酸活化抑制劑，已 知的有二氫葉酸還原酶抑制劑。它是將二氫葉酸還原成活化型的四氫葉酸的酶的抑制劑。 已知它們還可以作為與葉酸合成抑制劑進行組合的合劑來利用，作為抗菌劑能夠顯示協(xié)同 效果。另外，被稱為葉酸拮抗劑或者葉酸類似物的具有與葉酸類似結(jié)構(gòu)、也是通過酶抑制等 來抑制葉酸的活化的藥物也已知。作為此類葉酸活化抑制劑，已知的有嘧啶甲胺、甲氧芐 氨嘧啶、奧美普林、甲氨蝶呤、二甲葉酸、蝶羅呤、氨基蝶呤、依達曲沙、吡曲克辛、雙氨藜蘆 嘧啶、噴他脒、培美曲塞(pemetrexed)、曲美沙特等。本發(fā)明的寄生蟲驅(qū)除劑可以通過口服給藥來發(fā)揮效果。另外，還可以通過將魚浸 泡在溶解有藥劑的液體中的藥浴來給藥或者通過注射來給藥。對于本發(fā)明的寄生蟲驅(qū)除劑的給藥量，在口服給藥的情況下，每1天對魚體重Ikg 給1 2000mg/g的有效成分葉酸合成抑制劑、葉酸活化抑制劑或者所述葉酸合成抑制劑和 葉酸活化抑制劑的合劑，優(yōu)選在1 1000mg/kg的范圍內(nèi)給藥。另外，1次的給藥期間為1 15天較為適當。如果是作為封閉體系的水槽，還可能將寄生蟲完全消滅，但是在與外海接 觸的魚簍中，根據(jù)其環(huán)境寄生蟲的生存、殘存狀態(tài)是各種各樣的，所以優(yōu)選在掌握魚的健康 狀態(tài)、寄生蟲的寄生狀態(tài)的同時，重復進行停藥期間和上述的給藥。例如，如果是磺胺間甲 氧嘧啶與奧美普林的合劑、或者是磺胺間二甲氧嘧啶與嘧啶甲胺的合劑的情況下，通過每1 天對魚體重Ikg給藥25 500mg，口服給藥3 15天，可以獲得足夠的效果。優(yōu)選考慮寄 生蟲的生命周期的同時重復進行給藥。另外，可以在養(yǎng)殖水中溶解驅(qū)除劑，將魚浸漬于其中，直接接觸。在這種情況下，在 溶解后有效成分的濃度為0. 5 500ppm的養(yǎng)殖水中，放入受試魚，接觸10分鐘 15天。如 果是注射，一次給藥0. 1 200mg/kg，優(yōu)選0. 5 100mg/kg。另外，此時的給藥期間為1 15天比較合適。
本發(fā)明的寄生蟲驅(qū)除劑除了單獨使用作為有效成分的上述化合物以外，根據(jù)需要 可以與其它物質(zhì)組合使用，其他物質(zhì)例如是載體、穩(wěn)定劑、溶劑、賦形劑、稀釋劑等輔助性成 分。葉酸合成抑制劑、葉酸活化抑制劑是廣泛用于人、動物，且對魚類也作為抗菌劑使用的 化合物，已知有各種制劑。用于本發(fā)明的目的時也可以使用它們所使用的制劑。另外，形態(tài)也可以是粉末、顆粒、片劑、膠囊等通常用于這些化合物的形態(tài)中的任 一種。如果是對化合物的味道或者氣味敏感的魚，可以通過包衣等方法防止飼料的嗜好性 的降低，并且可以使化合物難以漏出。如果是魚類，通常將口服給藥的藥劑添加到飼料中使用。將本發(fā)明的寄生蟲驅(qū)除 劑添加到飼料中時，優(yōu)選使用考慮到了各種魚種所必需的營養(yǎng)成分或者物性的飼料。通常 使用將魚粉、糟糠類、淀粉、礦物質(zhì)、維生素、魚油等進行混合的團粒狀的物質(zhì)，或者將沙丁 魚等冷凍魚和在魚粉中添加有維生素等的粉末飼料(mash)進行混合的團粒狀物質(zhì)等。根 據(jù)魚的種類、大小，1天的攝食量大致已確定，所以在飼料中添加換算量的本寄生蟲驅(qū)除劑， 使其達到上述的用法用量。本寄生蟲驅(qū)除劑可以將1日量進行1次給藥，也可以分成數(shù)次 給藥。以下記載了本發(fā)明的實施例，但本發(fā)明不被這些所限定。在本實施例中使用的藥劑是以下制品?！せ前烽g甲氧嘧啶+奧美普林配合劑(Sulfamonomethoxine，Ormetoprim)商品名“水產(chǎn)用Ekuteshin”，制造銷售商明治制果株式會社，制造商第一精細 化工株式會社 磺胺間甲氧嘧啶(Sulfamonomethoxine)商品名“水產(chǎn)用Daimeton Soda”，制造銷售商明治制果株式會社，制造商第一 精細化工株式會社·磺胺異唑鈉(Sulfisozole Na)商品名“ Isuran Soda”，銷售商先靈葆雅動物保健公司，制造銷售商SERACHM株 式會社 磺胺甲基異噁唑(Sulfamethoxazole)、磺胺間二甲氧嘧啶(Sulfadimethoxine)、 磺胺二甲異嘧啶標準品(Sulfisomidine)、嘧啶甲胺(Pyrimethamine)、甲氧芐氨嘧啶 (Trimethoprim)、甲氨蝶呤(Methotrexate)，和光純藥株式會社制造，試劑·奧美普林標準品(Ormetoprim)，關東化學株式會社，試劑·羥乙基磺酸戊雙脒鹽(Pentamidine Isetionate Salt)、磺胺甲基嘧啶 (Sulfamerazine)、磺胺甲噻二唑(Sulfamethizole)，SIGMA-ALDRICH Janpan 公司制造，試 劑在實施例中，記載了在團粒中添加藥劑的情況下，是將藥劑溶解于含有低糖化還 原糖漿(Esui-30，日研化成株式會社制造)的水溶液中，涂撒在團粒的表面來使用的。實施例1口服給藥葉酸合成抑制劑和葉酸活化抑制劑對真鯛的白點蟲寄生的驅(qū)蟲效果-1試驗方法在200升水槽中飼 養(yǎng)約7天70尾平均魚體重約20g的真鯛，并在25 °C 的水溫中進行馴化。在此期間喂食市售飼料(日本水產(chǎn)株式會社制造，直徑為2. 5mm的初 期試料EP (expanded)團粒)，將喂食率設為魚體重的2%。注水設為2.4升/分鐘。寄生蟲感染是通過使200升的水槽停水，并投入約20萬個體的白點蟲孵化幼蟲，使魚暴露在寄生蟲中1小時來進行。暴露后，分別在7座100升水槽中各收容10尾。飼養(yǎng)期間的注水設 為1. 2升/分鐘。連續(xù)3天喂食含藥劑的試驗飼料，其喂食時間是暴露于幼蟲后從收容在 100升水槽開始2小時后，暴露1天、2天后。試驗飼料的喂食率為魚體重的2%。從暴露開 始3天后，將全部的魚進行取樣，對寄生在左側(cè)鰓的白點蟲進行計數(shù)。并且，同時觀察寄生 蟲的大小。試驗區(qū)設定了將嘧啶甲胺按8mg/kg魚體重/天口服給藥3天的區(qū)、將甲氧芐氨 嘧啶按50mg/kg魚體重/天口服給藥3天的區(qū)、將磺胺間甲氧嘧啶按300mg/kg魚體重/天 口服給藥3天的區(qū)、將磺胺甲基嘧啶鈉按50mg/kg魚體重/天口服給藥3天的區(qū)、將磺胺間 二甲氧嘧啶按216mg/kg魚體重/天和將甲氧芐氨嘧啶按24mg/kg魚體重/天口服給藥3 天的區(qū)、將磺胺甲基異噁唑按429mg/kg魚體重/天和將甲氧芐氨嘧啶按86mg/kg魚體重/ 天口服給藥3天的區(qū)、喂食無藥劑添加飼料的對照區(qū)，共計7個區(qū)。