專利名稱：一種經(jīng)猴股靜脈導(dǎo)管長期給藥方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了一種食蟹猴經(jīng)股靜脈導(dǎo)管長期給藥方法，屬藥物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
為了能夠在數(shù)天或數(shù)十天內(nèi)反復(fù)給藥，許多實驗需要在動物身上建立一條長期的 靜脈通路，在動物清醒時進行給藥以及采血等操作，常用的有鼠、豬、牛等動物。然而，由于 在生理上具有和人類極大的相似性，靈長類動物越來越多地被應(yīng)用于新藥安全性評價及藥 效學(xué)實驗中，隨著現(xiàn)代生物器械產(chǎn)品層出不窮，在靈長類動物上進行的靜脈插管(venous cannula)技術(shù)也隨之出現(xiàn)并不斷發(fā)展。[肖恩年，王靜.恒河猴長期保留性靜脈插管裝 置的研制.復(fù)旦學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，1992. (05) :392-394.，王衛(wèi)平等.恒河猴固定比率自身 給藥實驗動物模型的建立.中國藥物依賴性雜志，1995. (02) =96-100. ；KinsoraJ J Jr, Christoffersen C L, Swalec J M et al. The novel use of v ascular access ports forintravenous self-administration and blood withdrawal studies in squirrel monkeys. J Neurosci Methods，1997，75 :59 68.；王衛(wèi)平，哈鷹，蔡志基.關(guān)于恒河猴自身 給藥實驗動物模型的建立與評價.中國藥物依賴性雜志，1993. (02) =80-81.]

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了一種經(jīng)猴股靜脈導(dǎo)管長期給藥方法。本發(fā)明提供了一種食蟹猴經(jīng)股靜脈導(dǎo)管長期給藥方法，它包括如下步驟a、術(shù)前準備術(shù)前一周為食蟹猴穿上背心進行適應(yīng)性訓(xùn)練，術(shù)前禁食12h ；b、手術(shù)麻醉后將靜脈導(dǎo)管植入腹股溝部；C、術(shù)后維護；d、生理值檢測測定血常規(guī)、血凝、血生化值；e、給藥將輸液泵固定于背心上，輸液泵的輸液管與導(dǎo)管通道末端對接，設(shè)定輸注 速度和時間，進行輸液。其中，所述的導(dǎo)管為聚氨酯材料導(dǎo)管。其中，b步驟所述的靜脈導(dǎo)管植入方法是(1)在猴大腿中部內(nèi)側(cè)作一平行于股靜脈的4-5cm長的切口，暴露股鞘，分離一段 長2-3cm的股靜脈，結(jié)扎股靜脈的遠心端，近心端；(2)將靜脈導(dǎo)管前段削尖，放入手術(shù)用留置針內(nèi)；持留置針以近平行于血管的角 度刺入，刺入后，以手術(shù)線將導(dǎo)管和靜脈系緊，松開遠心端結(jié)扎線，將注射器連于導(dǎo)管向外 抽血；(3)向?qū)Ч軆?nèi)注入肝素鈉，松開近心端結(jié)扎線；將猴側(cè)臥，在肩胛下區(qū)背部正中線 處作一 2-3cm的切口，用套管針從股部切口到背部小口打皮下隧道，插管從隧道穿出猴背 部；把通道置于背部皮下并將其與靜脈導(dǎo)管相連；(4)固定導(dǎo)管；向通道內(nèi)注入肝素鈉以防止堵塞；持續(xù)觀察兩分鐘，若無明顯出血則縫合背部切口，手術(shù)完成。
步驟(2)中留置針刺入時，左右旋轉(zhuǎn)留置針，同時向前推進。其中，e步驟所述的給藥步驟給藥時，在猴穿戴的背心上連接恒速輸液泵，通過 輸液泵持續(xù)地以固定速率給藥；在不給藥時用肝素充滿導(dǎo)管。本發(fā)明給藥方法具有以下優(yōu)點第一，可以在數(shù)小時內(nèi)持續(xù)給藥；第二，以恒定的 速率給藥，從而可以保證血藥濃度持續(xù)穩(wěn)定于最低有效濃度之上；第三，可以在動物清醒的 狀態(tài)下給藥，不影響動物自身活動，比較人性化；另外，也使得實驗人員易于操作。
