專利名稱：粗肋草的組織培養(yǎng)繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及粗肋草的組織培養(yǎng)繁殖方法。
技術(shù)背景-
粗肋草是天南星科粗肋草屬Ug/ao"ema)植物的通稱，原產(chǎn)于亞洲東南部的印度、泰國、 越南、菲律賓、馬來西亞及印尼等地，為多年生常綠草本植物。粗肋草植株高度20 150厘米。 葉互生，披針形至狹卵形，葉長10 45厘米，葉寬4 16厘米。花小不明顯，花序?yàn)榉鹧婊ㄐ颍?佛焰苞白色或綠白色，果實(shí)為漿果，成熟時(shí)會變?yōu)榧t色。粗肋草觀賞價(jià)值高，是一種優(yōu)良的 觀葉花卉，可作為高檔觀葉植物用于室內(nèi)和庭園觀賞。
粗肋草可用分株、扦插與種子繁殖等三種繁殖方式，分株繁殖方式速度慢，而種子繁殖 雖是選育新品種的有效手段，但所需時(shí)間長，由種子萌芽至成株時(shí)間需要2 3年的時(shí)間，并 且后代易性狀分離，目前生產(chǎn)中常規(guī)繁殖大多以頂芽及莖段兩種扦插法為主要的繁殖方式， 但該繁殖速度也有限，并且對性狀優(yōu)良的母株損傷很大。
目前未見對粗肋草進(jìn)行組織培養(yǎng)，種苗大規(guī)模生產(chǎn)和專利申請的報(bào)道。 發(fā)明內(nèi)容-
本發(fā)明提供了一種繁殖速度快，可在短期內(nèi)獲得大量試管苗，并且對母株損傷不大，能 保持母株優(yōu)良性狀的粗肋草的組織培養(yǎng)繁殖方法。
本發(fā)明主要應(yīng)用植物組織細(xì)胞的全能性和植物組織培養(yǎng)技術(shù)，選擇合適的外植體，消毒 方法，獨(dú)特的培養(yǎng)基進(jìn)行粗肋草的組織培養(yǎng)從而實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的。
本發(fā)明所述的粗肋草的組織培養(yǎng)繁殖方法，包括以下步驟
a. 材料選擇選取生長旺盛的粗肋草幼莖為外植體；
b. 外植體的消毒和不定芽的誘導(dǎo)將外植體用水洗凈，先在體積分?jǐn)?shù)為70%~80%酒精 中浸泡30~60秒，再用質(zhì)量體積百分濃度為0.1%~0.2%升汞溶液消毒8~10分鐘，無 菌水沖洗4 5次，切成節(jié)段，接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，5 7天后取出，再次用質(zhì)量體 積百分濃度為0.1%~0.2%升汞溶液消毒8~10分鐘，無菌水沖洗4 5次，轉(zhuǎn)入新的誘 導(dǎo)培養(yǎng)基中，直至外植體上形成不定芽，所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為每升中含有6-芐基嘌 呤1.0 5.0毫克、萘乙酸0.2-1.0毫克、蔗糖20~30克、瓊脂6 7克，其余成份為 MS ;
C.繼代增殖將誘導(dǎo)出的不定芽切割后繼代培養(yǎng)于增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行不定芽的增殖，所述的增殖培養(yǎng)基為每升中含有6-芐基嘌呤5.0~10.0毫克、萘乙酸0.2-1.0毫克、蔗 糖20~30克、瓊脂6 7克，其余成份為MS;
d. 生根培養(yǎng)當(dāng)芽高3 5厘米高時(shí)，切下接種到生根培養(yǎng)基上，所述的生根培養(yǎng)基為 每升含有6-芐基嘌呤0.2~2.0毫克、萘乙酸0.5~1.0毫克、活性炭0.5~1克、蔗糖20~30 克、瓊脂6 7克，其余成份為1/2MS;
e. 試管苗移植當(dāng)試管苗長至6 7厘米高時(shí)，在自然光照下煉苗7 10天，取出試管 苗，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由沙、珍珠巖、泥炭土等體積混合成的基質(zhì)中，經(jīng)常規(guī)培 養(yǎng)后得到栽培苗；
在上述a、 b、 c、 d四個(gè)步驟中，所用的培養(yǎng)基(誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基) pH5.5 5.8;培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度24 30。C，光照度1500 20001x，光照12小時(shí)/天。
本發(fā)明中移栽后的試管苗注意澆水、遮蔭、保溫，成活率可達(dá)85%以上，大概40 天后就可上盆栽培。
本發(fā)明所述的用無菌水沖洗4 5次，主要是在無菌的環(huán)境下，將升汞沖洗干凈。
本發(fā)明中所述的切成節(jié)段是將升汞消毒過后，無菌水沖洗干凈的外植體最好切成1厘米 左右的節(jié)段。