將規(guī)定量的各藥劑添加 到濕性飼料(將魚粉、魚油、活性谷蛋白、瓜爾豆膠、維生素組合、礦物質(zhì)組合、飼料油、大豆 卵磷脂分別按80、3、2、4、3、6、2重量％的比例進行混合，在該粉體中加入重量為粉體重量 的30%的水，充分混合并制成團粒狀的物質(zhì))中作為試驗飼料。效果的判斷通過比較寄生數(shù)，觀察寄生蟲形態(tài)來進行。寄生蟲形態(tài)的觀察結(jié)果，判明在全部的藥劑給藥區(qū)中，寄生在真鯛的鰓中的該蟲 的大小與對照區(qū)相比小。該蟲長度在對照區(qū)中為約350μπι，在全部的藥劑給藥區(qū)中為100 至250 μ m。該結(jié)果表示葉酸合成抑制劑和葉酸活化抑制劑共同抑制該蟲的生長。因此，明 確了該蟲是自己合成葉酸的寄生蟲，可以通過對此進行阻礙來抑制其生長。寄生數(shù)的結(jié)果 如圖1所示。在嘧啶甲胺給藥區(qū)、甲氧芐氨嘧啶給藥區(qū)、磺胺間二甲氧嘧啶和甲氧芐氨嘧啶 給藥區(qū)、以及磺胺甲基異噁唑和甲氧芐氨嘧啶給藥區(qū)中顯示了寄生蟲數(shù)多的傾向。該結(jié)果 被認為是由于該蟲的生長極端被抑制，所以該蟲從用于形成包囊的宿主脫離的晚的原因。 在海水溫度25°C左右的白點蟲的生活過程是首先經(jīng)過約4天由包囊孵化成30 μ m左右的 幼蟲，它寄生在宿主的鰓或體表約3天從宿主攝取營養(yǎng)物質(zhì)而生長到350 μ m左右。生長后 的該蟲從宿主脫離而成為包囊。實施例2口服給藥葉酸合成抑制劑和葉酸活化抑制劑對真鯛的白點蟲寄生的驅(qū)蟲效果_2試驗方法在200升水槽中飼養(yǎng)約7天24尾平均魚體重約39g的真鯛，并在25 °C 的水溫中進行馴化。在此期間喂食市售飼料(日本水產(chǎn)株式會社制造，直徑為2. 5mm的初 期試料EP (expanded)團粒)，將喂食率設為魚體重的2%。注水設為2.4升/分鐘。寄生 蟲感染是通過使200升的水槽停水，并投入約17萬個體的白點蟲孵化幼蟲，使魚暴露在寄 生蟲中1小時來進行。暴露后，分別在3座100升水槽中各收容8尾。飼養(yǎng)期間的注水設 為1. 2升/分鐘。連續(xù)3天喂食含藥劑的試驗飼料，該時間是暴露于幼蟲后從收容在100 升水槽開始2小時后，暴露1天、2天后。試驗飼料的喂食率為魚體重的2%。從暴露開始 3天后，將全部的魚進行取樣，測定了寄生于鰓的白點蟲長度。試驗區(qū)設定了將磺胺間二甲氧嘧啶按216mg/kg魚體重/天和將甲氧芐氨嘧啶按 24mg/kg魚體重/天口服給藥3天的區(qū)、將磺胺甲基異噁唑按429mg/kg魚體重/天和將甲 氧芐氨嘧啶按86mg/kg魚體重/天口服給藥3天的區(qū)、喂食無藥劑添加飼料的對照區(qū)，共計3個區(qū)。將規(guī)定量的各藥劑添加到濕性飼料中作為試驗飼料。效果的判斷通過比較寄生在鰓上的該蟲的寄生蟲長度來進行。 結(jié)果如圖2和圖3所示。磺胺間二甲氧嘧啶和甲氧芐氨嘧啶給藥區(qū)、以及磺胺甲基 異噁唑和甲氧芐氨嘧啶給藥區(qū)的寄生蟲長度與對照區(qū)的該蟲長度相比明顯小(P < 0. 01)， 它的生長受到阻礙。從而，重現(xiàn)了實施例1的結(jié)果。并且，藥劑給藥區(qū)的該蟲的運動與對照 區(qū)相比遲鈍，明顯受到藥劑的影響。實施例3口服給藥葉酸合成抑制劑和葉酸活化抑制劑對真鯛的白點蟲寄生的驅(qū)蟲效果_3試驗方法在500升水槽中飼養(yǎng)約12天56尾平均魚體重約9Ig的真鯛，并在25°C 的水溫中進行馴化。在此期間喂食市售飼料(日本水產(chǎn)株式會社制造，直徑為2. 5mm的初 期試料EP (expanded)團粒)，將喂食率設為魚體重的2 %。注水設為2.4升/分鐘。寄生 蟲感染是通過使500升的水槽停水，并投入約50萬個體的白點蟲孵化幼蟲，使魚暴露在寄 生蟲中1小時來進行。暴露后，分別在8座100升水槽中各收容7尾。飼養(yǎng)期間的注水設 為1. 4升/分鐘。連續(xù)3天喂食含藥劑的試驗飼料，其喂食時間是暴露于幼蟲后從收容在 100升水槽開始2小時后，暴露1天、2天后。試驗飼料的喂食率為魚體重的2%。從暴露開 始3天后，將全部的魚進行取樣，測定了寄生于鰓的白點蟲長度。試驗區(qū)設定了將磺胺甲基異噁唑(SMXZ)按300mg/kg魚體重/天、將磺胺間二甲 氧嘧啶(SDMX)按300mg/kg魚體重/天、將磺胺間甲氧嘧啶(SMMX)按300mg/kg魚體重/ 天、將磺胺甲基嘧啶(SMDN)按300mg/kg魚體重/天、將磺胺二甲異嘧啶(SID)按300mg/kg 魚體重/天、將磺胺甲噻二唑(SMZ)按300mg/kg魚體重/天、將磺胺異唑(SIZ)按300mg/ kg魚體重/天分別進行3天口服給藥的區(qū)、喂食無藥劑添加飼料的對照區(qū)，共計8個區(qū)。將 規(guī)定量的各藥劑添加到濕性飼料中作為試驗飼料。效果的判斷通過比較寄生在鰓上的該蟲的寄生蟲長度來進行。并且，該結(jié)果與實施例4 一起進行敘述。實施例4口服給藥葉酸合成抑制劑和葉酸活化抑制劑對真鯛的白點蟲寄生的驅(qū)蟲效果_4試驗方法在500升水槽中飼養(yǎng)約12天42尾平均魚體重約113. 5g的真鯛，并在 25°C的水溫中進行馴化。在此期間喂食市售飼料(日本水產(chǎn)株式會社制造，直徑為2. 5mm的 初期試料EP (expanded)團粒)，將喂食率設為魚體重的2 %。注水設為2. 4升/分鐘。寄 生蟲感染是通過使500升的水槽停水，并投入約50萬個體的白點蟲孵化幼蟲，使魚暴露在 寄生蟲中1小時來進行。暴露后，分別在6座100升水槽中各收容7尾。飼養(yǎng)期間的注水 設為1. 4升/分鐘。連續(xù)3天喂食含藥劑的試驗飼料，其喂食時間是暴露于幼蟲后從收容 在100升水槽開始2小時后，暴露1天、2天后。試驗飼料的喂食率為魚體重的2%。從暴 露開始3天后，將全部的魚進行取樣，測定了寄生于鰓的白點蟲長度。試驗區(qū)設定了將甲氧芐氨嘧啶(TMP)按60mg/kg魚體重/天、將甲氨蝶呤(MTX) 按60mg/kg魚體重/天、將嘧啶甲胺(PRY)按60mg/kg魚體重/天、將羥乙基磺酸戊雙脒鹽 (PMD)按60mg/kg魚體重/天分別進行3天口服給藥的區(qū)、將磺胺間二甲氧嘧按216mg/kg 魚體重/天和將甲氧芐氨嘧啶按24mg/kg魚體重/天進行混合并進行3天口服給藥的區(qū)、 喂食無藥劑添加飼料的對照區(qū)，共計6個區(qū)。將規(guī)定量的各藥劑添加到濕性飼料中作為試驗飼料。效果的判斷通過比較寄生在鰓上的該蟲的寄生蟲長度來進行。實施例3和4的結(jié)果如圖4所示。將藥劑進行給藥的全部區(qū)的寄生蟲長度與對照 區(qū)的該蟲長度相比顯著地小(P < 0. 