具體實施例方式實施例1本發(fā)明食蟹猴經(jīng)股靜脈導(dǎo)管長期給藥方法1實驗材料1. 1實驗動物普通級成年食蟹猴20只，雄性，體重1. 8 2. 3Kg，結(jié)核菌素試驗 (_)。由海南金港實驗動物有限公司提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號SCXK(瓊)2004-0001。 飼養(yǎng)條件飼養(yǎng)于國家成都中藥安全性評價中心普通動物房，不銹鋼籠單只飼養(yǎng)，室溫 21 士5°C，相對濕度55士 15%。以實驗動物顆粒飼料(由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院提供)喂養(yǎng)，滅 菌自來水自由飲用。1. 2iW^fflit (implanted ports, with open-ended catheters) _ 自美國BARD公司，其中靜脈導(dǎo)管為聚氨酯管(Polyurethane catheter)，內(nèi)徑1. 2mm，這 種規(guī)格的聚乙烯管管壁較厚，可抵抗一定強度的外力撕扯。輸液設(shè)備購自美國S0RENS0N MEDICAL 公司，包括輸液栗(Ambit continuousinfusion pump)禾口暗盒(cassette),暗盒中 內(nèi)置一可自動旋轉(zhuǎn)的裝置，它可以將液體以精確、可控的速度泵出。1.3檢驗儀器CELL-DYN 3700SL全自動血液細胞分析儀(美國雅培)，美國雅培原 裝試劑；Cobas Integra 400Plus全自動血液生化分析儀(瑞士羅氏)，瑞士羅氏原裝試劑； CA-530型全自動血凝分析儀(日本SYSMEX)，試劑由日本Dade Behring公司生產(chǎn)；R-500型 網(wǎng)織紅細胞分析儀(日本SYSMEX)，試劑由日本Dade Behring公司生產(chǎn)。1. 4統(tǒng)計學(xué)方法統(tǒng)計處理采用SPSS 11. 0軟件。數(shù)據(jù)結(jié)果以無± 8表示，手術(shù)前后 比較采用t檢驗。P < 0. 05認為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2實驗方法2. 1手術(shù)過程2. 1. 1術(shù)前準備于手術(shù)前一周為食蟹猴穿上背心，放回實驗籠中進行適應(yīng)性訓(xùn)練， 使猴能逐漸習(xí)慣穿戴背心的生活環(huán)境。術(shù)前禁食12h，靜脈推注戊巴比妥鈉(pentobarbital sodium)(初始劑量30mg/Kg，維持劑量15mg/Kg)，麻醉后從籠中取出，右腿內(nèi)側(cè)和背部區(qū)域
備皮，按常規(guī)消毒。2. 1. 2手術(shù)本實驗采用股靜脈導(dǎo)管植入術(shù)(catheterization)。將備好皮的猴仰 臥于手術(shù)臺上，選任一上肢造靜脈通路，四肢呈“大”字型固定，常規(guī)消毒，鋪巾。于大腿中 部內(nèi)側(cè)作一平行于股靜脈的4-5cm長的切口，分離肌肉層，暴露股鞘(股動脈、股靜脈、股神 經(jīng))，用止血鉗(hemostat)鈍性分離一段長約2-3cm的股靜脈，注意不要損傷周圍血管及其 他組織，用三根2-0或3-0的不可吸收線結(jié)扎股靜脈的遠心端(distal ligature)，稍用力 提起手術(shù)線，同時結(jié)扎近心端。將靜脈導(dǎo)管前段削尖，放入手術(shù)用留置針內(nèi)。助手提起兩側(cè)手術(shù)線，術(shù)者持留置針以近平行于血管的角度刺入，為保證順利進入血管可輕輕左右旋轉(zhuǎn) 留置針，同時將其向前推進，待進入5cm左右后，以手術(shù)線將導(dǎo)管和靜脈系緊，松開遠心端 結(jié)扎線，將注射器連于導(dǎo)管向外抽血，若有血液表示通暢性良好。向?qū)Ч軆?nèi)注入約Iml肝素 鈉(heparin sodium)，松開近心端結(jié)扎線，在導(dǎo)管靜脈連接處再系一根7號線，確保固定牢 固，注意不可過緊，以免堵塞導(dǎo)管。