本發(fā)明適用于粗肋草屬植物的組織培養(yǎng)繁殖。
所述的MS為國際通用的培養(yǎng)基，其成分和配制方法參看譚文澄、戴策剛主編，《觀賞植 物組織培養(yǎng)技術(shù)》，北京中國林業(yè)出版社，1991，所述的1/2MS是將MS中的大量元素和 微量元素減半，其它成分不變而形成的培養(yǎng)基。
本發(fā)明所述的在自然光照下煉苗，其條件如光照強(qiáng)度、溫濕度等條件一般以不影響苗的
存活和生長。
應(yīng)用本發(fā)明的外植體消毒方法，消毒成功率可達(dá)70~80%， 50-60天能在外植體上形成不 定芽。通過本發(fā)明的繼代增值方法可以對不定芽進(jìn)行增值， 一般45天為l個(gè)繼代增殖周期， 每1個(gè)繼代增殖周期后的不定芽的增殖倍數(shù)為2 4倍。不定芽在本發(fā)明的生根培養(yǎng)基中能夠 正常生根，30天時(shí)生根率可達(dá)90°/。以上，每株苗有根數(shù)3 5條。
本發(fā)明的有益效果如下
本發(fā)明只需要簡單的植物組織培養(yǎng)設(shè)備就能在120天內(nèi)完成從外植體的選擇到試管苗的 形成的一個(gè)周期，大大加快了粗肋草的繁殖速度，通過繼代增值，每個(gè)繼代周期可對不定芽 增值2 4倍，因此可以在短時(shí)間內(nèi)獲得大量的試管苗，應(yīng)用本發(fā)明培養(yǎng)出的試管苗具有穩(wěn)定 性高，苗壯，種苗品質(zhì)好、抗性強(qiáng)、生長良好的特點(diǎn)，成活率可達(dá)85°/。以上，并且出苗快， 可大量滿足市場的需求，而且本方法對母株損傷不大，能保持母株的優(yōu)良性狀。
具體實(shí)施方式
-實(shí)施例1
a. 材料選擇在生長季節(jié)選取圓葉粗肋草"g/ao"e附araftm^mO幼嫩莖段為外植體。
b. 外植體的消毒和不定芽的誘導(dǎo)圓葉粗肋草的幼嫩莖段在自來水下沖洗干凈后，先在體積 分?jǐn)?shù)為70%酒精中浸泡30秒，再用質(zhì)量體積百分濃度為0.P/。升汞溶液消毒8分鐘，無菌 水沖洗4次，切成l厘米左右長的節(jié)段，接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，5天后取出節(jié)段再次用質(zhì) 量體積百分濃度0.1%升汞溶液消毒8分鐘，無菌水沖洗5次，后轉(zhuǎn)入新的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中， 消毒成功率為71%， 60天能在外植體上形成不定芽，所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為每升中含有6-芐基嘌呤2.0毫克、萘乙酸0.2毫克、蔗糖20克、瓊脂6克，其余成份為MS ;
c. 繼代增殖將誘導(dǎo)出的不定芽切割后再繼代培養(yǎng)在增殖培養(yǎng)基上，進(jìn)行不定芽的增殖，一 般45天為1個(gè)繼代增殖周期，每1個(gè)繼代增殖周期后的增殖倍數(shù)為2.5倍，所述的增殖 培養(yǎng)基每升中含有為6-芐基嘌呤5.0毫克、萘乙酸0.5毫克、蔗糖20克、瓊脂7克， 其余成份為MS;
d. 生根培養(yǎng)當(dāng)芽高約3 5厘米高時(shí)，切下接種到生根培養(yǎng)基上，不定芽能正常生根， 生根率可達(dá)90%，每株苗有根數(shù)4.5條，所述的生根培養(yǎng)基為每升含有6-芐基嘌呤1.0 毫克、萘乙酸0.5毫克、活性炭0.5克、蔗糖20克、瓊脂7克，其余成份為1/2MS
e. 試管苗移栽當(dāng)試管苗長至6 7厘米高時(shí)，在自然光照下煉苗9天。然后打開瓶塞，用 鑷子把試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由沙、珍珠巖、泥炭土等體積混合 成的基質(zhì)中。
在上述a、 b、 c、 d步驟中所用的培養(yǎng)基pH 5.5-5.8;培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度24 3(TC，光 照度1500 20001x,光照12小時(shí)/天。
移栽苗注意澆水、遮蔭、保溫，成活率可達(dá)85%以上，移栽后約40天后可上盆栽培，
從外植體的選擇到試管苗的獲得大概需要120天的時(shí)間。 實(shí)施例2
a. 材料選擇在生長季節(jié)選取銀王粗肋草"g/ao"ew" Silver King)幼嫩莖段為外植體。