01)，其生長受到阻礙。進一步，觀察到在全部藥劑給藥 區(qū)中，該蟲的運動與對照區(qū)相比遲鈍。這表示該蟲受到藥劑的影響而導致維持生命的機能 下降。先前的實施例1的結(jié)果以及本實施例3、4的結(jié)果表示葉酸合成抑制劑和葉酸活化抑 制劑共同抑制該蟲的生長，給白點蟲的生命活動造成不良影響。因此，明確了該蟲是自己合 成葉酸的寄生蟲，可以通過對此進行阻礙來抑制其生長或者寄生活動。另外，與將葉酸合成 抑制劑或者葉酸活化抑制劑分別單獨給藥的區(qū)相比，將葉酸合成抑制劑(磺胺間二甲氧嘧 啶)和葉酸活化抑制劑(甲氧芐氨嘧啶)的配合劑進行給藥的區(qū)更加阻礙本蟲的生長。因 此，認為在該蟲的驅(qū)除中，相對于將葉酸合成抑制劑或者葉酸活化抑制劑分別單獨給藥，將 葉酸合成抑制劑和葉酸活化抑制劑的配合劑進行給藥能夠獲得高驅(qū)蟲效果。實施例5口服給藥葉酸合成抑制劑和葉酸活化抑制劑對真鯛的白點蟲寄生的驅(qū)蟲效果_5試驗方法在200升水槽中飼養(yǎng)約7天62尾平均魚體重約32g的真鯛，并在25 °C 的水溫中進行馴化。在此期間喂食市售飼料(日本水產(chǎn)株式會社制造，直徑為2. 5mm的初 期試料EP (expanded)團粒)，將喂食率設為魚體重的2%。注水設為2.4升/分鐘。寄生 蟲感染是通過使200升的水槽停水，并投入約20萬個體的白點蟲孵化幼蟲，使魚暴露在寄 生蟲中1小時來進行。暴露后，分別在4座100升水槽中各收容15尾。預先在100升的水 槽中放入6張載玻片，以觀察各區(qū)的包囊形成狀況。另外，為了調(diào)查暴露3天后的該蟲的感 染狀況，將剩下的2尾收容到1座100升水槽中。飼養(yǎng)期間的注水設為1. 2升/分鐘。試 驗概要如圖5所示。就含藥劑的試驗飼料而言，設定了從暴露后開始5天連續(xù)喂食的區(qū)和 15天連續(xù)進行給藥的區(qū)，試驗飼料的喂食率為魚體重的2%。從暴露開始3天后對調(diào)查該 蟲的感染狀況的區(qū)的2尾魚進行取樣，并對寄生于左鰓的白點蟲數(shù)進行計數(shù)。從暴露開始 5天后對各區(qū)的3尾魚進行取樣，并對寄生于左鰓的白點蟲數(shù)進行計數(shù)。同時為了獲知包 囊形成狀況，回收所投入的載玻片，并對所附著包囊數(shù)進行計數(shù)。為了調(diào)查這些包囊是否孵 化，在含有海水的300ml燒杯中放入附著有包囊的載玻片，觀察12天。為了繼續(xù)了解包囊 的形成狀況，向各區(qū)再投入6張載玻片。繼續(xù)飼養(yǎng)到從暴露開始23天。對飼養(yǎng)期間的全部 斃死魚的寄生于左鰓的白點蟲進行計數(shù)。另外，在確認出任意區(qū)有大量斃死魚的情況下，從 其它的全部區(qū)各取樣3尾，對寄生于左鰓的白點蟲進行計數(shù)。并且同時將放入的載玻片回 收進行計數(shù)。為了繼續(xù)了解飼養(yǎng)區(qū)中的包囊的形成狀況，再放入6張載波片。試驗區(qū)將如圖5所示的規(guī)定量的各藥劑添加到濕性飼料中作為試驗飼料。另外， 在藥劑給藥區(qū)，藥劑給藥期間結(jié)束后喂食與對照區(qū)相同的無藥劑添加飼料。效果的判斷通過比較寄生數(shù)、包囊形成數(shù)、包囊長度、有無孵化包囊、斃死尾數(shù)來 進行。暴露3天后的感染確認區(qū)(對照區(qū)2)的左鰓的寄生數(shù)為約300個體(圖6a)。該 結(jié)果表示在本試驗中白點蟲的感染按目標完成。圖6b中表示了暴露5天后的各區(qū)的該蟲 寄生數(shù)。對照區(qū)的寄生數(shù)大致為 0。圖7a表示了暴露5天后和暴露9天后的包囊形成數(shù)的 結(jié)果。對照區(qū)的包囊形成數(shù)與其它區(qū)相比明顯多，這可以認為是由于該蟲為了成為包囊而從宿主鰓脫離并成為了包囊。結(jié)果是試驗區(qū)1的該蟲寄生數(shù)是與對照區(qū)同樣較少。但是， 包囊形成數(shù)與對照區(qū)相比明顯少(P < 0.01)。這可以認為是由于試驗區(qū)ι的該蟲在成為包 囊之前被殺滅的原因。因此，明確了將磺胺間二甲氧嘧啶和甲氧芐氨嘧啶進行給藥具有明 顯的驅(qū)蟲效果。另一方面，試驗區(qū)2、3的寄生蟲數(shù)明顯多，據(jù)推測可能是由于該蟲的生長受 到阻礙而從宿主脫離的晚的原因。雖然在對照區(qū)1以外的區(qū)也是少數(shù)(P < 0. 01)，但是能 看到包囊形成。藥劑給藥區(qū)的包囊長度與對照區(qū)相比明顯小，受到了影響(圖7b)。另外， 通過觀察12天來調(diào)查這些包囊的孵化率的結(jié)果，對照區(qū)為100%、試驗1為95. 8%、試驗2 為35%、試驗3為45. 2%。直至孵化的天數(shù)是對照區(qū)1為3天、試驗區(qū)1為8天到10天、 試驗區(qū)2、3為10天到12天。因此，可知這些藥劑在該蟲包囊形成后也妨礙包囊的正常孵 化。
在對照區(qū)，暴露9天后受試魚全部斃死(圖8)。調(diào)查左鰓的該蟲寄生數(shù)的結(jié)果，寄 生有1000個體以上的白點蟲。這可以認為是由于從包囊孵化的幼蟲再次感染所致。從暴 露9天后的試驗區(qū)1、2以及3各取樣3尾，調(diào)查左鰓的寄生蟲數(shù)的結(jié)果，全部個體均看不到 該蟲的寄生。這可以認為是由于包囊數(shù)少且包囊的正常產(chǎn)生受到阻礙，沒有孵化出新的幼 蟲的原因。在圖7b中表示了暴露9天后的包囊形成數(shù)的結(jié)果。在試驗區(qū)2、3中，包囊數(shù)大 致為0。在試驗區(qū)2、3中，暴露5天后看到在鰓上寄生有很多該蟲，但是暴露9天后看不到 在鰓上寄生的該蟲，暴露9天后的包囊形成數(shù)大致為0，由此認為寄生的該蟲在第5天到第 9天之間被殺滅。因此，明確了將磺胺甲基異噁唑、甲氧芐氨嘧啶進行給藥具有驅(qū)蟲效果。然后，將試驗區(qū)1至3繼續(xù)飼養(yǎng)，從試驗開始飼養(yǎng)了 30天。在飼養(yǎng)期間，在試驗區(qū) 1中3尾斃死、在試驗區(qū)2中1尾斃死、在試驗區(qū)3中1尾斃死。對斃死魚的鰓進行觀察的 結(jié)果，沒有觀察到白點蟲。全部的斃死魚均失去雙眼，斃死原因判斷為嗜食同類。飼養(yǎng)結(jié)束 時將全部的魚進行取樣并觀察鰓，在全部區(qū)(試驗區(qū)1至3)中沒有看到白點蟲的寄生。同 時回收載玻片并調(diào)查了有無包囊，沒有觀察到包囊。因此，認為試驗區(qū)1至3的仍存活的魚 的白點蟲感染已經(jīng)完全治愈。