將猴側(cè)臥，在肩胛下區(qū)背部正中線處作一 2-3cm的切口，用套管針(tunneling trocar)從股部切口到背部小口打皮下隧道(tunnel)，插管從隧道穿出猴背部。把通道 (vascular access port)置于背部皮下并將其與靜脈導(dǎo)管相連。在股靜脈處將導(dǎo)管盤曲成 一小圓環(huán)，縫合固定，關(guān)閉股靜脈切口。在通道處作一同樣大小的小圓環(huán)，固定，以備動物活 動時留下足夠的伸展性。將通道縫合于肌肉上，確保靜脈導(dǎo)管與之連接緊密，用注射器檢查 暢通性。向通道內(nèi)注入肝素鈉以防止堵塞。持續(xù)觀察兩分鐘，若無明顯出血則縫合背部切 口。手術(shù)完成，全部手術(shù)過程嚴格無菌操作。2. 1. 3術(shù)后維護手術(shù)完成后立即為食蟹猴穿戴背心以防止其蘇醒后搔撓背部通 道，由于麻醉時猴身體較軟，背心不可穿是過緊，以防窒息。為預(yù)防感染靜脈滴注0. 5%的頭 孢噻肟鈉100ml。手術(shù)過程及術(shù)后注意保溫。
2. 2生理值檢測分別于術(shù)前一周、術(shù)后一周及術(shù)后兩周測定血常規(guī)、血凝、血生 化值及一般生命體征，其中術(shù)后采血時把注射器針頭直接插入背部通道，血液通過靜脈導(dǎo) 管流出，采血量約為5ml。血細胞檢測指標紅細胞總數(shù)(RBC)、血紅蛋白(Hb)、白細胞總 數(shù)(WBC)、血小板總數(shù)(PLT)、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)(RET)；血液生化檢測指標天冬氨酸轉(zhuǎn)氨 酶(AST)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、總膽紅素(TBIL)、血糖(GLU)； 血凝檢測項目凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血酶原時間(APTT)；脈搏(pulse)、攝食量 (food consumption)、收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)。2. 3給藥給藥時，首先用帶有非取心針(non-coring needle)的注射器吸出保留 在導(dǎo)管內(nèi)的肝素鈉，打開通道末端，注入IOml生理鹽水。把輸液泵固定于背心上，將輸液泵 的輸液管與通道末端對接，確認無誤后打開輸液泵，設(shè)定輸注速度和時間，進行輸液。期間 將猴放回籠中。輸液結(jié)束后，關(guān)閉通道末端，取出輸液泵，向通道內(nèi)注入IOml生理鹽水以避 免輸入藥物與肝素之間的藥物反應(yīng)，最后注入5ml肝素鈉(100U/ml)，使其鎖定于導(dǎo)管內(nèi)， 防止管道堵塞。3 結(jié)果3. 1血液學(xué)指標由表1可見，與術(shù)前相比，術(shù)后一周WBC、RBC、Hb降低；PLT、RET 升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0. 05)；術(shù)后兩周WBC、PLT差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P > 0. 05)， 其余有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0. 05)。表1食蟹猴術(shù)前和術(shù)后血液指標^〒士 s η = 20 *P>o．05，與術(shù)前比較
3．2血生化指標由表2可見，與術(shù)前相比，術(shù)后一周ALT、Cr差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>o．05)，其余有統(tǒng)計學(xué)意義(P<o．05)；術(shù)后兩周各項指標均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>o．05)。
