專利名稱：：一種植物病害接種工具及其在針刺法接種中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種植物病原細菌接種工具及其應(yīng)用，尤其是一種通過將植物病原細菌通過針刺法接種的工具和其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：植物病害的接種是植物病原菌毒力、病原菌鑒定及其寄主抗病性的重要方法。測定病原菌的毒力、病原菌的鑒定等均要用通過病原菌的接種來完成，其中高效簡便的接種工具非常重要，對病原菌和寄主的抗性研究具有重要的意義。其中針剌接種是植物病原菌重要的接種方法。針剌法接種是植物病原菌細菌接種的主要方法，但缺乏高效簡便的接種工具。一些病害的接種技術(shù)并不成熟，缺乏精準高效的針刺接種工具。目前是要的接種技術(shù)接種程序繁雜，接種效率低，接種速度慢，不能滿足病原菌的接種鑒定的工作需要，尤其大批量病原菌或寄主抗性研究，工作量大，接種效果差，影響了研究工作的進度和質(zhì)量。設(shè)計方便快捷、高效的接種工具對研究病原菌具有重要的意義。目前采用針刺接種病原菌有細菌性條斑病菌、柑橘潰瘍病菌和水稻白葉枯病等病病原菌，這些病原菌是水稻、柑橘等作物的主要病原菌，對作物的產(chǎn)量、品種等影響大,發(fā)明和設(shè)計高效的病原菌接種工具意義重大。傳統(tǒng)的接種技術(shù)比較繁雜。下面以水稻細菌性條斑病菌的接種為例進行說明傳統(tǒng)的接種方法。目前使用的接種方法沒有固定的工具，一般將接種針固定在橡皮塞上，在橡皮塞的一側(cè)鋪上棉花，將接種菌液滴加到棉花上面，接種，采用手工措施在水稻葉片的雙側(cè)擠壓，使針刺穿葉片，達到接種的目的。這種接種工具的接種效率低，接種效果不夠穩(wěn)定。通常用此方法進行病原菌接種鑒定、病原菌的致病性測定、品種抗病行鑒定，由于接種工具的問題，費時費力，使用很不方便，影響對品種和病原菌的抗性進行準確合適的評價。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于針對目前針刺法接種的工具使用中存在的接種效率低，接種效果不夠穩(wěn)定，使用很不方便，影響對品種和病原菌的抗性進行準確合適的評價的實際問題，提供一種植物病害接種工具及其應(yīng)用。本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的一種植物病害接種工具，其特征在于由鉗體和位于鉗體端部鉗口中的接種帶組成，接種帶包括分別固定在上下兩個鉗口上對應(yīng)位置的A片和B片，其中A片為接種墊，接種墊中設(shè)有針刺穿孔;B片包括匹配的墊板和接種板，接種板通過墊板與鉗口連接，接種板上設(shè)有與接種墊中針刺穿孔對應(yīng)的接種針，接種板上覆有菌液固定件，所述的接種墊和接種板均為橡膠板。在本發(fā)明中接種墊中的針剌穿孔直徑為lmm，接種針為昆蟲解剖針，所述的接種墊和接種板均為矩形橡膠板。在本發(fā)明中接種墊的長對稱中軸線與一個鉗口重合；墊板的長對稱中軸線與另一個鉗口重合。在本發(fā)明中所述的菌液固定件為海綿或棉花。在本發(fā)明中接種墊中的針刺穿孔分布于5X4mm矩形的四個角。一種上述接種工具在針刺法接種中的應(yīng)用，其特征在于a)將植物病原細菌培養(yǎng)后，用無菌水洗下，將病原菌配制成3億細胞/毫升的細菌懸浮液；b)將菌液固定件浸泡細菌懸浮液后覆蓋在接種板上，接種針的針尖穿過菌液固定件外露；c)將葉片置于接種帶的A片接種墊和B片中的中間，并將鉗口合攏，使接種針穿過葉片進入A片接種墊的針刺穿孔中，將稍加擠壓，將菌液固定件中的植物病原細菌接種于葉片中。在具體應(yīng)用的過程中浸沾一次細菌懸浮液的菌液固定件可以接種3~5張葉片。本發(fā)明的優(yōu)點在于結(jié)構(gòu)簡單，利于加工，使用中，便于操作，接種效率高，接種效果穩(wěn)定。圖1是本發(fā)明實施例的結(jié)構(gòu)示意圖；圖2是圖1中A片的結(jié)構(gòu)示意圖3是圖1中B片的結(jié)構(gòu)示意圖。圖中1、鉗體，2、接種墊，3、針剌穿孔，4、墊板，5、接種板，6、接種針，7、菌液固定件。