專利名稱：：植物種子和器官的尺寸的控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及植物種子和器官的尺寸的控制方法。
背景技術(shù)：
：種子和器官的尺寸是處于遺傳控制下的在農(nóng)藝學(xué)和生態(tài)學(xué)上重要的性狀(Alonso-Blanco,C.ProcNatlAcadSciUSA96,4710-4717(1999)；Song,X.J.NatGenet39，623—630(2007)；Weiss,J.IntJDevBiol49,513-525(2005)；Dinneny,J.R.Development131,1101-1110(2004)；Disch,S.CurrBiol16,272-279(2006)；Science289，85—88(2000)；Horiguchi，G.PlantJ43，68—78(2005)；Hu,YPlantJ47，1-9(2006);Hu，Y.PlantCell15,1951-1961(2003)；Krizek,B.A.DevGenet25，224-236(1999)；Mizukami,Y.ProcNatlAcadSciUSA97,942-947(2000)；Nath,U.Science299，1404-1407(2003)；Ohno,C.K.Development131,1111-1122(2004)；Szecsi,J.EmboJ25,3912-3920(2006)；White,D.ff.ProcNatlAcadSciUSA103，13238-13243(2006)；Horvath,B.M.EmboJ25，4909-4920(2006)；Garcia,D.PlantCell17,52-60(2005))。在給定物種內(nèi)的種子和器官的最終尺寸是恒定的，而物種間的種子和器官尺寸的變化明顯較大，這表明植物具有以協(xié)調(diào)和適時(shí)的方式控制種子和器官生長的調(diào)節(jié)機(jī)制。然而，盡管種子和器官尺寸如此重要，對(duì)于控制植物中最終器官和種子尺寸的分子和遺傳機(jī)制還幾乎一無所知。已經(jīng)使用數(shù)量性狀基因座(QTL)作圖在包括番茄、大豆、玉米和水稻在內(nèi)的植物中研究了種子尺寸的遺傳調(diào)節(jié)。迄今為止，在已發(fā)表的文獻(xiàn)中，已經(jīng)鑒定出作為水稻谷粒尺寸的兩個(gè)主要QTL的基礎(chǔ)的兩個(gè)基因(Song,X.J.NatGenet39，623-630(2007)；Fan,C.Theor.Appl.Genet.112，1164-1171(2006))，但這些基因的分子機(jī)制仍有待解釋。在擬南芥中，已經(jīng)定位出影響在登錄號(hào)Ler和Cvi之間的雜交種中的種子重量和/或長度的11個(gè)基因座{Alonso-Blanco，1999，見上}，但尚未鑒定出相應(yīng)的基因。近期研究已經(jīng)揭示，AP2和ARF2參與了種子尺寸的控制。然而，不幸的是ap2和arf2突變體比野生型的能育性低(Schruff,M.C.Developmentl37,251-261(2006)；Ohto,M.A.Proc.NatnlAcad.SciUSA102，3123-3128(2005)Jofuku,K.D.Proc.NatnlAcad.Sci.USA102，3117-3122(2005))。另外，使用突變體植物的研究已經(jīng)鑒定出通過作用于細(xì)胞增殖或細(xì)胞擴(kuò)張而影響器官尺寸的數(shù)種正向調(diào)節(jié)物和負(fù)向調(diào)節(jié)物(Krizek,B.A.DevGenet25，224-236(1999)；Mizukami,Y.ProcNatlAcadSciUSA97，942-7(2000)；Nath,U.Science299，1404-1407(2003)；Ohno,C.K.Development131，1111-1122(2004)；Szecsi,J.EmboJ25,3912-3920(2006)；White,D.ff.ProcNatlAcadSciUSA103，13238—13243(2006)；Horvath,B.M.EmboJ25,4909-4920(2006)；Garcia,D.PlantCell17,52-60(2005).Horiguchi,G.PlantJ43,68-78(2005)；Hu,YPlantJ47,1-9(2006)；Dinneny,J.R.Development131，1101-1110(2004))。對(duì)于控制種子和器官的最終尺寸的一種或多種因子的鑒定不僅能發(fā)展對(duì)于植物中的尺寸控制機(jī)制的理解，而且還可以具有實(shí)質(zhì)性的實(shí)際應(yīng)用，例如，改善作物產(chǎn)量和用于產(chǎn)生生物燃料的植物生物量。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明人已鑒定出含UIM和LIM域的蛋白(稱為DA1)，該蛋白是通過限制增殖性生長的持續(xù)時(shí)間而控制種子和器官的最終尺寸的關(guān)鍵調(diào)節(jié)物。本文顯示了充當(dāng)DAR或DA1相關(guān)蛋白的顯性負(fù)向干擾突變的等位基因(稱為dal-1等位基因)。野生型中dal-1突變體基因(R358K)的過表達(dá)導(dǎo)致野生型植物中的種子和器官尺寸的增加，從而表明dal-1等位基因以劑量依賴性方式干擾DAR。減弱或消除對(duì)E3泛素連接酶進(jìn)行編碼的E0D1/BB的功能的突變協(xié)同性地增強(qiáng)dal-1的表型，從而表明DA1與E0D1/BB平行地作用以限制種子和器官的尺寸。對(duì)DA1和E0D1/BB的功能性表征提供了對(duì)最終種子和器官尺寸的控制機(jī)制的深刻認(rèn)識(shí)，并且可以作為用于改善作物產(chǎn)量和增加植物生物量的寶貴工具。本發(fā)明的某些方面提供了分離的DA1蛋白和編碼DA1蛋白的分離核酸。此外，本發(fā)明還提供了DA1相關(guān)蛋白和編碼核酸。本文中將DA1蛋白和DA1相關(guān)蛋白(DAR)統(tǒng)稱為DA蛋白。本發(fā)明的其它方面提供了干擾DA1蛋白和DA1相關(guān)蛋白的功能的分離蛋白(DA1R358K)和編碼該蛋白的分離核酸。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供了具有正常能育性但具有選自更長的壽命、增大的器官尺寸、增大的種子尺寸的一種以上特性的植物的生產(chǎn)方法。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供了具有正常能育性但具有選自更長的壽命、增大的器官尺寸、增大的種子尺寸和這些特性的組合的特性的植物。圖1顯示了dal-1具有較大的種子和器官。A和B:Col-0的干種(A)和dal-1的干種⑶。C禾日D:Col-0的成熟胚(C)和dal-1的成熟胚⑶。E禾PF:9日齡的Col_0的幼苗(E)和dal-1的幼苗(F)。dal-1具有比野生型(WT)更大的子葉。G:Col-0(左)和dal-1(右)的第5葉。與野生型Col-0相比，dal-1具有更大更圓的葉。H和I:Col-0的花(H)和dal-1的花(1)。了和1(:&)1-0的長角果(J)和dal-1的長角果(1()。1^以1^/100粒種子給出了Col-0、dal_l、dal-kol、darl-l和dal-koldarl-l的平均種子重量。顯示了標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)(n=5)。植物在相同條件下生長。M0:Col-0、dal-l、DAlC0M#2和35S::DA1E358K#5的莖直徑(M)、莖橫截面中的表皮細(xì)胞數(shù)(N)和花瓣面積(0)。P和Q:35日齡植物的5朵新鮮花(14期)⑵和葉(第1第7)(Q)的質(zhì)量。R:Col-0和dal-1中的胚(E)、花瓣⑵和葉(L)的細(xì)胞面積。S通過定量實(shí)時(shí)RT-PCR測(cè)定了Col-0和35S::DA1E358K#5幼苗中DA1的相對(duì)表達(dá)水平。比例尺200iim(A和B)，100iim(C和D)，1mm(E和F)，0.5cm(G)，1mm(HK)。圖2顯示了花瓣和葉生長的運(yùn)動(dòng)學(xué)分析。A:Col-0和dal-1突變體花瓣的生長。各系列的最大花瓣來自開放的花(14期)。B野生型和dal-1突變體花瓣中的有絲分裂指數(shù)。(B)中的時(shí)間軸對(duì)應(yīng)于(A)中的時(shí)間軸。C:Col-0、dal-l、DAlC0M#2和35S::DA1K358K#5的第5葉隨時(shí)間的生長。DAE是出現(xiàn)后天數(shù)。7圖3顯示了DAI基因的鑒定和表達(dá)。A:DA1基因結(jié)構(gòu)，顯示出dal-1、sodl-1、sodl-2和sodl-3等位基因的突變位點(diǎn)。指示出起始密碼子(ATG)和終止密碼子(TGA)。閉合方框指示編碼序列，框間線段指示內(nèi)含子。顯示出DA1基因中的T-DNA插入位點(diǎn)(dal-kol、dal-ko2和dal_ko3)。BG通過pDAl:GUS轉(zhuǎn)基因表達(dá)監(jiān)測(cè)的DAI啟動(dòng)子活性。幼苗(B和C)，胚(D)、根(E)和花瓣(F和G)中的GUS染色。H和I:Col-0(H)和dal-koldarl-1雙突變體(I)的花。J:Col_0(左)和dal-koldarl-l雙突變體(右)的長角果。K:Col-0、dal-kol、darl-l、dal-koldarl-l雙突變體的花瓣面積。dal-koldarl-l雙突變體展示出包含較大的花和花瓣、寬且平的長角果和較短的花柱的dal-1表型。L定量RT-PCR分析揭示出DA1的表達(dá)受到ABA的緩慢誘導(dǎo)。將7日齡野生型幼苗用10ymABA處理2小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)、18小時(shí)和30小時(shí)。M和N在恒定光照條件下野生型Col_0和dal_l種子在帶有2iimABA的MS培養(yǎng)基上生長。與野生型Col_0(M)相比，dal_l突變體(N)表現(xiàn)出不對(duì)ABA敏感的幼苗建立。0將4日齡的Col-0(左)、dal-l(中)和DA1C0M#2(右)的幼苗轉(zhuǎn)移至帶有5umABA的MS培養(yǎng)基中3周。在抑制野生型Col_0幼苗生長的低水平ABA的存在下，dal-1突變體幼苗繼續(xù)生長。比例尺1mm(B、H、I、M禾口N)，50ym(D禾口E)，0.5mm(C和J)，0.1mm(F和G)，0.5cm(0)。圖4顯示出E0D1/BB中的突變協(xié)同地增強(qiáng)了dal-1的表型。A:Col_0、dal_l、eodl-2和eodl-2dal-l雙突變體的花。B:Col-0、eodl-2、eodl-2和eodl-2dal_l雙突變體的土壤生長植物。C以mg/100粒種子顯示Col-0、dal-1、eodl-2和eodl-2dal_l雙突變體的平均種子重量。顯示了標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=5)。植物在相同條件下生長。D:Col-0、dal-l、eodl-2和eodl-2dal-l的花瓣面積。顯示了標(biāo)準(zhǔn)偏差值(n>50)E:DA1和E0D1/BB控制種子和器官尺寸的模式。比例尺2mm(A)，50mm⑶。圖5顯示出dal-1具有較大的種子。如補(bǔ)充方法中所述，讓來自各種植物的經(jīng)預(yù)先稱重的野生型Col-0(A)、dal-1(B)、DA1C0M#2(C)、35S::DA1臓#5(D)和dal-koldarl-l(E)突變體種子批次通過一系列網(wǎng)目尺寸(以Pm計(jì))遞減的金屬絲篩。F各植株的平均種子重量。給出了標(biāo)準(zhǔn)偏差值(n=5)。植物在相同條件下生長。圖6顯示出野生型和dal-1植物中的種子發(fā)育。AL:用差示反差光學(xué)器件(differentialcontrastoptic)成像的野生型(A、C、E、G、I和K)和dal-1(B、D、F、H、J和L)的已空出的胚珠(A、B)和種子(CL)。比例尺50iim(AL)。圖7顯示出具有帶有額外花瓣的大花和帶有額外心皮的長角果的dal-1植物。A野生型花。B和C:帶有額外花瓣的dal-1花。D:野生型長角果。EG:帶有額外心皮的dal-1長角果。比例尺lmm(AC)，2mm(DG)。圖8顯示出dal-1突變體具有延長的細(xì)胞增殖。A和B:生長于含葡萄糖的MS培養(yǎng)基上的野生型(A)和dal-1(B)幼苗的第1葉中pCyclinBl；1::GUS的活性(發(fā)芽后9天)。C通過使用定量實(shí)時(shí)RT-PCR分析來檢測(cè)野生型Col-0和dal-1植物的第5葉中的SAG12基因的表達(dá)水平。DAE是出現(xiàn)后天數(shù)。圖9顯示了基于定位圖(map-based)的DA1克隆。A:DA1基因座的精細(xì)定位圖。DA1基因座被定位于染色體1(Chr1)且在標(biāo)記物T16N11與CER451450之間。DA1基因座進(jìn)而被縮窄至標(biāo)記物T29M8-26與F18014-52之間的30_kb基因組DNA區(qū)并且與CAPS標(biāo)記物DA1CAPS共分離。顯示了從F2植株鑒定的重組體的數(shù)目。B使用CAPS標(biāo)記物DA1CAPS鑒定出dal-1中的突變。CD通過RT-PCR分析揭示了野生型和T-DNA系中的DAI(C)和DAR1(D)的表達(dá)水平。圖10顯示了擬南芥中的DA1相關(guān)蛋白和其它物種中的DA1同源物的鑒定。擬南芥中的DA1相關(guān)蛋白顯示于圖10A中，而其它物種中的DA1相關(guān)蛋白顯示于圖10B中。圖11顯示出DA1中的R358K突變是引起種子和器官尺寸增加的原因。A:Col-0、dal-l、dal-kol、dal-ko2、dal-ko3、dal-l/Col-0F^dal-kol/dal-1F1>dal-ko2/dal-lF^dal-ko3/dal-lF^dal-kol/Col-0F^dal-ko2/Col-0F^dal-ko3/Col-0F!和dal-kol/dal-1的花瓣面積。給出了標(biāo)準(zhǔn)偏差值(n>50)。B以mg/100粒種子給出了Col_0、dal-1、dal-kol、dal-kol/dal-l和dal-kol/Col-O的平均種子重量。給出了標(biāo)準(zhǔn)偏差值(n=5)。植物在相同條件下生長。圖12顯示出的dal-1增強(qiáng)子中的突變(E0D1/BB)協(xié)同地提高了dal_l的大種子和器官表型。A:e0dl-ldal-l雙突變體與dal-1相比具有增加的種子重量。dal-1和eodl-ldal-1雙突變體的平均種子重量以mg/100粒種子給出。顯示了標(biāo)準(zhǔn)偏差值(n=5)。植物在相同條件下生長。B:eodl-ldal-l雙突變體具有比dal-1更大的花。C:E0D1/BB基因結(jié)構(gòu)，顯示出兩個(gè)eodl等位基因的突變位點(diǎn)。指示出起始密碼子(ATG)和終止密碼子(TGA)。封閉方框指示編碼序列，框間線段指示內(nèi)含子。還顯示了eodl-1中的突變位點(diǎn)和eodl-2中的T-DNA插入位點(diǎn)。D顯示了Col-0、dal-l、eodl_2和eodl-2dal_l植物的8周齡植株。eod2-ldal_l植株比dal-1具有更長的生長期。E顯示了Ler、dal-lLer、bb_l和bb-ldal-lLer植物的8周齡植株。bb-ldal-lLer植株比dal-lLer具有更長的生長期。比例尺:lmm(B),5cm(D和E)。F:Ler、dal_lLer、bb_l和bb-ldal-lLer雙突變體的花瓣面積。顯示出標(biāo)準(zhǔn)偏差值(n>50)。BB中的突變協(xié)同地提高了dal-1的花瓣尺寸表型，表明DA1和BB在平行的途徑中起作用。圖13顯示了dal-1與ant-5、axrl-12、ap2_7和arf2_7之間的遺傳分析。A和B與其親本系相比，ant-5dal-lLer和aXrl-12dal-l雙突變體的花瓣尺寸表型基本是加和性的(additive)。(和D與其親本系相比，ap2-7dal_l和arf2-7dal_l雙突變體的種子大小表型也基本是加合性的。圖14顯示了DA1樣蛋白的系統(tǒng)發(fā)育分析。左圖使用采用缺省設(shè)定(蛋白序列進(jìn)化的JTT模型和鄰位相接(neighbour-joining)算法)的PHYLIP軟件(版本3.66)創(chuàng)建了距離矩陣系統(tǒng)發(fā)育樹。然后將該系統(tǒng)發(fā)育樹導(dǎo)入MEGA4.0軟件以重新排列。通過100次重復(fù)獲得了自舉值(bootstrapvalue)(分支上指示物種分割為由該分支分開的兩組的情況在樹中出現(xiàn)的次數(shù)的數(shù)字，僅在大于70時(shí)顯示)。用于系統(tǒng)發(fā)育樹的數(shù)據(jù)是全長DA1樣蛋白序列的C末端250個(gè)氨基酸區(qū)域。右圖顯示了(http//ucjeps.berkeley.edu/TreeofLife/hyperbolic,php)所展示的基于雙曲型樹的植物進(jìn)化的簡化概況圖。與文字相關(guān)的進(jìn)化枝保留在圖中。對(duì)被分析的物種加了下劃線。圖15A15D顯示了Col_0、BrDAlaC0M(35S::BrDAla轉(zhuǎn)基因系)、0sDAlC0M(35S::0sDAl轉(zhuǎn)基因系)和dal_l的長角果。EH:Col_0、dal_l、BrDAlbC0M(35S::BrDAlb轉(zhuǎn)基因系)和35S::BrDAlaK/K(在Col_0中過表達(dá)35S::BrDAlaE/K)的蓮座葉。I顯示出dal-1的突變位點(diǎn)和T-DNA插入位點(diǎn)(dal-kol、dal_ko2和dal_ko3)的DAI基因結(jié)構(gòu)。9具體實(shí)施例方式在各個(gè)方面，本發(fā)明提供了由DA基因和本文所述的核酸序列編碼的分離的DA多肽。如本文所述，DA多肽包括DA-1多肽和DA_1相關(guān)(DAR)多肽及其功能性同源物。包括DA-1多肽和DA-1相關(guān)(DAR)多肽的DA多肽擁有特征性的域結(jié)構(gòu)。DA多肽可以包含UIM1域和UIM2域。UIM1域可以由SEQIDNO3的序列組成，而UIM2域可以由SEQIDNO4的序列組成。p---pLpbAlpb.Sbp-.ppp(SEQIDNO3)p---pLpbAlpb.Sbp-sppp(SEQIDNO4)其中p是極性氨基酸殘基，例如，。、03、11、1(、^、1^或丁;b是大氨基酸殘基，例如，E、F、H、I、K、L、M、Q、R、W或Y；s是小氨基酸殘基，例如，A、C、D、G、N、P、S、T或V；1是脂肪族氨基酸殘基，例如，I、L或V；.是缺失或任何氨基酸，和-是任何氨基酸。下文列出了合適的UIM1和UIM2域序列的實(shí)例。UIM1和UIM2域序列的其它實(shí)例可以用如本文所述的標(biāo)準(zhǔn)序列分析技術(shù)(例如，簡單模塊結(jié)構(gòu)研究工具(SimpleModularArchitectureResearchTool；SMART)；EMBLHeidelberg,DE)ii對(duì)于f胃。DA多肽可以包含LIM域。LIM域可以由SEQIDNO5的序列組成；pCs.Cscslhs.....bhlptb.sp.aH...pCFpCs..pCppsLss....p.ab.pcspbaCpps...(SEQIDNO:5)其中c是帶電荷的氨基酸殘基，例如，D、E、H、K、R；p是極性氨基酸殘基，例如，。、03、11、1(、^、1^或丁;h是疏水性氨基酸殘基，例如，A、C、F、G、H、I、L、M、T、V、W和Y；t是極小氨基酸殘基，例如，A、G或S；a是芳香氨基酸殘基，例如，F(xiàn)、H、W或Y;b是大氨基酸殘基，例如，E、F、H、I、K、L、M、Q、R、W或Y；s是小氨基酸殘基，例如，A、C、D、G、N、P、S、T或V；1是脂肪族氨基酸殘基，例如，I、L或V；.是缺失或任何氨基酸，和-是任何氨基酸。下文列出了合適的LIM域序列的實(shí)例。LIM域序列的其它實(shí)例可以用標(biāo)準(zhǔn)序列分析技術(shù)(例如，簡單模塊結(jié)構(gòu)研究工具(SimpleModularArchitectureResearchTool；SMART)；EMBLHeidelberg,DE)進(jìn)行鑒定。DA多肽可以包含與限定DAI的C末端域的SEQIDNO1的250號(hào)532號(hào)殘基的氨基酸具有至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、10至少90%、至少95%或至少98%的同一性的羧基末端區(qū)。DA多肽還可以在等同于SEQIDNO:1的358位的位置包含R。使用標(biāo)準(zhǔn)序列分析工具可以容易地鑒定氨基酸序列中等同于SEQIDNO1的358位的位置。帶有處在等同于SEQIDN0:1的358位的位置的R殘基的序列的實(shí)例顯示于本文其它部分。在某些優(yōu)選實(shí)施方式中，DA多肽可以包含SEQIDNO:3的UIM域SEQIDNO4的UIM域SEQIDNO5的LIM域；和與SEQIDNO1的250位532位殘基的具有至少20%的序列同一性的C末端區(qū)。優(yōu)選的DA多肽還可以在等同于SEQIDN0:1的358位的位置包含R。例如，DA多肽可以包含選自由SGN-U317073、SGN-U277808、SGN-U325242、AT4G36860、SGN-U209255、AB082378.1、AT2G39830、CAN69394.1、0S03G16090.9234.M000024,29235.M000021、AT5G66620、AT5G66630、AT5G66610、AT5G66640、AT5G17890、SGN-U320806、AB096533.1、CAL53532.1、0S06G08400、SGN-U328968、0S03G42820禾口0S12G40490組成的組的數(shù)據(jù)庫條目中列出的氨基酸序列或者可以是保留了DA活性的這些序列中的一個(gè)序列的變異體或片段。DA多肽可以包含AtDAl、AtDARl、AtDAR2、AtDAR3、AtDAR4、AtDAR5、AtDAR6、AtDAR7、BrDAla、BrDAlb、BrDARl、BrDAR2、BrDAR3_7、BrDALl、BrDAL2、BrDAL3、OsDAl、0sDAR2、0sDAL3、0sDAL5、PpDAL1、PpDAL2、PpDAL3、PpDAL4、PpDAL5、PpDAL6、PpDAL7、PpDAL8、SmDALl和SmDAL2的氨基酸序列(如序列比對(duì)E中所示)。DA多肽的序列的數(shù)據(jù)庫條目的其它實(shí)例顯示于表6和表11中。包括上文所述特征性特點(diǎn)的其它DA多肽序列可以用標(biāo)準(zhǔn)序列分析工具進(jìn)行鑒定。在某些優(yōu)選實(shí)施方式中，DA多肽可以包含SEQIDNO:1(AT1G19270；NP_173361.1GI=15221983)的氨基酸序列或者可以是保留了DA活性的該序列的片段或變異體。作為參照DA序列(例如，SEQIDN01或序列比對(duì)E中所示序列)的變異體的DA多肽可以包含與參照序列具有至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或至少98%的序列同一性的氨基酸序列。作為SEQIDN0:1的變異體的DA多肽可以包含具有序列QENEDIDRAIALSLLEENQE(SEQIDNO6)的UIM1域和具有序列DEDEQIARALQESMVVGNSP(SEQIDNO7)的UIM2域。