從以上的結(jié)果，可知葉酸合成抑制劑、葉酸活化抑制劑不僅能夠阻礙該蟲的生長， 還具有對該蟲的驅(qū)蟲效果，以及在包囊形成后也持續(xù)發(fā)揮作用而阻礙包囊的正常產(chǎn)生的效果。實施例6口服給藥由葉酸合成抑制劑和葉酸活化抑制劑組成的配合劑對真鯛的白點蟲寄 生的驅(qū)蟲效果試驗方法在500升水槽中飼養(yǎng)約13天103尾平均魚體重約62g的真鯛，并在 25°C的水溫中進行馴化。在此期間喂食市售飼料(日本水產(chǎn)株式會社制造，直徑為2. 5mm的 初期試料EP (expanded)團粒)，將喂食率設為魚體重的2%。注水設為2. 4升/分鐘。寄 生蟲感染是通過使500升的水槽停水，并投入約60萬個體的白點蟲孵化幼蟲，使魚暴露在 寄生蟲中1小時來進行。暴露后，分別在5座100升水槽中各收容20尾。另外，為了調(diào)查 暴露3天后的該蟲的感染狀況，將剩下的3尾收容在1座100升水槽中。飼養(yǎng)期間的注水 設為1. 2升/分鐘。連續(xù)5天喂食含藥劑的試驗飼料，其喂食時間是暴露于幼蟲后從收容 在100升水槽開始2小時后，暴露1天、2天、3天、4天后。試驗飼料的喂食率為魚體重的 2%。從暴露開始3天后，對調(diào)查該蟲的感染狀況的區(qū)的3尾魚進行取樣，對寄生于左鰓的白點蟲進行計數(shù)。從暴露開始5天后，對各區(qū)的受試魚4尾進行取樣，對寄生于左鰓的白點 蟲進行計數(shù)。并且，同時觀察寄生蟲的大小。繼續(xù)飼養(yǎng)到從暴露開始的27天后。對飼養(yǎng)期間中的全部斃死魚的寄生于左鰓的 白點蟲進行計數(shù)。另外，在任意區(qū)中發(fā)生了認為該蟲是原因的大量斃死的情況下，從其它的 全部區(qū)取樣各3尾，對寄生于左鰓的白點蟲進行計數(shù)。試驗區(qū)設定了將磺胺甲基異噁唑按125mg/kg魚體重/天和甲氧芐氨嘧啶按 25mg/kg魚體重/天進行混合并口服給藥5天的區(qū)、將磺胺間甲氧嘧啶按112. 5mg/kg魚體 重/天和奧美普林按37. 5mg/kg魚體重/天進行混合并口服給藥5天的區(qū)、將磺胺間二甲 氧嘧啶按135mg/kg魚體重/天和甲氧芐氨嘧啶按15mg/kg魚體重/天進行混合并口服給 藥5天的區(qū)、將磺胺間二甲氧嘧啶按136. 4mg/kg魚體重/天和嘧啶甲胺按13. 6mg/kg魚體 重/天進行混合并口服給藥5天的區(qū)、喂食無藥劑添加飼料的對照區(qū)，共計5個區(qū)。配合劑 給藥區(qū)的藥劑給藥量設定為150mg/kg魚體重/天的配合劑。將規(guī)定量的各藥劑添加到濕 性飼料中作為試驗飼料。效果的判斷通過比較寄生數(shù)、寄生蟲形態(tài)、包囊形態(tài)、斃死尾數(shù)來進行。暴露3天后的感染確認區(qū)(無投藥區(qū))的3尾真鯛的左鰓的平均寄生數(shù)是每1尾 155個體(圖9a)。該結(jié)果表示在本試驗中白點蟲的感染按目標完成。另外，寄生在鰓中的 該蟲60個體的平均寄生蟲長度為約204 μ m。暴露3天后，無投藥區(qū)的1尾真鯛斃死。左鰓 的該蟲寄生數(shù)為180個體，沒有達到能夠斃死程度的寄生數(shù)。斃死魚失去了左眼，斃死原因 判斷為嗜食同類。暴露5天后的各區(qū)的該蟲寄生數(shù)是無投藥區(qū)為0個體、試驗區(qū)1為3個體、試驗 區(qū)2為1個體、試驗區(qū)3為0個體、試驗區(qū)4為2個體。據(jù)此可以認為在全部區(qū)中該蟲為了 形成包囊而從宿主鰓上脫離。從暴露第5天后的宿主脫離的各區(qū)30個體的包囊長度的比較結(jié)果如圖9b所示。 無投藥區(qū)的平均包囊直徑為約320 μ m。試驗區(qū)1的平均包囊直徑為約215 μ m，試驗區(qū)2的 平均包囊直徑為約206 μ m,試驗區(qū)3的平均包囊直徑為約226 μ m,試驗區(qū)4的平均包囊直 徑為約213 μ m。在全部的藥劑給藥區(qū)中的包囊長度顯著地小于對照區(qū)，雖然該蟲成了包囊， 但是受到藥劑的影響而生長受到阻礙。暴露7天后在無投藥區(qū)、試驗區(qū)2和試驗區(qū)4中各有1尾真鯛斃死。左鰓的該蟲 寄生數(shù)是無投藥區(qū)的斃死魚為8個體，試驗區(qū)2和試驗區(qū)4的斃死魚為0個體。全部的斃 死魚失去了雙眼，斃死原因判斷為嗜食同類。在無投藥區(qū)暴露9天后受試魚開始斃死(圖10)。調(diào)查暴露9天后死亡的受試魚 的左鰓的該蟲寄生蟲數(shù)，結(jié)果寄生有1000個體以上的白點蟲。可以認為這是由包囊孵化的 幼蟲再感染所致。從暴露9天后的試驗區(qū)1、2、3和4各取樣3尾，調(diào)查左鰓的寄生數(shù)，結(jié)果 在全部個體中該蟲的寄生數(shù)均為0。無投藥區(qū)的受試魚暴露10天后全部死亡。此后，將試 驗區(qū)i至4繼續(xù)飼養(yǎng)，從試驗開始飼養(yǎng)27天。暴露13天后，在試驗區(qū)1和試驗區(qū)3中各有1尾真鯛斃死。左鰓的該蟲寄生數(shù)是 試驗區(qū)1的斃死魚為6個體，試驗區(qū)3的斃死魚為23個體。斃死魚失去了雙眼，斃死原因 判斷為嗜食同類。暴露15天后，將試驗區(qū)1至4的受試魚各取 3尾，調(diào)查左鰓的該蟲寄生數(shù)的結(jié)果，試驗區(qū)1為平均5個體，試驗區(qū)2為平均1個體，試驗區(qū)3為平均6. 3個體，試驗區(qū)4為 3.7個體。暴露21天后，試驗區(qū)1的1尾真鯛斃死。左鰓的該蟲寄生數(shù)是54個體。斃死魚 失去了雙眼，判斷斃死原因為嗜食同類。同日，試驗區(qū)3的4尾真鯛斃死。4尾中，失去雙眼 的有2尾，失去左眼的有1尾，觀察到白點蟲病的癥狀眼睛白濁和體表發(fā)紅的有1尾。斃死 魚的左鰓的該蟲寄生數(shù)平均為788個體。觀察到白點蟲感染癥狀的1尾推測是由于白點蟲 病而斃死。暴露22天后，從試驗區(qū)1、試驗區(qū)2、試驗區(qū)4各取樣3尾，從試驗區(qū)3取樣1尾， 調(diào)查左鰓的該蟲寄生蟲數(shù)的結(jié)果，試驗區(qū)1為平均9. 3個體、試驗區(qū)2為平均9個體、試驗 區(qū)3為294個體、試驗區(qū)4為平均2. 7個體。此后，暴露24天后試驗區(qū)3的3尾斃死，翌日 25天后試驗區(qū)1、試驗區(qū)3、試驗區(qū)4全部死亡。任意一個在左鰓上都確認了 1000個體以上 的該蟲寄生。暴露27天后，將試驗區(qū)2的6尾仍存活的魚全部取樣，結(jié)束了試驗。撈上來 的受試魚的左鰓上寄生有平均1000個體以上的該蟲。通過這些結(jié)果明確了試驗的全部配合劑均具有抗白點蟲作用。其中，可以認為試 驗區(qū)2的磺胺間甲氧嘧啶和奧美普林配合區(qū)的效果最好。