表2食蟹猴術(shù)前和術(shù)后血清化學(xué)指標．一天士s．n一20 *P > 0. 05，與術(shù)前比較3. 3血凝及生命體征由表3可見，與術(shù)前相比，術(shù)后一周APTT、foodconsumption、 pulse、SBP, DBP差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P > 0. 05)，其余有統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0. 05)；術(shù)后兩周 各項指標均無統(tǒng)計學(xué)意義(P > 0. 05)。表3食蟹猴術(shù)前和術(shù)后血凝及生命體征_〒± s, η = 20 *Ρ > 0. 05，與術(shù)前比較4 討論4. 1國內(nèi)外在實驗研究中通過安置靜脈導(dǎo)管為動物進行輸液已有三十多年的歷 史，但這些報道均采用了頸靜脈作為導(dǎo)管插入口，并且存在個別不妥之處。比如留置的靜脈 插管均為醫(yī)用硅膠管，口徑也不盡相同，有內(nèi)徑0.8mm、1.0mm等。硅膠管能有效減輕排斥 反應(yīng)，但材料過于柔軟，如果全程采用，則固定插管至靜脈內(nèi)時不能用力過緊，否則易扎閉 管道，過松又易使導(dǎo)管滑脫。另外，將輸液裝置的聯(lián)動軸固定于動物籠頂不能移動，這使得 動物在實驗過程中活動受限。由于頸部的活動度較大且容易被猴時常撓抓致導(dǎo)管脫落，本 實驗選用股靜脈作為導(dǎo)管插入口，采用聚氨酯材料靜脈導(dǎo)管，其排斥反應(yīng)與硅膠管類似，但 比硅膠管堅固，可無需顧慮用力過緊的問題；將輸液泵置于猴背部，并由穿戴的背心將其固 定，這樣動物就可在給藥的同時隨意活動；手術(shù)切口位于腹股溝部，不易被抓到且活動度較 小，從而降低了導(dǎo)管滑脫的幾率。4. 2 檢測結(jié)果顯示，術(shù)后一周只有 APTT、ALT、Cr、food consumption、pulse 這五 項指標與術(shù)前相比無統(tǒng)計學(xué)差異(P > 0.05)，說明只有這五項指標基本恢復(fù)到術(shù)前狀態(tài)，這一現(xiàn)象可能是由于手術(shù)造成失血，而血細胞在一周時間里未能完全恢復(fù)正常以及術(shù)后短 期內(nèi)機體仍然處于應(yīng)激狀態(tài)有關(guān)。術(shù)后兩周除RBC、Hb和RET與術(shù)前比較仍有統(tǒng)計學(xué)差異 (P < 0. 05)外，其余均無統(tǒng)計學(xué)差異(P > 0. 05)，這說明經(jīng)過短暫的適應(yīng)期后，動物主要生 理指標基本恢復(fù)到術(shù)前狀態(tài)，從而有效避免了試驗給藥前就影響動物生理狀態(tài)的情況。而 RBC、Hb和RET這三項指標未能復(fù)原可能與紅細胞生理恢復(fù)時間較長有關(guān)。另外，我們在動 物清醒后進行了籠旁觀察，除1只因失血較多精神稍顯萎靡外，其余動物精神及行為狀態(tài) 均與術(shù)前無明顯差異。因此，可以認為通過本方法造出的模型對動物造成的創(chuàng)傷極小。4. 3本實驗采用了若干創(chuàng)新性方法。首先，往靜脈插入導(dǎo)管時，邊左右旋轉(zhuǎn)留置針 邊向前推進，這樣就能迅速而準確地進入靜脈內(nèi)。其次，在不給藥時用肝素充滿導(dǎo)管，這就 使得導(dǎo)管堵塞的概率大大降低，但如果長期不使用導(dǎo)管及通道，則肝素暢 通至少應(yīng)每四個 星期一次。最后，給藥時，在猴穿戴的背心上連接恒速輸液泵，通過輸液泵持續(xù)地以固定速 率給藥。采用此方法的原因是輸液泵具有以下優(yōu)點第一，可以在數(shù)小時內(nèi)持續(xù)給藥；第 二，以恒定的速率給藥，從而可以保證血藥濃度持續(xù)穩(wěn)定于最低有效濃度之上；第三，可以 在動物清醒的狀態(tài)下給藥，不影響動物自身活動，比較人性化；另外，也使得實驗人員易于 操作。4. 4靜脈插管術(shù)常見的并發(fā)癥有感染、導(dǎo)管堵塞、自行脫落、皮下隧道膿腫形成等。 本實驗在術(shù)后為期三個月的給藥過程中，有1只導(dǎo)管堵塞，1只猴麻醉清醒后將腹股溝部導(dǎo) 管拔出導(dǎo)致輸液時出現(xiàn)局部腫脹，重新手術(shù)后問題均得到解決；另有2只發(fā)生感染，表現(xiàn)為 背部通道處皮膚紅腫并有白色粘性液體流出，給予0. 5%的加替沙星后紅腫消失。手術(shù)未造 成一例動物死亡，所有動物都能順利完成為期三個月的實驗。綜上所述，食蟹猴靜脈長期給藥方法對手術(shù)及輸液設(shè)備的要求均很高，任何細微 的操作都可能影響整個實驗結(jié)果。本實驗采用的方法安全有效，適用可靠且易于操作，可廣 泛用于藥理學(xué)及毒理學(xué)靈長類動物長期給藥實驗。
