專利名稱：一種高灌藍(lán)莓工廠化組培快繁的工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)，具體涉及一種高灌藍(lán)莓 工廠化組培快繁的工藝流程。
背景技術(shù)：
高灌藍(lán)莓(Blueberry)，學(xué)名越橘，系多年生灌木，原產(chǎn)北美。一般無法形成種子， 大多采用扦插、壓條等繁殖方法，但高灌藍(lán)莓對(duì)溫度、土壤、氣候等要求比較嚴(yán)格，多數(shù)品種 不易繁殖，扦插養(yǎng)護(hù)更不容易，而且高灌藍(lán)莓種質(zhì)資源退化較為嚴(yán)重，扦插繁殖的質(zhì)量很不 理想。組織培養(yǎng)繁殖植物的技術(shù)是一種特殊的營(yíng)養(yǎng)繁殖方式，現(xiàn)在一般稱為快速繁殖技術(shù) 或微繁殖技術(shù)。它是在無菌條件下，利用植物體的一部分，包括細(xì)菌、組織和器官，在人工控 制的營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境條件下繁殖植物的方法。該技術(shù)比較成熟，設(shè)備比較簡(jiǎn)單，技術(shù)要求不十分 高，而經(jīng)濟(jì)效益可觀，越來越受到人們的重視。因此，采用工廠化生產(chǎn)方式繁育高灌藍(lán)莓品 種既能防止品種退化，保證種苗質(zhì)量，又能提供大量?jī)?yōu)質(zhì)廉價(jià)的種苗?，F(xiàn)有技術(shù)一般不針對(duì) 藍(lán)莓的品種統(tǒng)一用單一培養(yǎng)基，導(dǎo)致出苗誘導(dǎo)率不高；而且誘導(dǎo)時(shí)間較長(zhǎng)，生根難度大，成 活率低，不能適應(yīng)更加快速的市場(chǎng)需求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種能降低污染率，提高生根成活率且誘導(dǎo)率更高的高灌藍(lán) 莓組織培養(yǎng)快速繁殖方法。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案。高灌藍(lán)莓組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括如下步驟(1)、外植體材料處理即選用外植體材料進(jìn)行處理，在殺死率和污染率最低的平 衡點(diǎn)制備出符合要求的外植體；(2)、誘導(dǎo)即將步驟Sl中所述的外植體接種到培養(yǎng)基上，在誘導(dǎo)條件下誘導(dǎo)出 芽；所述培養(yǎng)基為瓊脂綜合培養(yǎng)基的改良；(3)繼代培養(yǎng)即將步驟S2中所得叢生芽新梢在繼代培養(yǎng)基中增殖培養(yǎng)；進(jìn)一步的，步驟Sl采用當(dāng)年生剪去葉片的嫩莖，自來水沖洗干凈，放入加入活性 炭的0. 氯化汞消毒液中8-30分鐘，在無菌工作臺(tái)上用無菌水沖洗3-5遍，切下解刨芽接 種。優(yōu)選的技術(shù)方案中，所述步驟Sl外植體材料處理包括清洗、消毒、和裁剪；所述清 洗將用于制作外植體的外植體材料洗凈；所述消毒對(duì)洗凈的外植體材料作消毒處理；所述 剪裁將消毒后的外植體材料裁成合適大小的外植體。步驟(2)中所述培養(yǎng)基的配方為瓊脂綜合培養(yǎng)基+玉米素0. 8--1. 3mg/L+萘乙酸 0. 2—1. 6mg/L,將外植體接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，1周后開始萌發(fā)，40-52天后芽長(zhǎng)成4 5cm 左右的新梢，側(cè)芽同時(shí)也萌發(fā)出5 10個(gè)叢生芽。步驟(3)中所述培養(yǎng)基配方為瓊脂綜合培養(yǎng)基+玉米素1.0mg/L+吲哚丁酸0. 2-0. 6mg/L將叢生芽切割2cm左右莖段新梢，轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基上增值培養(yǎng)，后可分化出 30 50個(gè)叢生芽，一般54-62天繼代培養(yǎng)一次，增值率在30 50倍。所述外植體材料為高灌藍(lán)莓當(dāng)年生去葉嫩莖。所述清洗包括無菌水清洗和含洗潔精的水浸洗。