據(jù)推測這是由于所使用的藥劑的 組合、葉酸合成抑制劑和葉酸活化抑制劑的配合量不同的原因。在本試驗中的葉酸合成抑 制劑和葉酸活化抑制劑的配合比是試驗區(qū)1為5比1，試驗區(qū)2為3比1，試驗區(qū)3為9比 1，試驗區(qū)4為10比1。因此，推測葉酸活化抑制劑的配合比例更多的一方，對該蟲的效果更 加好。實施例7由葉酸合成抑制劑和葉酸活化抑制劑組成的配合劑的不同給藥量對真鯛的白點 蟲寄生的驅(qū)蟲效果試驗方法在500升水槽中飼養(yǎng)19天平均魚體重38g的真鯛104尾，并在24. 9°C 的水溫中進行馴化。在此期間喂食市售飼料(日本水產(chǎn)株式會社制造，直徑為2. 5mm的初 期試料EP (expanded)團粒)，將喂食率設為魚體重的2. 5 %。寄生蟲感染是通過使500升 的水槽停水，并投入約60萬個體的白點蟲孵化幼蟲，使受試魚暴露在寄生蟲中1小時來進 行。暴露后，分別在5座100升水槽中各收容20尾。另外，為了調(diào)查暴露3天后的該蟲的 感染狀況，將剩下的4尾收容在1座100升水槽中。注水設為1. 4升/分鐘。連續(xù)5天喂 食含藥劑的試驗飼料，其喂食時間是暴露于幼蟲后從收容在100升水槽開始2小時后，暴露 1天后、暴露2天后、暴露3天后、暴露4天后。試驗飼料的喂食率為魚體重的2%。從暴露 開始3天后，將調(diào)查該蟲的感染狀況的區(qū)的魚取樣4尾，對寄生于左鰓的白點蟲進行計數(shù)。 從暴露開始5天后，將各區(qū)取樣5尾，對寄生于左鰓的白點蟲進行計數(shù)。并且，同時觀察寄 生蟲的大小。繼續(xù)飼養(yǎng)到從暴露開始29天后。對飼養(yǎng)期間中的全部斃死魚的寄生于左鰓的白 點蟲進行計數(shù)。并且，在任意區(qū)中發(fā)生了認為該蟲是原因的大量斃死的情況下，從其它的全 部區(qū)各取樣3尾，對寄生于左鰓的白點蟲進行計數(shù)。試驗區(qū)設定了試驗區(qū)1(將磺胺間甲氧嘧啶按37.5mg/kg魚體重/天和奧美普 林按12. 5mg/kg魚體重/天進行混合并口服給藥5天的區(qū)(作為合劑為50mg/kg魚體重/ 天))、試驗區(qū)2 (將磺胺間甲氧嘧啶按75mg/kg魚體重/天和奧美普林按25mg/kg魚體重/天進行混合并口服給藥5天的區(qū)(作為合劑為100mg/kg魚體重/天))、試驗區(qū)3(將磺 胺間甲氧嘧啶按187. 5mg/kg魚體重/天和奧美普林按62. 5mg/kg魚體重/天進行混合并 口服給藥5天的區(qū)(作為合劑為250mg/kg魚體重/天))、試驗區(qū)4 (將磺胺間甲氧嘧啶按 375mg/kg魚體重/天和奧美普林按125mg/kg魚體重/天進行混合并口服給藥5天的區(qū)(作 為合劑為500mg/kg魚體重/天))、喂食無藥劑添加飼料的對照區(qū)，共計5個區(qū)。將規(guī)定量 的各藥劑添加到濕性飼料中作為試驗飼料。效果的判斷通過比較寄生數(shù)、寄生蟲形態(tài)、包囊形態(tài)、斃死尾數(shù)來進行。暴露3天后的感染確認區(qū)(對照區(qū)2)的4尾真鯛的左鰓的平均寄生數(shù)是每1尾 420個體(圖11)。該結(jié)果表示在本試驗中白點蟲的感染按目標完成。觀察投放試驗飼料時的魚的攝食狀況。在對照區(qū)和試驗區(qū)1至試驗區(qū)3攝食了全 部試驗飼料，只有在試驗區(qū)4 (作為合劑500mg/kg魚體重/天)偶爾能發(fā)現(xiàn)攝食后吐出的 個體。這暗示出作為合劑500mg/kg魚體重/天，給藥量比較多的情況下，存在向飼料中添 加該合劑對真鯛的攝食產(chǎn)生不良影響的可能性。寄生于暴露5天后的各區(qū)5尾的左鰓的白 點蟲數(shù)的平均是對照區(qū)為0. 3個體、試驗區(qū)1為40. 3個體、試驗區(qū)2為157. 8個體、試驗 區(qū)3為140. 3個體、試驗區(qū)4為184個體(圖12a)。此時的試驗區(qū)1至試驗區(qū)4的寄生蟲 長度如圖12b所示。另外，比較了附著于預先鋪在各水槽底部的載玻片上的包囊的直徑(包 囊長度)，每個區(qū)比較30個體，結(jié)果對照區(qū)為約320 μ m、試驗區(qū)1為約215 μ m、試驗區(qū)2為 約206 μ m、試驗區(qū)3為約226 μ m、試驗區(qū)4為約213 μ m。這些結(jié)果表示，從比較少的給藥 量50mg/kg魚體重/天到比較多的給藥量500mg/kg魚體重/天，均具有阻礙該蟲生長的效 果，阻礙從用于成為包囊的宿主脫離的效果等。圖13表示了寄生于暴露后的各區(qū)真鯛的左鰓的白點蟲數(shù)的變化。另外，圖14中 表示了試驗期間中的死亡變化。在對照區(qū)中，暴露第9天受試魚大量斃死，翌日第10天全 部斃死。調(diào)查左鰓的該蟲寄生數(shù)，結(jié)果均寄生有1000個體以上的白點蟲。可以認為這是由 于與實施例5同樣再感染了由包囊孵化的幼蟲所致。從暴露第9天的試驗區(qū)1、2、3和4各 取樣4尾，調(diào)查左鰓的寄生數(shù)，結(jié)果全部個體中的該蟲的寄生數(shù)為0?？梢哉J為這是由于包 囊數(shù)少，包囊的正常產(chǎn)生被抑制，包囊的正常產(chǎn)生受阻礙而使幼蟲的孵化延遲所致。在試驗區(qū)3中暴露第12天發(fā)生了 1尾斃死。觀察斃死魚的鰓，結(jié)果沒有觀察到白 點蟲。斃死魚失去了雙眼，斃死原因判斷為嗜食同類。在試驗區(qū)1中暴露第18天受試魚全 部斃死。調(diào)查斃死魚左鰓的該蟲寄生數(shù)，結(jié)果均寄生有1000個體以上的白點蟲。對試驗區(qū) 2、3和4的受試魚各取樣3尾，調(diào)查左鰓的該蟲寄生蟲數(shù)，結(jié)果是試驗區(qū)2為每1尾平均 約74個體，試驗區(qū)3為約4個體、試驗區(qū)4為約1個體。此后，將試驗區(qū)1至4繼續(xù)飼養(yǎng)， 從試驗開始飼養(yǎng)29天。暴露第21天試驗區(qū)2的1尾受試魚斃死，翌日第22天全部斃死。死亡的受試魚 左鰓的該蟲寄生數(shù)是每1尾約1000個體。此后，繼續(xù)飼養(yǎng)到暴露第29天。將暴露第29天仍存活的試驗區(qū)3和試驗區(qū)4的 受試魚全部取出，對左鰓的該蟲寄生數(shù)進行計數(shù)，結(jié)果在試驗區(qū)3和試驗區(qū)4均觀察到了每 1尾約1000個體以上的白點蟲。從對照區(qū)全部死亡之日起，試驗區(qū)1(合劑50mg/kg魚體 重/天)再經(jīng)8天全部死亡，試驗區(qū)2 (合劑100mg/kg魚體重/天)是12天，試驗區(qū)3和 試驗區(qū)4晚了 19天 以上。