作為SEQIDNO1的變異體的DA多肽可以包含具有以下序列的LIM域ICAGCNMEIGHGRFLNCLNSLWHPECFRCYGCSQPISEYEFSTSGNYPFHKAC(SEQIDNO8)特定的氨基酸序列變異體可以以1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)、4個(gè)、510個(gè)、1020個(gè)、2030個(gè)、3050個(gè)氨基酸或者超過50個(gè)氨基酸的插入、添加、取代或缺失而不同于SEQIDNO1的DA-1多肽。一般參考GAP算法(WisconsinPackage,Accelerys,SanDiego，美國)來定義序列相似性和同一性。GAP使用Needleman和Wunsch算法來對(duì)比兩個(gè)完整序列，該算法使匹配數(shù)最大化而使間隙數(shù)最小化。通常使用缺省參數(shù)，且間隙創(chuàng)建罰分=12，間隙延長罰分=4。優(yōu)選使用GAP,但也可使用其它算法，例如，BLAST(使用Altschul等，(1990)J.Mol.Biol.215405-410的方法)、FASTA(使用Pearson和Lipman(1988)PNASUSA852444-2448的方法)或Smith-Waterman算法(Smith和Waterman(1981)J.MolBiol.147195-197)或者TBLASTN程序(Altschul等，(1990)，見上)，通常采用缺省參數(shù)。特別地，可以使用psi-Blast算法(Nucl.AcidsRes.(1997)253389-3402)。序列比較可以在本文所述的相關(guān)序列的整個(gè)長度上進(jìn)行。在各個(gè)方面，本發(fā)明提供了編碼如本文所述的DA多肽的DA基因和核酸序列。例如，編碼DA多肽的核酸可以包含選自由SGN-U317073、SGN-U277808、SGN-U325242、AT4G36860、SGN-U209255、AB082378.1、AT2G39830、CAN69394.1、0S03G16090、9234.M000024、29235.M000021、AT5G66620、AT5G66630、AT5G66610、AT5G66640、AT5G17890、SGN-U320806、AB096533.1、CAL53532.1、0S06G08400、SGN-U328968、0S03G42820禾口0S12G40490組成的組的數(shù)據(jù)庫條目中列出的核苷酸序列或者可以是這些序列中的一個(gè)序列的變異體或片段。編碼DA多肽的核酸序列的其它數(shù)據(jù)庫條目顯示于表7中。在某些優(yōu)選實(shí)施方式中，編碼DA多肽的核酸可以包含SEQIDNO:2的核苷酸序列或SEQIDNO:1116中的任一個(gè)的核苷酸序列，或者可以是編碼保留了DA活性的多肽的該序列的變異體或片段。變異體序列可以為參照DA序列(例如，SEQIDNO2；SEQIDN0:1116中的任一個(gè)；或具有上文所列的數(shù)據(jù)庫條目的序列)的突變體、同源物或等位基因，并且可以以核酸中的一個(gè)或多個(gè)核苷酸的一個(gè)或多個(gè)添加、插入、缺失或取代而不同于參照DA序列，從而導(dǎo)致在所編碼的多肽中一個(gè)或多個(gè)氨基酸的添加、插入、缺失或取代。當(dāng)然，也包括對(duì)所編碼的氨基酸序列不造成任何差異的核酸的改變。編碼DA多肽的核酸可以包含與參照DA核酸序列具有至少20%或至少30%、優(yōu)選至少40%、至少50%、至少60%、至少65%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或至少98%的序列同一性的序列。序列同一性如上文所述。片段或變異體可以包含編碼功能性DA多肽(即保留了由野生型DA基因編碼的多肽的一種或多種功能性特征(例如，調(diào)節(jié)增殖性生長的持續(xù)時(shí)間的能力)的多肽)的序列。包含作為參照DA核酸序列(例如，SEQIDNO2或者SEQIDN01116中的任一序列)的變異體的核苷酸序列的核酸可以在嚴(yán)格條件下與該核酸序列或其互補(bǔ)物選擇性雜交。例如對(duì)于約80%90%相同的序列的雜交而言，嚴(yán)格條件包括在42°C的0.25MNa2HP04、pH7.2,65%SDS、10%硫酸葡聚糖中雜交過夜并最終在55°C的0.1XSSC、0.1%SDS中洗滌。對(duì)于大于約90%相同的序列的檢測(cè)，合適的條件包括在65°C的0.25MNa2HP04、pH7.2,6.5%305、10%硫酸葡聚糖中雜交過夜并最終在601的0.1\55(、0.1%SDS中洗滌?？赡芴貏e適于植物核酸制備的另一種選擇是5XSSPE溶液(最終為0.9MNaCl、0.05M磷酸鈉、0.005MEDTA、pH7.7)、5XDenhardt溶液、0.5%SDS在50°C或65°C過夜。12必要時(shí)可以在65°C的0.2XSSC/0.SDS中或50°C60°C的1XSSC/0.SDS中進(jìn)行洗滌。本文所述的核酸可以是完全合成或部分合成的。特別地，這些核酸可以是重組的，重組方式為將未共同發(fā)現(xiàn)于自然中(不連續(xù)延伸)的核酸序列連接或者人工合并。作為另一種選擇，可以例如使用自動(dòng)合成儀來直接合成它們。當(dāng)然，核酸可以是雙鏈或單鏈的，可以是cDNA或基因組DNA或者RNA。根據(jù)設(shè)計(jì)，核酸可以是完全合成的或部分合成的。本領(lǐng)域技術(shù)人員自然可以理解，當(dāng)核酸包含RNA時(shí)，對(duì)于所示序列的參考應(yīng)被認(rèn)為是參考以U取代T的RNA等價(jià)物。在各個(gè)方面，本發(fā)明提供了顯性負(fù)向DA多肽和編碼核酸。顯性負(fù)向DA多肽可以在表達(dá)于植物中時(shí)增加器官尺寸、種子尺寸或壽命中的一項(xiàng)或多項(xiàng)而不會(huì)影響能育性。DA多肽的顯性負(fù)向等位基因可以包含具有與SEQIDNO:1的358位等同的位置處的突變(例如，取代或缺失)的DA多肽。例如，DA多肽的顯性負(fù)向等位基因可以包含與SEQIDNO1的358位等同的位置處的保守殘基R的突變。在優(yōu)選實(shí)施方式中，該保守殘基R可以被K取代。SEQIDNO1的R358位位于保守C末端區(qū)(SEQIDNO1的250532號(hào)氨基酸)內(nèi)。可以通過使用標(biāo)準(zhǔn)序列分析和比對(duì)工具來比對(duì)那些保守C末端區(qū)從而進(jìn)行鑒定位于DA多肽序列中的與SEQIDN0:1的358位等同的位置處的R殘基。編碼DA蛋白的顯性負(fù)向等位基因的核酸可以由任何便利技術(shù)生成。例如，可以對(duì)編碼DA多肽的核酸采用定點(diǎn)突變來改變與SEQIDN0:1的R358等同的位置處的保守R殘基，例如，變?yōu)镵。用于體外突變的試劑和試劑盒可商購?？梢匀缦滤鰧⒕幋aDA蛋白的顯性負(fù)向等位基因的突變核酸進(jìn)一步克隆至表達(dá)載體內(nèi)并在植物細(xì)胞中表達(dá)以改變植物表型。編碼DA多肽的核酸可以在與從中最初將其分離的相同植物物種或品種或者不同的植物物種或品種(例如，異源植物)中表達(dá)?！爱愒吹摹笔侵敢呀?jīng)使用基因工程或重組手段(即通過人的干預(yù))來將所討論的基因/核苷酸序列或調(diào)節(jié)該被討論的基因/序列的序列導(dǎo)入植物或其原種的所述細(xì)胞內(nèi)。與植物細(xì)胞異源的核苷酸序列可以是不在該類型、品種或物種的細(xì)胞中天然存在的(即，外源性的或外來的)，或者可以是不在所述細(xì)胞的亞細(xì)胞環(huán)境或基因組環(huán)境中天然存在的序列，或者可以是不是在所述細(xì)胞中被天然調(diào)節(jié)(即與非天然調(diào)節(jié)元件可操作性連接)的序列?！胺蛛x的”是指分離的分子(例如，多肽或核酸)存在于與其在自然中的存在環(huán)境不同的環(huán)境中。例如，分離的核酸可以是相對(duì)于其天然存在的基因組環(huán)境基本分離的。分離的核酸可以存在于除了其天然存在的環(huán)境以外的其它環(huán)境中。編碼本文所述的DA多肽的核酸可以與如啟動(dòng)子(例如，組成型啟動(dòng)子、誘導(dǎo)型啟動(dòng)子、組織特異性啟動(dòng)子或發(fā)育特異性啟動(dòng)子)等異源調(diào)節(jié)序列可操作性連接。許多合適的調(diào)節(jié)序列是本領(lǐng)域內(nèi)已知的并且可以根據(jù)本發(fā)明使用。合適的調(diào)節(jié)序列的實(shí)例可以源自植物病毒，例如，以高水平表達(dá)于幾乎所有植物組織中的花椰菜花葉病毒35S(CaMV35S)基因啟動(dòng)子(Benfey等，(1990)EMBOJ9:1677-1684)。其它合適的組成型調(diào)節(jié)元件包括花椰菜花葉病毒19S啟動(dòng)子；玄參花葉病毒啟動(dòng)子；和胭脂堿合成酶(nos)基因啟動(dòng)子(Singer等，PlantMol.Biol.14433(1990)；An,PlantPhysiol.811386(1986))。下文中舉例說明了用于在強(qiáng)組成型啟動(dòng)子(所述35S啟動(dòng)子)的控制下表達(dá)DA基因的構(gòu)建體，但本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，可以采用各種各樣的其它啟動(dòng)子以在特定的環(huán)境中獲益?？梢圆捎媒M織特異性啟動(dòng)子來在特定的組織或器官中表達(dá)DA多肽的顯性負(fù)向形式以增加該組織或器官相對(duì)于其中所述組織特異性啟動(dòng)子沒有活性和所述DA多肽的顯性負(fù)向形式?jīng)]有表達(dá)的組織或器官的尺寸。例如，為增加種子的尺寸，可以使用種子特異性啟動(dòng)子使DA多肽的顯性負(fù)向形式優(yōu)先表達(dá)于種子組織中。例如，可以將所述多肽使用如IN0啟動(dòng)子(MeisterR.M.，PlantJournal37=426-438(2004))等珠被特異性啟動(dòng)子表達(dá)于發(fā)育中的珠被中，或者使用組蛋白H4啟動(dòng)子(DevicM.Plantjournal9；205-215(1996))等胚特異性啟動(dòng)子表達(dá)于胚中。作為另一種選擇，或者除此以外，可以選擇誘導(dǎo)型啟動(dòng)子。通過這種方式，例如，可以將DA多肽的顯性負(fù)向形式在特定的時(shí)間或位置表達(dá)以便獲得所需的在器官生長中的變化?？梢圆捎冒ù颊T導(dǎo)型AlcA基因表達(dá)體系(Roslan等，PlantJournal；2001Oct；28(2)225-35)的誘導(dǎo)型啟動(dòng)子。可以將DA核酸裝載于核酸構(gòu)建體或載體上。所述構(gòu)建體或載體優(yōu)選適于轉(zhuǎn)化至植物細(xì)胞內(nèi)和/或在植物細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。載體尤其是雙鏈或單鏈的線形或環(huán)形形式的任何質(zhì)粒、粘粒、噬菌體或農(nóng)桿菌二元載體，它們可以是或不是可自身傳遞或可自身移動(dòng)的，并且能通過整合至細(xì)胞基因組內(nèi)或在染色體外存在而轉(zhuǎn)化原核或真核宿主、特別是植物宿主(例如，帶有復(fù)制起點(diǎn)的自主復(fù)制質(zhì)粒)。具體而言，上述載體包括穿梭載體(shuttlevector)，穿梭載體是指天然地或通過設(shè)計(jì)而能夠在兩種不同生物體中復(fù)制的DNA載質(zhì)，所述生物體選自放線菌及相關(guān)物種、細(xì)菌和真核(例如，高等植物、哺乳動(dòng)物、酵母菌或真菌)細(xì)胞。包含如上所述的核酸的構(gòu)建體或載體不必包含啟動(dòng)子或其它調(diào)節(jié)序列，特別是在如果該載體將被用于將所述核酸導(dǎo)入細(xì)胞以便重組至基因組內(nèi)的情況下。構(gòu)建體和載體還可以包含由可賦予如對(duì)抗生素的抗性等可選擇的表型的基因組成的可選擇遺傳標(biāo)記，所述抗生素可以是例如卡那霉素、潮霉素、膦基麥黃酮(phosphinotricin)、氯磺隆、甲氨蝶呤、慶大霉素、大觀霉素、咪唑啉酮、草甘膦和d_氨基酸等。本領(lǐng)域技術(shù)人員能很好地為重組基因表達(dá)(特別是在植物細(xì)胞中的表達(dá))構(gòu)建載體并設(shè)計(jì)方案?？梢赃x擇或構(gòu)建含有適當(dāng)?shù)恼{(diào)節(jié)序列的合適載體，所述調(diào)節(jié)序列包括啟動(dòng)子序列、終止子片段、多腺苷酸化序列、增強(qiáng)子序列、標(biāo)記物基因和適當(dāng)?shù)钠渌蛄小８敿?xì)的內(nèi)容參見例如MolecularCloning:aLaboratoryManual第3版，Sambrook&Russell,2001,ColdSpringHarborLaboratoryPress。本領(lǐng)域技術(shù)人員能為例如微生物或植物細(xì)胞中的重組基因表達(dá)構(gòu)建載體和設(shè)計(jì)方案?？梢赃x擇或構(gòu)建含有適當(dāng)?shù)恼{(diào)節(jié)序列的合適載體，所述調(diào)節(jié)序列包括啟動(dòng)子序列、終止子片段、多腺苷酸化序列、增強(qiáng)子序列、標(biāo)記物基因和適當(dāng)?shù)钠渌蛄?。更詳?xì)的內(nèi)容參見例如MolecularCloning:aLaboratoryManual第3版，Sambrook等，2001，Cold14SpringHarborLaboratoryPress禾口ProtocolsinMolecularBiology,第二版，Ausubel等編著，JohnWiley&Sons，1992。在Bevan，Nucl.AcidsRes.(1984)12,8711-8721)以及Guerineau禾口Mullineaux,(1993)Planttransformationandexpressionvectors(PlantMolecularBiologyLabfax(CroyRRDed)Oxford,BIOSScientificPublishers,第121-148頁)中描述了此前極為成功地用于植物的具體步驟和載體。當(dāng)將選定基因構(gòu)建體導(dǎo)入細(xì)胞時(shí)，必須考慮到本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的某些考量。待插入的核酸應(yīng)該被組裝到含有可驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄的有效調(diào)節(jié)元件的構(gòu)建體內(nèi)。必須存在可利用的將構(gòu)建體運(yùn)送至細(xì)胞內(nèi)的方法。一旦構(gòu)建體位于細(xì)胞膜內(nèi)，向內(nèi)源染色體材料的整合可能會(huì)發(fā)生也可能不會(huì)發(fā)生。最后，靶標(biāo)細(xì)胞類型優(yōu)選能再生為完整植株的細(xì)胞。本領(lǐng)域技術(shù)人員還可理解，在生產(chǎn)用于實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的基因的表達(dá)的構(gòu)建體時(shí)，理想的是使用可提高編碼DA多肽的顯性負(fù)向形式的核酸的表達(dá)的構(gòu)建體和轉(zhuǎn)化方法。單拷貝基因在植物細(xì)胞的基因組內(nèi)的整合可能有益于使基因沉默效應(yīng)最小化。類似地，對(duì)整合的復(fù)雜性的控制在這方面也是有益的。在這方面特別令人感興趣的是，利用根據(jù)例如EP專利第EP1407000B1號(hào)(為此通過參考將其并入本文)的最小基因表達(dá)構(gòu)建體來轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞?？梢允褂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員公知的技術(shù)將核酸構(gòu)建體和載體導(dǎo)入植物細(xì)胞以產(chǎn)生具有本文所述性質(zhì)的轉(zhuǎn)基因植物。農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化是一種由本領(lǐng)域技術(shù)人員廣泛用于轉(zhuǎn)化木本植物物種、特別是如楊樹等闊葉樹種的方法。穩(wěn)定、有能育性的轉(zhuǎn)基因植物的生產(chǎn)現(xiàn)已在本領(lǐng)域中較為常規(guī)(參見例如，Toriyama等，(1988)Bio/Technology6，1072-1074;Zhang等，(1988)PlantCellR印7，379-384;Zhang等，(1988)TheorApplGenet76，835-840;Shimamoto等，(1989)Nature338，274-276;Datta等，(1990)Bio/Technology8，736-740;Christou等，(1991)Bio/Technology9,957-962;Peng等，(1991)InternationalRiceResearchlnstitute,Manila,Philippines563-574；Cao等，(1992)PlantCellRep.11，585-591；Li等，(1993)PlantCellR印12，250—255;Rathore等，(1993)PlantMolecularBiology21,871—884;Fromm等，(1990)Bio/Technology8，833-839;Gordon-Kamm等，(1990)PlantCell2，603-618；D'Halluin等，(1992)PlantCell4，1495-1505;Walters等，(1992)PlantMolecularBiologyl8,189-200；Koziel等，(1993)Biotechnology11,194-200；Vasil,I.K.(1994)PlantMolecularBiology25，925-937;Weeks等，(1993)PlantPhysiology102，1077-1084；Somers等，(1992)Bio/Technology10，1589-1594；W092/14828；Nilsson,0.等，(1992)TransgenicResearch1，209_220)。當(dāng)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化效率低或無效時(shí)(例如在某些裸子植物物種中)，可以優(yōu)選其它方法,例如，微彈(microprojectile)或顆粒轟擊(US5100792、EP-A-444882、EP-A_434616)、電穿孔(EP290395、W08706614)、微注射(W092/09696、W094/00583、EP331083、EP175966，Green等，(1987)PlantTissueandCellCulture,AcademicPress)、直接DNA攝入(DE4005152、W09012096,US4684611)、脂質(zhì)體介導(dǎo)的DNA攝入(例如，F(xiàn)reeman等，PlantCellPhysiol.291353(1984))或渦旋法(例如，Kindle,PNASU.S.A.871228(1990d))。在Oard，1991，Biotech.Adv.9:1_11中回顧了轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞的物理方法。作為另一種選擇，可以采用不同技術(shù)的組合來提高轉(zhuǎn)化過程的效率，例如，采用經(jīng)農(nóng)桿菌涂布的微粒的轟擊(EP-A-486234)或微彈轟擊以誘導(dǎo)創(chuàng)傷其后與農(nóng)桿菌共培養(yǎng)(EP-A-486233)。轉(zhuǎn)化后，植物可以例如從單細(xì)胞、愈傷組織或葉盤如本領(lǐng)域中標(biāo)準(zhǔn)的那樣再生。幾乎任何植物都能從該植物的細(xì)胞、組織和器官完全再生。在Vasil等，CellCultureandSomaticCellGeneticsofPlants,VolI,IIandIII,LaboratoryProceduresandTheirApplications,AcademicPress,1984以及Weissbach禾口Weissbach,MethodsforPlantMolecularBiology，AcademicPress，1989中對(duì)可利用技術(shù)進(jìn)行了回顧。轉(zhuǎn)化技術(shù)的具體選擇將由其轉(zhuǎn)化特定植物物種的效率以及用特定的選擇方法學(xué)實(shí)施本發(fā)明的人員的經(jīng)驗(yàn)和偏好確定。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見，將核酸導(dǎo)入植物細(xì)胞的轉(zhuǎn)化體系的具體選擇和植物再生技術(shù)的選擇對(duì)于本發(fā)明都不是至關(guān)重要的，也不是對(duì)本發(fā)明的限制。在另一方面，本發(fā)明提供了改變植物表型的方法，所述方法包括在所述植物細(xì)胞內(nèi)相對(duì)于對(duì)照植物表達(dá)編碼顯性負(fù)向DA多肽的核酸。合適的顯性負(fù)向DA多肽和在植物細(xì)胞中的表達(dá)方法如上所述。如上所述生成的帶有改變的表型的植物與對(duì)照植物相比可能具有延長的增殖性生長時(shí)期并且可能展示出增加的壽命、增加的器官尺寸和增加的種子尺寸中的一個(gè)或多個(gè)。優(yōu)選的是，具有改變的表型的植物的能育性正常。本文所述的方法可能可用于例如增加植物產(chǎn)量、改善作物中的籽粒產(chǎn)量和/或增加例如生物燃料生產(chǎn)中的植物生物量。本文顯示出，DA蛋白的顯性負(fù)向等位基因的效果通過植物中大哥(BB)蛋白的表達(dá)或功能的降低或消除而增強(qiáng)。大哥(BB)蛋白是已知會(huì)抑制植物器官生長的E3泛素連接酶(Disch，2006)。BB蛋白可以包含SEQIDNO:9(At3g63530NP_001030922.1GI79316205)的氨基酸序列或表9中所示數(shù)據(jù)庫條目的序列，或者可以是保留了BB活性或能干擾BB功能的這些序列中的任何一個(gè)序列的片段或變異體。作為參照BB序列(例如，SEQIDNO:9或表9中所示的數(shù)據(jù)庫條目的序列)的變異體的BB多肽可以包含與參照序列具有至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或至少98%序列同一性的氨基酸序列。序列同一性在上文中有更詳細(xì)的描述。特定的氨基酸序列變異體可以以1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)、4個(gè)、510個(gè)、1020個(gè)、2030個(gè)、3050個(gè)氨基酸或者超過50個(gè)氨基酸的插入、添加、取代或缺失而不同于SEQIDNO9的BB多肽。在某些實(shí)施方式中，BB多肽可以包含處在對(duì)應(yīng)于SEQIDNO9的44位的位置的A0編碼BB多肽的核酸可以例如包含表10中所示數(shù)據(jù)庫條目中所述的核苷酸或者可以是其變異體或片段。