所述消毒包括酒精消毒和加入活性炭的氯化汞消毒液消毒。采用本發(fā)明技術(shù)方案的高灌藍(lán)莓組織培養(yǎng)快速繁殖方法，與現(xiàn)有技術(shù)對(duì)比的有益 效果在于使用的消毒液對(duì)越桔莖段滅菌時(shí)，以25min為宜，污染率與殺死率降到最低，成活 率最高可達(dá)75%。初代培養(yǎng)50d左右，部分莖段可直接誘導(dǎo)產(chǎn)生萌生芽，在附加玉米素1. Omg/L 和萘乙酸1.0mg/L的改良瓊脂綜合培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)時(shí)間更短，不定芽的萌芽率最高，達(dá)到 86. 67% ；越桔在改良生根培養(yǎng)基中，生根率達(dá)80 %以上，其成活率可達(dá)95 %由于外植體材料處理包括清洗、消毒和裁剪，能夠獲得更加優(yōu)質(zhì)的外植體，為組織 培養(yǎng)快速繁殖方法鑒定良好的基礎(chǔ)。由于優(yōu)選藍(lán)莓去葉嫩莖作為外植體材料，為組織培養(yǎng)快速繁殖提供良好的的材料 保證。由于清洗包括自來水沖洗和含洗潔精的水浸洗，可以使得清洗更加徹底。由于消毒包括酒精消毒和加入活性炭的消毒液消毒，消毒更加徹底。由于將外植體材料去掉葉之后切成0. 5 lcmXO. 85 1cm大小的嫩莖作為外植 體，誘導(dǎo)培養(yǎng)更加方便，且效果更好。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施做進(jìn)一步的說明實(shí)施例1 1、外植體材料處理包括對(duì)外植體材料進(jìn)行清洗、消毒和裁剪等處理，以制備出合 乎要求的外植體。具體為采用當(dāng)年生剪去葉片的嫩莖，自來水沖洗干凈，在無菌工作臺(tái)上用無菌水 沖洗3-5遍，用自來水中沖洗20 30min，再用加洗潔精的水浸洗20 30min。清洗干凈 之后在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行消毒處理，放入加入活性炭的0. 氯化汞消毒液中10分鐘，消 毒完成之后放入無菌瓶中備用。2、誘導(dǎo)出芽將外植體接種在配方為瓊脂綜合培養(yǎng)基+玉米素0. 8mg/L+萘乙酸 0. 2mg/L的培養(yǎng)基中，將外植體接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，1周后開始萌發(fā)，40天后芽長(zhǎng)成4 5cm左右的新梢，側(cè)芽同時(shí)也萌發(fā)出5 10個(gè)叢生芽3、生根培養(yǎng)將叢生芽切割2cm左右莖段新梢，轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基上增值培養(yǎng)，所述 培養(yǎng)基配方為瓊脂綜合培養(yǎng)基+玉米素1. Omg/L+吲哚丁酸0. 2mg/L后可分化出30 50 個(gè)叢生芽，54天左右繼代培養(yǎng)一次，增值率在30 50倍。實(shí)施例2:1、外植體材料處理包括對(duì)外植體材料進(jìn)行清洗、消毒和裁剪等處理，以制備出合乎要求的外植體。
具體為采用當(dāng)年生剪去葉片的嫩莖，自來水沖洗干凈，在無菌工作臺(tái)上用無菌水 沖洗3-5遍，用自來水中沖洗20 30min，再用加洗潔精的水浸洗20 30min。清洗干凈 之后在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行消毒處理，放入加入活性炭的0. 氯化汞消毒液中20分鐘，消 毒完成之后放入無菌瓶中備用。2、誘導(dǎo)出芽將外植體接種在配方為瓊脂綜合培養(yǎng)基+玉米素1.0mg/L+萘乙酸 1. Omg/L的培養(yǎng)基中，將外植體接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，1周后開始萌發(fā)，45天后芽長(zhǎng)成4 5cm左右的新梢，側(cè)芽同時(shí)也萌發(fā)出5 10個(gè)叢生芽3、生根培養(yǎng)將叢生芽切割2cm左右莖段新梢，轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基上增值培養(yǎng)，所述 培養(yǎng)基配方為瓊脂綜合培養(yǎng)基+玉米素1. Omg/L+吲哚丁酸0. 