這些結(jié)果表示對該蟲的驅(qū)蟲效果隨著該藥劑的給藥量的增加而增加。實施例8由葉酸合成抑制劑和葉酸活化抑制劑組成的配合劑對紅鰭東方飩的白點蟲寄生的驅(qū)蟲效果試驗方法在200升水槽中飼養(yǎng)約20天平均魚體重約183g的紅鰭東方飩15尾， 并在25°C的水溫中進行馴化。在此期間喂食市售飼料(日本水產(chǎn)株式會社制造，直徑為3mm 的紅鰭東方飩用EP(expanded)團粒)，將喂食率設為魚體重的2%。寄生蟲感染是通過使 200升的水槽停水，并投入約20萬個體的白點蟲孵化幼蟲，使受試魚暴露在寄生蟲中1小時 來進行。暴露后，分別在3座100升水槽中各收容5尾。注水設為1.4升/分鐘。連續(xù)3 天喂食含藥劑的試驗飼料，其喂食時間是暴露于幼蟲后從收容在100升水槽開始2小時后， 暴露1天、2天后。試驗飼料的喂食率為魚體重的2%。從暴露開始3天后，將全部的魚進 行取樣，調(diào)查寄生于左鰓的白點蟲數(shù)。并且，同時觀察寄生蟲的大小。試驗區(qū)設定了將磺胺間甲氧嘧啶按112.5mg/kg魚體重/天和奧美普林按 37. 5mg/kg魚體重/天進行配合并口服給藥3天的區(qū)(SMMX+0MP區(qū))、將磺胺間二甲氧嘧啶 按136. 4mg/kg魚體重/天和嘧啶甲胺按13. 6mg/kg魚體重/天進行配合并口服給藥3天的 區(qū)(SDMX+PRY區(qū))、喂食無藥劑添加飼料的對照區(qū)(Control區(qū))，共計3個區(qū)。將規(guī)定量的 各藥劑添加到市售EP飼料中作為試驗飼料。另外，為了在餌料中均勻地添加藥劑，在餌料 中添加將餌料量的5%量的水和5%量的淀粉加入到藥劑中并進行混合而得到的混合物。效果的判斷通過比較寄生數(shù)、觀察寄生蟲形態(tài)來進行。比較寄生數(shù)的結(jié)果，與沒有給藥的對照區(qū)相比，在任意的藥劑給藥區(qū)中均顯示了 寄生數(shù)多的傾向(圖15a)。每片鰓的平均寄生數(shù)是對照區(qū)為約405個體，磺胺間甲氧嘧 啶和奧美普林的配合給藥區(qū)為約544個體，磺胺間二甲氧嘧啶和嘧啶甲胺的配合給藥區(qū)為 約558個體，兩藥劑抑制了該蟲從用于成為包囊的宿主上脫離。另外，觀察寄生蟲形態(tài)的結(jié)果，確定了在全部藥劑給藥區(qū)中，寄生于紅鰭東方飩鰓 的該蟲的大小與對照區(qū)相比顯著地小(圖15b)。該蟲長度在對照區(qū)為約252 μ m、在磺胺間 甲氧嘧啶和奧美普林的配合給藥區(qū)為約164 μ m，在磺胺間二甲氧嘧啶和嘧啶甲胺的配合給 藥區(qū)為約197 μ m，在任意的藥劑給藥區(qū)中，該蟲的生長均受到阻礙。由該結(jié)果可知，葉酸合成抑制劑和葉酸活化抑制劑的配合劑，對于紅鰭東方飩的 白點蟲病，與對真鯛的白點蟲病同樣能夠發(fā)揮抗白點蟲作用。實施例9由葉酸合成抑制劑和葉酸活化抑制劑組成的配合劑對比目魚的白點蟲寄生的驅(qū) 蟲效果試驗方法在200升水槽中飼養(yǎng)約8天平均魚體重約47g的比目魚21尾，并在 25°C的水溫中進行馴化。在此期間喂食市售飼料(日本水產(chǎn)株式會社制造，直徑為2. 5mm的 初期試料EP (expanded)團粒)，將喂食率設為魚體重的2%。注水設為2. 2升/分鐘。寄 生蟲感染是通過使200升的水槽停水，并投入約20萬個體的白點蟲孵化幼蟲，使受試魚暴 露在寄生蟲中1小時來進行。暴露后，分別在3座100升水槽中各收容7尾。連續(xù)3天喂 食含藥劑的試驗飼料，其喂食時間是暴露于幼蟲后從收容在100升水槽開始2小時后，暴露 1天、2天后。試驗飼料的喂食率為魚體重的2%。從暴露開始3天后將全部的魚進行取樣，調(diào)查寄生于左鰓的白點蟲數(shù)。并且，同時觀察寄生蟲的大小。試驗區(qū)設定了將磺胺間甲氧嘧啶按112.5mg/kg魚體重/天和奧美普林按 37.5mg/kg魚體重/天進行配合并口服給藥3天的區(qū)(SMMX+0MP區(qū))、將磺胺間二甲氧嘧啶 按136. 4mg/kg魚體重/天和嘧啶甲胺按13. 6mg/kg魚體重/天進行配合并口服給藥3天的 區(qū)(SDMX+PRY區(qū))、喂食無藥劑添加飼料的對照區(qū)(Control區(qū))，共計3個區(qū)。將規(guī)定量的 各藥劑添加到市售EP飼料中作為試驗飼料。另外，為了在餌料中均勻地添加藥劑，在餌料 中添加將餌料量的5%量的水和5%量的淀粉加入到藥劑中并進行混合而得到的混合物。效果的判斷通過比較寄生數(shù)、觀察寄生蟲形態(tài)來進行。比較寄生數(shù)的結(jié)果，與對照區(qū)相比，在任意的藥劑給藥區(qū)中均顯示了寄生數(shù)多的 傾向(圖16a)。兩藥劑抑制了該蟲從用于成為包囊的宿主上脫離。另外，觀察寄生蟲形態(tài)的結(jié)果，確定了在全部藥劑給藥區(qū)中，寄生于比目魚鰓的該 蟲大小與對照區(qū)相比顯著地小(圖16b)。由該結(jié)果可知，葉酸合成抑制劑和葉酸活化抑制劑的配合劑，對于比目魚的白點 蟲病，與對真鯛的白點蟲病同樣能夠發(fā)揮抗白點蟲作用。實施例10由葉酸合成抑制劑和葉酸活化抑制劑組成的配合劑對杜氏螄的白點蟲寄生的驅(qū) 蟲效果試驗方法在200升水槽中飼養(yǎng)約7天平均魚體重約26g的杜氏螄24尾，并在 25°C的水溫中進行馴化。在此期間喂食市售飼料(日本水產(chǎn)株式會社制造，直徑為2. 5mm 的初期試料EP (expanded)團粒)，將喂食率設為魚體重的2%。寄生蟲感染是通過使200 升的水槽停水，并投入約20萬個體的白點蟲孵化幼蟲，使受試魚暴露在寄生蟲中1小時來 進行。暴露后，分別在3座100升水槽中各收容8尾。注水設為1.4升/分鐘。連續(xù)3天 喂食含藥劑的試驗飼料，其喂食時間是暴露于幼蟲后從收容在100升水槽開始2小時后，暴 露1天、2天后。試驗飼料的喂食率為魚體重的2%。從暴露開始3天后將全部的魚進行取 樣，調(diào)查寄生于左鰓的白點蟲數(shù)。并且，同時觀察寄生蟲的大小。試驗區(qū)設定了將磺胺間甲氧嘧啶按112.5mg/kg魚體重/天和奧美普林按 37. 5mg/kg魚體重/天進行配合并口服給藥3天的區(qū)(SMMX+0MP區(qū))、將磺胺間二甲氧嘧啶 按136. 4mg/kg魚體重/天和嘧啶甲胺按13. 6mg/kg魚體重/天進行配合并口服給藥3天的 區(qū)(SDMX+PRY區(qū))、喂食無藥劑添加飼料的對照區(qū)(Control區(qū))，共計3個區(qū)。將規(guī)定量的 各藥劑添加到市售飼料(日本水產(chǎn)株式會社制造，直徑為2. 5mm的初期試料EP (expanded) 團粒)中作為試驗飼料。另外，為了在餌料中均勻地添加藥劑，在餌料中添加將餌料量的 5%量的水和5%量的淀粉加入到藥劑中并進行混合而得到的混合物。效果的判斷通過比較寄生數(shù)、觀察寄生蟲形態(tài)來進行。比較寄生數(shù)的結(jié)果，與對照區(qū)相比，在任意的藥劑給藥區(qū)中均顯示了寄生數(shù)多的 傾向(圖17a)。兩藥劑抑制了該蟲從用于成為包囊的宿主上脫離。另外，觀察寄生蟲形態(tài)的結(jié)果，確定了在全部藥劑給藥區(qū)中，寄生于杜氏螄鰓的該 蟲的大小與對照區(qū)相比顯著地小(圖17b)。由該結(jié)果可知，葉酸合成抑制劑和葉酸活化抑制劑的配合劑，對于杜氏螄的白點 蟲病，與對真鯛的白點蟲病同樣也能夠發(fā)揮抗白點蟲作用。