b. 外植體的消毒和不定芽的誘導(dǎo)銀王粗肋草的幼嫩莖段在自來水下沖洗千凈后，先在75% 酒精中浸泡45秒，再用0.15%升汞溶液消毒10分鐘，無菌水沖洗5次，切成l厘米左右 長的節(jié)段，接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，6天后取出節(jié)段，再次用0.15%升汞溶液消毒8分鐘， 無菌水沖洗5次，后轉(zhuǎn)入新的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，消毒成功率可達(dá)78%， 60天能在外植體上 形成不定芽，所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為每升中含有6-芐基嘌呤3.0毫克、萘乙酸0.5毫克、 蔗糖25克、瓊脂7克，其余成份為MS ;C.繼代增殖將誘導(dǎo)出的不定芽切割后再繼代培養(yǎng)在增殖培養(yǎng)基上，進(jìn)行不定芽的增殖，一 般45天為1個(gè)繼代增殖周期，每1個(gè)繼代增殖周期后的增殖倍數(shù)為3倍，所述的增殖培 養(yǎng)基為每升中含有6-芐基嘌呤7.0毫克、萘乙酸0.5毫克、蔗糖25克、瓊脂7克，其 余成份為MS;
d. 生根培養(yǎng)當(dāng)芽高約3 5厘米高時(shí)，切下接種到生根培養(yǎng)基上，不定芽能正常生根， 生根率可達(dá)卯％,每株苗有根數(shù)5條，所述的生根培養(yǎng)基為每升含有6-芐基嘌呤0.5毫 克、萘乙酸0.8毫克、活性炭0.75克、蔗糖25克、瓊脂6克，其余成份為1/2MS
e. 試管苗移栽當(dāng)試管苗長至6 7厘米高時(shí)，在自然光照下煉苗7天。然后打開瓶塞，用 鑷子把試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由沙、珍珠巖、泥炭土等體積混合 成的基質(zhì)中。
在上述a、 b、 c、 d步驟中所用的培養(yǎng)基pH5.5 5.8，培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度24 3(TC，光照 度1500 20001x，光照12小時(shí)/天。
移栽苗注意澆水、遮蔭、保溫，成活率可達(dá)90%以上，移栽后約40天后可上盆栽培。
從外植體的選擇到試管苗的獲得大概需要115天的時(shí)間。 實(shí)施例3
a. 材料選擇在生長季節(jié)選取超紅葉粗肋草"g/ao朋maTembaga Super Red)幼嫩莖段為外 植體。
b. 外植體的消毒和不定芽的誘導(dǎo)超紅葉粗肋草的幼嫩莖段在自來水下沖洗干凈后，先在
80%酒精中浸泡60秒，再用0.2。/。升汞溶液消毒8分鐘，無菌水沖洗5次，切成l厘米左 右長的節(jié)段，接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，7天后取出節(jié)段，再次用0.1%升汞溶液消毒8分鐘， 無菌水沖洗5次，后轉(zhuǎn)入新的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，消毒成功率可達(dá)79%， 50天能在外植體上 形成不定芽，所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為每升中含有6-芐基嘌呤5.0毫克、萘乙酸1.0毫克、 蔗糖30克、瓊脂7克，其余成份為MS ;
c. 繼代增殖將誘導(dǎo)出的不定芽切割后再繼代培養(yǎng)在增殖培養(yǎng)基上，進(jìn)行不定芽的增殖，一 般45天為1個(gè)繼代增殖周期，每1個(gè)繼代增殖周期后的增殖倍數(shù)為4倍，所述的增殖培 養(yǎng)基每升中含有為6-芐基嘌呤10.0毫克、萘乙酸1.0毫克、蔗糖30克、瓊脂6克， 其余成份為MS;
d. 生根培養(yǎng)當(dāng)芽高約3 5厘米高時(shí)，切下接種到生根培養(yǎng)基上，不定芽能正常生根， 生根率可達(dá)95%以上，每株苗有根數(shù)7條，所述的生根培養(yǎng)基為每升含有6-芐基嘌呤 2.0毫克、萘乙酸1.0毫克、活性炭1克、蔗糖30克、瓊脂7克，其余成份為1/2MS;
e. 試管苗移栽當(dāng)試管苗長至6 7厘米高時(shí)，在自然光照下煉苗10天。然后打開瓶塞，用鑷子把試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由沙、珍珠巖、泥炭土等體積混 合成的基質(zhì)中。
在上述a、 b、 c、 d步驟中所用的培養(yǎng)基pH5.5 5.8，培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度24 30。C，光照 度1500 20001x，光照12小時(shí)/天。
移栽苗注意澆水、遮蔭、保溫，成活率可達(dá)95%以上，移栽后約40天后可上盆栽培。 從外植體的選擇到試管苗的獲得大概需要110天的時(shí)間。