在某些優(yōu)選實(shí)施方式中，編碼BB多肽的核酸可以包含SEQIDNO10(NM_001035845.1GI=79316204)的核苷酸序列或者可以是編碼保留了BB活性的多肽的該序列的變異體或片段。變異體序列可以是參照BB序列(例如，SEQIDNO10或具有表10中所列的數(shù)據(jù)16庫條目的序列)的突變體、同源物或等位基因，并且可以以一個(gè)或多個(gè)核苷酸在核酸中的一個(gè)或多個(gè)添加、插入、缺失或取代而不同于參照BB序列，從而導(dǎo)致在所編碼的多肽中添加、插入、缺失或取代一個(gè)或多個(gè)氨基酸。當(dāng)然，也包括對(duì)所編碼的氨基酸序列不造成任何差異的核酸的改變。編碼BB多肽的核酸可以包含與參照BB核酸序列具有至少20%或至少30%、優(yōu)選至少40%、至少50%、至少60%、至少65%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或至少98%的序列同一性的序列。序列同一性如上文所述。片段或變異體可以包含編碼功能性BB多肽的序列，所述功能性BB多肽即保留了由野生型BB基因編碼的多肽的一種或多種功能性特征(例如，E3泛素連接酶活性)的多肽。如本文所述的改變植物表型的方法還可以包括減少或消除BB多肽在所述植物中的表達(dá)或活性。這可以增強(qiáng)或提高顯性負(fù)向DA多肽的表達(dá)對(duì)器官尺寸、種子尺寸或壽命中的一個(gè)項(xiàng)或多項(xiàng)的影響。用于減少或消除BB多肽在所述植物中的表達(dá)或活性的方法是本領(lǐng)域內(nèi)公知的并且下文中有更詳細(xì)的描述?？梢酝ㄟ^使植物細(xì)胞中編碼BB多肽的核酸序列突變并從突變的細(xì)胞再生植物從而消除活性蛋白的表達(dá)?？梢酝ㄟ^插入或缺失一個(gè)或多個(gè)核苷酸來使核酸突變。用于將靶標(biāo)基因失活或敲除的技術(shù)是本領(lǐng)域內(nèi)公知的。例如，可以通過在對(duì)應(yīng)于SEQIDNO9的44位的位置處引入如缺失、插入或取代等突變(例如，A至T的取代)來產(chǎn)生BB多肽的E0D1等位基因。BB多肽序列中與SEQIDNO9的44位等同的位置可以使用標(biāo)準(zhǔn)序列分析和比對(duì)工具來進(jìn)行鑒定。適合用于消除活性蛋白的表達(dá)的其它突變將對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員非常顯而易見?？梢允褂靡种萍夹g(shù)來減少活性蛋白的表達(dá)。對(duì)植物細(xì)胞中靶標(biāo)多肽的表達(dá)的抑制是本領(lǐng)域內(nèi)公知的。合適的抑制子核酸可以是以相對(duì)于靶標(biāo)BB基因的反義和/或正義方向插入以便實(shí)現(xiàn)BB基因表達(dá)減少的全部或部分的BB基因的拷貝。參見例如，vanderKrol等，(1990)ThePlantCell2，291-299;Napoli等，(1990)ThePlantCell2,279-289；Zhang等，(1992)ThePlantCell4，1575-1588，和US-A-5,231，020。該方法的進(jìn)一步改進(jìn)可見于W095/34668(Biosource)；Angel1&Baulcombe(1997)TheEMBOJournal16,123675-3684；和Voinnet&Baulcombe(1997)Nature389第553頁。在某些實(shí)施方式中，抑制子核酸可以是BB多肽表達(dá)的正義抑制子。合適的正義抑制子核酸可以是雙鏈RNA(FireA.等，Nature,Vol391，(1998))。由dsRNA介導(dǎo)的沉默是基因特異性的并且一般稱為RNA干擾(RNAi)。RNAi是兩步過程。首先，dsRNA在細(xì)胞內(nèi)被切割而產(chǎn)生長度為約21nt23nt且?guī)в?’末端磷酸根和3’短突出端(約2nt)的短干擾RNA(siRNA)。該siRNA特異性靶向?qū)?yīng)的mRNA序列以進(jìn)行破壞(ZamoreP.D.NatureStructuralBiology，8，9，746-750，(2001))。siRNA(有時(shí)稱為微RNA)通過與互補(bǔ)RNA結(jié)合并觸發(fā)mRNA消除(RNAi)或使mRNA至蛋白的翻譯停止從而下調(diào)基因表達(dá)。siRNA可以源自長雙鏈RNA的加工，并且在自然中發(fā)現(xiàn)時(shí)通常是外源性來源。微干擾RNA(miRNA)是內(nèi)源性編碼的小的非編碼RNA，源自短發(fā)夾結(jié)構(gòu)的加工。siRNA和miRNA均能不經(jīng)RNA切割而抑制攜帶部分互補(bǔ)的靶標(biāo)序列的mRNA的翻譯并且降解攜帶完全互補(bǔ)的序列的mRNA。于是，本發(fā)明提供了基于BB核酸序列的RNAi序列對(duì)抑制DA多肽表達(dá)的應(yīng)用。例如，RNAi序列可以對(duì)應(yīng)于SEQIDNO:10或上文提及的其它BB核酸序列或其變異體的片段。siRNA分子通常是雙鏈的，并且為了優(yōu)化經(jīng)RNA介導(dǎo)的靶標(biāo)基因功能的下調(diào)的有效性，優(yōu)選的是選擇siRNA分子的長度和序列以便確保該siRNA受到RISC復(fù)合體的正確識(shí)別并且使得siRNA足夠短以減少宿主響應(yīng)，所述RISC復(fù)合體介導(dǎo)siRNA對(duì)mRNA靶標(biāo)的識(shí)別。miRNA配體通常是單鏈的并且具有部分互補(bǔ)從而使該配體能形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)的區(qū)域。miRNA是從DNA轉(zhuǎn)錄但沒有翻譯成蛋白的RNA序列。編碼miRNA的DNA序列比該miRNA長。該DNA序列包含所述miRNA序列和近似反向互補(bǔ)物(approximatereversecomplement)。當(dāng)該DNA序列被轉(zhuǎn)錄為單鏈RNA分子時(shí)，miRNA序列及其反向互補(bǔ)物堿基配對(duì)而形成部分雙鏈的RNA片段。微RNA序列的設(shè)計(jì)在John等，PLoSBiology,11(2),1862-1879,2004中進(jìn)行了討論。通常，計(jì)劃用以模擬siRNA或miRNA的效果的RNA分子具有1040個(gè)核苷酸(或其合成類似物)，更優(yōu)選為1730個(gè)核苷酸，更優(yōu)選為1925個(gè)核苷酸，且最優(yōu)選為2123個(gè)核苷酸。在本發(fā)明的采用雙鏈siRNA的某些實(shí)施方式中，所述分子可以具有對(duì)稱的3’突出端(例如，1或2個(gè)(核糖)核苷酸)，通常為dTdT的UU3’突出端?；诒疚奶峁┑墓_內(nèi)容，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地例如使用如AmbionsiRNA查找器(參見http://www.ambion.com/techlib/misc/siRNA_finder.html)等資源來設(shè)計(jì)合適的siRNA和miRNA序列。siRNA和miRNA序列可以經(jīng)合成制備并外源性添加來造成基因下調(diào)，或者使用表達(dá)體系(例如，載體)制備。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，siRNA經(jīng)合成而生成。較長雙鏈RNA可以在細(xì)胞內(nèi)被加工以產(chǎn)生siRNA(參見例如，Myers(2003)NatureBiotechnology21:324_328)。較長dsRNA分子可以具有對(duì)稱的3，或5，突出端(例如，12個(gè)(核糖)核苷酸)，或者具有平頭末端。較長dsRNA分子可以為25個(gè)以上的核苷酸。優(yōu)選的是，較長dsRNA分子的長度為2530個(gè)核苷酸。更優(yōu)選的是，較長dsRNA分子的長度為2527個(gè)核苷酸。最優(yōu)選的是，較長dsRNA分子的長度為27個(gè)核苷酸。長度為30個(gè)核苷酸以上的dsRNA可以使用pDECAP載體進(jìn)行表達(dá)(Shinagawa等，GenesandDev.,17，1340-5，2003)。另一種選擇是在細(xì)胞中表達(dá)短發(fā)夾RNA分子(shRNA)。shRNA比合成的siRNA更加穩(wěn)定。shRNA由被小的環(huán)序列分開的短倒轉(zhuǎn)重復(fù)序列組成。一個(gè)倒轉(zhuǎn)重復(fù)序列是與基因靶標(biāo)互補(bǔ)的。在細(xì)胞中，shRNA被DICER加工為可降解靶標(biāo)基因mRNA并抑制表達(dá)的siRNA。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，shRNA通過從載體的轉(zhuǎn)錄而內(nèi)源性(在細(xì)胞內(nèi))生成?？梢酝ㄟ^在RNA聚合酶III啟動(dòng)子(例如，人HI或7SK啟動(dòng)子)或RNA聚合酶II啟動(dòng)子的控制下用編碼shRNA序列的載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞來在細(xì)胞內(nèi)生成shRNA。作為另一種選擇，可以通過從載體轉(zhuǎn)錄來外源性地(在體外)合成shRNA。然后可以將shRNA直接導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)。shRNA分子優(yōu)選包含SHR的部分序列。例如，shRNA序列的長度為40100個(gè)堿基，更優(yōu)選為4070個(gè)堿基。發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖的長度優(yōu)選為1930個(gè)堿基對(duì)。所述莖可以含有G-U配對(duì)以穩(wěn)定發(fā)夾結(jié)構(gòu)?？梢酝ㄟ^轉(zhuǎn)錄優(yōu)選包含在載體內(nèi)的核酸序列來重組制成siRNA分子、較長dsRNA18分子或miRNA分子。優(yōu)選的是，siRNA分子、較長dsRNA分子或miRNA分子包含SEQIDNO1、3、5、7、9、11、13、15的部分序列或其變異體。在其它實(shí)施方式中，抑制子核酸可以是兩種以上DA多肽的表達(dá)的反義抑制子。在使用反義序列來下調(diào)基因表達(dá)時(shí)，將核苷酸序列置于“反向取向”的啟動(dòng)子的控制下從而轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的RNA與從靶標(biāo)基因的“正義”鏈轉(zhuǎn)錄的正常mRNA互補(bǔ)。參見例如，Rothstein等，1987;Smith等，(1988)Nature334，724-726;Zhang等，(1992)ThePlantCell4，1575-1588，English等，(1996)ThePlantCell8，179_188。反義技術(shù)也在Bourque，(1995),PlantScience105，125-149和Flavell(1994)PNASUSA91，3490-3496中得到回顧。反義抑制子核酸可以包含至少10個(gè)核苷酸的反義序列，所述核苷酸來自SEQIDNO10或上文提及的其它BB序列的片段或其變異體的核苷酸序列。優(yōu)選的是，在用于下調(diào)靶標(biāo)序列表達(dá)的序列與靶標(biāo)序列之間可以存在完全序列同一性，但序列的全互補(bǔ)性或相似性不是關(guān)鍵。所用序列可以與靶標(biāo)基因中的一個(gè)或多個(gè)核苷酸不同。因此，根據(jù)本發(fā)明在下調(diào)基因表達(dá)中采用的序列可以是選自可利用的那些序列的野生型序列(例如，基因)或這類序列的變異體。所述序列不必包含開放閱讀框或者指定可以翻譯的RNA?？赡軆?yōu)選的是，對(duì)于各個(gè)反義和正義RNA分子存在足夠的同源性以進(jìn)行雜交。即使在所用序列和靶標(biāo)基因之間存在約5%、10%、15%或20%以上的錯(cuò)配時(shí)，也可能使基因表達(dá)下調(diào)。有效的是，所述同源性應(yīng)足以使基因表達(dá)的下調(diào)發(fā)生。抑制子核酸可以與組織特異性啟動(dòng)子或誘導(dǎo)型啟動(dòng)子可操作性連接。例如，可以使用珠被和種子特異性啟動(dòng)子來特異性下調(diào)正在發(fā)育的胚珠和種子中的兩種以上DA核酸以增加最終種子尺寸。如本文所述的可抑制BB多肽表達(dá)的核酸可以與如啟動(dòng)子等異源調(diào)節(jié)序列可操作性連接，例如，如上所述的組成型啟動(dòng)子、誘導(dǎo)型啟動(dòng)子、組織特異性啟動(dòng)子或發(fā)育特異性啟動(dòng)子?？梢匀缟纤鰧?gòu)建體或載體轉(zhuǎn)化至植物細(xì)胞內(nèi)并表達(dá)。表達(dá)DA多肽的顯性負(fù)向形式并且必要時(shí)減少或消除BB多肽表達(dá)的植物可以有性或無性繁殖，或者可以讓子代或后代生長。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供了制備具有改變的表型的植物的方法，所述方法包括通過轉(zhuǎn)化的方式將編碼顯性負(fù)向DA多肽的異源核酸引入植物細(xì)胞內(nèi)，和；由一個(gè)或多個(gè)轉(zhuǎn)化細(xì)胞再生植物。通過所述方法產(chǎn)生的植物的改變的表型已在上文進(jìn)行了更詳細(xì)的說明。所述方法可用于例如產(chǎn)生相對(duì)于對(duì)照植物具有增加的產(chǎn)量的植物，例如，具有提高的谷粒產(chǎn)量的作物。在某些實(shí)施方式中，方法還可以包括減少或消除BB多肽在植物細(xì)胞或植物中的表達(dá)或活性。這可以在引入編碼顯性負(fù)向DA多肽的核酸之前、其同時(shí)或之后進(jìn)行。例如，在某些實(shí)施方式中，可以在一個(gè)或多個(gè)已經(jīng)引入了編碼顯性負(fù)向DA多肽的核酸的植物細(xì)胞中消除或減少BB多肽的表達(dá)或活性。在其它實(shí)施方式中，可以在一個(gè)或多個(gè)已消除或減少BB19多肽表達(dá)的植物細(xì)胞內(nèi)引入編碼顯性負(fù)向DA多肽的核酸。如此生成的植物在一個(gè)或多個(gè)其植物細(xì)胞中可包含編碼顯性負(fù)向DA多肽的異源核酸并且可以擁有消除或減少的BB多肽表達(dá)或活性?？梢匀缟纤鰜頊p少或消除BB多肽的表達(dá)或活性。例如，方法可以包括通過轉(zhuǎn)化的方式將異源核酸引入植物細(xì)胞，其中所述核酸編碼可減少BB多肽表達(dá)的抑制子核酸如siRNA或shRNA等。編碼顯性負(fù)向DA多肽的異源核酸和BB抑制子核酸可以在相同或不同的表達(dá)載體上，并且可以通過常規(guī)技術(shù)被弓I入植物細(xì)胞內(nèi)。顯性負(fù)向DA多肽和BB抑制子核酸已在上文中更詳細(xì)地進(jìn)行了說明。如上所述生成的植物可以有性或無性繁殖或生長以產(chǎn)生子代或后代。從一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞再生的植物的子代或后代可以有性或無性繁殖或生長。該植物或其子代或后代可以與其它植物或其自身雜交。適用于本方法中的植物優(yōu)選為高等植物，例如，選自由紫草、紅豆杉屬、煙草、葫蘆科植物、胡蘿卜、蕓苔屬植物(vegetablebrassica)、甜瓜、辣椒、葡萄、萵苣、草莓、油菜、甜菜、小麥、大麥、玉米、水稻、大豆、豌豆、高粱、向日葵、番茄、馬鈴薯、胡椒、菊花、香石竹、亞麻、大麻和黑麥組成的組的農(nóng)業(yè)植物。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供了表達(dá)顯性負(fù)向DA多肽和可選地減少或消除BB多肽表達(dá)的植物，其中所述植物相對(duì)于對(duì)照展示出改變的表型。顯性負(fù)向DA多肽可以是異源多肽。合適的植物可以通過本文所述的方法產(chǎn)生。如上所述，與對(duì)照植物相比，所述植物可能具有增加的壽命、增加的器官尺寸、增加的增殖性生長持續(xù)時(shí)間和增加的種子尺寸中的一個(gè)或多個(gè)。所述植物相對(duì)于對(duì)照植物可具有正常能育性。本發(fā)明的植物可以是在一種以上的性質(zhì)上非純育(breedtrue)的植物?？梢愿鶕?jù)植物育種者權(quán)利(PlantBreedersRight)排除植物物種、特別是可登記植物物種。除了表達(dá)顯性負(fù)向DA多肽的植物(例如，通過本文所述方法產(chǎn)生的植物)以外，本發(fā)明還涵蓋了這類植物、種子、自交或雜交子裔和后代的任何克隆體以及它們中任何一個(gè)的任何可用于有性或無性繁殖或繁衍的部分或繁殖體(propagule)(例如，插條和種子)。此外，本發(fā)明還涵蓋了作為所述植物的有性或無性繁殖的子代、克隆體或后代的植物，或者所述植物、子代、克隆體或后代的任何部分或繁殖體。本發(fā)明人已經(jīng)顯示，兩種以上的DA多肽的表達(dá)或活性的減少或消除還產(chǎn)生了改變的表型，該表型的特征在于正常的能育性以及增加的壽命、增加的器官尺寸、增加的增殖性生長持續(xù)時(shí)間和增加的種子尺寸中的一個(gè)或多個(gè)。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供了改變植物表型的方法，所述方法包括減少或消除一個(gè)以上的植物細(xì)胞中兩種以上的活性DA蛋白的表達(dá)或活性。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供了帶有改變的表型的植物的生產(chǎn)方法，所述方法包括減少或消除植物細(xì)胞中兩種以上的活性DA蛋白的表達(dá)或活性，和；使植物從所述植物細(xì)胞再生。表達(dá)減少或消除后的植物的表型已在上文進(jìn)行了更詳細(xì)的描述?？梢酝ㄟ^使植物細(xì)胞中編碼兩種以上DA蛋白的核酸序列突變并使植物從突變的細(xì)胞重生來消除活性蛋白的表達(dá)?？梢酝ㄟ^插入或缺失一個(gè)以上的核苷酸來使核酸突變。用于靶標(biāo)基因的失活或敲除技術(shù)是本領(lǐng)域內(nèi)公知的。可以通過抑制技術(shù)來減少植物細(xì)胞中靶標(biāo)多肽的表達(dá)。用以抑制植物細(xì)胞中靶標(biāo)多肽表達(dá)的抑制子核酸的使用是本領(lǐng)域內(nèi)公知的并且已在上文進(jìn)行了更詳細(xì)的描述。減少兩種以上DA多肽的表達(dá)的抑制子核酸可以與組織特異性啟動(dòng)子或誘導(dǎo)型啟動(dòng)子可操作性連接。例如，可以使用珠被和種子特異性啟動(dòng)子來特異性地下調(diào)發(fā)育中的胚珠和種子中的兩種以上DA核酸以便增加最終種子尺寸。本發(fā)明的其它方面涉及DA多肽在植物細(xì)胞中的過表達(dá)。改變植物表型的方法可以包括在所述植物的細(xì)胞內(nèi)表達(dá)編碼DA多肽的核酸。所述植物可能具有改變的表型，該表型的特征在于正常的能育性以及與對(duì)照植物相比減少的壽命、減小的器官尺寸、減少的增殖性生長持續(xù)時(shí)間和減小的種子尺寸中的一個(gè)或多個(gè)?？梢匀缟衔膶?duì)于顯性負(fù)向DA多肽所述加以必要變動(dòng)來在植物細(xì)胞中表達(dá)編碼DA多肽的核酸。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供了鑒定顯性負(fù)向DA多肽的方法，所述方法包括提供編碼DA多肽的分離的核酸，在所述核酸內(nèi)引入一個(gè)以上的突變，通過轉(zhuǎn)化的方式將所述核酸導(dǎo)入植物細(xì)胞內(nèi)，從一個(gè)以上的轉(zhuǎn)化細(xì)胞使植物再生，和鑒定再生的植物的表型。包括正常的能育性以及與對(duì)照植物相比增加的壽命、增加的器官尺寸和增加的種子尺寸中的一個(gè)或多個(gè)在內(nèi)的改變的表型表明突變的核酸編碼顯性負(fù)向DA等位基因。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供了顯性負(fù)向DA多肽的制備方法，所述方法包括提供編碼植物DA多肽的核酸序列，鑒定所編碼的DA多肽中的與SEQIDNO1的358位等同的位置處的R殘基和使所述核酸突變以改變所編碼的植物DA多肽中的所述R殘基，突變體核酸序列編碼顯性負(fù)向DA多肽。編碼如上所述鑒定或制備的顯性負(fù)向DA多肽的突變核酸可以用于生成具有如上所述的改變的表型的植物。本文所用“和/或”應(yīng)被當(dāng)作對(duì)兩個(gè)指定特性或成分的每一個(gè)與另一個(gè)或不與另一個(gè)的具體公開。例如，“A和/或B”應(yīng)被當(dāng)作(i)A、(ii)B和(iii)A和B各自的具體公開，就如同此處將其單獨(dú)列出。除非上下文另外指明，上文所述特點(diǎn)的描述和定義不限于本發(fā)明的任何特定方面或?qū)嵤┓绞讲⒌韧貞?yīng)用于所描述的所有方面和實(shí)施方式。上文以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了一般性描述，現(xiàn)在將通過實(shí)施例的方式對(duì)本發(fā)明的特定方面和實(shí)施方式進(jìn)行說明以擴(kuò)展本發(fā)明的書面說明和實(shí)施，并確保本發(fā)明的具體實(shí)施方式的充分公開。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解，不應(yīng)將本發(fā)明的范圍釋義為受到這些實(shí)施例的具體情況的限制。而是，可以在不背離由本公開所包括的本發(fā)明范圍的情況下進(jìn)行這些具體情況的變化、擴(kuò)展、修改和等價(jià)以及這些細(xì)節(jié)的一般性擴(kuò)展。因此，為了理解本發(fā)明的范圍和本文所要求的專有權(quán)利，應(yīng)該參照本公開所附的權(quán)利要求(包括其等同形式)。本說明書中提及的所有文獻(xiàn)的全部內(nèi)容通過參考并入本文。此外，本說明書中提及的所有數(shù)據(jù)庫條目的全部內(nèi)容也通過參考并入本文。這包括任何序列在本申請(qǐng)?zhí)峤蝗掌跁r(shí)的現(xiàn)有版本。實(shí)施例下文所列數(shù)據(jù)顯示，“DA1”是終止種子和器官生長的關(guān)鍵調(diào)節(jié)物，并編碼含UIM和LIM域的新型蛋白。據(jù)顯示DA1通過限制增殖性生長的持續(xù)時(shí)間來控制種子和器官尺寸。dal-1的增強(qiáng)子eodl是bb的等位基因，表明DA1和E3泛素連接酶BB“大哥”(Disch，S.CurrBiol16，272-9(2006)；Science289，85-8(2000))能在平行途徑中起作用從而控制種子和植物器官的最終尺寸。DA1和E0D1/BB有可能共享控制種子和器官尺寸的下游組分。此前的研究已經(jīng)顯示，BB很可能通過標(biāo)記細(xì)胞蛋白以進(jìn)行降解來充當(dāng)器官生長的負(fù)調(diào)節(jié)物(Disch,S.Curr.Biol.16,272-279(2006))DAI含有兩個(gè)預(yù)測(cè)的UIM基序，這兩個(gè)UIM基序可能具有結(jié)合泛素和促進(jìn)泛素化的功能(Hurley，J.H.Biochem.J.399，361-372(2006))。