實施例11由葉酸合成抑制劑和葉酸活化抑制劑組成的配合劑對七帶石斑魚的白點蟲寄生的驅(qū)蟲效果試驗方法將在25°C的水溫中馴化后的平均魚體重約14g的七帶石斑魚21尾在 100升水槽中飼養(yǎng)約1天，并用于試驗。在此期間喂食市售飼料(日本水產(chǎn)株式會社制造， 直徑為2mm的初期試料EP (expanded)團粒)，將喂食率設為魚體重的3%。寄生蟲感染是 通過使100升的水槽停水，并投入約10萬個體的白點蟲孵化幼蟲，使魚暴露在寄生蟲中1 小時來進行。暴露后，分別在3座100升水槽中各收容7尾。注水設為1.4升/分鐘。連 續(xù)3天喂食含藥劑的試驗飼料，其喂食時間是暴露于幼蟲后從收容在100升水槽開始2小 時后，暴露1天、2天后。試驗飼料的喂食率為魚體重的2%。從暴露開始3天后將全部的 魚進行取樣，調(diào)查寄生于左鰓的白點蟲數(shù)。并且，同時觀察寄生蟲的大小。試驗區(qū)設定了將磺胺間甲氧嘧啶按112.5mg/kg魚體重/天和奧美普林按 37. 5mg/kg魚體重/天進行配合并口服給藥3天的區(qū)(SMMX+0MP區(qū))、將磺胺間二甲氧嘧啶 按136. 4mg/kg魚體重/天和嘧啶甲胺按13. 6mg/kg魚體重/天進行配合并口服給藥3天的 區(qū)(SDMX+PRY區(qū))、喂食無藥劑添加飼料的對照區(qū)(Control區(qū))，共計3個區(qū)。將規(guī)定量的 各藥劑添加到市售EP飼料中作為試驗飼料。另外，為了在餌料中均勻地添加藥劑，在餌料 中添加將餌料量的5%量的水和5%量的淀粉加入到藥劑中并進行混合而得到的混合物。效果的判斷通過比較寄生數(shù)、觀察寄生蟲形態(tài)來進行。比較寄生數(shù)的結(jié)果，與對照區(qū)相比，在任意的藥劑給藥區(qū)中均顯示了寄生數(shù)多的 傾向(圖18a)。兩藥劑抑制了該蟲從用于成為包囊的宿主上脫離。另外，觀察寄生蟲形態(tài)的結(jié)果，確定了在全部藥劑給藥區(qū)中，寄生于七帶石斑魚鰓 的該蟲大小與對照區(qū)相比顯著地小(圖18b)。由該結(jié)果可知，葉酸合成抑制劑和葉酸活化抑制劑的配合劑，對于七帶石斑魚的 白點蟲病，與對真鯛的白點蟲病同樣也能夠發(fā)揮抗白點蟲作用。由以上的結(jié)果判明了葉酸合成抑制劑和葉酸活化抑制劑共同阻礙該蟲的生長，進 一步還能阻礙包囊的產(chǎn)生。因此，可知該蟲是自己合成葉酸的寄生蟲，可以通過對此進行阻 礙來抑制其生長或者寄生活動。另外，判明了雖然通過將葉酸合成抑制劑或葉酸活化抑制 劑分別單獨投給宿主魚，能夠獲得明顯的抗白點蟲作用，但是將葉酸合成抑制劑和葉酸活 化抑制劑的配合劑進行給藥會獲得更高的驅(qū)蟲效果。葉酸合成抑制劑和葉酸活化抑制劑的 配合劑在試驗的全部魚種，即鱸形目魚類的真鯛、杜氏螄、七帶石斑魚，飩形目魚類的紅鰭 東方飩，鰈形目魚類的比目魚中發(fā)揮了抗白點蟲作用。因此，可以認為葉酸合成抑制劑、葉 酸活化抑制劑以及它們的配合劑對于各種魚種所發(fā)生的海產(chǎn)白點蟲病能夠發(fā)揮抗白點蟲 作用。實施例12由葉酸合成抑制劑和葉酸活化抑制劑組成的配合劑對淡水白點蟲寄生的驅(qū)蟲效 果試驗方法將在21°C的水溫中馴化后的平均魚體重約3. 6g的黑龍睛金魚18尾在 1座25升水槽中飼養(yǎng)3天后，與感染了淡水白點蟲的紅麗麗魚(colisa labiosa)混養(yǎng)2 天，使其感染淡水白點蟲，在新設置的2座25L水槽中分別收容8尾用于試驗。為了確認剩下的2尾黑龍睛金魚是否感染成功，調(diào)查了寄生數(shù)。此時每1尾的體表寄生數(shù)平均為66個 體。從感染第一天開始，每天對照區(qū)給予在市售飼料(日本水產(chǎn)株式會社制造，直徑 為2mm的初期試料EP (expanded)團粒)中添加了水的飼料，試驗區(qū)給予含藥劑的試驗飼 料。喂食率為魚體重的0.7%。在試驗區(qū)，將磺胺間甲氧嘧啶按112. 5mg/kg魚體重/天和奧美普林按37. 5mg/kg 魚體重/天(作為合劑是150mg/kg魚體重/天)進行配合，每天給藥。效果的判定是在試驗開始第3天和第7天通過目視計算寄生在各區(qū)全部試驗魚體 表的該蟲數(shù)量。并且，在試驗期間出現(xiàn)死亡魚的情況下，計算寄生在體表的該蟲數(shù)量。第3天的該蟲寄生數(shù)是對照區(qū)為平均2. 9個體，試驗區(qū)為平均0. 9個體，第7天 的該蟲寄生數(shù)是對照區(qū)為平均50. 8個體，試驗區(qū)為平均0. 1個體(圖19)。試驗開始第9天的對照區(qū)和試驗區(qū)的受試魚如圖20所示。在該時刻，可以目視觀 察到對照區(qū)的受試魚寄生有無數(shù)的淡水白點蟲。另一方面，試驗區(qū)的受試魚僅能看到很少 的寄生。試驗開始第11天對照區(qū)的受試魚全部死亡。調(diào)查斃死魚的體表、鰭的結(jié)果，觀察 到了 2000個體以上的該蟲，該蟲明顯增殖。同日，撈出試驗區(qū)的全部受試魚調(diào)查體表、鰭， 沒有發(fā)現(xiàn)該蟲的寄生。從這些結(jié)果可以判明葉酸合成抑制劑和葉酸活化抑制劑的配合劑對 淡水白點蟲具有驅(qū)蟲效果。因此，可知淡水白點蟲與海產(chǎn)白點蟲同樣是自身合成葉酸的寄 生蟲，可以通過對此進行阻礙來抑制其生長或者寄生活動。對于海產(chǎn)白點蟲，葉酸合成抑制劑和葉酸活化抑制劑的配合劑對試驗的全部魚種 發(fā)揮了抗白點蟲作用。因此，認為葉酸合成抑制劑、葉酸活化抑制劑以及它們的配合劑對各 種魚種所發(fā)生的淡水白點蟲病能發(fā)揮抗白點蟲作用。產(chǎn)業(yè)上利用的可能性本發(fā)明的寄生蟲驅(qū)除劑通過口服給藥而發(fā)揮魚類 寄生蟲的驅(qū)除效果，對目前沒有 有效藥劑的白點蟲等寄生蟲也能發(fā)揮效果。可以用于養(yǎng)殖魚、觀賞魚等的寄生蟲病的預防、 治療。