具體實施例方式附圖非限制性地公開了本發(fā)明實施例的具體結(jié)構(gòu)，下面結(jié)合附圖對本發(fā)明作進一步的描述。由圖1~3可見，本發(fā)明由鉗體1和位于鉗體1端部鉗口中的接種帶組成，接種帶包括分別固定在上下兩個鉗口上對應(yīng)位置的A片和B片，其中A片為接種墊2，接種墊中設(shè)有針剌穿孔3;B片包括匹配的墊板4和接種板5，接種板5通過墊板4與鉗口連接，接種板5上設(shè)有與接種墊2中針刺穿孔3對應(yīng)的接種針6，接種板5上覆有菌液固定件7，所述的接種墊2和接種板5均為橡膠板。實施例1利用醫(yī)用鉗制作植物病害接種工具A片部分的制作接種墊2為8X6X4mm(長X寬X厚)的矩形橡膠板，用穿孔機制作4個針剌穿孔3，針刺穿孔3為直徑lmm的圓？L，它們分布在一個5X4mm(長X寬)的矩形角上，孔中心距離長邊邊緣為1.5mm，距離短邊邊緣為lmm。制作好后以A片長對稱中軸線與一個鉗口重合，固定在鉗口前端。固定可以采用502膠水粘貼。如果工業(yè)化生產(chǎn)，可以將A片部分直接固定在醫(yī)用鉗的鉗口。B部分的制作墊板4為銅片或鋁片裁剪的8X6X0.5mm(長X寬X厚)的矩形，接種板5為8X6X3mm(長X寬X厚)的矩形橡膠板，接種針6由昆蟲解剖針制成，長度為9mm，4個接種針同樣分布在接種板5中5X4mm(長X寬)的矩形四個角，使它們穿過接種板5，最后將帶有接種針6的接種板5用502膠水固定在墊板4上。制作好后以B片長對稱中軸線與一個鉗口重合，固定在鉗口前端，B片與鉗口之間可以采用502膠水粘貼，也可以通過焊接固定。然后再在接種板5上配置菌液固定件7，菌液固定件7可以采用7X5X2mm的海綿或棉花，使用時，所述的接種針6應(yīng)該穿過浸有菌液的菌液固定件7，浸沾一次細菌懸浮液的菌液固定件7可以接種35張葉片。制作好后，應(yīng)該保證鉗口閉合時A片與B片完全重合，B片中的接種針6置于A片的針刺穿孔3中。實施例2植物病原細菌將細菌性條斑病菌JSbl-l移植在斜本氏培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48小時后，用無菌水洗下，將病原菌配制成3億細胞/毫升的細菌懸浮液供接種使用。接種方法針刺法使用工具分別為傳統(tǒng)的接種工具和實施例制作的工具供試品種和接種時機水稻品種金剛30，品種生長處于分蘗盛期調(diào)查時間在接種后21天的調(diào)査結(jié)果，調(diào)查結(jié)果參見表l表l:兩種接種工具接種病原菌JSB1-1后病菌發(fā)病情況<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>結(jié)論本發(fā)明接種的發(fā)病情況和傳統(tǒng)接種工具相當(dāng)，且本發(fā)明接種后病情比較穩(wěn)定，重復(fù)性好，比傳統(tǒng)接種工具穩(wěn)定，且接種株病情穩(wěn)定，能夠體現(xiàn)出病原菌的毒力水平。實施例3本實施例與實施例2的區(qū)別僅在于植物病原細菌、供試品種和接種時機不同。其中植物病原細菌將細菌性條斑病菌GD414移植在斜本氏培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48小時后，用無菌水洗下，將病原菌配制成3億細胞/毫升的細菌懸浮液供接種使用。供試品種和接種時機鄭選2號、金科3號、鄭稻040285、D0J01(H040744)、D0J08(連粳05045)、遲粳12、遲粳生Ol，品種生長時期處于孕穗期。調(diào)查結(jié)果參見表2表2:兩種接種工具接種病原菌GD414在不同品禾P上發(fā)病情況接種方法使用本發(fā)明接種Cmm)原來接種工具接種(mm)鄭選2號11.310.4金科3號9.49.1鄭稻0402857.37.0D0J01(H040744)8.37.9D0J08(連粳05045)6.66.5遲粳127.06.8遲粳生Ol5.75.7結(jié)論同一病原菌在不同品種上的發(fā)病情況穩(wěn)定，重復(fù)性好，說明實施例1制作的工具可以代替原來傳統(tǒng)的接種工具。實施例4本實施例僅使用實施例1制作的工具，它與實施例2和實施例3的區(qū)別還在于植物病原細菌、供試品種和接種時機不同。