專利名稱：一種南美白對(duì)蝦抗菌肽制劑及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含有南美白對(duì)蝦抗菌肽的制劑，屬于動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
水產(chǎn)動(dòng)物疾病的防治是長(zhǎng)期以來(lái)困擾水產(chǎn)養(yǎng)殖者的難題，特別是傳統(tǒng)魚(yú)病學(xué)上 行之有效的一些藥物紛紛被禁用或限用，以及化學(xué)消毒劑和抗生素等藥物的廣泛和長(zhǎng)期 使用，許多病原產(chǎn)生了抗藥性和藥物耐受現(xiàn)象。因此，開(kāi)發(fā)一種全新的抗病藥物已成為 魚(yú)病學(xué)研究的熱點(diǎn)。根據(jù)抗菌肽結(jié)構(gòu)和生物活性等方面的特點(diǎn)可以看出，這些肽類具有 廣譜抗菌 作用，并且抗菌機(jī)理獨(dú)特，病原菌不易對(duì)抗菌肽產(chǎn)生耐藥性，屬無(wú)毒副作用， 無(wú)殘留的一類環(huán)保型制劑。本發(fā)明的目的是提供一種新型綠色環(huán)保飼料免疫添加劑，它能有效地增強(qiáng)水產(chǎn) 養(yǎng)殖動(dòng)物機(jī)體免疫功能，提高水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物抗病能力。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明南美白對(duì)蝦抗菌肽制劑其抗菌肽為Pen-3a，Genbank序列號(hào)為Y14926， 其mRNA基因序列如序列表所示。本發(fā)明南美白對(duì)蝦抗菌肽制劑，抗菌肽效價(jià)為400mg/g，以玉米蛋白為載體。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的飼料中添加的南美白對(duì)蝦抗菌肽被對(duì)蝦吸收后， 主要儲(chǔ)存在大顆粒血細(xì)胞(LGH)的細(xì)胞質(zhì)顆粒中。當(dāng)血細(xì)胞受微生物刺激，抗菌物質(zhì)就 從血細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)顆粒中釋放出來(lái)，這樣通過(guò)對(duì)抗菌肽經(jīng)胞吐作用從對(duì)蝦顆粒血細(xì)胞中 釋放的過(guò)程進(jìn)行調(diào)控，能夠提高微生物與血細(xì)胞接觸部位血漿的抗菌活性，從而防止微 生物感染。本發(fā)明因從動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)免疫學(xué)角度，提高水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物免疫抗病能力，起到預(yù)防 疾病的作用，因而無(wú)需使用抗生素類藥物，減少藥物殘留。實(shí)施例1以大腸桿菌為實(shí)驗(yàn)菌種，采用制片擴(kuò)散法和液體生長(zhǎng)抑制法測(cè)定南美白對(duì)蝦抗 菌肽抗菌活性。結(jié)果表明，抗菌肽對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌均有不同程度的抗菌 活性，對(duì)氨芐青霉素不敏感的強(qiáng)致病性細(xì)菌，如枯草芽孢桿菌、蘇云金芽孢桿菌和綠膿 桿菌等都有很好的抗菌活性，對(duì)抗氨芐青霉素的大腸桿菌也具抑菌活性，且隨抗菌肽含 量的提高抑菌效果不斷加強(qiáng)。實(shí)施例2在南美白對(duì)蝦的養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)中，進(jìn)行本抗菌肽制劑與金霉素的對(duì)比研究，結(jié)果顯 示，養(yǎng)殖100天后，添加抗菌肽制劑4mg/kg組較添加0.5mg/kg金霉素組成活率增加 13.3%,收獲量增加12.8%，添加4mg/kg抗菌肽制劑組較添加10mg/kg金霉素組成活率增加16.7%。表明南美白對(duì)蝦抗菌肽能顯著提高對(duì)蝦的成活率、提高對(duì)蝦產(chǎn)量。南美白對(duì)蝦抗菌肽(Pen_3a)mRNA序列表<110>山東省淡水水產(chǎn)研究所<120>—種南美白對(duì)蝦抗菌肽制劑及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用<141>2009-09-15<160>1<210>1 <211>703<212>RNA<213> 南美白對(duì)蟲(chóng)下(Penaeus vannamei)<400>tcgagcctcacctgcagagaccgacgctccgagcccgggttccctcctgcgtccgccatg 60cgcctcgtggtctgcctggtcttcttggcctccttcgccctggtctgccaaggccaagtg 120tacaagggcggttacacgcgcccgatacccaggccaccacccttcgtgagacctttgcca 180ggagggcctattggtccatacaacggttgccctgtctcatgccggggaatttccttctca 240caagcgcgttcttgctgctcccggttagggcgttgctgtcacgtgggaaagggatattcc 300ggttgatggagaacacgatgaaaacctcgcttgacaacctgttgattgatacttgtatgt 360gaagagactgtgatcctgattttgcactgtgttttctcgttcaatattcttactctggct 420tgtggaatggatgtagttatttgaccctatgtttttttttaagacttttccatgaatgca 480cgatgaatgaaagcttgcgtgatatgaatgagtgcatccacttttcaacgtcccagcagg 540tggcgccgtattcatgatttgtgacacacgaggaagtaaatccatgccatctgcctttcg 600ttgtaatttttagtgagtatggatctgtgtgtgggtgatttttacaaatctctcaaagga 660cttttagaaatgttactcctttacaaataaaattggtatcttg70權(quán)利要求
1.一種南美白對(duì)蝦抗菌肽制劑，抗菌肽效價(jià)為400mg/g，以玉米蛋白為載體。
2.按照權(quán)利要求1所述制劑，其中抗菌肽為Pen-3a，分子大小為5.48 6.62KU(1U= IDa),是一類富含陽(yáng)離子的分子，等電點(diǎn)為9.34 9.84。其氨基酸序列為pE VYKGGYTRPIPRPPPFVRPLPGGPIGPYNGCPVSCRGISFSQARSCCSRLGRCCHV GKGYS*注“*”代表C端酰胺化；pE代表焦谷氨酸；“P” “C”分別代表脯氨酸和半胱氨酸殘基。
3.按照權(quán)利要求2中所述抗菌肽氨基酸序列，Pen-3a的N端有一個(gè)富含脯氨酸的區(qū) 域，同時(shí)存在焦谷氨酸，C端以酰胺化形式存在，由三個(gè)分子內(nèi)二硫鍵來(lái)維持穩(wěn)定。
全文摘要
本發(fā)明公布一種南美白對(duì)蝦抗菌肽制劑及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用。南美白對(duì)蝦抗菌肽制劑是通過(guò)將南美白對(duì)蝦抗菌肽的基因克隆到載體上，然后進(jìn)入酵母細(xì)胞中表達(dá)、發(fā)酵制備而成。本發(fā)明南美白對(duì)蝦抗菌肽制劑能促進(jìn)南美白對(duì)蝦生長(zhǎng)，提高南美白對(duì)蝦免疫抗病能力。可做為綠色、環(huán)保的新型飼料免疫添加劑，減少乃至消除抗生素在水產(chǎn)品中的蓄積，提高水產(chǎn)品質(zhì)量。
文檔編號(hào)A23K1/18GK102018101SQ200910018200
公開(kāi)日2011年4月20日 申請(qǐng)日期2009年9月15日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月15日
發(fā)明者周嗣泉, 宋理平, 師吉華, 張延華, 潘曉玲, 王愛(ài)英, 胡斌, 軒子群, 馬國(guó)紅, 馬汝芳 申請(qǐng)人:山東省淡水水產(chǎn)研究所