DAI基因的表達(dá)受植物激素脫落酸(ABA)的誘導(dǎo)，且dal_l突變體對(duì)ABA不敏感，從而表明ABA通過DA1對(duì)器官生長進(jìn)行負(fù)調(diào)節(jié)。長期以來已經(jīng)認(rèn)識(shí)到ABA對(duì)生長的抑制效果是由對(duì)細(xì)胞分裂的抑制造成的(Lui，J.H.Planta194，368-373(1994)，這與ABA能誘導(dǎo)細(xì)胞周期蛋白依賴的激酶抑制劑(ICK1)的表達(dá)的事實(shí)相一致，細(xì)胞周期蛋白依賴的激酶抑制劑是細(xì)胞周期進(jìn)展的重要調(diào)節(jié)物(Wang，H.CellBiol.Int.27，297-299(2003))。在種子發(fā)育中，從發(fā)育種到成熟種的轉(zhuǎn)變也與種子ABA含量的增加相關(guān)(Finkelstein，R.R.PlantCell14增刊S15-45(2002))，表明ABA可能是植物所感知的通過誘導(dǎo)如DA1等負(fù)向生長調(diào)節(jié)物來控制種子和器官的最終尺寸的環(huán)境線索之一。本文在此報(bào)道，一種所述負(fù)向生長調(diào)節(jié)物是DA1。通過對(duì)abi4-ldal_l和abi5-ldal_l雙突變體進(jìn)行的遺傳分析，發(fā)現(xiàn)dal_l的大器官尺寸表型不依賴于ABI4和ABI5途徑。本文中還顯示出dal-1的抑制子(sodl)是在dal-1突變體基因中具有第二位點(diǎn)突變的據(jù)預(yù)測(cè)會(huì)減少基因功能的分子，從而表明DA1中的R358K突變是種子尺寸增加的原因且dal-1等位基因干擾DAR的活性。本文中還顯示，al-lR358K等位基因還以劑量依賴性方式干擾DA1功能，這被在野生型中過表達(dá)dal-1等位基因(35S::DA1R358K)的植物具有較大的種子和器官尺寸的事實(shí)證實(shí)。該結(jié)果還表明dal-1突變體基因(DA1R358K)可以用于進(jìn)行遺傳工程化以顯著增加種子重量和生物量。迄今為止，某些展示出較大種子的突變體(例如，ap2和arf2)通常對(duì)其能育性和生長具有較強(qiáng)的負(fù)向影響(Schruff,M.C.Development137，251-261(2006)；Ohto,M.A.Proc.NatnlAcad.SciUSA102，3123-3128(2005)Jofuku,K.D.Proc.NatnlAcad.Sci.USA102,3117-3122(2005))。然而，下文所述實(shí)驗(yàn)顯示，dal_l與野生型相比具有增加22的種子質(zhì)量、較大的器官尺寸但卻正常的能育性。方法植物材料將哥倫比亞擬南芥(ArabidopsisthalianaColumbia)(Col-0)入藏物用作野生型。除了Landsbergerecta背景的dal-lLer和bb_l以外，所有突變體處在Col_0環(huán)境下。分析之前，將dal-1和dal-lLer分別6次回交至Col-0和Ler。從SIGnAL(SalkInstitute)和NASC(Nottingham)獲得T-DNA插入系。基因篩選和基于定位圖的克隆從Col-0入藏物的經(jīng)甲基磺酸乙酯(EMS)處理的M2群體中鑒定出作為新型種子和器官尺寸突變體的dal-1。從dal-1的經(jīng)甲基磺酸乙酯(EMS)處理的M2群體中分別鑒定出作為dal-1的抑制子和增強(qiáng)子的sodl-1、sodl-2、sodl-3和eodl-1。從Ler/dal-1、Ler/sodl-3dal-l和dal-lLer/eodl-ldal-1的單交(singlecross)產(chǎn)生了F2定位群體。表2中提供了引物序列的列表。質(zhì)粒和轉(zhuǎn)基因植物生成了以下構(gòu)建體DA1C0M、35S::DA1-HA、35S::GFP-DA1、35S::DA1-GFP、35S:DA1R358K、pDAlGUS和35SE0D1。形態(tài)學(xué)和細(xì)胞分析樣品制備、測(cè)定、顯微鏡法和3-葡萄糖醛酸糖苷酶活性的組織化學(xué)染色使用標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行(JeffersonR.，EMB0J.EmboJ6，3901-3907(1987)。DAI限制種子和器官的尺寸為了鑒定種子和/或器官生長的阻遏物，從擬南芥Col-0入藏物中的EMS誘變?nèi)汉Y選具有較大種子和/或器官尺寸的da突變體(DA在中文中是“大”的意思)進(jìn)行。dal-1突變體與野生型相比具有較大的種子和器官尺寸但卻正常的能育性(圖lalp)，從而表明種子和器官生長分享公共的調(diào)節(jié)機(jī)制。采用dal-1與野生型植物之間的正反交的遺傳分析揭示出dal-1擁有在單核基因座中的突變。為了揭示野生型和dal-1突變體之間的種子尺寸的差異，通過使用一系列金屬絲網(wǎng)篩來對(duì)個(gè)體野生型和dal-1植株產(chǎn)生的種子進(jìn)行分級(jí)來檢驗(yàn)dal-1突變體種子尺寸。來自野生型的種子僅被保留在180ym300um孔隙網(wǎng)中，而突變體種子展示出向較大的排除尺寸180iim355um的范圍偏移(圖5a和5b)。超過80%的野生型種子保留在250um孔隙網(wǎng)中，然而約70%的dal-1種子保留在300Pm孔隙網(wǎng)中。為了確定dal_l的種子尺寸的增加是否反映出胚尺寸的變化，從野生型和dal-1突變體種子分離出成熟胚。dal-1成熟胚比野生型的成熟胚明顯更豐滿和更長(圖lc和Id)。觀察到dal-1種子的種子腔在整個(gè)發(fā)育過程中都比野生型的種子腔更大(圖6)。另外，dal-1突變體的種子質(zhì)量增加至野生型的種子質(zhì)量的132%(表5)。據(jù)發(fā)現(xiàn)dal-1植物的能育性正常并且每株dal-1植物的平均種子重量大于每株野生型植物的平均種子重量(圖5)。因此，推斷出DA1有助于決定擬南芥的種子尺寸和種子重量。此外，還從作物植株鑒定出DA1和DAR相關(guān)基因的實(shí)例，所述實(shí)例表明可以通過進(jìn)行R358K顯性干擾突變或者通過使用上述RNA干擾法減少所選的DA1和DAR相關(guān)蛋白的表達(dá)來靶向具有相關(guān)功能的相關(guān)基因。23對(duì)DAI是否能以母性地或以合子地起作用進(jìn)行了研究。如表1所示，僅在母本植株對(duì)于突變?yōu)榧兒献訒r(shí)才觀察到dal-1突變對(duì)于種子質(zhì)量的影響。不管花粉供體的基因型如何，由dal-1母本產(chǎn)生的種子都一致性地比母本野生型植株所產(chǎn)生的那些種子更重。相反，dal-1突變體和野生型花粉產(chǎn)生了重量與野生型母本植株相當(dāng)?shù)姆N子。這些結(jié)果顯示，dal-1是影響種子質(zhì)量的母本效應(yīng)突變。除了增加的種子質(zhì)量以外，dal-1突變體還展示出比野生型更大的器官尺寸(圖lelm和lo)。與野生型相比，dal-1植物具有較大的花(圖lh和li)，并且該其花往往具有額外的花瓣和心皮(圖7)。dal-1花瓣的平均尺寸是可比較的野生型花瓣的約1.6倍(圖lo)。與野生型長角果的窄且光滑的圓柱形相比，dal-1突變體的長角果是較寬、變形和扁平的(圖lj和lk)。dal-1突變體還形成比野生型更大的子葉和葉以及更粗的莖(圖lelg、li和lm)。與此相一致的是，與野生型植物相比，dal-1突變體以花和葉的形式積累了更多的生物量(圖lp和lq)。這些結(jié)果匯總起來表明DA1限制了擬南芥的種子和器官的尺寸。DA1限制增殖性生長的持續(xù)時(shí)間種子和器官的尺寸由細(xì)胞數(shù)量和/或尺寸決定。為了了解導(dǎo)致dal-1突變體的較大種子和器官尺寸的參數(shù)，對(duì)胚、花瓣和葉的細(xì)胞尺寸進(jìn)行了分析。如圖lr所示，來自dal-1胚、花瓣和葉的細(xì)胞的尺寸與相應(yīng)的野生型細(xì)胞的尺寸相當(dāng)。dal-1突變體的莖的上皮細(xì)胞數(shù)增加至野生型的莖的上皮細(xì)胞數(shù)的180%(圖In)。這些結(jié)果表明，經(jīng)dal-1引發(fā)的對(duì)種子質(zhì)量和器官尺寸的影響是由細(xì)胞數(shù)的增加造成的。為了確定DA1如何限制種子和器官尺寸，對(duì)野生型和dal-1突變體中的胚、花瓣和葉進(jìn)行了運(yùn)動(dòng)學(xué)分析。用dal-1突變體和野生型植株自身的花粉粒對(duì)其進(jìn)行人工授粉并檢驗(yàn)了種子發(fā)育的持續(xù)時(shí)間。在本發(fā)明的生長條件下，大多數(shù)野生型種子在受精后8天中發(fā)育至干燥期(desiccationstage)，但大多數(shù)dal_l種子在受精后10天中發(fā)育至成熟期，這表明dal-1突變體的種子發(fā)育周期被延長。將花瓣原基和葉的尺寸對(duì)時(shí)間作圖，揭示出dal-1突變體中的器官變大主要是由于更長的生長時(shí)期(圖2a、2c)。與此相一致的是，與野生型相比，dal-1植物在發(fā)育早期具有更幼齡和新鮮的器官以及更長的壽命(圖12e、12f)。為了確定細(xì)胞分裂如何促進(jìn)所觀察到的生長動(dòng)態(tài)，對(duì)野生型和突變體中的花瓣和葉的有絲分裂指數(shù)進(jìn)行了測(cè)定。將細(xì)胞周期進(jìn)程的轉(zhuǎn)基因標(biāo)記物PCYCB1:1::GUS融合物用于比較野生型和dal-1植株的發(fā)育中的花瓣中的細(xì)胞增殖程度。dal-1花瓣中的細(xì)胞比野生型花瓣中的細(xì)胞持續(xù)增殖了更長的時(shí)間(圖2b)。類似地，葉細(xì)胞中的細(xì)胞周期停滯也被延遲(圖8)。倍體水平的分析也表明dal-1突變體比野生型更晚退出細(xì)胞周期。該結(jié)果表明，dal-1展示出延長的細(xì)胞增殖。DA1編碼含UIM和LIM域的新型蛋白使用基于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的標(biāo)記將DA1基因座精細(xì)定位至約30千堿基(kb)的區(qū)域(圖9)。DNA測(cè)序揭示出dal-1等位基因帶有在與dal-1表型共分離的Atlgl9270基因中從G至A的單核苷酸突變并且導(dǎo)致預(yù)測(cè)蛋白的358位氨基酸處精氨酸(R)至賴氨酸(K)的變化(圖3a和圖9a、9b)。攜帶有包含整個(gè)0RF的6.4_kb野生型基因組片段的二元質(zhì)粒(DA1C0M)和帶有35S啟動(dòng)子加Atlgl9270cDNA的質(zhì)粒(35S::DA1)能夠挽回dal-1突變體的表型(圖lilq和圖2a)，從而證實(shí)Atlgl9270實(shí)際上是DAI基因。24據(jù)預(yù)測(cè)DA1編碼在N末端處含有兩個(gè)泛素相互作用基序(UIM)(Hiyama,H.J.Bio.Chem.274,28019-28025(1999))和存在于Lin-11、Isl_l、Mec-3中的一個(gè)鋅結(jié)合域(LIM)(Freyd,G.Nature344,876-879(1990))的532個(gè)氨基酸的蛋白(見“序列”)。UIM是具有結(jié)合泛素和促進(jìn)泛素化的雙重功能的短肽基序。該基序在整個(gè)真核生物中是保守的并且存在于參與包括胞吞、蛋白運(yùn)輸和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的各種各樣的細(xì)胞過程的多種蛋白中(HurleyJ.H.Biochem.J.399，361-372(2006))。LIM域是密切參與包括細(xì)胞骨架組織、器官發(fā)育和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的多種基礎(chǔ)生物過程的蛋白-蛋白相互作用基序(Dawid，I.B.TrendsGenet.14，156-162(1998)；Dawid,I.B.CRAcad.Sci.Ill318,295-306(1995)；Kadrmas,J.L.Nat.Rev.Mol.CellBiol.5，920-931(2004))。擬南芥中的7種其它預(yù)測(cè)蛋白與DAI共享相當(dāng)大的氨基酸相似性(>30%同一性)并且已被命名為DA1相關(guān)蛋白(DAR)(見序列比對(duì)D)。DA1和DAR中的保守區(qū)位于分子的C末端部分，這表明這些保守區(qū)可能對(duì)其功能至關(guān)重要。與DA1共享有在UIM和LIM之外的顯著同源性的蛋白也見于植物和綠藻中，但未見于動(dòng)物。通過對(duì)含有DA1啟動(dòng)子⑶S融合物(pDAl⑶S)的轉(zhuǎn)基因植物的0-葡萄糖醛酸糖苷酶(GUS)活性的組織化學(xué)測(cè)試揭示了DA1的空間表達(dá)模式。組織化學(xué)染色顯示出遍及包括子葉、真葉、花和胚的植株中的DA1基因表達(dá)(圖3b3h)，這與dal-1突變體植物的大尺寸表型相一致。在增殖組織中檢測(cè)到了相對(duì)較高水平的GUS活性(圖3c3f)。另外，DA1啟動(dòng)子在根中也是活性的(圖3b、3c)。至于激素對(duì)器官生長的影響，測(cè)試了主要的植物激素類別(脫落酸、茉莉酸、乙烯、生長素、細(xì)胞分裂素、赤霉素、油菜素類固醇和葡萄糖)是否能影響DA1基因的轉(zhuǎn)錄。DA1基因的表達(dá)水平被ABA緩慢誘導(dǎo)(圖3m)而不受其它激素誘導(dǎo)，從而表明ABA信號(hào)可能參與DA1的調(diào)節(jié)。與此相一致的是，dal-1突變體對(duì)于ABA不敏感(圖3n)，從而表明ABA可能是調(diào)節(jié)DA1基因以限制種子和器官生長的環(huán)境線索之一。在35S啟動(dòng)子的控制下的綠色熒光蛋白(GFP)-DAl翻譯融合物挽回了dal_l表型。然而，無法檢測(cè)到GFP信號(hào)。與此相一致的是，也無法使用蛋白印跡檢測(cè)到過表達(dá)帶有HA(35DA1-HA)和GFP(35SDA1-GFP)標(biāo)簽的DA1的轉(zhuǎn)基因植物的DA1蛋白，從而表明DA1蛋白在植物中被輕易降解或切割。dal-1充當(dāng)DA1相關(guān)蛋白的顯性負(fù)向突變類型為了鑒定決定種子和器官尺寸的最終尺寸的DA1途徑的新型成分，篩選了dal-1的大種子和器官尺寸表型的抑制子(sod)并發(fā)現(xiàn)定位在原DA1基因座的3個(gè)sodl等位基因。對(duì)來自這些品系的DA1基因進(jìn)行測(cè)序，發(fā)現(xiàn)各包含據(jù)預(yù)測(cè)會(huì)減少或消除基因功能的第二位點(diǎn)突變(圖3A)。dal-1突變體基因中的該第二位點(diǎn)突變抑制了dal-1表型，表明DA1編碼序列內(nèi)的(R358K)突變產(chǎn)生了較大的種子和器官尺寸。與此相一致的是，經(jīng)由T-DNA插入造成的DA1基因的斷裂(dal-kol、dal-ko2和dal-ko3)沒有顯示出明顯的表型(圖10)。為了確定發(fā)現(xiàn)于原dal-1等位基因中的一個(gè)氨基酸改變是否對(duì)于dal-1表型是必須的，將dal-1與野生型或dal-ko系雜交。來自Col-0與dal_l間雜交的所有雜合系(F1)都展示出野生型表型，而來自dal-1與T-DNA系(dal-kol、dal_ko2和dal_ko3)間雜交的所有F1植株都展示出與dal-1相似的表型(圖S9)。另外，在帶有35S::DA1R358K轉(zhuǎn)基因的野生型植株中也觀察到了dal-1表型(圖li圖lr)。因此，DA1中的R358K突變對(duì)導(dǎo)致dal-1表型是必要且充分的。功能喪失的等位基因不顯示出明顯的表型。因此，假設(shè)DA1可以冗余地與DAR起作用并且dal-1等位基因的表達(dá)干擾DAR替代DA1的能力。為了測(cè)試該假設(shè)，生成了dal-koldarl-1雙突變體。dal-koldarl-l雙突變體展示出原始的dal-1表型(圖3i31，表1和圖4e)，從而表明dal-1充當(dāng)DAR的一類隱性干擾等位基因。在Col_0中過表達(dá)dal-1等位基因的植物的大種子和器官尺寸表型表明，dal-1等位基因還以劑量依賴性方式干擾DA1活性(圖lilq)。DAI不依賴于ANT、AXR1、ARF2和AP2而與E0D1/BB平行地起作用在增強(qiáng)子篩選中，分離了一種dal-1的隱性增強(qiáng)子的等位基因(eodl-1)。與dal-1相比，eodl-ldal-1植物展示出更大的種子和器官尺寸、更多的額外花瓣和更長的壽命(圖12a、12b)。對(duì)eodl-1突變進(jìn)行定位并發(fā)現(xiàn)其與編碼E3泛素連接酶并抑制擬南芥的器官生長的大哥(BB)基因(At3g63530)連鎖{Disch，2006}。測(cè)序揭示出eodl-1等位基因帶有在At3g63530中的由G至A的單核苷酸突變并且導(dǎo)致預(yù)測(cè)BB蛋白的44位氨基酸處由丙氨酸(A)至蘇氨酸⑴的改變(圖12c)。在內(nèi)含子(eodl-2)和bb-1中均插入T-DNA也增強(qiáng)了dal-1表型(圖4和圖12d、12e)。帶有35S啟動(dòng)子加At3g63530cDNA的二元質(zhì)粒(35S::E0D1)能挽回eodl突變體的表型，從而表明E0D1是BB基因。為了確定在限制器官尺寸上E0D1/BB與DA1的關(guān)系，分析了bb-1突變體中的DA1的mRNA表達(dá)水平和dal_l突變體中的BB的mRNA表達(dá)水平。與野生型相比，bb_l突變體中的DA1基因表達(dá)和dal_l植株中的BB基因表達(dá)未受到顯著影響(圖12a、12b)。為了理解E0D1/BB與DA1之間的遺傳關(guān)系，測(cè)定了eodl-2dal_l和bb-ldal-lLer雙突變體中的種子和花瓣尺寸，發(fā)現(xiàn)E0D1/BB中的突變協(xié)同性地增強(qiáng)了dal-1的表型(圖4、圖lld、lle和圖12a)，從而表明兩種基因在平行途徑中起作用從而限制植物中的種子和器官尺寸。aintegumenta(ant)等位基因展示出較小的花瓣，而過表達(dá)ANT的植物因器官生長期延長展示出器官的增大{Krizek,B.A.DevGenet25,224-36(1999)；Mizukami，Y.ProcNatlAcadSciUSA97,942-7(2000)}，從而表明DAI和ANT能在共同途徑中對(duì)抗性地起作用。為了對(duì)此進(jìn)行測(cè)試，分析了ant突變體中的DA1的mRNA表達(dá)水平和dal_l突變體中的ANT及其下游靶標(biāo)CyclinD3；1的mRNA表達(dá)水平。DA1的mRNA水平在ant突變體中沒有顯示出較強(qiáng)變化(圖12b)。類似地，ANT和Cyclin3；lmRNA的水平都沒有受到dal_l突變的顯著影響，ARG0S的mRNA水平也是如此{(lán)Hu,Y.PlantCell15，1951-61(2003)}(圖llc、lld、lie)。遺傳分析還顯示，ant-5dal-l突變體的花瓣尺寸表型基本是加和性的，從而表明DA1和ANT在獨(dú)立的途徑中起作用。由于axrl、arf2和ap2突變體改變了器官和/或種子尺寸，還生成了axrl-12dal-l、arf2-7dal-l和ap2-7dal_l雙突變體(Lincoln，C.PlantCell2,1071-1080(1990)；Schruff,M.C.Development137，251-261(2006)；Ohto,M.A.Proc.NatnlAcad.SciUSA102，3123-3128(2005)Jofuku,K.D.Proc.NatnlAcad.Sci.USA102，3117-3122(2005))。遺傳分析揭示，與其親本系相比，axrl-12dal-l突變體的花瓣尺寸表型或arf2-7dal_l和ap2-7dal_l的種子尺寸表型基本是加和性的(圖12b、12c、12d、12e)。因此，推斷出DAI可能不依賴于ANT、ARX1、ARF2和AP2而與E0D1/BB平行地起作用。擬南芥中的DA1蛋白家族如上所述，據(jù)預(yù)測(cè)DA1基因可編碼含有兩個(gè)泛素受體典型的泛素相互作用基序(UIM)和單個(gè)鋅結(jié)合LIM域的532個(gè)氨基酸的蛋白，所述LIM域由其與標(biāo)準(zhǔn)的Lin-ll、Isl-l和Mec-3域的保守所限定(Li等，2008)。在擬南芥中，7種其它預(yù)測(cè)蛋白與DA1共享了相當(dāng)大的C末端(UIM和LIM域之外)氨基酸相似性，并且已被命名為DA1相關(guān)(DAR)蛋白，其中4種(DAR3、DAR57)見于染色體5的串聯(lián)簇中。使用SMART(http//smart,embl-heidelberg.de/smart/show_motifs.pi)對(duì)不同的功能域進(jìn)行表征(見表11)。UIM是帶有結(jié)合所必需的兩個(gè)保守絲氨酸殘基的泛素相互作用基序，其與泛素形成短的a螺旋結(jié)構(gòu)(Haglund和Dikic，2005)。LIM是富含半胱氨酸的蛋白相互作用基序，其具有鋅結(jié)合能力(Freyd等，1990)。NB-ARC(代表“由APAF-1、某些R基因產(chǎn)物和CED-4共有的核苷酸結(jié)合銜接子)將蛋白-蛋白相互作用模塊與效應(yīng)物域相連，它是由植物抗性基因產(chǎn)物和動(dòng)物中的細(xì)胞死亡調(diào)節(jié)劑共享的新型信號(hào)傳導(dǎo)基序。LRR是富含亮氨酸的重復(fù)序列，其為短序列基序并且據(jù)認(rèn)為會(huì)參與蛋白-蛋白相互作用。RPW8屬于由來自擬南芥的數(shù)種廣譜抗霉菌蛋白組成的家族。這些各異的蛋白結(jié)構(gòu)表明該家族具有各異的功能并且近來已被功能性多樣化。表11可以用于指導(dǎo)形成雙重或三重突變體，例如，DAUDAR1是相似的且已被表明可冗余地起作用；DA6和DAR7也可能因其相似的結(jié)構(gòu)而與彼此以及DA1和DAR1冗余地起作用。小立碗蘚、江南卷柏、蕪菁、二穗短柄草和水稻中的DA1樣(DAL)蛋白的表征使用擬南芥DA1和DAR17的氨基酸序列作為查詢項(xiàng)來篩選可用小立碗蘚、江南卷柏、蕪菁、二穗短柄草和水稻數(shù)據(jù)庫。然后使用不同的BLAST算法來選擇候選基因以進(jìn)行初步系統(tǒng)發(fā)育分析。早期陸生植物小立碗蘚和江南卷柏中的DA1樣蛋白通過使用DA1氨基酸序列作為查詢項(xiàng)來在NCBIBLAST中搜索小立碗蘚的DA1家族直系同源物，然后在JGIP.patensBLAST(http//genome,jgi-psf.org/cgi-bin/runAlignment？db=Phypal_l&advanced=1)中修正?；谠u(píng)分、E值和初步系統(tǒng)發(fā)育分析選擇8個(gè)基因(PpDALl8)。根據(jù)SMART(簡單分子結(jié)構(gòu)研究工具)程序(http://smart,embl-heidelberg.de/)，由于缺少N末端的兩個(gè)UIM域(見圖1)，因而所有小立碗蘚DA1樣蛋白都比DA1氨基酸序列短。江南卷柏測(cè)序計(jì)劃提供了在第一脈管植物中研究DA1家族直系同源性的機(jī)會(huì)。通過使用JGIS.moellendorffiBLAST(http//genome,jgi-psf.org/cgi-bin/runAlignment？db=Selmol&advanced=1)發(fā)現(xiàn)了兩種直系同源物，且與小立碗蘚DAI樣蛋白相比，其具有與擬南芥DAI家族蛋白相似的氨基酸序列長度。