其中植物病原細菌將植物病原細菌YNll、YN18、HENll、YN7、GD414、YN24、FUJ、YN1、Scrc-6等病原菌分別移植在斜本氏培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48小時后，用無菌水洗下，將各病原菌分別配制成3億細胞/毫升的細菌懸浮液供接種使用。供試品種和接種時機水稻品種為金剛30，水稻處于孕穗期調(diào)査結(jié)果參見表3表3:使用本發(fā)明接種不同病原菌接種不同品種的效果。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>結(jié)論采用實施例1的接種工具后，不同病原菌的接種結(jié)果發(fā)病況相當(dāng)，但是實施例1的接種工具接種后重復(fù)性好，發(fā)病穩(wěn)定，說明實施例1的接種工具可以代替原來傳統(tǒng)的接種工具。在實施例2和實施例3中采用實施例1制作的接種工具，平均接種一張葉片需要時間為3-8秒鐘，而傳統(tǒng)的接種工具，平均接種一張葉片需要30-60秒。因此實施例1制作的接種工具可以大大加快接種速度，簡化接種程序，同時具有較好的接種質(zhì)量和較高的接種效率。權(quán)利要求1、一種植物病害接種工具，其特征在于由鉗體和位于鉗體端部鉗口中的接種帶組成，接種帶含有分別固定在上下兩個鉗口上對應(yīng)位置的A片和B片，其中A片為接種墊，接種墊中設(shè)有針刺穿孔；B片含有匹配的墊板和接種板，接種板通過墊板與鉗口連接，接種板上設(shè)有與接種墊中針刺穿孔對應(yīng)的接種針，接種板上覆有菌液固定件，所述的接種墊和接種板均為橡膠板。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物病害接種工具，其特征在于接種墊中的針刺穿孔直徑為lmm，接種針為昆蟲解剖針，所述的接種墊和接種板均為矩形橡膠板。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的植物病害接種工具，其特征在于接種墊的長對稱中軸線與一個鉗口重合；墊板的長對稱中軸線與另一個鉗口重合。4、根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的植物病害接種工具，其特征在于所述的菌液固定件為海綿或棉花。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的植物病害接種工具，其特征在于接種墊中的針刺穿孔分布于5X4mm矩形的四個角。6、一種如權(quán)利要求l所述接種工具在針刺法接種中的應(yīng)用，其特征在于a)將植物病原細菌培養(yǎng)后，用無菌水洗下，將病原菌配制成3億細胞/毫升的細菌懸浮液；b)將菌液固定件浸泡細菌懸浮液后覆蓋在接種板上，接種針的針尖穿過菌液固定件外露；c)將葉片置于接種帶的A片接種墊和B片中的中間，并將鉗口合攏，使接種針穿過葉片進入A片接種墊的針刺穿孔中，將稍加擠壓，將菌液固定件中的植物病原細菌接種于葉片中。7、根據(jù)權(quán)利要求6所述接種工具接種工具在針刺法接種中的應(yīng)用，其特征在于浸沾一次細菌懸浮液的菌液固定件可以接種3~5張葉片。全文摘要本發(fā)明涉及一種植物病害接種工具，它由鉗體和接種帶組成，接種帶含有對應(yīng)的A片和B片，其中A片為接種墊，接種墊中設(shè)有針刺穿孔；B片含有墊板和接種板，接種板通過墊板與鉗口連接，接種板上設(shè)有接種針，接種板上覆有菌液固定件。它在針刺法接種中是這樣應(yīng)用的將植物病原細菌培養(yǎng)后，配制成3億細胞/毫升的細菌懸浮液；將菌液固定件浸泡細菌懸浮液后覆蓋在接種板上，接種針的針尖穿過菌液固定件外露；將葉片置于接種帶的A片接種墊和B片中的中間，并將鉗口合攏，使接種針穿過葉片進入A片接種墊的針刺穿孔中，將稍加擠壓，將菌液固定件中的植物病原細菌接種于葉片中。文檔編號A01G7/06GK101480145SQ20091002503公開日2009年7月15日申請日期2009年2月17日優(yōu)先權(quán)日2009年2月17日發(fā)明者劉永鋒,劉郵洲,羅楚平,聶亞峰,陳志誼申請人:江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院