權(quán)利要求
1.一種粗肋草的組織培養(yǎng)繁殖方法，其特征在于包括以下步驟a.材料選擇選取生長旺盛的粗肋草幼莖為外植體；b.外植體的消毒和不定芽的誘導(dǎo)將外植體用水洗凈，先在體積分?jǐn)?shù)為70％～80％酒精中浸泡30～60秒，再用質(zhì)量體積百分濃度為0.1％～0.2％升汞溶液消毒8～10分鐘，無菌水沖洗4～5次，切成節(jié)段，接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，5～7天后取出，再次用質(zhì)量體積百分濃度為0.1％～0.2％升汞溶液消毒8～10分鐘，無菌水沖洗4～5次，轉(zhuǎn)入新的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，直至外植體上形成不定芽，所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為每升中含有6-芐基嘌呤1.0～5.0毫克、萘乙酸0.2～1.0毫克、蔗糖20～30克、瓊脂6～7克，其余成份為MS；c.繼代增殖將誘導(dǎo)出的不定芽切割后繼代培養(yǎng)于增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行不定芽的增值，所述的增殖培養(yǎng)基為每升中含有6-芐基嘌呤5.0～10.0毫克、萘乙酸0.2～1.0毫克、蔗糖20～30克、瓊脂6～7克，其余成份為MS；d.生根培養(yǎng)當(dāng)芽高3～5厘米高時(shí)，切下接種到生根培養(yǎng)基上，所述的生根培養(yǎng)基為每升含有6-芐基嘌呤0.2～2.0毫克、萘乙酸0.5～1.0毫克、活性炭0.5～1克、蔗糖20～30克、瓊脂6～7克，其余成份為1/2MS；e.試管苗移植當(dāng)試管苗長至6～7厘米高時(shí)，在自然光照下煉苗7～10天，取出試管苗，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由沙、珍珠巖、泥炭土等體積混合成的基質(zhì)中，經(jīng)常規(guī)培養(yǎng)后得到栽培苗；在上述a、b、c、d步驟中，所用的培養(yǎng)基pH 5.5～5.8；培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度24～30℃，光照強(qiáng)度1500～2000lx，光照12小時(shí)/天。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的粗肋草的組織培養(yǎng)繁殖方法，其特征在于所述的b步驟中的切成 節(jié)段是將外植體切成1厘米長的節(jié)段。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的粗肋草的組織培養(yǎng)繁殖方法，其特征在于a步驟所述的外植 體為圓葉粗肋草Xgtewema raf訓(xùn)rfw/r7、銀王粗肋草^g/卯newa Silver King或超紅葉粗肋 草乂g/tro"ewfl Tembaga Super Red的幼嫩莖段。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種粗肋草的組織培養(yǎng)繁殖方法，旨在提供一種繁殖速度快，可在短期內(nèi)獲得大量試管苗，并且對母株損傷不大，能保持母株優(yōu)良性狀的粗肋草的組織培養(yǎng)繁殖方法。本方法包括選擇生長旺盛的粗肋草幼莖為外植體，對外植體進(jìn)行消毒，在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行不定芽的誘導(dǎo)，再將不定芽接入增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代增殖，當(dāng)芽高3～5厘米高時(shí)，切下接種到生根培養(yǎng)基上生根培養(yǎng)，當(dāng)試管苗長至6～7厘米高時(shí)，在自然光照下煉苗7～10天，取出試管苗，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由沙、珍珠巖、泥炭土等體積混合成的基質(zhì)中，經(jīng)常規(guī)培養(yǎng)后得到栽培苗。本發(fā)明可以為市場提供大量的粗肋草試管苗。
文檔編號A01H4/00GK101536674SQ20091003898
公開日2009年9月23日 申請日期2009年4月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月24日
發(fā)明者吳坤林, 張建霞, 曾宋君, 虬 李, 俊 段, 陳之林 申請人:中國科學(xué)院華南植物園