權利要求
一種魚類的寄生蟲驅(qū)除劑，其特征在于，含有葉酸合成抑制劑和/或葉酸活化抑制劑作為有效成分。
2.根據(jù)權利要求1所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除劑，其特征在于，是葉酸合成抑制劑和葉 酸活化抑制劑的合劑。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除劑，其特征在于，葉酸合成抑制劑為磺 胺劑。
4.根據(jù)權利要求3所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除劑，其特征在于，所述磺胺劑是磺胺甲基 異噁唑、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺間二甲氧嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺異噁唑、磺胺二甲異嘧 啶、磺胺甲噻二唑、磺胺異唑、以及它們的藥學上可接受的鹽中的任意一種。
5.根據(jù)權利要求1至4中的任一項所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除劑，其特征在于，所述葉酸 活化抑制劑為二氫葉酸還原酶抑制劑。
6.根據(jù)權利要求1至4中的任一項所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除劑，其特征在于，所述葉酸 活化抑制劑為嘧啶甲胺、甲氧芐氨嘧啶、奧美普林、甲氨蝶呤、二甲葉酸、蝶羅呤、氨基蝶呤、 依達曲沙、吡曲克辛、以及它們的藥學上可接受的鹽中的任意一種。
7.根據(jù)權利要求1至6中的任一項所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除劑，其特征在于，所述寄生 蟲是屬于魚類原生動物亞界的寄生蟲。
8.根據(jù)權利要求7所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除劑，其特征在于，所述寄生蟲是屬于魚類 原生動物亞界纖毛蟲門的寄生蟲。
9.根據(jù)權利要求8所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除劑，其特征在于，所述寄生蟲為白點蟲。
10.根據(jù)權利要求1至9中的任一項所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除劑，其特征在于，所述魚 類是鱸形目、鰈形目、鯡形目、飩形目、鯉形目、鰻鱺目或鲇形目的魚類。
11.一種魚類的寄生蟲驅(qū)除方法，其特征在于，用葉酸合成抑制劑和/或葉酸活化抑制 劑對魚類進行給藥。
12.根據(jù)權利要求11所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除方法，其特征在于，用葉酸合成抑制劑 和葉酸活化抑制劑的合劑進行給藥。
13.根據(jù)權利要求11或12所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除方法，其特征在于，所述葉酸合成 抑制劑為磺胺劑。
14.根據(jù)權利要求13所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除方法，其特征在于，所述磺胺劑是磺胺 甲基異噁唑、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺間二甲氧嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺異噁唑、磺胺二甲異 嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺異唑、以及它們的藥學上可接受的鹽中的任意一種。
15.根據(jù)權利要求11至14中的任一項所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除方法，其特征在于，所 述葉酸活化抑制劑為二氫葉酸還原酶抑制劑。
16.根據(jù)權利要求11至14中的任一項所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除方法，其特征在于，所 述葉酸活化抑制劑為嘧啶甲胺、甲氧芐氨嘧啶、奧美普林、甲氨蝶呤、二甲葉酸、蝶羅呤、氨 基蝶呤、依達曲沙、吡曲克辛、以及它們的藥學上可接受的鹽中的任意一種。
17.根據(jù)權利要求11至16中的任一項所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除劑，其特征在于，所述 寄生蟲是屬于魚類原生動物亞界的寄生蟲。
18.根據(jù)權利要求17所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除方法，其特征在于，所述寄生蟲是屬于 魚類原生動物亞界纖毛蟲門的寄生蟲。
19.根據(jù)權利要求18所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除方法，其特征在于，所述寄生蟲為白點蟲。
20.根據(jù)權利要求11至19中的任一項所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除方法，其特征在于，所 述魚類是鱸形目、鰈形目、鯡形目、飩形目、鯉形目、鰻鱺目或鲇形目的魚類。
21.根據(jù)權利要求11至20中的任一項所述的魚類的寄生蟲驅(qū)除方法，其特征在于，根 據(jù)魚的體重，以1 1000mg/kg 口服給藥葉酸合成抑制劑和/或葉酸活化抑制劑。
全文摘要
本發(fā)明提供一種含有葉酸合成抑制劑和/或葉酸活化抑制劑作為有效成分的魚類寄生蟲驅(qū)除劑。優(yōu)選葉酸合成抑制劑和葉酸活化抑制劑的合劑，作為葉酸合成抑制劑優(yōu)選磺胺劑。作為葉酸活化抑制劑可以使用二氫葉酸還原酶抑制劑、葉酸拮抗劑等。該寄生蟲驅(qū)除劑可以通過口服給藥來驅(qū)除魚類的寄生蟲。在魚類寄生蟲中對屬于纖毛蟲的寄生蟲特別有效。
文檔編號A01N43/824GK101842012SQ20088011377
公開日2010年9月22日 申請日期2008年10月29日 優(yōu)先權日2007年10月29日
發(fā)明者平澤德高, 河野文美 申請人:日本水產(chǎn)株式會社