權(quán)利要求
一種食蟹猴經(jīng)股靜脈導(dǎo)管長期給藥方法，其特征在于它包括如下步驟a、術(shù)前準備術(shù)前一周為食蟹猴穿上背心進行適應(yīng)性訓(xùn)練，術(shù)前禁食12h；b、手術(shù)麻醉后將靜脈導(dǎo)管植入腹股溝部；c、術(shù)后維護；d、生理值檢測測定血常規(guī)、血凝、血生化值；e、給藥將輸液泵固定于背心上，輸液泵的輸液管與導(dǎo)管通道末端對接，設(shè)定輸注速度和時間，進行輸液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的給藥方法，其特征在于所述的導(dǎo)管為聚氨酯材料導(dǎo)管。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的給藥方法，其特征在于b步驟所述的靜脈導(dǎo)管植入方法是(1)在猴大腿中部內(nèi)側(cè)作一平行于股靜脈的4-5cm長的切口，暴露股鞘，分離一段長 2-3cm的股靜脈，結(jié)扎股靜脈的遠心端，近心端；(2)將靜脈導(dǎo)管前段削尖，放入手術(shù)用留置針內(nèi)；持留置針以近平行于血管的角度刺 入，刺入后，以手術(shù)線將導(dǎo)管和靜脈系緊，松開遠心端結(jié)扎線，將注射器連于導(dǎo)管向外抽 血；(3)向?qū)Ч軆?nèi)注入肝素鈉，松開近心端結(jié)扎線；將猴側(cè)臥，在肩胛下區(qū)背部正中線處作 一 2-3cm的切口，用套管針從股部切口到背部小口打皮下隧道，插管從隧道穿出猴背部；把 通道置于背部皮下并將其與靜脈導(dǎo)管相連；(4)固定導(dǎo)管；向通道內(nèi)注入肝素鈉以防止堵塞；持續(xù)觀察兩分鐘，若無明顯出血則縫 合背部切口，手術(shù)完成。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的給藥方法，其特征在于步驟(2)中留置針刺入時，左右旋轉(zhuǎn) 留置針，同時向前推進。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的給藥方法，其特征在于e步驟所述的給藥步驟是在給藥時， 在猴穿戴的背心上連接恒速輸液泵，通過輸液泵持續(xù)地以固定速率給藥；在不給藥時用肝 素充滿導(dǎo)管。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種經(jīng)猴股靜脈導(dǎo)管長期給藥方法，它包括如下步驟a、術(shù)前準備術(shù)前一周為食蟹猴穿上背心進行適應(yīng)性訓(xùn)練，術(shù)前禁食12h；b、手術(shù)麻醉后將靜脈導(dǎo)管植入腹股溝部；c、術(shù)后維護；d、生理值檢測；e、給藥將輸液泵固定于背心上，輸液泵的輸液管與導(dǎo)管通道末端對接，設(shè)定輸注速度和時間，進行輸液。本發(fā)明給藥方法具有以下優(yōu)點第一，可以在數(shù)小時內(nèi)持續(xù)給藥；第二，以恒定的速率給藥，從而可以保證血藥濃度持續(xù)穩(wěn)定于最低有效濃度之上；第三，可以在動物清醒的狀態(tài)下給藥，不影響動物自身活動，比較人性化；另外，也使得實驗人員易于操作。
文檔編號A61D7/00GK101843528SQ20091005868
公開日2010年9月29日 申請日期2009年3月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月24日
發(fā)明者匡林峰, 葉雪飛, 張琰艷, 扈正桃, 李宏霞, 李尤, 段嘉川, 王莉, 程峰, 蔣星 申請人:四川大學(xué)華西醫(yī)院;成都華西海圻醫(yī)藥科技有限公司;國家成都中藥安全性評價中心