4mg/L后可分化出30 50 個(gè)叢生芽，58天繼代培養(yǎng)一次，增值率在30 50倍。實(shí)施例3 1、外植體材料處理包括對(duì)外植體材料進(jìn)行清洗、消毒和裁剪等處理，以制備出合 乎要求的外植體。具體為采用當(dāng)年生剪去葉片的嫩莖，自來水沖洗干凈，在無菌工作臺(tái)上用無菌水 沖洗3-5遍，用自來水中沖洗20 30min，再用加洗潔精的水浸洗20 30min。清洗干凈 之后在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行消毒處理，放入加入活性炭的0. 氯化汞消毒液中30分鐘，消 毒完成之后放入無菌瓶中備用。2、誘導(dǎo)出芽將外植體接種在配方為瓊脂綜合培養(yǎng)基+玉米素1. 3mg/L+萘乙酸 1. 6mg/L的培養(yǎng)基中，將外植體接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，1周后開始萌發(fā)，52天后芽長(zhǎng)成4 5cm左右的新梢，側(cè)芽同時(shí)也萌發(fā)出5 10個(gè)叢生芽3、生根培養(yǎng)將叢生芽切割2cm左右莖段新梢，轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基上增值培養(yǎng)，所述 培養(yǎng)基配方為瓊脂綜合培養(yǎng)基+玉米素1. Omg/L+吲哚丁酸0. 6mg/L后可分化出30 50 個(gè)叢生芽，62天繼代培養(yǎng)一次，增值率在30 50倍。
權(quán)利要求
一種高灌藍(lán)莓工廠化組培快繁的工藝，包括如下步驟(1)、外植體材料處理即選用外植體材料進(jìn)行處理，在殺死率和污染率最低的平衡點(diǎn)制備出符合要求的外植體；(2)、誘導(dǎo)即將步驟S1中所述的外植體接種到培養(yǎng)基上，在誘導(dǎo)條件下誘導(dǎo)出芽；所述培養(yǎng)基為瓊脂綜合培養(yǎng)基的改良；(3)繼代培養(yǎng)即將步驟S2中所得叢生芽新梢在繼代培養(yǎng)基中增殖培養(yǎng)。
2.如權(quán)利要求1所述的一種高灌藍(lán)莓工廠化組培快繁的工藝，其特征在于步驟(1)所 述材料用0. 氯化汞和含活性炭消毒液處理。
3.如權(quán)利要求1所述的一種高灌藍(lán)莓工廠化組培快繁的工藝，其特征在于步驟(1)所 述材料處理時(shí)間為8-—30分鐘。
4.如權(quán)利要求1所述的一種高灌藍(lán)莓工廠化組培快繁的工藝，其特征在于步驟(2)所 用培養(yǎng)基為瓊脂綜合培養(yǎng)基+玉米素0. 8-1. 3mg/L+萘乙酸0. 2-1. 6mg/L。
5.如權(quán)利要求1所述的一種高灌藍(lán)莓工廠化組培快繁的工藝，其特征在于步驟(2)培 養(yǎng)40-52天再切割新梢。
6.如權(quán)利要求1所述的一種高灌藍(lán)莓工廠化組培快繁的工藝，其特征在于步驟(3)所 用培養(yǎng)基為瓊脂綜合培養(yǎng)基+玉米素1. 0mg/L+吲哚丁酸0. 2-0. 6mg/L。
7.如權(quán)利要求1所述的一種高灌藍(lán)莓工廠化組培快繁的工藝，其特征在于步驟(3)培 養(yǎng)54—62天后生根培養(yǎng)。
全文摘要
本發(fā)明提供一種高灌藍(lán)莓工廠化組培快繁的工藝，包括如下步驟(1)外植體材料處理即選用外植體材料進(jìn)行處理，在殺死率和污染率最低的平衡點(diǎn)制備出符合要求的外植體；(2)誘導(dǎo)即將步驟S1中所述的外植體接種到培養(yǎng)基上，在誘導(dǎo)條件下誘導(dǎo)出芽；所述培養(yǎng)基為瓊脂綜合培養(yǎng)基的改良；(3)繼代培養(yǎng)即將步驟S2中所得叢生芽新梢在繼代培養(yǎng)基中增殖培養(yǎng)。
文檔編號(hào)A01H4/00GK101836584SQ20091002073
公開日2010年9月22日 申請(qǐng)日期2009年4月21日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月21日
發(fā)明者不公告發(fā)明人 申請(qǐng)人:山東高端藍(lán)莓生物技術(shù)股份有限公司