LIM域之前的區(qū)域被SMART預(yù)測(cè)為低復(fù)雜性區(qū)，且沒有發(fā)現(xiàn)明顯的UIM蛋白序列基序。因此可以推斷，在低等植物中沒有發(fā)現(xiàn)特征性DA1蛋白結(jié)構(gòu)。蕪菁中的DA1樣蛋白由于擬南芥和蕓苔屬的親密進(jìn)化關(guān)系，使用了核苷酸BLAST法以用于鑒定蕓苔屬DA1家族直系同源物。在Brassica數(shù)據(jù)庫中(http://www.brassica.bbsrc.ac.uk/)，使用擬南芥DAI和DAR17的全長cDNA序列作為查詢項(xiàng)。由于近期的完整基因組復(fù)制，一個(gè)擬南芥基因可能具有2個(gè)或3個(gè)蕪菁中的同源基因。發(fā)現(xiàn)了兩個(gè)DA1直系同源物和一個(gè)DAR2直系同源物(圖1)。這些直系同源物稱作DAL(DA樣)基因。DAR37蕓苔屬直系同源物也見于串聯(lián)簇中。所發(fā)現(xiàn)的蕓苔屬直系同源物的數(shù)目少于預(yù)期，這可能是由于不完全的基因組測(cè)序造成的。將蕓苔屬DAL基因的部分序列用于設(shè)計(jì)引物以對(duì)來自蕪菁的全長DAL基27因進(jìn)行特異性擴(kuò)增。禾本科植物二穗短柄草和水稻中的DA1樣蛋白在二穗短柄草中，鑒定出了3種主要的DA1家族直系同源物，而在水稻中使用NCBI的PROTEINBLAST發(fā)現(xiàn)了4種DA1樣蛋白。鑒定出水稻DA1和DAR2直系同源物并命名為OsDAl和0sDAR2。沒有發(fā)現(xiàn)與擬南芥DAR1匹配的水稻基因。在圖14的系統(tǒng)發(fā)育樹中，所有來自脈管植物的DA樣蛋白形成一個(gè)大的進(jìn)化枝。在該進(jìn)化枝中，江南卷柏DA樣蛋白是高度發(fā)散的，但有可能其DA樣蛋白可源自苔蘚植物，并從第一脈管植物(石松類植物(Lycophytes))的進(jìn)化開始充當(dāng)尺寸調(diào)節(jié)劑。在該樹中，AtDAR2、BrDAR2、BdDAL3和0sDAR2形成了一個(gè)進(jìn)化枝。這些蛋白序列顯示出更大的相似性，表明DAR2在單子葉植物起源之前進(jìn)化(見圖14的右圖)并且在進(jìn)化過程中是功能性保守的。另一個(gè)進(jìn)化枝由AtDAl、BrDAla和BrDAlb構(gòu)成。它們之間的高度相似性表明蕪菁DA1蛋白可能具有與AtDAl相同的功能。由OsDAl、BdDALl和BdDAL2構(gòu)成的進(jìn)化枝與該進(jìn)化枝分開，表明禾本科植物DA1蛋白可能與十字花科中那些DA1蛋白在功能上稍有分別。所有十字花科DAR1和DAR37位于同一進(jìn)化枝中，表明這些基因可能是在十字花科內(nèi)在基因組復(fù)制中由DA1或DAR2產(chǎn)生。該假設(shè)已被部分地由遺傳分析證實(shí)，這顯示出在擬南芥中DA1和DAR1是功能性冗余的。蕪菁、水稻中的DA1樣蛋白的功能性分析在計(jì)算機(jī)模擬中，鑒定了兩個(gè)蕪菁DA1樣基因(BrDAla，BrDAlb)和一個(gè)水稻DA1樣基因(OsDAl)。合成了全長cDNA并用定向T0P0載體進(jìn)行測(cè)序。AtDAl、BrDAla、BrDAlb和OsDAl的預(yù)測(cè)生化特征如表12所示。這三個(gè)基因編碼的蛋白具有非常相似的生化特征，特別是兩個(gè)蕓苔屬基因。有趣的是，盡管基于氨基酸序列的分析顯示BrDAla與AtDAl更接近，但據(jù)預(yù)測(cè)BrDAlb具有與AtDAl更加相似的生化特性(表12)。BrDAla、BrDAlb和OsDAl基因?qū)al_l表型的挽回將全長BrDAla、BrDAlb和OsDAl等的cDNA亞克隆至T0P0載體中并通過LR重組轉(zhuǎn)移至PMDC32二元目的載體(destinationvector)。這些載體表達(dá)從組成型35S啟動(dòng)子表達(dá)cDNA。對(duì)dal-1植株進(jìn)行轉(zhuǎn)化以測(cè)試來自蕓苔屬和水稻的野生型DAL基因是否能補(bǔ)償dal-1植株的大生長表型。35S::BrDAla和35S:OsDAl轉(zhuǎn)基因植株顯示出至少部分的補(bǔ)償(見圖15A15D)。有趣的是，盡管BrDAlb不是與AtDAl最接近的同源物，但35S::BrDAlb轉(zhuǎn)基因植株顯示出對(duì)dal-1表型的完全補(bǔ)償(見圖15E15G)，這與其同AtDAl的高度生化相似性相一致(見表12)。進(jìn)行兩輪轉(zhuǎn)化體篩選。在第一輪中，40個(gè)35S:BrDAla的T1植株中的10個(gè)和11個(gè)35S:OsDAl的T1植株中的3個(gè)顯示出圖15A15D中的長角果表型。在第二輪中，150個(gè)35S::BrDAlb中的30個(gè)顯示出圖15E15G中的蓮座葉表型。這一有說服力的數(shù)據(jù)說明BrDAlb與擬南芥DAI發(fā)揮類似功能。結(jié)果，已經(jīng)顯示DA1和相關(guān)基因在控制蕓苔屬和水稻以及可能的許多其它類型植物的器官和種子尺寸上具有相似的功能。BrDAlaE358K能干擾Co1-0植株中的AtDAl功能使用定點(diǎn)突變來產(chǎn)生T0P0載體中的BrDAlacDNA中的等價(jià)R358K突變，然后用通路系統(tǒng)(gatewaysystem)將突變的cDNA轉(zhuǎn)移至pMDC32目的載體。在表達(dá)35S::BrDAlaE358K的野生型Col-0植株中觀察到包括大器官表型的典型dal-1表型(見圖15E、15F、15H)。在28本轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中，對(duì)60棵T1轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行篩選并發(fā)現(xiàn)其中7棵具有見于dal-1植株中的特征性大器官表型。DA1蛋白穩(wěn)定性已經(jīng)觀察到表達(dá)GFP蛋白與全長DA1蛋白的C末端的融合物的轉(zhuǎn)化體可補(bǔ)償DA1K358K大器官表型，表明該融合蛋白是全功能性的。然而，在許多轉(zhuǎn)基因系中沒有檢測(cè)到GFP熒光，從而表明DA1GFP蛋白水平極低。這得到了以下觀察結(jié)果的支持采用良好特異性抗體在植物提取物中對(duì)DA1蛋白的檢測(cè)極為困難。因此，使用表達(dá)于大腸桿菌中的DA1蛋白和來自擬南芥的無細(xì)胞蛋白提取物測(cè)試了擬南芥中的DA1蛋白的穩(wěn)定性。將作為N末端GST融合蛋白表達(dá)和純化的全長DA1蛋白與擬南芥蛋白提取物和ATP—同溫育，然后使用特異性DA1抗體進(jìn)行蛋白印跡分析。發(fā)現(xiàn)DA1蛋白在這些條件下快速降解。發(fā)現(xiàn)一種特異性蛋白酶體抑制劑MG132可消除這種降解。因此，DA1被擬南芥中的蛋白酶體快速降解?；趯?duì)動(dòng)物細(xì)胞中UIM功能的認(rèn)識(shí)，預(yù)測(cè)DA1的UIM基序會(huì)參與泛素化。有可能的是，作為生長控制機(jī)制的一部分，DA1被泛素化并靶向降解。表1.DA1母性地起到控制種子重量的作用平均種子重量以mg/100粒種子給出。給出了標(biāo)準(zhǔn)偏差值(n=5)。植株在相同條件下共同生長。CAPS或dCAPS標(biāo)記物的限制酶被標(biāo)注出，其它為SSLP標(biāo)記物。29表2.表3．RT—PCR矛口QRT—PCR弓!物歹0表表4．T—DNA驗(yàn)證用引物列表表5．DAl控制種子重量]表6lCA。61229未命名蛋白產(chǎn)物[葡萄]gil57335399embCA。6l229．1[157335399]2:EAZ36049假定蛋白0sJ_019532[水稻(粳稻品種(japonicacultivar)組)]gi1125596269|gb|EAZ36049.11[125596269]3:EAY99923假定蛋白0sl_021156[水稻(秈稻品種(indicacultivar)組)]gi1125554318|gb|EAY99923.11[125554318]4:NP_0010569850s06g0182500[水稻(粳稻品種組)]gi|115466772|ref|NP_001056985.1[115466772]5:CA022922未命名蛋白產(chǎn)物[葡萄]gi1157348212|emb|CA022922.11[157348212]6:EAZ21100假定蛋白0sJ_035309[水稻(粳稻品種組)]gi|125579954|gb|EAZ21100.1[125579954]7:NP_0010671880sl2g0596800[水稻(粳稻品種組)]gi1115489402|ref|NP_001067188.1[115489402]8:CA022921未命名蛋白產(chǎn)物[葡萄]gi11573482111emb|CA022921.11[157348211]9:AAW34243假定的含LIM域的蛋白[水稻(粳稻品種組)]gi|57164484|gb|AAW34243.11[57164484]10:AAW34242假定的含LIM域的蛋白[水稻(粳稻品種組)]gi|57164483|gb|AAW34242.1[57164483]11:NP_0010507020s03g0626600[水稻(粳稻品種組)]gi|115454203|ref|NP_001050702.1[115454203]12:EAY83760假定蛋白0sl_037719[水稻(秈稻品種組)]gi1125537272|gb|EAY83760.11[125537272]13:EAZ27845假定蛋白0sJ_011328[水稻(粳稻品種組)]gi1125587181|gb|EAZ27845.11[25587181]14:NP_0010496680s03g0267800[水稻(粳稻品種組)]gi1115452135|ref|NP_001049668.11[115452135]15:EAY91080假定蛋白0sl_012313[水稻(秈稻品種組)]gi11255449411gb|EAY91080.11[125544941]16:AAP06895假定蛋白[水稻(粳稻品種組)]gi|298936411gb|AAP06895.11[29893641]17:EAY89390假定蛋白0sl_010623[水稻(秈稻品種組)]gi11255432511gb|EAY89390.11[125543251]18:CA016347未命名蛋白產(chǎn)物[葡萄]gi1157346464|emb|CA016347.11[157346464]19:CAN64300假定蛋白[葡萄]gi1147817187|emb|CAN64300.11[147817187]20:CAN69394假定蛋白[葡萄]gi1147768077|emb|CAN69394.11[147768077]表7水稻(粳稻品種組)0s06g0182500(0s06g0182500)mRNA，完整cdsgi11154667711ref|NM_001063520.11[115466771]水稻(粳稻品種組)cDNA克隆體001-201-F10，全插入序列g(shù)i|32990928|dbj|AK105719.11[32990928]水稻(粳稻品種組)cDNA克隆體J023004G21，全插入序列g(shù)i|32979080|dbj|AK069056.11[32979080]水稻(粳稻品種組)0sl2g0596800(0sl2g0596800)mRNA，完整cdsgi11154894011ref|NM_001073720.11[115489401]水稻(粳稻品種組)cDNA克隆體J013039D10，全插入序列g(shù)i|32975778|dbj|AK065760.11[32975778]水稻(粳稻品種組)cDNA克隆體J013073011，全插入序列g(shù)i|32976683|dbj|AK066665.11[32976683]水稻(粳稻品種組)0s03g0626600(0s03g0626600)mRNA,部分cdsgi1115454202|ref|NM_001057237.11[115454202]水稻(粳稻品種組)cDNA克隆體001-043-H07，全插入序列g(shù)i|32972053|dbj|AK062035.11[32972053]水稻(粳稻品種組)0s03g0267800(0s03g0267800)mRNA，完整cdsgi1115452134|ref|NM_001056203.11[115452134]水稻(粳稻品種組)cDNA克隆體J023020C05，全插入序列g(shù)i|32979610|dbj|AK069586.11[32979610]水稻(粳稻品種組)分離體29050未知mRNAgi|29368349|gb|AY224559.11[29368349]水稻(粳稻品種組)分離體29050抗疾病樣蛋白mRNA，部分cdsgi|29367476|gb|AY224475.11[29367476]水稻(粳稻品種組)基因組DNA，染色體6gi|58531193|dbj|AP008212.11[58531193]水稻(粳稻品種組)基因組DNA，染色體6，BAC克隆體0SJNBb0036B04gi|50657316|dbj|AP007226.11[50657316]水稻(粳稻品種組)基因組DNA，染色體12gi|58531199|dbj|AP008218.11[58531199]水稻染色體12，來自水稻的粳稻亞種的日本晴品種(cultivarNipponbare)的染色體12的OSJNBa庫的.BAC0SJNBa0056D07,完整序列g(shù)i|23897123|emb|AL928754.2|[23897123]水稻染色體12，來自水稻的粳稻亞種的日本晴品種的染色體12的Monsanto庫的.BAC0J1306_H03,完整序列g(shù)i|20513132|emb|AL713904.3|[20513132]水稻(粳稻品種組)基因組DNA，染色體3gi|58530789|dbj|AP008209.11[58530789]水稻(粳稻品種組)染色體3克隆體0SJNBa0002I03映射圖E1419S，完整序列g(shù)i|57164481|gb|AC091246.8|[57164481]水稻(粳稻品種組)染色體3克隆體0JA1364E02，完整序列g(shù)i|27901829|gb|AC139168.11[27901829]水稻(粳稻品種組)染色體3克隆體0J1364E02，完整序列g(shù)i|27901828|gb|AC135208.3|[27901828]水稻染色體3BAC0SJNBb0013K08基因組序列，完整序列g(shù)i116356889|gb|AC092390.3|[16356889]水稻(秈稻品種組)克隆體0SE-97-192_H5Zn離子結(jié)合蛋白mRNA，部分cdsgi1149390776|gb|EF575818.11[149390776]水稻(秈稻品種組)cDNA克隆體0SIGCRA102J03，全插入序列g(shù)i|116633496|emb|CT833300.1[116633496]水稻(粳稻品種組)0s01g0916000(0s01g0916000)mRNA，完整cdsgi1115441820|ref|NM_001051725.11[115441820]水稻(粳稻品種組)基因組DNA，染色體1gi|58530787|dbj|AP008207.11[58530787]水稻(粳稻品種組)基因組DNA，染色體1，PAC克隆體P0413C03gi119386744|dbj|AP003451.4|[19386744]水稻(粳稻品種組)基因組DNA，染色體1，PAC克隆體P0004D12gi|20804980|dbj|AP003433.3|[20804980]水稻(粳稻品種組)cDNA克隆體002-101_C04，全插入序列33gi|32991509|dbj|AK106300.11[32991509]水稻(粳稻品種組)cDNA，克隆體J100024013，全插入序列g(shù)i1116012466|dbj|AK243101.11[116012466]玉米克隆體EL01N0524A08.dmRNA序列g(shù)i|546535411gb|BT018760.11[54653541]玉米PC0156068mRNA序列g(shù)i|21212590|gb|AY109151.1[21212590]玉米克隆體EL01N0553E07mRNA序列g(shù)i|85540336|gb|BT024085.11[85540336]玉米克隆體E04912705F06.cmRNA序列g(shù)i|54651736|gb|BT016955.11[54651736]玉米硝酸還原酶基因，啟動(dòng)子區(qū)gi|4894987|gb|AF141939.11AF141939[4894987]大麥亞種大麥cDNA克隆體FLbaf82hl6，mRNA序列g(shù)i1151419042|dbj|AK250393.1[151419042]葡萄，全基因組鳥槍序列，重疊群VV78X106678.4，克隆體ENTAV115gi1123680846|emb|AM488121.1[123680846]葡萄重疊群VV78X222701.5，全基因組鳥槍序列g(shù)i1147817185|emb|AM484789.2[147817185]葡萄，全基因組鳥槍序列，重疊群VV78X165152.5，克隆體ENTAV115gi|123703056|emb|AM483648.1[123703056]葡萄重疊群VV78X263569.4，全基因組鳥槍序列g(shù)i1147790377|emb|AM453516.2[147790377]葡萄重疊群VV78X179395.3，全基因組鳥槍序列g(shù)i1147769864|emb|AM456337.2[147769864]葡萄重疊群VV78X219892.2，全基因組鳥槍序列g(shù)i1147780236|emb|AM461946.2[147780236]葡萄，全基因組鳥槍序列，重疊群VV78X014445.8，克隆體ENTAV115gi1123704690|emb|AM483793.1[123704690]葡萄重疊群VV78X193742.9，全基因組鳥槍序列g(shù)i1147768076|emb|AM435996.2|[147768076]百脈根基因組DNA，染色體2，克隆體LjB06D23，BM0787,完整序列g(shù)i|375911311dbj|AP006541.11[37591131]冰草分離體Bsyly型高分子量麥谷蛋白亞基假基因，完整序列g(shù)i|71159564|gb|DQ073532.11[71159564]冰草分離體Btyly型高分子量麥谷蛋白亞基假基因，完整序列g(shù)i|71159568|gb|DQ073535.11[71159568]冰草分離體Bfyly型高分子量麥谷蛋白亞基假基因，完整序列g(shù)i|71159563|gb|DQ073531.11[71159563]火炬松假定細(xì)胞壁蛋白(lp5)基因，完整cdsgi|2317763|gb|AF013805.11[2317763]蕪菁亞種白菜克隆體KBrHOllGlO，完整序列g(shù)i1110797257|gb|AC189577.11[110797257]蕪菁亞種白菜克隆體KBrB032C14，完整序列g(shù)i1110796986|gb|AC189306.11[110796986]蕪菁亞種白菜克隆體KBrB011P07，完整序列g(shù)i1110744010|gb|AC189225.11[110744010]楊樹cDNA序列g(shù)i1115416791|emb|CT029673.11[115416791]楊樹cDNA序列g(shù)i1115416790|emb|CT029672.11[115416790]小果咖啡微衛(wèi)星DNA，克隆體26-4CTGgi113398992|emb|AJ308799.11[13398992]蒺藜苜?？寺◇wmth2-34ml4，完整序列g(shù)i|61675739|gb|AC126779.19|[61675739]蒺藜苜蓿染色體5克隆體mth2-5p5，完整序列g(shù)i1119359633|emb|CU302347.11[119359633]蒺藜苜蓿染色體8克隆體mth2-14m21，完整序列g(shù)i|50355770|gb|AC148241.211[50355770]番茄cDNA，克隆體LEFL1035BC02，葉中的HTCgi1148538338|dbj|AK247104.11[148538338]多斑溝酸漿克隆體MGBa-44P14，完整序列g(shù)i1150010729|gb|AC182564.2|[150010729]多斑溝酸漿克隆體MGBa-64L10，完整序列g(shù)i1154350257|gb|AC182570.2|[154350257]江南卷柏克隆體JGIASXY-5I19，完整序列g(shù)i|62510100|gb|AC158187.2|[62510100]來自染色體3上的克隆體MTH2-170H18的蒺藜苜蓿DNA序列，完整序列g(shù)i1115635794|emb|CT967314.8[115635794]豇豆谷蛋白2mRNA，部分cdsgi|4973069|gb|AF142332.11AF142332[4973069]表8大豆cDNA克隆體gb|CX711863.1|CX711863gb|BM525343.1|BM525343gb|BG156297.1|BG156297gb|BM308148.1|BM308148gb|AI856660.1|AI856660gb|BF596520.11BF596520gb|BI472193.11BI472193gb|C0982042.11C0982042gb|BM143278.11BM143278gb|AW831270.1|AW831270gb|BE329874.11BE329874gb|BG652163.11BG652163gb|BI967821.11BI967821gb|BI321493.11BI321493gb|BU546579.11BU546579gb|C0984945.11C0984945gb|DW247614.11DW247614gb|BG726202.11BG726202gb|BI968915.1|BI968915gb|BG043212.11BG043212gb|BG510065.11BG510065gb|BG043153.11BG043153gb|AW832591.1|AW832591gb|AI856369.11AI856369gb|BI699452.11BI699452gb|BG650019.11BG650019gb|AW234002.11AW234002gb|AW310220.1|AW310220gb|AW394699.11AW394699gb|AW832462.11AW832462gb|AW459788.11AW459788gb|BM731310.11BM731310gb|BI317518.11BI317518gb|AI988431.11AI988431gb|CA801874.11CA801874gb|BE057592.11BE057592gb|AW102002.11AW102002gb|CA938750.11CA938750gb|AW397679.11AW397679表9.由Blastp鑒定的BB多肽emb|CA040855.11未命名蛋白產(chǎn)物[葡萄]gb|EAY88740.11假定蛋白0sl_009973[水稻(秈稻品種組)]gb|EAZ25768.11假定蛋白0sJ_009251[水稻(粳稻品種組)]ref|NP_001049123.110s03g0173900[水稻(粳稻品種組)]36emb|CA021927.1未命名蛋白產(chǎn)物[葡萄]emb|CAD41576.3|0SJNBa0088I22.8[水稻(粳稻品種組)]gb|EAY95219.11假定蛋白0sl_016452[水稻(秈稻品種組)]emb|CAH67282.1|0SIGBa0111L12.9[水稻(秈稻品種組)]ref|NP_001053604.1|0s04g0571200[水稻(粳稻品種組)]ref|NP_001063719.110s09g0525400[水稻(粳稻品種組)]gb|EAZ09811.1假定蛋白0sl_031043[水稻(秈稻品種組)]gb|EAZ45411.1假定蛋白0sJ_028894[水稻(粳稻品種組)]ref|NP_001062434.110s08g0548300[水稻(粳稻品種組)]gb|EAZ07897.1假定蛋白0sl_029129[水稻(秈稻品種組)]ref|NP_001063778.110s09g0535100[水稻(粳稻品種組)]emb|CAC10211.1假定蛋白[鷹嘴豆]emb|CA044394.11未命名蛋白產(chǎn)物[葡萄]gb|ABG73441.11鋅指C3HC4型家族蛋白[短藥野生稻]ref|NP_001056653.110s06g0125800[水稻(粳稻品種組)]gb|EAZ09879.1假定蛋白0sl_031111[水稻(秈稻品種組)]gb|EAZ45482.11假定蛋白0sJ_028965[水稻(粳稻品種組)]dbj|BAD82497.11RING-H2指蛋白R(shí)HGla樣[水稻(粳稻品種組)]emb|CAN71989.11假定蛋白[葡萄]dbj|BAD05399.11DNA結(jié)合鋅指蛋白樣[水稻(粳稻品種組)]emb|CAH65886.110SIGBa0148J22.5[水稻(秈稻品種組)]emb|CAE02518.2|0SJNBb0003A12.5[水稻(粳稻品種組)]ref|NP_001052192.110s04g0185500[水稻(粳稻品種組)]emb|CA071872.1未命名蛋白產(chǎn)物[葡萄]emb|CA039354.11未命名蛋白產(chǎn)物[葡萄]emb|CAE01827.2|0SJNBa0041A02.20[水稻(粳稻品種組)]emb|CA071869.1未命名蛋白產(chǎn)物[葡萄]emb|CAA85320.11C末端鋅指[大豆]gb|EAZ08608.11假定蛋白0sl_029840[水稻(秈稻品種組)]gb|EAY75305.11假定蛋白0sl_003152[水稻(秈稻品種組)]ref|NP_001043810.110s01g0667700[水稻(粳稻品種組)]dbj|BAD73651.11RING指蛋白樣[水稻(粳稻品種組)]emb|CA071875.1未命名蛋白產(chǎn)物[葡萄]ref|NP_001062870.110s09g0323100[水稻(粳稻品種組)]gb|EAZ35180.1假定蛋白0sj_018663[水稻(粳稻品種組)]dbj|BAA74802.11DNA結(jié)合鋅指蛋白(Pspzf)[豌豆]ref|NP_001056239.110s05g0550000[水稻(粳稻品種組)]gb|EAY98923.11假定蛋白0sl_020156[水稻(秈稻品種組)]emb|CAN83345.11假定蛋白[葡萄]emb|CA043928.11未命名蛋白產(chǎn)物[葡萄]emb|CAN79375.11假定蛋白[葡萄]表10.由tBlastn鑒定的編碼BB多肽的核酸ref|NM_001055658.11水稻(粳稻品種組)0s03g0173900(0s03g0173900)mRNA，完整cdsdbj|AK063978.11水稻(粳稻品種組)cDNA克隆體001-124_C08，全插入序列dbj|AP006425.1百脈根基因組DNA，染色體1，克隆體LjT39B10，TM0315，完整序列g(shù)b|AY110224.11玉米CL5837_lmRNA序列ref|NM_001060139.11水稻(粳稻品種組)0s04g0571200(0s04g0571200)mRNA，部分cdsdbj|AK071401.11水稻(粳稻品種組)cDNA克隆體J023097G23，全插入序列ref|NM_001068969.11水稻(粳稻品種組)0s08g0548300(0s08g0548300)mRNA，完整cdsdbj|AK073266.11水稻(粳稻品種組)cDNA克隆體J033029A20，全插入序列emb|CT832808.11水稻(秈稻品種組)cDNA克隆體0SIGCSN035L02，全插入序列ref|NM_001070254.11水稻(粳稻品種組)0s09g0525400(0s09g0525400)mRNA，完整cdsdbj|AK104112.11水稻(粳稻品種組)cDNA克隆體006-202_G09，全插入序列dbj|AK066238.11水稻(粳稻品種組)cDNA克隆體J013059J01，全插入序列emb|CT832015.11水稻(秈稻品種組)cDNA克隆體:0SIGCRA126H24,全插入序列dbj|AK250973.11大麥亞種大麥cDNA克隆體FLbaf101a03，mRNA序列dbj|AK249803.11大麥亞種大麥cDNA克隆體FLbaf58cl6，mRNA序列emb|CT832014.11水稻(秈稻品種組)cDNA克隆體0SIGCRA11OT08，全插入序列g(shù)b|BT016451.11玉米克隆體Contig284mRNA序列emb|AJ299062.11假定蛋白(0RF1)用CAR299062鷹嘴豆部分mRNA，克隆體Canl83gb|AY109631.11玉米CL5026_lmRNA序列g(shù)b|AY108288.11玉米PC0148716mRNA序列ref|NM_001070313.1水稻(粳稻品種組)0s09g0535100(0s09g0535100)mRNA，完整cdsdbj|AK069888.11水稻(粳稻品種組)cDNA克隆體J023039004，全插入序列g(shù)b|AY103990.11玉米PC0093361mRNA序列emb|AM485242.1葡萄，全基因組鳥槍序列，重疊群VV78X218805.2，克隆體ENTAV115gb|BT018037.11玉米克隆體EL01N0530G02.cmRNA序列emb|CT829435.11水稻(秈稻品種組)cDNA克隆體:0SIGCRA107A15，全插入序列ref|NM_001063188.1水稻(粳稻品種組)0s06g0125800(0s06g0125800)mRNA，完整cdsgb|AY225189.11水稻(秈稻品種組)鋅指蛋白mRNA，完整cdsgb|AY207044.11水稻(秈稻品種組)鋅指蛋白mRNA,完整cdsdbj|AK104425.11水稻(粳稻品種組)cDNA克隆體:006-205_F10，全插入序列dbj|AK068302.11水稻(粳稻品種組)cDNA克隆體J013144A04，全插入序列g(shù)b|AYl12568.11玉米CL32837_1mRNA序列emb|AM453896.2葡萄重疊群VV78X100953.6，全基因組鳥槍序列g(shù)b|AC157490.18|蒺藜苜?？寺◇wmth2_123f23，完整序列g(shù)b|AC151824.13|蒺藜苜?？寺◇wmth2-45nl8，完整序列ref|NM_001058727.1水稻(粳稻品種組)0s04g0185500(0s04g0185500)mRNA，完gb|BT019187.11玉米克隆體Contig858.FmRNA序列dbj|AK064939.11水稻(粳稻品種組)cDNA克隆體J013000P06,gb|AY110468.11玉米CL16240_2mRNA序列g(shù)b|AY110685.11玉米CL9024_1mRNA序列dbj|AK246964.11番茄cDNA，克隆體LEFL1004CA06，葉中的HTCdbj|AP008214.1水稻(粳稻品種組)基因組DNA，染色體ref|NM_001050479.1水稻(粳稻品種組)0s01g0692700(0s01g0692700)mRNA，部dbj|AK065626.11水稻(粳稻品種組)cDNA克隆體J013028F14,dbj|AP004704.3|水稻(粳稻品種組)基因組DNA，染色體8，PAC克隆體:P0544G09dbj|AP006265.2水稻(粳稻品種組)基因組DNA，染色體8，BAC克隆體:0J1112_表11表12序列MGWFNKIFKGSNQRLRVGNNKHNHNVYYDNYPTASHDDEPSAADTDADNDEPHHTQEPSTSEDNTSNDQENEDIDRAIALSLLEENQEQTSISGKYSMPVDEDEQLARALQESMVVGNSPRHKSGSTYDNGNAYGAGDLYGNGHMYGGGNVYANGDIYYPRPITFQMDFRICAGCNMEIGHGRFLNCLNSLWHPECFRCYGCSQPISEYEFSTSGNYPFHKACYRERYHPKCDVCSHFIPTNHAGLIEYRAHPFWVQKYCPSHEHDATPRCCSCERMEPRNTRYVELNDGRKLCLECLDSAVMDTMQCQPLYLQIQNFYEGLNMKVEQEVPLLLVERQALNEAREGEKNGHYHMPETRGLCLSEEQTVSTVRKRSKHGTGKWAGNITEPYKLTRQCEVTAILILFGLPRLLTGSILAHEMMHAWMRLKGFRTLSQDVEEGICQVMAHKWLDAELAAGSTNSNAASSSSSSQGLKKGPRSQYERKLGEFFKHQIESDASPVYGDGFRAGRLAVHKYGLRKTLEHIQMTGRFPVSEQIDNO1atgggttggtttaacaagatctttaaaggctctaaccaaaggctccgggttgggaataataagcacaatcacaatgtttattacgataattatccgactgcttcacatgatgatgagcctagtgcggcggatacagatgctgataatgatgaacctcatcatactcaggaaccatctacatctgaggataatacatcgaatgaccaggaaaatgaagacatagaccgtgcaattgcattgtcgcttttagaagagaatcaagaacagacaagtataagcgggaaatactcgatgccggtggatgaagatgagcaacttgctagagccctacaagaaagtatggtagttgggaattcaccccgtcacaaaagtggaagtacatatgataatgggaatgcatatggagctggagatttatatgggaatggacatatgtatggaggaggaaatgtatatgcaaatggagatatttattatccaagacctattacttttcaaatggatttcaggatttgtgctggctgtaatatggagattggccatggaagatttctgaattgccttaattcactatggcatccagaatgttttcgatgttatggctgcagtcagccgatttctgagtacgagttttcaacatcagggaactacccttttcacaaggcttgttacagggagagatatcatcctaaatgtgatgtctgcagccactttataccaacaaatcatgctggtcttattgaatatagggcacatcctttttgggttcagaagtattgtccttctcacgaacacgatgctaccccgagatgttgcagttgtgaaagaatggagccacggaatacgagatatgttgaacttaacgatggacggaaactttgccttgagtgtttggactcggcggtcatggacaccatgcaatgccaacctctgtacttgcaaatacaaaatttctatgaaggactcaacatgaaggtagagcaggaagttccactcctcttggttgagagacaagcacttaacgaagccagagaaggtgaaaagaatggtcactatcacatgccagaaacaagaggactctgcctttcagaagaacaaactgttagtactgtaagaaagcgatcaaagcatggcacaggaaaatgggccgggaatattacagaaccttacaagttaacacggcaatgtgaagttaccgccattctcatcttattcgggctccctaggttacttactggttcgattctagctcatgagatgatgcatgcgtggatgaggctcaaaggattccgaacactgagccaagatgttgaagaaggtatatgtcaagtgatggctcataaatggttagatgctgagttagctgctggttcaacaaatagcaatgctgcatcatcatcctcctcttctcaaggactgaaaaagggaccgagatctcagtacgagagaaagcttggtgagtttttcaagcaccaaatcgagtctgatgcttctccggtttatggagacgggttcagagctgggaggttagctgttcacaagtacggtttgcgaaaaacacttgagcatatacagatgaccggtagattcccggtttaaSEQIDNO2p——pLpbAlpb.Sbp-.pppSEQIDNO3p---pLpbAlpb.Sbp—sppp、0、1、*orY；s是小氨基酸殘基，例如，A、C、D、G、N、P、S、TorV；1是脂肪族氨基酸殘基，例如，I.LorV；.是缺失或任何氨基酸；和-是任何氨基酸。SEQIDNO5QENEDIDRAIALSLLEENQESEQIDNO6DEDEQIARALQESMVVGNSPSEQIDNO7ICAGCNMEIGHGRFLNCLNSLWHPECFRCYGCSQPISEYEFSTSGNYPFHKACSEQIDNO81mngdnrpvedahytetgfpyaatgsymdfyggaaqgplnydhaatmhpqdnlywtmntna61ykfgfsgsdnasfygsydmndhlsrmsigrtnwdyhpmvnvaddpentvarsvqigdtde121hseaeecianehdpdspqvswqddidpdtmtyeelvelgeavgtesrglsqelietlptk181kykfgsifsrkragercvicqlkykigerqmnlpckhvyhseciskwlsinkvcpvcnse241vfgepsihSEQIDNO9lacactctttc61tctctcgtct121tgcccttctc181ttgccgtctc241agataataga301tggaagttac361cgcaactatg421tgggttttca481atcgaggatg541tgatcctgaa601agctgaagaa661tgacattgatctctctctttacagtgccctctcctcctcccaattgccacccagtggaagatggacttttcatcctcaggggatcagatatccatagggaaacacagttgtgcattgcaacctgatacaacttctctcttccgcatcaccttccactaattcaccgctccatgctcattaatggtggtgcacaatctgtaatgcttctttgaacaaattgcacgttccgtatgagcatgatgacctatgatcttttctcttttttccttgctcaaaagataactctcttccacggagacaggctcaggggctggaccatgctatggttcaggactatcatccaaatcggatcccgacagtggaattagtactctctcctctcctatgaatatatccttcggaattagctgggtttcccttcctcttaactaataccaatgtatgacatgacccatggtgagacacagatgcctcaggtatgagctgggggtgctcctccgttggtcgaaaagactctcccaaatgaatggatgctgctacacgatcatgccatacaagttacgatcatttacgttgctgaagcactctgacctggcaagaaagcagtagg410679]721aacagaaagcagggggttgtctcaggaactcatagaaacgcttcccactaaaaagtataa0680]781gtttgggagcatcttctccaggaaaagagctggggagaggtgtgtgatatgccagctcaa0681]841gtacaagataggggagaggcaaatgaatctgccgtgcaagcatgtgtatcattctgaatg0682]901catttccaaatggctaagcatcaacaaggtttgcccggtgtgtaacagcgaggtctttgg0683]961ggagcccagcattcattgatcggcacaaggggctcctcctcttcttttctttttggcttt0684]1021ttatatcgaggctcatcaagtaattgttttagtgtagtga3.3.3.CCCC3.3.3.aaatagtcta0685]1081aaagatgtccacactatactctctcatgttcagtccttctctgtacatgtaatttttctt0686]1141ctagttccattttcgcttgtgtgtgctttaagtttaacagtcactcgtattgtatactaa0687]1201atgctaagtcaaaaacgctgaatccatat0688]SEQIDNO100689]latggcctactcctcacggtcttgtgatcagtgcagtcacgagaggagatccggcttcatg0690]61aagtggctctgcgctttcctgaaggggacgaaggacggcgaggccaaccgacggcgccct0691]121cgggtgacggcaggagaagagaccacgctctgggaagaaccagttagaccaaagaaggaa0692]181gaaccacctagacataacaatgaagaaatggaccatgcacttgcccttgctcttgcagac0693]241gatgccaaaaatacaaaagagagaaaccatgacaagggagaaaacgatgaagaactcgct0694]301agagcaatacaggacagtctgaacatgaatccttaccagccttacaatccttgtgcaccc0695]361tctcagacccaggccaggtcgagaggatacagggtctgtgggggttgcaagcatgagata0696]421gggcatggccattacttgagctgcttgggaatgtactggcaccctcagtgcttccgctgt0697]481tcttcctgtcgccaccctatccgtgagatggagttcaccttgctaggtacagatccatac0698]541cacaagctgtgctacaaggagcttcatcacccaaagtgtgacgtctgccttcaatttatc0699]601ccaacgaacaggactggtttgatagagtacagagcccatccattctggggacagaagtat0700]661tgtcctttgcatgagcatgatagaacacctcgttgctgtagctgtgagaaaatggagcca0701]721aggaacacaaagtatatgtcattaggggatggacgcagcttgtgcatggaatgcctggat0702]781tctgcaatcatggacaccggtgaatgtcaaccgctataccattccatcagagactactac0703]841gaagggatgaacatgaaactagaccagcagatacccatgctcttggttgaacgtcaagcc0704]901cttaatgaagctatggaaggagaaagcaaaggaccgcatcatatgcctgaaacacgaggc0705]961ctttgtctgtcagaggagcagactgtgaccagtatacttaggaggcccagaattggtgca0706]1021aatcggttactagatatgaaaacccaaccgcaaaagctaactaggagatgcgaagtcact0707]1081gcaattcttgtattgtttggcctccccaggctgctaacgggctccattcttgcccatgaa0708]1141ttgatgcatgggtggttgcgcctcaaaggttaccggaacctaaaggcggagattgaggaa0709]1201ggtatatgccaggtcatgtcttacctgtggctggagtcagagatccttccatccacttca0710]1261agatatggacaggcttcaacatcttacgcttcatcttcgtcgtcctcctgtcgaccacca0711]1321ccgtccaagaagggtgggatctctcacaccgagaagaagcttggagaattcttcctgcat0712]1381cagatcgccaatgacacatcatcagcatacggcgatggtttcagagctgcctatgcagct0713]1441gtgaacaagtatggccttcgccaatcactgaaccatatacggctaaccggaggctttcct0714]1501gtgtaa0715]SEQIDNO:ll(0sDAR2)0716]latggagtttcttcttctcttgtttggatacattaagaatgtgtttctctttgcagtaaag0717]61aggttgttgttgatgccaatggggtggcttactaagatccttaaaggttctagtcataag121tattcagatggtcaagctaacagaagatacaatagagaggatagaagcctggacactcct181cgttattccgcggaaggatctgattttgacaaagaagaaattgaatgcgccattgcactc241tccctttctgaacaagaacatgtgattccacaagatgacaaaggaaagaaagtcatcgga301atacaaatctgaaactgaagaagatgatgatgaggatgaggatgaggatgaggaggatga361tgatgaagaacacatgagagctcaggtggaagcagcagaagaagaggaaaagaaggtagc421tcaagctcaaatagaggaagaagagaaacgaagagctgaagaagctgagctagaagagtt481agagaaacagcttgccaaagctagactagaagaggaagaagttagacgcgccaaagctca541acttgaggaagatgagcagctcgcaaaggctattcaagaaagtatgaatgtgggatctcc601tcctcctggatatgattctggaagtgtgtttccatcataccccttccttgttccttctag661agaatatgcactggttgccgagctgagattggacatggaaggtttctgagttgcatgggt721ggcgtttggcatcctgaatgtttttgctgccacgcttgtgataagcccatcatagactgt781gaggtgttctcaatgtcaggaaaccgtccttatcacaaactgtgttacaaggagcagcat841catccaaaatgtgatgtttgtcataactttattcctacaaatccagctggtctcattgag901tacagggcacatcccttttggatgcagaagtattgtccttcacatgagcgtgatggaaca961cctagatgctgcagctgtgagcgcatggagccgaaagatacaaagtatctgatacttgat1021gatggtagaaaactgtgtcttgaatgtctagactcagccattatggacactaatgaatgc1081caaccgttgtatctcgagatacgtgagttttatgaaggcttgcacatgaaagtggaacag1141cagatacctatgctcttggtggagagatcagctttaaacgaagctatggaaggagagaaa1201catggacatcatcacttacctgagactagaggactctgtttgtctgaagaacaaactgtc1261acaacagtgttgaggagaccaaagattggtgcaggctacaagttgatagacatgatcact1321gagccttgcaggctggtgcgccgttgtgaagtcactgctattctcatcttatatggactt1381ccccgcgtttgttaactggatcaatcctagctcatgagatgatgcatgcatggcttcgac1441taaatggggtatccaaatcttagaccagaagtggaagaagggatatgtcaggttttagct1501cacatgtggttggaatctgagacttatgctggctctacattgatagatattgcatcttct1561tcttcgtcttcatcatcagccgctgtggcgattgcatcgtccaagaaaggtgagaggtct1621gattttgagaagaaactcggtgagtttttcaagcaccagatagagtcagattcttcttcg1681gcatatggggatgggttcaggcaaggtaaccaagctgttcttacgcatggtctgaagcga1741acccttgatcatattcgcttgaccggtacatttccttaaSEQIDNO:12(BrDARl)latggattcttcttcatatggtgtttctcatgtcagccatatctccaatccttgtatcttt61ggggctgggtcgtcgtcttcgccagagaagaaatggaacttgatgaaatgggtgagtaaa121cttttcaagagtggctctaacggtggcactggtggtgctcgcactaaccgtcatcctcct181cagtttcaagaggacgagaatatggtctttcctttacctccttcctcttcggacgatcgg241tcgagagcctcacgggacaaagaagaactagatcgtgcattgtcagtttctctagctgac301gatacgaaccgaccatatggatatggttggtctatggataataattcagatttccctagg361ccttttcacagtggattgaatccatctttcattccaccttatgaaccgtcctatcaagtc421agacgaccacaaagaatatgtggcggttgcaatagcgatattggattggggaactatctg481ggatgcatgggaacattctttcatcctgattgcttctgttgtgattcatgtcgttaccct541atcactgagcatgagttctctctatcaggaaccaaaccttaccatcagatttgtttcaaa0757]601gagctcactcatcctaaatgcgaagtttgtcaccattttatcccaactaatgatgctggc0758]661ttgatcgaatatcgatgccatccgttttggaaccaaaagtattgcccctctcacgaacac0759]721gatagaaccgctcgttgctgtagctgcgaacgtttggagtcatgggaggtgagatattac0760]781acgttagacgatgggagaagtttatgtttagaatgcatggaaactgcgataaccgacact0761]841ggagattgtcaaccactttaccatgcaatacgtgactattacgaaggaatgtacatgaaa0762]901cttgagcaacaaatccccatgcttcttgttcagcgagaagctctcaacgacgctatcgtc0763]961ggagagaaacacggataccatcacatgcctgagacaaggggtttatgtttgtctgaagaa0764]1021caaacagtcacaagtgttcttaaaagaccgagactgggcgctcaccgtcttgttggtatg0765]1081agaactcagcctcaaaagcttacacgtaaatgtgaagtcactgcgattctcgttctttac0766]1141ggcctccctagactattaactggagcaattcttgcccacgagctgatgcatggatggcta0767]1201aggctcaaagggtataggaaccttaaccctgaggtagaggaaggtatctgccaagtcctc0768]1261tcttacatgtggcttgaatctgaagttctctcagatccttcttcaagaagcatgccctca0769]1321acatcaactgccacctcgtcatcatcatcatcatcatcttcttctaacaagaaaggaggg0770]1381aaaacaaacgtggagaagaaacttggagagttctttaagcatcagatagctcatgacgca0771]1441tctcctgcttacggagggggtttcagagcagcaaatgcagcggtttgtaagtacggtctg0772]1501cgtcgcacacttgatcatatccgcttcactggaacgtttcctttgtaaSEQIDNO13(BrDAR2)0774]latgccattgagagtgacatatctgatggaagatcggaaaagaaaaaggaaaaagcttttt0775]61gatttgggcagcggacttaaccttaaacctgcaggatccttttgaagctgaaactgatat0776]121cgtcaaacaagtgtcatcgaatgatgctcacgttcaagaagatgaacagcttgctttggc0777]181cattcaaaaatctaaagaagacgaagaggaaagaaggcccaccagggacttagaagagca0778]241tgcacatgagagaggagaaaggcaaaataattatgacaactcttcttctttgaaagacaa0779]301aaaagaaggacagacttctgaggagaaaacatgacaacatttcctctgaagctcgcttgg0780]361atgagaatgaggagcagcggattatctgggagagtttgaaggataaaggtcaaacaaagc0781]421catctgaagatgaggtcattcctcctcgtagagcaagtgtggtggttgccactctgagat0782]481tgaacaaggaggatcagtggatgtctttggtgttccttggcatcctgaatgtttctcttg0783]541tggtgcttgccgtaacccaattgctgtccacgaggttcaaaaccatgtctcaaactcaag0784]601aggcaagttcC3.C3.3.3.3.3.Ctgctataaccggtactgctatgtctgccaagagaaagttaa0785]661gattagagagtacaatagccatcctttctggaaggagatatactgccctgctcacgaaac0786]721tgatggaactcccaagtgttgcagctgcgagaggctagagcctagagaaacggagttcgt0787]781aatgctagatgatggaaggtggctatgtctagaatgtatggactcagcggttatggatac0788]841tgacgaagtccagcctcttcactttgaaatccgtgacttcttccatggcttgttcttgcc0789]901agttgagaaagagttttctcttcttttggtggagaaacaagccctgaataaagctgagga0790]961ggaagagaagattgtgtcaaaagggccaaagatgggggagaacaagcagctaacaggaaa0791]1021gaccacggaatctcaaagggttgtgagtggatgcccggtcactgcaattctcatcttata0792]1081tggacttcctagaggttactaacaggatctatcatggctcacgagatgatgcatgcttat0793]1141cttagactcaatgggacataataatttgaacaaggttctggaagaaggaatatgccaagt0794]1201gctagggcacatgtggttggagactcagagatacgcccctattgatgttgctgcagcttc0795]1261ttcttcttcttcgtcaaatgcggcaaagaaaggggagtggtctgaactcgagaagaagct1321ggtggatttttacaagtatgagatagaaacagatgagtcagctgtctatggtgaagggtt1381taggaaagttaactatatggttacaaactccagcctccaggaaaccctcaaagagattct1441tccccgccggggttgaSEQIDNO:14BrDAR3-7latgggttggttaaacaagatcttcaaaggctctaaccaaaggcaccccctggggaatgaa61cactatcatcataatggcggctattacgagaactacccgcacgaacattctgagcctagt121gcagagacagatgctgatcatacgcaggagccatctacttctgaggaggagacatggaat181gggaaggaaaatgaagaagtagaccgtgtaattgcattgtctattttagaagaagagaat241caaagaccagagactaatacaggcgcctggaaacacgcaatgatggatgacgatgagcaa301cttgctagagccatacaagagagtatgatagctaggaatggaactacttatgactttggg361aatgcatatgggaatggacatatgcatggaggaggcaatgtatatgacaatggtgatatt421tattatccaagacctattgctttctcaatggacttcaggatctgtgctggctgcaatatg481gagattggccatggaagatatctgaattgcctcaacgcactatggcatccacaatgtttt541cgatgctatggctgcagtcacccaatctctgagtacgagttctcaacgtctgggaattac601ccttttcacaaagcttgttacagggagaggttccatccaaaatgtgatgtctgcagcctc661tttatttcaacaaaccatgctggtcttattgaatatagagcacatcctttctgggtccag721aagtattgcccttctcacgaacacgatgctacgccaagatgttgcagctgtgaaagaatg781gagccgcggaatacaggatattttgaactcaacgatggacggaagctttgccttgagtgt841ctagactcatcggtgatggacacttttcaatgccagcctctgtacttgcagatacaagag901ttctatgaaggacttaacatgacggtagagcaggaggttccacttctcttagttgagcgg961caggcacttaacgaagccagagaaggtgaaaggaatggtcactatcacatgccagagaca1021agaggactctgtctgtcggaagaacaaactgttagaactgtgagaaagagatcgaaggga1081aactggagtgggaatatgattacagagcaattcaagctaactcgtcgatgcgaggttact1141gccattctcatcttgtttggtctccctaggctactcactggttcaattctagctcatgag1201atgatgcacgcgtggatgcggctcaaagggttccggccacttagccaagatgttgaagag1261gggatatgtcaagtgatggctcataagtggttagaagctgagttagctgctggttcaaga1321aatagcaatgctgcatcatcttcatcatcttcttatggaggagtgaagaagggaccaagg1381tctcagtacgagaggaagcttggtgagtttttcaagcaccagatagagtctgatgcttct1441ccggtttatggagatgggttcagggccgggaggttagcggttaacaagtatggtttgtgg1501agaacacttgagcatatacagatgactgggagattcccggtttaaSEQIDNO:15BrDAlblatgggttggtttaacaagat61catgaccacaatggctatta121cctgatcctgatcctgatcc181gatacatccggccaggaaaa241aacagtcaaggacagactaa301gatgaagatgagcaacttgc361cgtcagaagcatggaagtag421gggaatggacatatgcatggcttcaaaggctctacccaaaggttccggcttgggaatgacccagagttatccacatgatgagcctagtgctgatactgattgatgaaactcatactcaggaaccatctacctctgaggagcgaagacatagatcgtgcaatcgcattgtctcttatagaataatacatgcgctgccaacgcagggaagtacgcaatggtgtagagccatacaagagagcatggtagttgggaatacaccgttatgatattgggaatgcatatggggctggagacgtttacaggtggaaatgtatatgccaatggagatatttattatcca481agacctactgctttcccaatggatttcaggatttgtgctggctgcaatatggagattgga541catggaagatatctgaattgcttgaatgcactatggcatccagaatgttttcgatgttat601ggctgtaggcaccccatttctgagtacgagttctcaacgtctgggaactacccttttcac661aaagcttgttatagggagagataccatccaaaatgtgatgtctgcagcctctttattcca721acaaaccatgctggtcttattggatatagggcacatcctttttgggtccagaagtattgc781ccttctcacgaacacgatgctaccccaagatgttgcagttgcgaaagaatggagccacgc841aatacaggatatgttgaacttaacgatggacggaaactttgccttgaatgtctggactca901gcggtgatggacacttttcaatgccaacctctgtatctgcagatacaagaattctacgaa961ggtcttttcatgaaggtagagcaggacgttccacttcttttagttgagaggcaagcactc1021aacgaagccagagaaggtgaaaagaatggtcactatcacatgccagagacaagaggactc1081tgcctttcagaagagcaaactgttagcactgtaagaaagagatcgaagcatggcacagga1141aactgggctgggaatatgattacagagccttacaagttgacacgtcaatgcgaggttact1201gccattctcatcttgtttgggctccctaggctactcaccggttcgattctagctcatgag1261atgatgcacgcgtggatgcggctcaagggattccggacgctgagccaagacgttgaagaa1321ggaatatgtcaagtgatggctcataagtggttggaagcagagttagctgctggttcaaga1381aacagcaatgttgcgtcatcttcatcttctagaggagtgaagaagggaccaagatcgcag1441tacgagaggaagcttggtgagtttttcaagcaccaaatcgagtctgatgcttctccggtt1501tatggagacgggttcagggctgggaggttagcggttaacaagtatggtttgccaaaaaca1561cttgagcatatacagatgaccggtagattcccggtttaaSEQIDNO:16BrDAlalatgggttggttgaccaaattttttagaggttcaacccacaaaatctcggaagggcaatac61cacagcaaacccgcggaggagacgatatggaatggaccctctaattccgcagttgtgacg121gatgtcccgtcagaatttgacaatgaagatatcgctcgtgctatatcactctctctatta181gaggaggaacaaagaaaggcaaaggcaatagaaaaggacatgcatttggaggaggatgaa241caacttgcaagagctatccaggaaagtttgaatgttgaatcgcctcctcgtgctcgtgaa301aatggcaacgccaatggtggcaatatgtatcaaccactgccatttatgttttcttctgga361ttcaggacttgtgccggatgtcacagtgagattggtcatgggcgtttccttagttgcatg421ggagctgtttggcatccagaatgttttcgctgtcatgcttgtaatcaaccaatatatgac481tatgagttctccatgtcggg3-3-3.CC3.tCC3.taccataaaacatgctacaaggagcgcttt541cacccaaaatgtgatgtctgcaagcaatttattcctacaaatatgaatggcctgattgaa601tatagagcacatcctttctggttacaaaaatactgtccatcacatgaggtggacggtact661ccaagatgctgtagttgtgaaagaatggagccaagggaatcaagatatgtattgctggac721gatggtcgcaaactctgcctggagtgccttgattctgcagttatggatacgagcgagtgc781caacctctttatcttgaaatacaggaattttatgaaggcctaaatatgaaagtggaacaa841caagttcccttgcttcttgtagaaagacaggctttaaatgaagccatggaaggagagaag901actggtcaccaccatcttccagaaacaagaggtttatgcttatcagaagagcaaactgtc961agcacgatattgaggagaccaagaatggctggaaataaagttatggaaatgataacggag1021ccatataggttgactcgtcgatgtgaagtgactgcaattctcattctttatggtctccca1081agattgttgacaggttcaattttagctcatgagatgatgcatgcgtggttgcgacttaaa1141ggatatcgcacacttagtccagacgtagaagagggcatatgccaagttcttgctcacatg1201tggattgagtcagagatcattgcaggatcaggcagtaatggtgcttcaacgtcttcatcc1261tcatcagcatccacatcatcgaaaaaggggggaagatctcagtttgagcgaaagcttggt1321gattttttcaagcaccaaattgagtcagatacctcaatggcctatggcgatggttttaga1381gctggcaaccgagctgttcttcagtatggtctaaagcgcacccttgagcatatccggtta1441acagggactttcccattttgaSEQIDNO:170sDAl序列比對(duì)A.DAI的氨基酸,序列(SEQIDNO1)和核苷酸序列(SEQIDNO:2)和dal-1、sodl_l、sodl-2和sodl-3的突變位點(diǎn)。顯示了通過使用SMART軟件預(yù)測(cè)的域。B.不同的含UIM基序的蛋白之間的UIM基序的比對(duì)。通過使用SMART軟件預(yù)測(cè)UIM基序。所預(yù)測(cè)的UIM1(E值，6.39e-02)和UIM2(E值，7.34e_02)序列顯示于A中。C.含LIM域的蛋白之間的LIM域比對(duì)。在LIM域中，存在數(shù)個(gè)保守的半胱氨酸殘基和一個(gè)保守組氨酸。這些保守殘基所遵循的排列是C-x(2)-C-x(16，23)-H-x(2)-[CH]-x(2)-C-x(2)-C-x(16,21)-C-x(2,3)-[CHD]LIM域(E值，3.05e_10)使用SMART軟件進(jìn)行預(yù)測(cè)并且顯示于A中。D.擬南芥中的DA1和DA1相關(guān)蛋白的比對(duì)。DA1與DAR當(dāng)中的保守區(qū)域是在其C末端區(qū)中。dal-1等位基因具有在基因Atlgl9270中的G至A的單核苷酸轉(zhuǎn)變，且據(jù)預(yù)測(cè)其導(dǎo)致358位處的保守氨基酸從精氨酸(R)變?yōu)橘嚢彼?K)。星號(hào)表示比對(duì)中相同的氨基酸殘基。冒號(hào)表示比對(duì)中的保守取代，“.”表示比對(duì)中的半保守取代。E.DA1樣蛋白的氨基酸比對(duì)。采用缺省設(shè)置的CluStalW(http://WWW.ebi.ac.uk/Tools/clustalw2/index.html)來對(duì)來自小立碗蘚(Pp)、江南卷柏(Sm)、蕪菁(Br)、擬南芥(At)、二穗短柄草(Bd)和水稻(0s)的DAI樣蛋白的全長氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)，并在VectorNTi中編輯顯示設(shè)置。紅色箭頭顯示dal_l等位基因中的突變。DAL代表DA1樣蛋白。47AcgtggggaacgttttttcctggaagaagaagaagaagagctcaacaagctcaacgaccaaaaaacttcggacacgaagactttttaattcatttctcctcttttgtttttttcgttccaaaatattcgatactctcgatctcttcttcgtgatcctcattaaataaaaatacgatttttattctttttttgtgagtgcaccaaattttttgactttggattagcgtagaattcaagcacattctgggtttattcgtgtatgagtagacattgattttgtcaaagttgcattcttttatataaaagaagtttaatttccttttttcttttcttttctcttttttttttttttcccccatgttatagattcttccccaaattttgaagaaaggagagaactaaagagtcctttttgagattcttttgctgcttcccttgcttgattagatcatttttgtgattctggattttgtgggggtttcgtgaagcttattgggatcttatctgattcaggattttctcaaggctgcattgccgtatgagcagatagttttatttaggcattatgggttggtttaacaagatctttaaaggctctaaccaaaggctccgggttgggaataatMGWFNKIFKGSNQRLRVGNNaagcacaatcacaatgtttattacgataattatccgactgcttcacatgatgatgagcctKHNHNVYYDNYPTASHDDEPagtgcggcggatacagatgctgataatgatgaacctcatcatactcaggaaccatctacaSAADTDADNDEPHHTQEPSTtctgaggataatacatcgaatgaccaggaaaatgaagacatagaccgtgcaattgcattgSEDNTSNDQENEDIDRAIALuijsodl-l(a)G/EtcgcttttagaagagaatcaagaacagacaagtataagcgggaaatactcgatgccggtgSLLEENQEQTSISGKYSMPVgatgaagatgagcaacttgctagagccctacaagaaagtatggtagttgggaattcacccDEDEQLARALQESMVVGNSPVI>cgtcacaaaagtggaagtacatatgataatgggaatgcatatggagctggagatttatatRHKSGSTYDNGNAYGAGDLYgggaatggacatatgtatggaggaggaaatgtatatgcaaatggagatatttattatccaGNGHMYGGGNVYANGDIYYPagacctattacttttcaaatggatttcaggatttgtgctggctgtaatatggagattggcRPITFQMDFRICAGCNMEIGcatggaagatttctgaattgccttaattcactatggcatccagaatgttttcgatgttatHGRFLNCLNSLWHPECFRCYli1ggctgcagtcagccgatttctgagtacgagttttcaacatcagggaactacccttttcacGCSQPISEYEFSTSGNYPFHaaggctcgttacagggagagatatcatcctaaatgtgatgtctgcagccactttataccaKACYRERYHPKCDVCSHFIPacaaatcatgctggtcttattgaatatagggcacatcctttttgggttcagaagtattgtTNHAGLIEYRAHPFWVQKYCccttctcacgaacacgatgctaccccgagatgttgcagttgtgaaagaatggagccacggPSHEHDATPRCCSCERMEPRaatacgagatatgttgaacttaacgatggacggaaactttgccttgagtgtttggactcgNTRYVELNDGRKLCLECLDSgcggtcatggacaccatgcaatgccaacctctgtacttgcaaatacaaaatttctatgaaAVMDTMQCQPLYLQIQNFYEggactcaacatgaaggtagagcaggaagttccactcctcttggttgagagacaagcacttGLNMKVEQEVPLLLVERQALdal-1(a)(R/K)aacgaagccagagaaggtgaaaagaatggtcactatcacatgccagaaacaagaggactcNEAREGEKNGHYHMPETRGL(t)(L/F)sodl-2tgcctttcagaagaacaaactgttagtactgtaagaaagcgatcaaagcatggcacaggaCLSEEQTVSTVRKRSKHGTGaaatgggccgggaatattacagaaccttacaagttaacacggcaatgtgaagttaccgccKWAGNITEPYKLTRQCEVTAattctcatcttattcgggctccctaggttacttactggttcgattctagctcatgagatgILILFGLPRLLTGSILAHEMsodl-3(T)(Q/.)atgcatgcgtggatgaggctcaaaggattccgaacactgagccaagatgttgaagaaggtMHAWMRLKGFRTLSQDVEEGatatgtcaagtgatggctcataaatggttagatgctgagttagctgctggttcaacaaatICQVMAHKWLDAELAAGSTNagcaatgctgcatcatcatcctcctcttctcaaggactgaaaaagggaccgagatctcagSNAASSSSSSQGLKKGPRSQtacgagagaaagcttggtgagtttttcaagcaccaaatcgagtctgatgcttctccggttYERKLGEFFKHQIESDASPVtatggagacgggttcagagctgggaggttagctgttcacaagtacggtttgcgaaaaacaYGDGFRAGRLAVHKYGLRKTCttgagcatatacagatgaccggtagattcccggtttaagaacccaaatggacaaggtctLEHIQMTGRFPV-tctactttatttataggatccttggtagattcctcctatatgctctaattcttttggtggaaaatgtactctcgaccatattcttattgtagtctcattcgatgattctttgtattcctctgttaaaatccatcagaatcagattcagtgttttctttgtt序列比對(duì)BgUUEEN-a^Iaqj^q；F.EDKAj_KESRN輯工T|QESGL|mscrptoEHEK:ll^OQMGKjAI1BDPKl^SEIH-]IjKEMMRJVQ.DSAKIKKEAEQ|jiSESTAjpiaEIOM]VQDAGGjli'LEAGTjgEAQAK||QYNPPSfe'VETSG|_SEMEA卜KEMPQjJiiKEAQK1躲EISH|^etakofVGDVMM'|reakeL.QAEEfEEGSSilGHSSE^METGG|SEQKH|l,DSKK"jFEYKK(LIYET^QMMNTipLTAKKPQEQKQAAKEEERfeRDASP續(xù)鮮K3A.EEIjEEQRQ$QGSBGlEIQDFKX)'45/64頁CN101855353A說明書UIMlDAIQ9I.M05/295-314Q74423/25&-277VP27_YE.AST/258Q05785/175-194Q9P2G1/976-995AAK61871/10S-1_€7'41231/229-2Q9XTL2/丄73_:1922623826/295-31Q9FJXS/64-S4Q9C9U5/139-158YMIa_YEAST/6S1Q3FJX8/119-13BAAK6171/80-99Q201S7/2-21Q9HOH8/758—777Q9VSR1/860-679081340/323-342Q9T0E1/138-1570~4749/164-183O35315/224-24305丄43/323—342Q9HFF.12iJ8-22Q9FJX8/146-165ENSG0000C13275YMIc_YEAST/5I7Q9MK11/5-24Q9V.8R1/S10-529AAH11090/250-2Q13821/260-279013821/304-323YMI8_Y:EAST/533EPiS~MOVSE/878035STS/329-348PSD4_ARATH/282Q9FJK6/38-57VP27—YE.AST/301O"144^3./230-249O82143/291-310Q9.LG27/1615-16Q9HA1B/233-252G23197/65-64O4526.6/382-401Q9H3M9/215-23YHA2_YEAST/162YMI；3_YEAST/54726二3"§26/252_28Q9HCH6/780-7"99Q12518/I65-184075986/165-184EPl5_MOUSE/852O23197/110-129Q9HCH8/856-675Q9T0E1/170-189QC3291/171-1PSD4_DROME/212Q9H3M9/235-Z52Q9VS85/226-245QENEHIiHDDTA二『<dseakIOIDEEELIKjf^SYODoflEiKDOPniLX,eeeeJoedl^BQKEODIAJ^HEEOOZA*^MVOEL.。!^KEOELgAItTTEEE^FAilq:eqed|kiSEEDVpi^ATfEOSAI^iQHEAUIQteedpd!EHOPFjDOAQI^lQEDDirlGDDIfcJFDKE*.IKClGDEEUFXsddkfJDEDE^SEEAM]KEDDDIKEDED-SKEDMIIDEDEim_KEEEligAA^HDDDrJZAXl"QDDEtREDEHflRSDDVHiKARSDASGSKEA-RVEWFKSQHSOPKNESS-RASEADGdkqqksdqrrsknr^PKM.E1-QLEMI'OAXHAJKQTVKBAXrxKX..KMLAI.KfiIMHsEnLH^LEBVKX50序列比對(duì)C序列比對(duì)DAT1G19270----------AT4G38660----------AT2G39830----------AT5G66620----------AT5G66630----------AT5G66610----------AT5G66640AT5G17890TKFF60AT1G19270AT4G36860AT2G39830AT5G66620AT5G66630AT5G66610AT5G66640AT5G17890LTRV120AT1G19270AT4G36860AT2G39830AT5G66620AT5G66630AT5G66610AT5G66640AT5G17890IWGM180AT1G19270MEPPAARVTPSIKADCSHSVNIICEETVLHSLVSHLSAALRREGISVFVDACGLQESIKQNQPLTDGARVLVVVISDEVEFYDPWFPKFLKVIQGWQNNGHVVVPVFYGVDSYGILSNNVLTDSELVEEIVRDVYGKLYPAERVGIYARLLEIEKLLYKQHRDIRSIG56A／4636860A／2639830A／5666620A／5666630A／5666610A／5666640[1000]A／5G17890ESSY240[1001]ATlGl9270[1002]A／4036860[1003]A／2039830[1004]A／5066620[1005]A／5066630[1006]A／5066610[1007]A／5066640[1008]A／5G17890FCQI300[1009]ATl319270[1010]A／40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SASKKGE-WSDFDKKLVEFCKNQIETDESPVYGLGFRTVNSSASS-—SSRTP-AANASKKGA-QSDYEKKLVEFCKDQIETDDSPVYGVGFRKVNBdDAU.proBdDAL3.proOsDAl.proOsDAR2.proOsDAL3.pOsDAL4.proPpDAll.proPpDAL2.proPpDAL3.proPpDAW.proPpDAL6.proPpDAL5.proPpDAL7.proPpDALS.proSmDAH.proSmDAL2.pro相同保守相似塊權(quán)利要求一種改變植物表型的方法，所述方法包括在所述植物的細(xì)胞內(nèi)表達(dá)編碼顯性負(fù)向DA多肽的核酸。2.如權(quán)利要求1所述的方法，所述方法包括減少或消除所述植物的細(xì)胞內(nèi)的BB多肽表達(dá)。3.—種生產(chǎn)具有改變的表型的植物的方法，所述方法包括通過轉(zhuǎn)化將編碼顯性負(fù)向DA多肽的異源核酸引入植物細(xì)胞內(nèi)；和從一個(gè)或多個(gè)轉(zhuǎn)化的細(xì)胞使植物再生。4.如權(quán)利要求4所述的方法，所述方法還包括通過轉(zhuǎn)化將表達(dá)減少BB多肽表達(dá)的抑制子核酸的異源核酸引入所述植物細(xì)胞內(nèi)。5.如權(quán)利要求14中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述改變的表型包括相對(duì)于對(duì)照植物正常的能育性以及增加的壽命、增加的器官尺寸和增加的種子尺寸中的一個(gè)或多個(gè)。6.如權(quán)利要求15中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述顯性負(fù)向DA多肽包含SEQIDNO:3的UIM1域和SEQIDNO4的UIM2域。7.如權(quán)利要求6所述的方法，其中，所述顯性負(fù)向DA多肽包含SEQIDNO5的LIM域。8.如權(quán)利要求6或7所述的方法，其中，所述顯性負(fù)向DA多肽包含與SEQIDNO1的250532位殘基具有至少20%的序列同一性的C末端區(qū)。9.如權(quán)利要求18中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述顯性負(fù)向DA蛋白包含與SEQIDNO1具有至少20%的序列同一性的序列。10.如權(quán)利要求19中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述顯性負(fù)向DA蛋白在與SEQIDNO:1的358位等同的位置處包含R向K突變。11.如權(quán)利要求2或4所述的方法，其中，所述BB多肽包含與SEQIDN0:9具有至少20%的序列同一性的氨基酸序列。12.如權(quán)利要求111中任一項(xiàng)所述的方法，其中，編碼所述顯性負(fù)向DA多肽和/或所述抑制子核酸的核酸與異源啟動(dòng)子可操作性相連。13.如權(quán)利要求12所述的方法，其中，所述啟動(dòng)子是組織特異性啟動(dòng)子。14.如權(quán)利要求13所述的方法，其中，所述啟動(dòng)子是誘導(dǎo)型啟動(dòng)子。15.如權(quán)利要求1214中任一項(xiàng)所述的方法，其中，編碼所述顯性負(fù)向DA多肽和/或所述抑制子核酸的核酸包含在一個(gè)或多個(gè)載體中。16.如權(quán)利要求115中任一項(xiàng)所述的方法，所述方法包括有性或無性繁殖或生長表達(dá)DA多肽的顯性負(fù)向形式的植物的子代或后代。17.如權(quán)利要求116中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述植物是高等植物。18.如權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述植物是選自由紫草、紅豆杉屬、煙草、葫蘆科植物、胡蘿卜、蕓苔屬植物、甜瓜、辣椒、葡萄、萵苣、草莓、油菜、甜菜、小麥、大麥、玉米、水稻、大豆、豌豆、高粱、向日葵、番茄、馬鈴薯、胡椒、菊花、香石竹、亞麻、大麻和黑麥組成的組的農(nóng)業(yè)植物。19.一種植物，所述植物在其細(xì)胞內(nèi)表達(dá)編碼顯性負(fù)向DA多肽的異源核酸并且具有或不具有減少或消除的BB多肽表達(dá)。20.如權(quán)利要求19所述的植物，所述植物由權(quán)利要求3或4所述的方法產(chǎn)生。21.如權(quán)利要求19或20所述的植物，所述植物相對(duì)于對(duì)照植物具有正常的能育性并且相對(duì)于對(duì)照植物具有增加的壽命、增加的器官尺寸和增加的種子尺寸中的一個(gè)或多個(gè)。22.一種改變植物表型的方法，所述方法包括減少或消除所述植物的一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞中編碼DA多肽的兩個(gè)或多于兩個(gè)核酸的表達(dá)。23.—種生產(chǎn)具有改變的表型的植物的方法，所述方法包括減少或消除植物細(xì)胞中編碼DA多肽的兩個(gè)或多于兩個(gè)核酸的表達(dá)；和從所述植物細(xì)胞再生所述植物。24.如權(quán)利要求22或23所述的方法，其中，通過使植物細(xì)胞中編碼兩個(gè)或多于兩個(gè)DA蛋白的核酸序列突變并從突變的細(xì)胞再生所述植物來消除表達(dá)。25.如權(quán)利要求22或23所述的方法，其中，通過在所述植物的細(xì)胞內(nèi)表達(dá)抑制所述兩個(gè)或多于兩個(gè)核酸的表達(dá)的兩個(gè)或多于兩個(gè)異源核酸來減少或消除表達(dá)。26.如權(quán)利要求2225中任一項(xiàng)所述的方法，其中，一個(gè)或多個(gè)DA多肽包含SEQIDNO:3的UIM1域、SEQIDNO:4的UIM2域、SEQIDN0:5的LIM域、與SEQIDNO:1的250532位殘基具有至少20%的序列同一性的C末端區(qū)和位于與SEQIDNO:1的358位等同的位置處的R殘基。27.如權(quán)利要求2226中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述改變的表型的特征是相對(duì)于對(duì)照植物正常的能育性和相對(duì)于對(duì)照植物增加的壽命、增加的器官尺寸和增加的種子尺寸中的一個(gè)或多個(gè)。28.一種改變植物表型的方法，所述方法包括相對(duì)于對(duì)照植物在所述植物的細(xì)胞內(nèi)表達(dá)編碼DA多肽的核酸。29.如權(quán)利要求28所述的方法，其中，所述改變的表型的特征是相對(duì)于對(duì)照植物正常的能育性以及減少的壽命、減小的器官尺寸和減小的種子尺寸中的一個(gè)或多個(gè)。30.如權(quán)利要求28或29所述的方法，其中，所述DA多肽包含SEQIDNO3的UIM1域、SEQIDNO4的UIM2域、SEQIDNO5的LIM域、與SEQIDNO1的250532位殘基具有至少20%的序列同一性的C末端區(qū)和位于與SEQIDNO:1的358位等同的位置處的R殘基。31.一種鑒定顯性負(fù)向DA多肽的方法，所述方法包括提供編碼DA多肽的分離核酸，在所述核酸內(nèi)弓丨入一個(gè)或多個(gè)突變，通過轉(zhuǎn)化將所述核酸導(dǎo)入植物細(xì)胞內(nèi)，從一個(gè)或多個(gè)轉(zhuǎn)化細(xì)胞再生所述植物，和鑒定再生的植物的表型，其中，包括相對(duì)于對(duì)照植物正常的能育性以及減少的壽命、減少的器官尺寸和減少的種子尺寸中的一個(gè)或多個(gè)的改變的表型表明突變的DA多肽是負(fù)向植物生長調(diào)節(jié)物。32.—種顯性負(fù)向DA多肽的制備方法，所述方法包括提供編碼植物DA多肽的核酸序列，鑒定與SEQIDNO1的358位等同的位置處的所編碼的植物DA多肽中的R殘基和使所述核酸突變以改變所編碼的植物DA多肽中的所述R殘基，突變體核酸序列編碼顯性負(fù)向DA多肽。33.一種分離的DAI或DAR蛋白。34.如權(quán)利要求33所述的分離的DA1或DAR蛋白，所述蛋白包含至少一個(gè)UIM域和至少一個(gè)LIM域以及見于包含DA1中358位處的保守精氨酸的DA1和DAR蛋白的C末端區(qū)中的擴(kuò)展蛋白同源性。35.如權(quán)利要求34所述的分離的DA1或DAR基因，所述基因是AT1G19270、SGN-U317073、SGN-U277808、SGN-U325242、AT4G36860、SGN-U209255、AB082378.1、AT2G39830、CAN69394.1、0S03G16090.9234.M000024、29235.M000021、AT5G66620、AT5G66630、AT5G66610、AT5G66640,AT5G17890、SGN-U320806、AB096533.1、CAL53532.1、0S06G08400、SGN-U328968、0S03G42820、0S12G40490或其同源物、操作性變異體或部分，其中操作性部分或變異體是能夠限制增殖性生長的持續(xù)時(shí)間或能干擾對(duì)增殖性生長的持續(xù)時(shí)間的限制并增加種子和/或器官尺寸的分子。36.如權(quán)利要求3335中任一項(xiàng)所述的分離的DA1或DAR，所述分離的DA1或DAR包含358位的Arg向358位或與所述DA1或DAR的該位置等同的位置處的Lys的突變。37.一種包含權(quán)利要求36所述的DA1或DAR的植物。38.一種編碼權(quán)利要求3336中任一項(xiàng)所述的蛋白的分離核酸。39.一種包含與啟動(dòng)子操作性連接的權(quán)利要求38所述的核酸的載體。40.如權(quán)利要求39所述的載體，所述載體還包含編碼至少一個(gè)eod序列的核酸序列。41.一種不會(huì)對(duì)能育性產(chǎn)生不利影響的增加植物的器官和/或種子的尺寸的方法，所述方法包括在植物內(nèi)表達(dá)DA1或DAR變異體，所述DA1或DAR變異體干擾對(duì)增殖性生長的持續(xù)時(shí)間的限制并增加種子和/或器官尺寸。42.如權(quán)利要求41所述的方法，其中，所述DA1或DAR變異體包含AT1G19270、SGN-U317073、SGN-U277808、SGN-U325242、AT4G36860、SGN-U209255、AB082378.1、AT2G39830、CAN69394.1、0S03G16090.9234.M000024,29235.M000021、AT5G66620、AT5G66630、AT5G66610、AT5G66640,AT5G17890、SGN-U320806、AB096533.1、CAL53532.1、0S06G08400、SGN-U328968、0S03G42820、0S12G40490或其同源物、操作性變異體或部分，其中所述變異體干擾對(duì)增殖性生長的持續(xù)時(shí)間的限制并增加種子和/或器官尺寸。43.如權(quán)利要求42所述的方法，其中，所述變異體包含與DA1K358K等同的突變。44.一種延長植物的生長期的方法，所述方法包括在所述植物內(nèi)表達(dá)DA1K358K。45.如權(quán)利要求4144中任一項(xiàng)所述的方法，所述方法還包括具有突變的遺傳組合，所述突變破壞E0D基因或其同源物、操作性變異體或部分的功能，其中所述突變體組合干擾對(duì)增殖性生長的持續(xù)時(shí)間的限制并增加種子和/或器官尺寸。46.如權(quán)利要求4144中任一項(xiàng)所述的方法，所述方法包括帶有表達(dá)RNA干擾構(gòu)建體的轉(zhuǎn)基因的遺傳組合，所述RNA干擾構(gòu)建體減少E0D1或其同源物、操作性變異體或部分的表達(dá)，其中所述突變體組合干擾對(duì)增殖性生長的持續(xù)時(shí)間的限制并增加種子和/或器官尺寸。47.一種包含在至少一個(gè)編碼DA1的第一基因中和至少一個(gè)編碼DAR的第二基因中的敲除的植物。48.一種包含表達(dá)RNA干擾構(gòu)建體的轉(zhuǎn)基因的植物，所述RNA干擾構(gòu)建體減少DAI、DAR或其同源物、操作性變異體或部分的表達(dá)，其中所述變異體干擾對(duì)增殖性生長的持續(xù)時(shí)間的限制并增加種子和/或器官尺寸。49.一種包含表達(dá)減少DAI、DAR或其同源物、操作性變異體或部分在特定器官和組織中的RNA水平的任何類型的RNA干擾構(gòu)建體的轉(zhuǎn)基因的植物，其中所述構(gòu)建體在特定組織和器官中干擾對(duì)增殖性生長的限制并增加種子和/或器官尺寸。50.如權(quán)利要求4749中任一項(xiàng)所述的植物，所述植物還包含具有破壞E0D基因或其同源物、操作性變異體或部分的功能的突變的遺傳組合。全文摘要本發(fā)明涉及對(duì)控制擬南芥和其它植物的植物種子和器官尺寸的稱為DA的調(diào)節(jié)蛋白的鑒定。對(duì)于DA蛋白表達(dá)的操控可以用于例如改善作物產(chǎn)量和增加植物生物量。文檔編號(hào)A01H5/00GK101855353SQ200880115291公開日2010年10月6日申請(qǐng)日期2008年10月10日優(yōu)先權(quán)日2007年10月11日發(fā)明者李云海,邁克爾·貝文申請(qǐng)人:植物生物科學(xué)有限公司